HONGOS ENDOFITOS EN PLANTAS MEDICINALES.

Jorge Ramírez

Solveig Tosi

Mayo, 2007

UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA

Primeras Jornadas Andinas de Etnomedicina.

INTRODUCCION

La palabra endófito se deriva del griego endon, que significa dentro y phyte que significa planta.

Grupo muy interesante de microorganismos asociados a plantas terrestres y acuáticas.

Seis de los veinte medicamentos más comúnmente prescritos son de origen fúngico. (Gloer 1997)

INTRODUCCION

5 % de los hongos han sido descritos, (Hawksworth 1991, 2001).

Gran Fuente potencial para nuevos Productos. (Schulz et al., 2002).

Solo existen datos de hongos epifitos asociados a diversas especies de Baccharis, Piper y Borreria (Farr et al., 1995).

En la mayoría de Plantas la presencia de hongos endófitos es beneficiosa. (Siegel & Scharld, 1991)

INTRODUCCION

Las Plantas seleccionadas en función de:

Son plantas nativas de la zona Andina de Ecuador.Son Plantas medicinales y por tal motivo utilizadas por la población local (Zaragoza 2003)

El propósito principal del trabajo es aislar los hongos endófitos de 4 plantas ecuatorianas con interés medicinal: Baccharis latifolia (Ruiz & Pav.) Pers., Baccharis obtusifolia Kunth Piper barbatum Kunth,Borreria laevis (Lam.) Grises. Además determinar la interacción entre los hongos endofitos aislados y microorganismos (hongos y bacterias): Aspergillus niger, Stafilococcus aureus, Klebsiellapneumomiae, Pseudomonas aeruginosa y Escherichia coli.

MATERIALES Y METODOS

Al Sur del Ecuador en laProvincia de Loja.

Lugar de estudio

Figura 1: Localización geográfica de la provincia de Loja, mapa creado en SIG-UTPL 2005.

Figura 2: Localización de las zonas de muestreo. En la zona 1 fueron colectadas: Baccharis latifolia, Baccharis obtusifolia y Borreria laevis, mientras que en la zona 2 se colecto Piper barbatum. Mapa creado en el SIG-UTPL 2006

Las hojas se lavaron con agua potable y fueron esterilizadas superficialmente por inmersiones consecutivas, durante 1 minuto en etanol 70% (v/v), 10 minutos en hipoclorito de sodio 3% y 30 segundos en etanol 70% (v/v) siguiendo el método reportado por Bills (1996).

MATERIALES Y METODOS

10 hojas al azar

10 Individuos

1 2

3 4

Cada hoja

Inoculo al azar / 1 pedazo

Medio MEA

AislamientoMEA

MEA

MEA

2

2-1

2-2

2-3

Recolección y Tratamiento de la muestra

Evaluación de la Interacción Antagonista entre los aislados Fúngicos y Hongos y Bacterias Patógenas.

MATERIALES Y METODOS

Las bacterias fueron inoculadas con Tryptic Soy Agar (TSA; DIFCO), como medio de cultivo e incubadas a 37 ºC, hasta observar crecimiento.

Los hongos fueron inoculados con Potato Dextrosa Agar (PDA; DIFCO), como medio de cultivo e incubados en el laboratorio a temperatura ambiente (25 ± 2ºC) expuestos a periodos naturales de luz y oscuridad.

Prueba Hongo-Hongo

MATERIALES Y METODOS

Método Fokkema (1973). Formula de Van Den Heuvel.

( ) 100*/% rrRI −=

Prueba Hongo-Bacteria

MATERIALES Y METODOS

Prueba similar a la anterior, del un lado el micelio fúngico y del otro la bacteria

RESULTADOS Y DISCUSION

X (10 %)Zygomycetes-like

X (10%)Stilbacea

X (10 %)Phoma-like

X (10%)Nigrospora sp.

X (70%)X (10%)X (40%)X (100%)Micelia sterilia

X (10 %)X (10%)Epicoccum-like

X (20%)Coelomycetes

X (20%)Aspergillus sp.

X (10 %)X (30 %)X (70 %)Alternaria sp.

