Download pdf - UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BIJI KELOR (Moringa … · 2018. 8. 15. · penyebab kematian meliputi perforasi usus, prolapse rekti, kejang, anemia, hiponatremia, toxic megacolon

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BIJI

KELOR (Moringa oleifera Lmk.) TERHADAP

BAKTERI Shigella dysenteriae

SKRIPSI

OLEH:

ENI RAHMAWATI

H71214009

PROGRAM STUDI BIOLOGI

JURUSAN SAINS

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SUNAN AMPEL

SURABAYA

2018

digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id

xii

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BIJI KELOR (Moringa oleifera

Lmk.) TERHADAP BAKTERI Shigella Dysenteriae

ABSTRAK

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh konsentrasi esktrak biji

kelor (Moringa oleifera Lmk.) terhadap bakteri Shigella dysenteriae dengan

menggunakan pelarut metanol. Penelitian eksperimental ini menggunakan RAL

(Rancangan Acak Lengkap) yang terdiri atas uji difusi dan uji dilusi. Uji difusi terdiri

atas 4 konsentrasi ekstrak, masing-masing terdiri atas (75, 100, 200, 400 mg/ml).Uji

dilusi terdiri atas 5 konsentrasi ekstrak, masing-masing terdiri atas (75, 60, 45, 30, 15

mg/ml). Parameter yang diukur untuk uji difusi adalah diameter zona hambat (mm),

masing-masing perlakuan terdiri atas 3 ulangan. Uji dilusi digunakan untuk mencari

nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum

(KBM). Data diameter daerah zona hambat dianalisis secara statistik menggunakan

uji Kruskall-Wallis dilanjutkan uji Mann-Whitney, sedangkan data uji dilusi

dianalisis secara deskriptif. Hasil penelitian uji difusi menunjukkan bahwa

konsentrasi ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) berpengaruh menghambat

pertumbuhan bakteri. Nilai zona hambat tertinggi untuk ekstrak biji kelor pada

konsentrasi 400 mg/ml sebesar 7,8 mm. Nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)

pada 75 mg/ml dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) belum dapat ditemukan,

namun memberikan pengaruh penghambatan pertumbuhan.

Kata kunci : Moringa oleifera Lmk., Shigella dysenteriae, KHM KBM.


xiii

ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF MORINGA SEED EXTRACTS (Moringa

oleifera Lmk.) AGAINST BACTERIA Shigella dysenteriae

ABSTRACT

This research was aimed to determine the effects of concentration of moringa

seed extracts (Moringa oleifera Lmk.) against bacteria Shigella dysenteriae using

solvent methanol. This experimental study using the CRD (Completely Randomized

Design) which consists of diffusion test and the test dilution. Diffusion test consisted

of 4 concentrations of extracts, each consisted of (75, 100, 200, 400 mg/ml). Dilution

test consisted of 5 concentrations of extract, each consisted of (75, 60, 45, 30, 15

mg/ml). The parameters measured for the diffusion test is the diameter of the

inhibition zone (mm), each treatment consisted of 3 replications. Dilution test was

used to find the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum

Bactericidal Concentration (MBC). Diameter of the inhibition zone data were

analyzed using a statistical test of Kruskall-Wallis test followed Mann-Whitney, the

dilution of the test data were analyzed descriptevely. The results of diffusion tests

showed that the concentration of moringa seed extract (Moringa oleifera Lmk.) gives

the effect of growth inhibition. The inhibition zone highest value for the Moringa

oleifera seed extract at a concentration of 400 mg/ml 7,8 mm. Minimum Inhibitory

Concentration (MIC) values are at 75 mg/ml and Minimum Bactericidal

Concentration (MBC) can not be found, but it gives the effect of growth inhibition.

