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Petunjuk TeknisPemeriksaan Biakan, Identifikasi, Dan
Uji Kepekaan Mycobacterium
tuberculosis pada Media Padat
DIREKTORAT JENDERAL BINA UPAYA KESEHATANDIREKTORAT JENDERAL PENGENDALIAN PENYAKIT DAN
PENYEHATAN LINGKUNGAN
2012
KEMENTERIAN KESEHATAN RI
7/23/2019 Booklet JUKNIS Biakan OK
2/66
Katalog Dalam Terbitan. Kementerian Kesehatan RI
616.995 1Indp
Indonesia. Kementerian Kesehatan RI. DirektoratJenderal Bina Upaya Kesehatan
Petunjuk teknis pemeriksaan biakan, indentifikasi,dan uji kepekaan Mycobacterium tuberculosispada media padat,-- Jakarta : KementerianKesehatan RI. 20121
ISBN 978-602-235-144-3
1. Judul I. TUBERCULOSIS - DIAGNOSISII. TUBERCULOSIS - LABORATORY MANUALSIII. MICROSCOPY - LABORATORY MANUALSIV. MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
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KATA PENGANTAR
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TIM PENYUSUN
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KEPUTUSAN DIREKTUR JENDERAL BINA UPAYA KESEHATAN
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA
NOMOR : HK.02.04/V/1808/2012.
TENTANG
PETUNJUK TEKNIS PEMERIKSAAN BIAKAN, IDENTIFIKASI DAN
UJI KEPEKAAN MYCOBACTERIUM TUBERCULOSISPADA MEDIA PADAT
DENGAN RAHMAT TUHAN YANG MAHA ESA
DIREKTUR JENDERAL BINA UPAYA KESEHATAN,
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VI. ALUR KERJA BIAKAN, IDENTIFIKASI DAN UJI KEPEKAAN
Mycobacterium tuberculosis ..............................................................................43
VII. PRAKTEK LABORATORIUM ............ ............. ............. ............ ............. ............. .51
A. Pengambilan, Pengiriman dan Penerimaan Spesimen .................................51
B. Pembuatan Media Lowenstein-Jensen...........................................................54
C. Biakan Mycobacterium tuberculosis ..............................................................57
D. Pembacaan Hasil Biakan .................................................................................62
E. Subkultur Isolat Mycobacterium tuberculosis ..............................................63
F. Identifikasi Mycobacterium tuberculosis .......................................................69
G. Pembuatan Media untuk Uji PNB dan Resistensi .........................................75
H. Pembuatan Suspensi Kuman untuk Uji Kepekaan........................................79
I. Uji Resistensi Mycobacterium tuberculosisCara Proporsi ..........................81
J. Interpretasi Hasil Uji Kepekaan .......................................................................84
K. Preservasi Kuman pada Suhu -70oC ..............................................................87
L. Resusitasi Mycobacterium tuberculosisdari -70oC .....................................89
M. Pengiriman Isolat ke Laboratorium Rujukan .................................................89N. Pengelolaan Limbah.........................................................................................90
VIII. PEMANTAPAN MUTU BIAKAN DAN UJI KEPEKAAN .....................................93
A. Tujuan Pemantapan Mutu ................................................................................93
B. Komponen Pemantapan Mutu Laboratorium Tuberkulosis .........................93
IX. PENCATATAN DAN PELAPORAN .....................................................................103
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DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ............ ............ ............. ............. ............ ............. ............ ............. ...i
KATA SAMBUTAN .......................................................................................................iii
TIM PENYUSUN ..........................................................................................................iv
KEPUTUSAN DIRJEN BINA UPAYA KESEHATAN KEMENTERIAN KESEHATANREPUBLIK INDONESIA NOMOR : HK.02.04/V/1808/2012 ............ ............ ............. .v
DAFTAR ISI .................................................................................................................ix
DAFTAR TABEL ..........................................................................................................xi
DAFTAR GAMBAR .....................................................................................................xii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................xiii
DAFTAR SINGKATAN ...............................................................................................xiv
I. PENDAHULUAN ............. ............ ............. ............ ............. ............. ............ ............. ..1
A. Latar Belakang ....................................................................................................1
B. Tujuan Petunjuk Teknis ......................................................................................4
II. MANFAAT PEMERIKSAAN BIAKAN, IDENTIFIKASI DAN UJI KEPEKAANPADA PROGRAM PENGENDALIAN TB .................................................................5
A. Biakan Mycobacterium tuberculosis ................................................................7
B. Uji kepekaan ( Drug Susceptibility Test/ DST) .................................................9
III. KARAKTERISTIK MYCOBACTERIA ............ ............ ............. ............. ............ ...... 11
IV. SUMBER DAYA LABORATORIUM .......................................................................15
A. Ruang laboratorium .........................................................................................15
B. Peralatan dan penjaminan kinerja alat, termasuk kalibrasi .........................23
V. KEAMANAN KERJA UNTUK BIAKAN DAN UJI KEPEKAAN ........ ............. .......29
A. Desain Laboratorium........................................................................................29
B. Pedoman Umum Keamanan Laboratorium ....................................................29
C. Pedoman Khusus .............................................................................................32
D. Penanganan Limbah. .......................................................................................38
E. Penanganan Tumpahan Infeksius ...................................................................39
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DAFTAR SINGKATAN
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DAFTAR TABEL
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DAFTAR GAMBAR
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DAFTAR LAMPIRAN
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LAMPIRAN
KEPUTUSAN DIREKTUR JENDERAL BINA UPAYA KESEHATAN
NOMOR : HK.02.04/V/1808/2012
TANGGAL : 27 SEPTEMBER 2012
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M. gastrii, M. malmoense, M. avium complex, M. haemophilum, M. xenopi.
