Microscopio, del griego: "mikro" = pequeño y "scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas)

MICROSCOPÍA MICROSCOPÍA

DE LUZ

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

se clasifican en:

De acuerdo con la radiación que utilizan

La naturaleza de la luz • Puede ser descrita mediante dos modelos:

– Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James Clerk Maxwell)

– Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza corpuscular ó fotónica (Albert Einstein)

• Forma parte del espectro electromagnético • Luz blanca está constituida por varios colores diferentes (Isaac

Newton)

Espectro electromagnético

ESPECTRO VISIBLE

ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO

Luz visible Forma parte de una estrecha franja que va

desde longitudes de onda de 400 nm (violeta) hasta los 700 nm (rojo). (0.4 – 0.7 mm)

El espectro de luz visible puede ser percibido

por el ojo humano y su frecuencia determina su

color.

Las Lentes

• Objetos que concentran o hacen

diverger los rayos de luz

• Existen dos tipos principales de

lentes:

Convergentes: forman imágenes

reales

Divergentes: forman imágenes

virtuales

Lentes convergentes

Lentes divergentes

Amplificación Vacía: Incremento de la imagen sin que pueda percibirse mayores detalles.

Amplificación total: Dado por el producto de la lente ocular por el objetivo.

Amplificación: Aumento del tamaño de la imagen.

Conceptos en microscopía Ocular 10x

Objetivo 10x

Aumento Total 100x

Poder de Resolución: Medida de la capacidad para ver puntos vecinos como entidades diferentes. El límite de resolución del microscopio de luz es de 0.2 micrómetros (0.22 μm) ó 200nm.

• Milímetro: milésima parte del metro (mm)

• Micrómetro: milésima parte del milímetro (mm)

• Nanómetro: milésima parte del micrómetro (nm)

• Angstrom: décima parte del nanómetro (Aº)

Medidas Microscópicas

Microscopio

compuesto

fabricado en

1751 por

Magny.

El microscopio compuesto • Instrumento óptico que se usa para

aumentar o amplificar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista.

• Se utiliza para examinar objetos transparentes o cortados en láminas tan finas que se transparentan

• Está conformado por tres sistemas:

1. Iluminación 2. Óptico 3. Mecánico

Formación de la imagen

LENTE INTRAOCULAR

Genera la imagen sobre la retina que es la que el cerebro interpreta

LENTE OCULAR

Amplifica la imagen anterior y forma una IMAGEN VIRTUAL

LENTE OBJETIVO

Amplifica la imagen y forma: IMAGEN REAL E INVERTIDA

CONDENSADOR

Concentra los rayos dispersos e ilumina solo la muestra

FUENTE DE LUZ

Imprescindible para que funcione el microscopio

• El contraste lo provee la tinción de las

muestras

Imágenes con microscopio

de campo claro

1. Campo claro, brillante o luminoso:

La luz proveniente de la fuente converge sobre la muestra se forma un

campo brillante alrededor de la imagen de la muestra.

MICROSCOPIOS DE CAMPO CLARO, BRILLANTE Ó LUMINOSO

Microscopio óptico convencional Microscopio óptico convencional con doble óptica para

aprendizaje

TEMPORALES

FIJAS

Muestra +Colorante + Medio de Montaje

Muestra + Fijadores + Tinción + Medio de Montaje

Cubreobjeto Portaobjeto

• Permite observar muestras vivas, o carentes de color.

• sin uso de colorantes

2. Contraste de Fases:

Convierte la diferencia de índices de

refracción en diferencias de intensidad.

Fibroblastos teñidos con el fluorocromo FITC

Bacillus subtilis esporulando teñidos con FITC, DAPI y

βgalactosidasa.

3. Fluorescencia:

Utiliza moléculas fluorescentes que al iluminarlas con radiación invisible, emiten radiación

visible.

Utiliza luz de longitud de onda corta (uv) para excitar los electrones de la muestra.

La muestra se “tiñe” con una sustancia fluorescente (fluorocromos) que absorbe la energía de las ondas cortas de la luz y emite la luz de longitudes de ondas más largas (verde).

• Se basa en la birrefringencia (emite brillantez) de los objetos.

• Utiliza luz polarizada plana.

• Las muestras se colocan entre dos láminas polaroid que tienen sus direcciones de vibración perpendiculares

Cristales de ácido urico observados con microscopio de luz polarizada

4. DE LUZ POLARIZADA:

.

5. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

• Dispositivo que permite transmitir la luz de forma circular, dejando el centro oscuro.

• Con esto conseguimos que el fondo de la muestra aparezca negro y los especímenes brillantes.

• El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitación cerrada.

• Las porciones transparentes del

espécimen quedan oscuras, mientras que las superficies y partículas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en todas las direcciones

• Se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminación normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla.

Utiliza muestras de cortes seriados teñidas con fluorescencia, para reconstruir una imagen tridimensional

6. Confocal: Combina la microscopía fluorescente con el análisis

electrónico de la imagen para obtener imágenes tridimensionales.

Microscopio confocal

MICROSCOPIA OPTICA

CAMPO CLARO Requiere tinciones

CONTRASTE DE FASES

Permite diferenciar densidades, no

tinciones

FLUORESCENCIA Utiliza luz UV, usa

fluorocromos

DE LUZ POLARIZADA Produce birrefringencia

CAMPO OSCURO Permite ver muestras

vivas, no tinciones

CONFOCAL Forma imágenes 3D