Key word : Moringa oleifera Lmk., Shigella dysenteriae, MIC MBC


vi

DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL .................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. ii

PERNYATAAN KEASLIAN .......................................................................... iii

KATA PENGANTAR ..................................................................................... iv

DAFTAR ISI .................................................................................................... vi

DAFTAR TABEL ............................................................................................ ix

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... x

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xi

ABSTRAK ....................................................................................................... xii

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................... 1

A. Latar Belakang .......................................................................... 1

B. Rumusan Masalah .................................................................... 6

C. Tujuan Penelitian ...................................................................... 6

D. Batasan Penelitian .................................................................... 7

E. Manfaat Penelitian .................................................................... 8

BAB II KAJIAN PUSTAKA ......................................................................... 9

A. Kelor (Moringa oleifera Lmk.) ................................................ 9

1. Deskripsi Umum ................................................................... 9

2. Klasifikasi ............................................................................. 10

B. Komponen Kimiawi Biji Kelor (Moringa oleifera Lmk.) ........ 10

C. Manfaat Biji Kelor (Moringa oleifera Lmk.) ........................... 11

D. Metode Ekstraksi ...................................................................... 13

1. Ekstraksi ............................................................................... 13

2. Ekstraksi dengan Menggunakan Pelarut .............................. 13

a. Cara Dingin ...................................................................... 13

1). Maserasi ..................................................................... 13

2). Perkolasi .................................................................... 14

b. Cara Panas........................................................................ 14

1). Refluks ....................................................................... 14

2). Soxhlet ....................................................................... 14

3). Digesti ........................................................................ 14

4). Infus ........................................................................... 14

5). Dekok ......................................................................... 14

3. Destilasi Uap ........................................................................ 15

E. Antimikroba .............................................................................. 15

1. Mekanisme Kerja Antimikroba ............................................ 15

a. Menghambat Sintesis Dinding Sel ................................... 16

b. Menghambat Sintesis Asam Nukleat ............................... 16

c. Menghambat Sintesis Protein........................................... 16

d. Merusak Keutuhan Membran sel ..................................... 16

e. Menghambat Sintesis Metabolisme Esensial ................... 16

2. Faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Antimikroba ............ 17

a. Konsetrasi Antimikroba ................................................... 17

b. Jumlah Mikroorganisme .................................................. 17

c. Suhu ................................................................................. 17


vii

d. Jenis Mikroorganisme ...................................................... 17

e. pH ..................................................................................... 17

f. Adanya Senyawa Organik ................................................ 17

3. Metode Pengujian Antimikroba ........................................... 18

a. Metode Penyebaran (diffusion method) ........................... 18

1). Metode cakram kertas (disc diffusion method) .......... 18

2). Metode garis tingkat (E-Test) .................................... 18

b. Metode Pengenceran (dilution method) ........................... 18

1). Metode dilusi cair (broth dilution test) ...................... 18

F. Senyawa Fitokimia ................................................................... 19

1. Flavonoid .............................................................................. 19

2. Alkaloid ................................................................................ 20

3. Saponin ................................................................................. 20

4. Tanin ..................................................................................... 20

G. Bakteri Shigella dysenteriae ..................................................... 21

1. Deskripsi Umum ................................................................... 21

2. Klasifikasi ............................................................................. 23

H. Patogenitas Shigella dysenteriae .............................................. 23

BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN ............ 25

A. Kerangka Konsep ..................................................................... 25

B. Hipotesis Penelitian .................................................................. 26

BAB IV METODOLOGI PENELITIAN ........................................................... 27

A. Rancangan Penelitian ............................................................... 27

B. Waktu dan Lokasi Penelitian .................................................... 28

C. Bahan dan Alat Penelitian ........................................................ 29

1. Bahan Penelitian ................................................................... 29

2. Alat Penelitian ...................................................................... 29

D. Variabel Penelitian ................................................................... 29

1. Variabel Bebas ...................................................................... 29

2. Variabel Terikat .................................................................... 30

3. Variabel Terkendali .............................................................. 30

E. Prosedur Penelitian ................................................................... 30

1. Koleksi Tumbuhan ............................................................... 30

2. Ekstraksi Tumbuhan ............................................................ 30

3. Uji Fitokimia ........................................................................ 32

a. Uji Alkaloid .................................................................... 32

b. Uji Flavonoid .................................................................. 32

c. Uji Saponin ..................................................................... 32

d. Uji Tanin ......................................................................... 32

4. Sterilisasi Alat dan Bahan .................................................... 33

5. Pembuatan Stok Bakteri....................................................... 33

6. Pembuatan Suspensi Mikroba Uji........................................ 33

7. Penentuan Aktivitas Antimikroba ........................................ 34

a. Metode Cakram Kertas/Disc Diffusion Method.............. 34

b. Metode Pengenceran dalam Tabung/Dilusi .................... 34

F. Analisis Data ............................................................................ 35


viii

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 36

A. Hasil .......................................................................................... 36

1. Hasil Uji Difusi Kertas Cakram (disc diffusiom method)

terhadap Shigella dysenteriae .............................................. 36

2. Hasil Uji Dilusi (tube dilution method) terhadap

Shigella dysenteriae ............................................................. 39