3. ScotochromogenV -$)7') ."73$) %9(9)" ?")77' X
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chelonae complex: #$&')6'%') %43') -'+" 79(9)7') ")" *"-'% .'*97$) &'7"
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Gambar 2. Contoh lay out laboratorium pemeriksaan Mycobacterium tuberculosis
dengan fasilitas biomolekuler
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Tabel 4. Peralatan laboratorium biakan dan uji kepekaan dengan media padat
untuk beban kerja 6000 uji/tahun
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Gambar 3. Tanda baku biohazard international
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5. Penggunaan BSCkelas II
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Gambar 5. Skema aliran udara pada BSC klas 2
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Komposisi Kit tumpahan biologi
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Pedoman Umum pada Insiden tumpahan
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Pembersihan tumpahan
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D. Penanganan Limbah.
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CatatanR
Pada sampel dahak SPS atau SP, kerjakan pemeriksaan biakan dalam
tabung yang sama. Kumpulkan dahak menjadi satu atau ambil dahak
dengan hasil BTA terbanyak
Identifikasi dikerjakan pada koloni murni dan jumlah memadai (confluent)
Untuk bahan yang steril,misalnya cairan liquorserebrospinal, bronkolaveolar
lavage tidak perlu dilakukan dekontaminasi dan homogenisasi, cukup
dilakukan konsentrasi dengan sentrifugasi minimum 3000 g selama 15
menit
Untuk bahan bilasan lambung biarkan sisa makanan mengendap, kemudian
dilakukan sentifugasi 3000g selama 15 menit terhadap supernatannya.
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Pembersihan tumpahan di BSC.
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Pembersihan tumpahan sentrifugasi
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Gambar 8. Alur Uji Kepekaan Mycobacterium tuberculosis
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Tabel 7. Diferensiasi diantara Mycobacterium tuberculosis complex
Species Niasin Nitrat
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tahan
panas
Pyra-
zinami-
dase
Urease
Hidro-
lisa
tween
10 hari
Kepe-
kaan
pada
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M. tubercu-
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J95Z
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Gambar 7. Alur Kerja Identifikasi Rutin
*Subkultur hanya dilakukan apabilajumlah koloni tidak memadai (
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VII. PRAKTEK LABORATORIUM
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8)-9)$5"' -') 3$)774)'%') 3$-"' .'-'* &$+&',') *$(4+C %'+$)' 3$-"' ")" 6')7 .'(")7
&')6'% -"74)'%') -" 8)-9)$5"' 5$+*' +$('*"K 34+',:
A. Pengambilan, Pengiriman dan Penerimaan Spesimen
Spesimen dahak
1. Alat dan bahan yang diperlukan
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B. Pembuatan Media Lowenstein-Jensen
1. Alat dan bahan yang diperlukan untuk membuat media :
Alat :
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&: E.'*4(' Z 5$)-9%
M: b$('5 4%4+ POOO 3( 5*$+"(
-: b$('5 &$'%$+ POOO 3( 5*$+"(
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K: ;'&4 c+($)3$6$+ HYO 3(C POOO
3( 5*$+"(
7: 29*9( @Md'+*)$6
,: 24)5$)
": J9D$+ .".$*Z.".$*9+
?: .G 3$*$+
%: /*9%('K
(: 8)5."5'*9+Z G9* 0"+ />$)
3: 2($)-$+ 5*'")($55 5*$$(
): @'7)$*"M 5*"++$+ s 3'7)$*"M &'+ 5*$+"(
9: d9+9)7 5*$+"(
.: #'") %'5' 5*$+"(
h: ;'. .$3&$+5", *$(4+
Bahan :
': 2',') -'5'+ @$-"43 ;N -$)7') %93.95"5" RPX J9*'55"43 -",6-+97$) .,95.,'*$
HX @'7)$5"43 54(K'*$ ,$.*',6-+'*$
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media. Hal ini dianjurkan jika pengolahan dahak dilakukan pada
tabung 15 ml.