X (10 %)X (20 %)Alternaria-like

Piper barbatumBaccharis

obtusifoliaBaccharis

latifoliaBorreria laevisAislados

fúngicos

En la tabla, se enlistan los taxa de hongos encontrados en las cuatro especies de plantas medicinales investigadas

RESULTADOS Y DISCUSION

Alternaria-like Alternaria sp

Coelomycetes Nigrospora sp.

Zygomicetes-like

X1000

X400

X400

X1000

X400

RESULTADOS Y DISCUSION

Diversos taxa aislados, son: Alternaria, Epicoccum, Nigrospora, Phoma resultando como hongos ambientales comunes, estos se encuentran comúnmente en el aire, como epifitos o en asociación con numerosos sustratos (Domsch et al., 1980).

Mayoritariamente se ha aislado Micelia sterilia en las cuatro especies de plantas medicinales investigadas, hongos interesantes que viven en posible asociación endófitica. Dato que arroga una perspectiva muy amplia para el aislamiento de metabolitos secundarios, de interés potencial.

Pruebas de Interacción entre Hongos y Bacterias.

RESULTADOS Y DISCUSION

En la tabla , se presenta los resultados de la interacción antagonista de algunas de las cepas de hongos aislados frente a microorganismos patógenos (Hongos y Bacterias). El porcentaje de inhibición I1, esta referido a la inhibición del patógeno sobre la cepa ensayada y el porcentaje de inhibición I2, esta referido a la inhibición de la cepa sobre el patógeno.

++++21,7432,14Stilbacea

+-++39.137.14Micelia sterilia 3

----25.8715.85Micelia sterilia 2

+**+39,1310,71Micelia sterilia 1

++++2125Epicoccum-like

++++2215,93Nigrospora sp.

++++8,737,5Phoma-like

++++17,3726,78Alternaria-like

++++36,9517,86Alternaria sp.

I2 %I1 %Staphylococcus

aureusPseudomonas

aeruginosaKlebsiella

pneumonieEscherichia coli

Aspergillus nigerAislados Fúngicos

RESULTADOS Y DISCUSION

Cultivo Doble. Inhibición de K pneumoniae de parte de Miceliasterilia 3

Cultivo Doble. Inhibición de E colide parte de Nigrospora sp.

Cultivo Doble. Inhibición de Aspergillus niger de parte phoma-like.

Cultivo Doble. Inhibición de Aspergillus niger de parte alternaria-like.

RESULTADOS Y DISCUSION

El potencial bioactivo de los hongos aislados es prometedor, la mayoría muestran propiedad antagonista positiva tanto con bacterias como también con Aspergillus niger. Principalmente las tres cepas que no han fructificado nombrados como Micelia sterilia, exhiben antagonismo positivo.

CONCLUSIONESMicelia sterilia fue la cepa fúngica mayoritariamente aislada en las cuatro especies de plantas medicinales estudiadas, principalmente en Borrerialaevis (Lam.) Grises, se encontró presente en todos los individuos muestreados.

Los géneros de Alternaria sp., fueron comúnmente aislados en Baccharislatifolia (Ruiz & Pav.) Pers., Piper barbatum Kunth y Borreria laevis (Lam.) Grises.

Los géneros Phoma-like y Nigrospora sp., además la Familia de Moniliales, (Stilbacea), se aislaron de manera común en Borreria laevis (Lam.) Grises.

Los géneros, Zygomycetes-like, Aspergillus sp y los hongos Coelomycetes, se aislaron de forma común en Piper barbatum Kunth.

Epicoccum-like, fue un género fúngico aislado tanto en Borreria laevis(Lam.) Grises. como también en Piper barbatum Kunth

CONCLUSIONESLos resultados de los ensayos de bioactividad, mediante cultivo doble, evidencian que, Alternaria sp, Micelia sterilia 1(Hospedero Baccharislatifolia), Micelia sterilia 2 (Hospedero Borreria laevis) y Micelia sterilia 3 (Hospedero Baccharis obtusifolia), muestran actividad antifúngica, aunque débil contra Aspergillus Níger.

La mayoría de las cepas fúngicas testadas, muestras actividad antibacteriana, en contra de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus.

El resultado mas interesante se muestra en lo referente al Micelio estéril 3 (Hospedero Baccharis obtusifolia), pues este muestra una marcada actividad antibacteriana, principalmente frente a Klebsiella pneumoniae.