B. Pembahasan .............................................................................. 40

1. Pembahasan Uji Difusi Kertas Cakaram (disc diffusion

method) terhadap Shigella dysenteriae ................................. 40

2. Pembahasan Uji Dilusi (tube dilution method) terhadap

Shigella dysenteriae .............................................................. 42

BAB VI PENUTUP ............................................................................................ 47

A. Simpulan ...................................................................................... 47

B. Saran ............................................................................................ 47

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 48

LAMPIRAN ........................................................................................................ 53


1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Disentri merupakan salah satu penyakit diare akut dengan kondisi

kronis meliputi diare, nyeri perut, demam, mual dan muntah. Tinja yang

melewati usus besar berjalan dengan cepat karena bakteri telah menembus

usus besar (Munfaati et al., 2015).

Salah satu penyebab disentri adalah Shigella dysenteriae atau disebut

penyakit disentri basiler, yaitu suatu infeksi peradangan akut saluran

pencernaan dengan kondisi kronis yang dapat berakibat fatal pada penderita

jika tidak ditangani dengan benar (Arthasari., 2015). Menurut WHO (2016)

dari 165 juta angka kejadian diare yang disebabkan oleh Shigella dysenteriae

setiap tahun, kebanyakan 99 % terjadi di negara berkembang. Pada tahun 2013

, menunjukkan angka kematian sebanyak 28.000 hingga 48.000 kasus kematian

yang disebabkan oleh Shigella dysenteriae, sebagian besar kasus terjadi di

negara berkembang dan lebih dominan terjadi pada anak-anak usia di bawah 5

tahun.

Shigella dysentriae dapat bertahan hidup di lingkungan asam (lambung)

dan menyerang sel-sel epitel usus besar untuk dapat menginfeksi manusia.

Menyebabkan usus mengalami inflasi serta sel- sel akan mati, sehingga diare

tampak berdarah dan berlendir. Inilah yang menjadi karakteristik infeksi

Shigella dysenteriae (Sari, 2015).


2

Diare shigellosis pada anak usia di bawah 5 tahun merupakan masalah

serius karena manifestasinya cukup berat akibat komplikasi yang dapat

menyebabkan kematian (Abdullah et al., 2012). Komplikasi shigelosis

penyebab kematian meliputi perforasi usus, prolapse rekti, kejang, anemia,

hiponatremia, toxic megacolon dan sindrom hemolitik uremik. Pada kasus E.

coli apabila terjadi komplikasi berlanjut akan menyebabkan sindrom hemolitik

uremik (Kusumaningsih, 2010).

Antibiotik yang resisten terhadap Shigella dysenteriae diantaranya

streptomycin, ampisilin, tetrasiklin, chloramphenicol dan ciprofloxacin.

Penggunan antibiotik dapat menganggu fungsi kinerja pada organ hati, jantung

dan ginjal jika penggunaannya dalam waktu yang lama (Munfaati et al., 2015).

Pada saat ini diperlukan pengobatan alternatif dari tanaman herbal untuk

menghambat pertumbuhan bakteri Shigella dysenteriae.

Shigella dysenteriae memiliki resistensi terhadap beberapa antibiotik

diantaranya tetrasiklin, ampisilin, streptomycin dan chloramphenicol.

Penggunaan antibiotik dalam jangka panjang dan tidak tepat dosis juga dapat

menganggu fungsi kinerja pada organ ginjal, jantung dan hati (Munfaati et al.,

2015). Oleh karena itu, perlu dikembangkan alternatif pengobatan dengan

menggunakan bahan alam yang diharapkan lebih efektif, efisien dan aman

dalam upaya menghambat pertumbuhan bakteri Shigella dysenteriae.