-: J$)79(',') -$)7') -$)7') S"*'5" =OOO 7 V&4%') =OOO +.3X
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U: BSC Class II
Cara pengolahan dahak
P: Dahak tanpa CPC diolah sebagai berikut :
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Catatan :
PBS dapat dibuat dalam bentuk konsentrat 10x. Untuk itu
timbang bahan 10 kali lipat. Larutan kerja dibuat dengan jalan
menambahkan 1 bagian volume PBS 10 x dengan 9 bagian
volume aquades,pH 7.0
HCl adalah asam kuat. Jika terjadi tumpahan, segera siram
dengan air sebanyak mungkin
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Jika menggunakan medium Ogawa 3% untuk inokulasi, setelah
dihomogenisasi dengan NaOH 4% dan didiamkan selama 15
menit, contoh uji yang sudah diolah langsung ditanam pada
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Mycobacterium tuberculosis 3$3.4)6'" 5"K'* R
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F. Identifikasi Mycobacterium tuberculosis
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Inokulasi bahan pada media :
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_ S'/G
Catatan
Kristal sianogen bromida sangat sukar larut. Karena itu
pembuatan larutan sianogen bromida dapat juga dilakukan
dengan menambahkan 50 ml air dalam botol berisi 25 gr
sianogen bromida dan dibiarkan minimal semalam. Sianogen
bromida yang terlarut mempunyai konsentrasi sekitar 10%
Cara kerja
P: 1'3&', P
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p j
Suspensi (1mg/ml
107/ ml )
Media bebas
Obat
Obat/konsentrasi (mg/L)
Pengenceran (estimasi
jumlah kuman per ml )
E VUX G VO:HX B VUOX c VHX
10-1 (106)
10-2 (105)
10-3 (104) UkC Uk U k
VtYOOX
P =k ] Hk
10-4 (103)
10-5 (102) =WC UYp UY O PH O HO
Proporsi resistensi xO:P_ HI_ O:H_ UU:U_
Hasil dilaporkan E B E B
p pilih angka tertinggi dari jumlah koloni pada media tanpa obat sebagai dasar
perhitungan.
Koloni yang dipakai dalam perhitungan pada tabel contoh diatas adalah :
H (12) pada 10-5; E (20) pada 10-5 & R (8) pada 10-3) dan S (1) pada 10-3).
N"%' -","*4)7 3'%' *'3.'% 5$&'7'" &$+"%4* R
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B"K'3."M") R ]ZUCYOO e POO_ m O:H_ VE$)5"*"KX
c*,'3&4*9( R HOZUY e POO_ m UU:U_ VB$5"5*$)X
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Bahan yang diperlukan :P: 24&4% 5454 5%"3 Vn ('&9+'*9+6 7+'-$ nX
H: 0h4'-$5
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Catatan :
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*$+,'-'. S'/G ,'+45 5')7'* *$+%$)-'(": N"%' -$)7') %9)5$)*+'5" H_C M$3'+')
3'5", *")77": )'"%%') %9)5$)*+'5" '%,"+ 3$)?'-" =
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Alat Yang Diperlukan
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H: 2',') .$)6$+'. R %$+*'5C *"554$
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U: #')*9)7 .('5*"% &$+5$7$(
Y: a9+34("+ "-$)*"*'5 "59('*
W: J'+'!(3C ('%&')
I: E*"%$+ R Biohazard, Fragile,
Cara kerja :
P: 14*4. 29*9( @M d'+*)$6 -$)7') +'.'* %$34-"') 5$7$( -$)7') .'+'!(3: @'54%%')
H &9*9( -'+" P .'5"$) %$-'('3 %')*9)7 .('5*"% &$+5$7$(:
H: 24)7%45 *"'. %')*9)7 .('5*"% -$)7') %$+*'5 *"554$ '7'+ ?"%' *$+?'-" &9M9+')C *"-'%
%$(4'+ -'+" D'-', &',') ")K$%5"45
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Y: 14*4. D'-',C +$%'*%') -$)7') ('%&')
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N. Pengelolaan LimbahE$34' &',')Z '('* 6')7 *$(', '*'4 -"')77'. *$+M$3'+ ,'+45 -"5*$+"("5'5" 5$&$(43
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CATATAN TAMBAHAN
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-"*$+"3': @$3&$+"%') ")K9+3'5" 6')7 +")M" -') 34-', -"3$)7$+*" 3$+4.'%') 5'(',
5'*4 %4)M" %$&$+,'5"(') .$)743.4(') -') .$)7"+"3') 5.$5"3$) 6')7 &'"%:
H: 8-$'()6' M9)*9, 4?" -",'+'.%') 5'3.'" %$ ('&9+'*9+"43 -'('3 D'%*4 P V5'*4X ?'3:
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2. Pemantapan Mutu External (PME) atau External Quality Assurance (EQA)
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3. Peningkatan mutu (Quality Improvement)
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IX. PENCATATAN DAN PELAPORAN
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Lampiran 3. Form TB 05 MDR (Formulir permohonan lab TB MDR)
TB 05 MDRPENANGGULANGANT B NASIONAL
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No. Alat Pemeliharaan Dilakukan oleh
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