K E L O M P O K 4

A N G G O T A :

• A S Y A P U T R I R I U P A S S A

• A U R E L L Y A H A R M U D A N I

• D E L L A N U R F I T R I H A N I F A H

• P U T R I N A D H I L A H

• S R E S A A Z Z A H R A S A L S A B I L A

PRAKTEK PEMBUATAN

“POTATO DEXTROSE

AGAR”

I. TUJUAN

dapat mengetahui bagaimana cara membuat media PDA (Potato

Dextrose Agar)

dapat atau mampu membuat Potato Dextrose Agar apabila terjadi kontaminasi pada PDA tersebut

II. ALAT DAN BAHAN

ALAT

Tabung reaksi

Pembakar spiritus

Kapas

Pinset

Pisau

Gelas beker

BAHAN

Kentang ½ kg

Dekstrosa

Agar-agar bubuk

Alkohol 70%

Air

Jamur tiram

III. LANDASAN TEORI

Kultur jaringan suatu metode untuk mengisolasi

bagian dari tanaman seperti protoplasma, sel, jaringan

atau organ yang serba steril, dalam botol kultur yang

steril dan dalam kondisi yang aseptic, sehingga

bagian-bagian tersebut dapat memperbanyak diri dan

beregenerasi menjadi tanaman yang lengkap.

Landasan teori

Kultur jaringan termasuk jenis perkembangbiakan vegetatif

yang prinsip dasarnya sama dengan menyetek. Bagian

tanaman yang akan dikultur (eksplan) dapat diambil dari

akar, pucuk, bunga, meristem, serbuk sari.

Teknik kultur jaringan tidak dapat dilakukan di sembarang

tempat. Teknik ini harus dilakukan di dalam ruangan khusus

yang steril agar terbebas dari kontaminasi udara luar.

Kultur jaringan dilakukan di dalam suatu labolatorium khusus

yang di gunakan untuk kultur jaringan.

Labolatorium berfungsi untuk mengkondisikan kultur dalam

suhu dan pencahayaan terkontrol yang dilengkapi dengan alat

dan bahan untuk pembuatan media.

Landasan TeoriLangkah-langkah Teknik Kultur Jaringan

Kultur jaringan tumbuhan dapat dilakukan dengan langkahseperti berikut :

1. Menyiapkan media tumbuh yang terdiri atas campurangaram mineral berisi unsur makro dan mikro, asam ammio, vitamin, gula, serta hormon tumbuhan denganperbandingan tertentu.

2. Siapkan eksplan (jaringan yang akan di kultur). Misalnyaeksplan berupa potongan dari akar tanaman tertentu.

3. Tanamkan eksplan pada media yang telah di siapkan.

4. Setelah terbentuk calon tumbuhan (akar, tunas) makadipindahkan ke media tanah untuk tumbuh menjaditanaman dewasa

Landasan Teori

Gangguan pada Kultur Jaringan

Gangguan kultur jaringan dapat menyebabkan kematian eksplan.

Gangguan kultur jaringan secara umum dapat muncul dari bahan

yang di tanam, lingkungan kultur maupun manusia yang

melakukannya. Masalah yang muncul antara lain adalah :

1. Kontaminasi oleh bakteri, jamur, virus dan lain - lain. Agar

terhindar dari kontaminasi maka langkah-

langkah pelaksanaannya harus mengikuti prosedur yang benar

dan dalam keadaan steril.

2. Browning (pencoklatan), untuk mengatasinya dengan cara

mengabsorbi fenol penyebab pencoklatan dengan arang aktif.

Cara Kerja

CARA PEMBUATAN PDA

Kupas kentang, kemudian cuci bersih.

Lalu potong kentang berbentuk dadu 2cm.

Siapkan pembakar spiritus dan gelas beker.

Isi gelas beker dengan air 1 liter dan panaskan hingga mendidih

Setelah mendidih siapkan tabung reaksi, cuci bersih dan sterilkan dengan direbus

dalam gelas beker 10-15menit untuk menghilangkan bakteri patogen.

Angkat tabung reaksi, taruh di nampan/wadah steril

Masukkan kentang ke dalam gelas beker selama 15-20 menit sampai kentang lunak.

Pisahkan kentang hasil rebusan, kemudian saring air hasil rebusannnya

*note: apabila air rebusan kentang berkurang dari 1 liter, tambahkan hingga 1 liter

PDA.

Panaskan larutan PDA dan tambahkan dextrosa serta agar-agar

sambil diaduk perlahan-lahan sampai larut sempurna.

Setelah larut, tuangkan larutan PDA tersebut ke dalam tabung

reaksi sebanyak ¼ volume tabung reaksi tsb.

Lalu tutup tabung reaksi dengan kapas dan lapisi dengan

alumunium foil hingga tidak ada celah udara.

Letakkan tabung reaksi pada wadah steril dengan posisi

miring.

Taruh tabung reaksi di tempat yg tidak ada sinar matahari

(gelap) dan tunggu 1 minggu untuk hasil PDA nya

CARA PENGAMBILAN JARINGAN JAMUR

Setelah 1 minggu didiamkan, hasil PDA akan menjadi padat.

Buka kapas dan alumnium foil pada PDA yang sudah padat.

*note: PDA yang sempurna apabila tidak ada perubahan warna pada isi PDA,jika

ada perubahan berarti telah terkontaminasi oleh bakteri patogen.

Siapkan jamur tiram utuh, dan semprot/sterilkan menggunakan alkohol 70%

Ambil sedikit daging jamur bagian antara batang dengan daun jamur menggunakan

pinset

Lalu masukkan kedalam media PDA yang sudah jadi, taruh pada posisi tengah.

Tutup kembali media PDA menggunakan kapas dan lapisi menggunakan alumunium

foil.

Taruh kembali pada wadah dan simpan di tempat yang gelap dan kering. Tunggu

1 minggu.

Data Pengamatan

Sebelum didiamkan Sesudah didiamkan

Cair Padat

Berwarna putih Berwarna putih kecoklatan

Tidak berbau Berbau busuk

Analisis Data

Dari uji coba yang telah dilakukan dan data yang sudah diambil ternyata kegitatan ini tidak terlaluberhsil karena di dalam media PDA tersebut masihterdapat bakteri pathogen(bakteri disekitar ruangpercobaan). Bakteri bakteri tersebut bisa masukdikarenakan ruang dan alat praktek pembuatan media PDA yang kurang steril.

Seharusnya media PDA yang berhasil tidak terdapatwarna kecoklatan dan tidak terdapat bakterididalamnya. Media PDA yang berhasil biasanyatergantung pada ke sterilan tempat dan alat padasaat uji coba/praktek berlangsung.

Kesimpulan

Berdasarkan Uji coba yang telah dilakukan ternyatapraktek pembuatan media PDA ini masi tergolongkurang berhasil karena tempat dan alat yang kurangsteril.

TERIMAKASIH