Sebagai manusia yang dikaruniai akal, manusia diperintahkan untuk

selalu berpikir dan mencari sesuatu yang belum diketahui manfaat dan

bahayanya, baik itu benda mati maupun makhluk hidup seperti hewan dan


3

tumbuhan. Allah SWT menciptakan segala sesuatu agar kita berpikir, seperti

yang dijelaskan di dalam firman-Nya Surat Ar-Ra’d (13) ayat 4:

واحد لا ء با وان يسقى وان وغي ر صن يل صن و ف الرض قطع متجورت وجن ت من اعناب وزرع ون

عقلون ال ك لقلي ان ف ذلك ليت ل قوم ي ون فضل ب عضها على ب عض ف

Artinya : ”Dan di bumi ini terdapat bagian-bagian yang berdampingan, dan

kebun-kebun anggur, tumbuhan-tumbuhan dan pohon korma yang bercabang

dan yang tidak bercabang, disirami dengan air yang sama. Kami melebihkan

sebagian tumbuh-tumbuhan itu atas sebagian yang lain tentang rasanya.

Sesungguhnya pada yang demikian itu terdapat tanda-tanda (kebesaran Allah)

bagi kaum yang berfikir” (QS ar Ra’d (13) : 4)

Ayat di atas menyeru kita untuk berfikir bahwa semua yang ada di bumi

diciptakan memiliki tujuan. Seperti Allah menciptakan berbagai macam

tumbuh-tumbuhan yang sesungguhnya tumbuhan tersebut memiliki banyak

manfaat bagi manusia. Salah satu manfaat dari tumbuhan tersebut adalah

memiliki khasiat sebagai obat.

Wa fil ardli qitha’um mutajaawiraatun (“Dan di bumi ini terdapat

bagian-bagian yang berdampingan.”) maksudnya, tanah-tanah yang berdekatan

antara satu dengan yang lain diantaranya ada yang subur dan ada yang tandus

dan diantaranya lagi ada yang kekurangan air dan yang banyak airnya. Wa

jannaatum min a’naabiw wa zar’uw wa nakhiilun (“Dan kebun-kebun anggur,

tanaman-tanaman dan pohon kurma.”) kedua kata zar’un’ dan nakhilun’ dapat

di athaf kan kepada kata jannaatun, jadi dibaca marfu’ dan dapat diathafkan


4

kepada a’naabin, jadi dibaca majrur. Karena itu ada sekelompok ulama yang

membaca dengan kedua bacaan tersebut.

Yusqaa bimaa-iw waahidiw wa nufadl-dhilu ba’dlahaa ‘alaa ba’dlin fil

ukuli (“Disirami dengan air yang sama, kami melebihkan sebagian tanaman-

tanaman yang lain tentang rasanya.”). Al-A’masy meriwayatkan dari Abu

Shalih dari Abu Hurairah, ia berkata: Rasulullah saw, bersabda: “ Ad-daqal dan

Al-Farisi, yang manis dan yang asam.” (HR at-Tirmidzi, ia berkata: “(Hadits

ini) hasan gharib”. Maksudnya meskipun tanaman tersebut ditanam ditanah

yang sama, disiram dengan air yang sama, namun tetap memiliki rasa, bentuk,

warna, bau yang berbeda. Inna fii dzalika la-aayaatil liqaumiy yatafakkaruun

(“Sesungguhnya dalam hal yang demikian itu terdapat tanda-tanda (kebesaran

Allah) bagi kaum yang memikirkan. Maksudnya, dalam anugerah, kebijakan

dan petunjuk Allah itu terdapat tanda-tanda kebesaran-Nya. Tinggal bagaimana

manusia menyadari kebesaran tersebut (Abinyazahid, 2010).

Perkembangan ilmu pengetahuan dan teknologi yang pesat sekarang ini

membuat kita lebih membuka diri dalam menerima perubahan-perubahan yang

terjadi akibat kemajuan dan perkembangan tersebut. Belakangan ini

masyarakat cenderung mendayagunakan alternatif bahan alam sebagai obat,

salah satu bahan alam yang dapat digunakan sebagai anti-bakteri adalah

tanaman kelor (Moringa oleifera Lmk.). Hampir seluruh bagian dari tanaman

kelor dapat dimanfaatkan sebagai obat salah satunya adalah biji kelor

(Krisnadi,2015).


5

Kelor dapat bertahan hidup di kondisi lingkungan apapun bahkan pada

lingkungan ekstrim bahkan pada tanah lempung ataupun pasir, daerah

berpenghujan antara 250 sampai 1500 mm. Dibandingkan dengan tanaman lain

seperti mengkudu yang tidak mampu bertahan hidup pada kondisi lingkungan

ekstrim dan perbanyakan tanaman terbatas menggunakan biji. Tanaman kelor

mudah dikembangbiakkan dengan biji ataupun stek batang (Anwar et al.,

2007).

Hasil uji skrining fitokimia pendahuluan terhadap ekstrak alkohol biji

kelor yang dilakukan oleh (Kheir et al., 2014) ternyata mengandung senyawa

fitokimia sebagai antibakteri, seperti tanin, alkaloid, saponin dan flavonoid.

Walter et al., (2011), melakukan uji terhadap ekstrak biji kelor dengan n-

heksana dapat menghambat bakteri Eschericia coli pada konsentrasi 2,5 %, 5

%, 10 %, 20 %, dan 40 % yang menghasilkan zona hambat berturut-turut 17,5

mm, 9,4 mm, 11,2 mm, 19,6 mm dan 36,8 mm.

Uji in vitro dengan metode kertas cakram dan uji dilusi dilakukan untuk

mengetahui bahwa biji kelor dapat digunakan sebagai antibakteri. Adanya zona

penghambatan berupa lingkaran bening bisa dilihat disekeliling kertas cakram

dan untuk mengetahui konsentrasi hambat (KHM) dan juga kadar bunuh

minimum (KBM) pada uji difusi (Maharani, 2012).

Berdasarkan penelitian sebelumnya tentang khasiat ekstrak etanol biji

kelor terhadap Shigella flexneri pada konsentrasi 400 mg/ml, 200 mg/ml, 100

mg/ml dan 50 mg/ml yang menghasilkan zona hambat berturut-turut 15 mm, 12

mm, 9 mm dan 0 mm. Banyaknya penelitian tentang biji kelor sebagai zat


6

antibakteri sehingga peneliti ingin melakukan penelitian serupa ke spesies

berbeda yaitu Shigella dysenteriae, karena spesies ini memiliki tingkat

keparahan yang lebih tinggi. Ekstraksi biji kelor menggunakan pelarut metanol

dengan konsentrasi 75 mg/ml, 100 mg/ml, 200 mg/ml dan 400 mg/ml,

diharapkan menghasilkan zona hambat berturut-turut yang lebih besar. Oleh

karena itu, peneliti ingin mengetahui “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Biji

Kelor (Moringa oleifera Lmk.) Terhadap Bakteri Shigella dysenteriae”.

B. Rumusan Masalah

1. Apakah ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) memiliki aktivitas

antibakteri terhadap bakteri Shigella dysenteriae ?

2. Berapa konsentrasi minimum ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.)

yang mampu menghambat pertumbuhan (KHM = konsentrasi hambat

minimum) bakteri Shigella dysenteriae ?

3. Berapa konsentrasi minimum ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.)

yang mampu membunuh (KBM = konsentrasi bunuh minimum) bakteri

Shigella dysenteriae ?

C. Tujuan Penelitian

1. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak biji kelor (Moringa

oleifera Lmk.) terhadap bakteri Shigella dysenteriae.


7

2. Untuk mengetahui konsentrasi minimum ekstrak biji kelor (Moringa

oleifera Lmk.) yang efektif menghambat pertumbuhan (KHM = konsentrasi

hambat minimum).

3. Untuk mengetahui konsentrasi minimum ekstrak biji kelor (Moringa

oleifera Lmk.) yang efektif mampu membunuh (KBM = konsentrasi bunuh

minimum) bakteri Shigella dysenteriae.

D. Batasan Penelitian

Batasan masalah yang digunakan dalam penelitian ini adalah :

1. Biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) yang digunakan dalam penelitian ini

berasal dari PT. moringa organik indonesia.

2. Biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) diidentifikasi di LIPI kebun raya

Purwodadi.

3. Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi biji kelor (Moringa oleifera Lmk.)

adalah pelarut Metanol.

4. Bakteri yang digunakan pada penelitian ini adalah bakteri Shigella

dysenteriae.

5. Uji difusi mengukur diameter daerah penghambatan (mm) terdiri 3 ulangan

dan uji dilusi secara visualisasi untuk menemukan nilai kadar hambat

minimum (KHM) dan kadar bunuh minimum (KBM).


8

E. Manfaat Penelitian

1. Penelitian ini secara umum diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah

mengenai potensi biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) sebagai antibakteri

dalam menghambat bakteri Shigella dysenteriae.

2. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai

kandungan fitokimia pada ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.).

3. Penelitian ini diharapkan dapat dijadikan dasar pertimbangan untuk

menciptakan sebuah produk antibakteri dari bahan alam yang lebih efektif,

aman dan terjangkau.


9

BAB II

KAJIAN PUSTAKA

A. Kelor (Moringa oleifera Lmk.)

1. Deskripsi Umum

Kelor (Moringa oleifera Lmk.) yang paling terkenal dari tiga belas

spesies genus Moringacae, berasal dari Agra, India.. Nama "Shigon" ada

dalam kitab "Shushruta Sanhita" dituliskan pada awal abad pertama

Masehi. Bukti bahwa kelor masuk pertama kali di India, karena mereka

tahu bahwa biji-bijian bisa untuk obat (Amjad et al., 2015).

Morfologi kelor termasuk jenis pohon, batangnya berkayu,

permukaannya kasar dengan kulit tipis, berumur panjang, tinggi mencapai 7

- 12 m dengan diameter 20-40 cm (Amjad et al., 2015). Kelor sangat

mudah untuk diperbanyak dengan stek batang dan biji. Hidupnya didataran

rendah ketinggian ± 1000 m dpl. Kelor tumbuh di wilayah tropis maupun

sub tropis dengan suhu ± 25–35◦C. Kelor juga mampu tumbuh pada daerah

bersalju ringan, daerah ekstrim sekaligus dengan hujan 250 sampai 3000

mm.

Kelor diketahui merupakan tanaman asli India biasanya tingginya

mencapai 1.400 m dari permukaan laut. Kelor mampu tumbuh diluar

daerah maupun Negara asalnya seperti Asia Tenggara, Arab, Himalaya,

Bangladesh, Sri lanka (Krisnadi, 2015).


10

Gambar 2.1 Penampakan Keseluruhan Pohon Kelor

Sumber: Krisnadi (2015), hal 21-22

2. Klasifikasi

Adapun klasifikasi kelor, menurut Chukwuebuka, 2015 :

Kingdom : Plantae

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Ordo : Brassicales

Famili : Moringaceae

Genus : Moringa

Spesies : Moringa oleifera Lmk.

B. Komponen Kimiawi Biji Kelor (Moringa oleifera Lmk.)

Gambar 2.2 Biji Kelor

Sumber : Amjad et al., 2015


11

Salah satu bagian dari tanaman kelor yang dapat dimanfaatkan oleh

manusia yaitu biji kelor, ada banyak kandungan kimia pada biji kelor misalnya

sterol 92 %, abu 6,2 %, protein 31,4%, serat 7,3 %, karbohidrat 18,4 % dan

lemak 36,7 % (Leone, 2016). Biji kelor juga mengandung komponen bioaktif

penting termasuk alkaloid, flavonoid (catechin, epichatechin, quercetin,

kaempferol), asam fenolik dan glikosida. Hasil uji skrining fitokimia

pendahuluan terhadap ekstrak alkohol biji kelor Kheir et al., (2014) ternyata

ada kandungan fitokimia seperti saponin, tanin, flavonoid dan alkaloid. Biji

kelor juga memiliki kandungan asam lemak tak jenuh dan asam lemak jenuh,

sterol, tocopherol, protein, asam amino dan antioksidan. Fraksi protein biji

kelor memiliki kadar methionine dan sistein yang tinggi. Fraksi sterol terdiri

dari sitosterol, stigmasterol, campesterol yang menyumbang 92% dari total

sterol. Kandungan fenolik total dari biji kelor berkisar 4.581-4.953 mg/100 g.

C. Manfaat Biji Kelor (Moringa oleifera Lmk.)

Menurut Aney et al, (2009) biji kelor mengandung antibiotik yang dikenal

sebagai pterigospermin yang bertanggung jawab untuk membunuh

mikroorganisme dalam air. Folkard dan Sutherland (2005) juga menyarankan

pemanfaatan biji kelor untuk dikonsumsi karena biji kelor mampu

menghambat dan menghancurkan dinding sel Salmonella typhii yang hidup di

saluran usus manusia. Penelitian lain juga menunjukkan bahwa biji kelor

mempunyai aktivitas antibakteri terhadap kedua jenis bakteri, yaitu gram

negatif dan gram positif (Walter et al, 2011).


12

Hasil uji skrining fitokimia pendahuluan terhadap ekstrak alkohol biji

kelor Kheir et al., (2014) positif terdapat senyawa fitokimia tanin, flavonoid,

alkaloid, saponin. Sehingga biji kelor memiliki kemampuan sebagai anti

inflamasi, anti diabetik, anti kanker, anti tumor, anti fungi, dan anti bakteri.

Masyarakat juga menggunakan serbuk biji kelor untuk mengobati sakit

perut dan untuk membantu masalah pencernaan. Penelitian yang dilakukan oleh

Leone et al (2016) bahwa fraksi sterol yang terkandung di dalam biji kelor

memiliki keterlibatan dalam metabolisme kolestrol ditandai dengan

menurunnya tingkat LDL. Biji kelor memiliki potensi sebagai antidiabetes,

karena adanya kandungan sitosterol (Gupta et al., 2011).

Biji kelor telah ditemukan mengandung antioksidan yang mampu

mengurangi kerusakan oksidatif yang terkait dengan penuaan dan kanker.

Senyawa bioaktif yang diisolasi dari biji kelor juga digunakan sebagai

promotor antitumor. Hasil penelitian lain menunjukkan bahwa biji kelor

memiliki hepatoprotektif, antiinflamasi dan Anti-fibrotik terhadap kerusakan

hati akibat CCl4 dan fibrosis. Aktivitas anti-fibrotik terkait dengan kandungan

antioksidan dari ekstrak biji kelor (Hamza AA, 2010).

Penelitian eksperimental menggunakan ekstrak etanol dari biji kelor

terhadap tikus, diketahui mampu meredakan peradangan bronkus alveolar

dengan mengurangi infiltrasi sel-sel inflamasi di paru-paru dan mengurangi

inflamasi di saluran pernapasan karena asma. Ekstrak etanol biji kelor juga

mampu mengurangi volume edema pada tikus (Mahajan et al., 2007).


13

D. Metode Ekstraksi

1. Ekstrasksi

Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan zat terlarut dengan

pelarutnya berdasarkan titik didih pelarut. Pemilihan metode ekstraksi

tergantung pada sifat bahan dan senyawa yang akan diisolasi.

Tujuan ekstraksi bahan alam adalah menarik komponen kimia yang

terdapat pada bahan alam. Ekstraksi ini didasarkan pada prinsip perpindahan

massa komponen zat kedalam pelarut, dimana perpindahan mulai pada

lapisan antar muka kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut. Sarker et al

(2006), menyebutkan berbagai cara ekstraksi :

2. Ekstraksi dengan Menggunakan Pelarut

a. Cara Dingin

1) Maserasi

Maserasi merupakan metode yang paling sederhana dan paling

banyak digunakan. Metode ini dilakukan dengan memasukkan serbuk

tanaman dan pelarut yang sesuai ke dalam wadah tertutup rapat.

Proses ekstraksi dihentikan ketika tercapai kesetimbangan antara

konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan konsentrasi dalam sel

tanaman. Setelah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan dari sampel

dengan penyaringan. Kerugian utama dari metode maserasi ini adalah

memakan banyak waktu, pelarut yang digunakan cukup banyak dan

kemungkinan besar senyawa fitokimia ikut menguap. Namun disisi


14

lain, metode maserasi dapat menghindari rusaknya senyawa-senyawa

yang bersifat termolabil.

2) Perkolasi

Membutuhkan pelarut yang lebih banyak dan memakan waktu

lebih lama.

b. Cara Panas

1) Refluks

Sampel dimasukkan dengan pelarut ke labu yang sudah

terhubung dengan kondensor, pelarutnya konstan karena adanya

pendinginan balik saat melakukan ekstraksi.

2) Soxhlet

Menggunakan metode ini memiliki keuntungan prosesnya

cepat, sampelnya murni, pelarutnya sedikit. Namun ada kerugiannya

senyawanya bersifat termolabil.

3) Digesti

Ekstraksi bisa dilakukan dalam suhu kamar 40-50° C dan

diaduk terus menerus.

4) Infus

Ekstraksi simplisia dengan air (90° C) dalam 15-20 menit.

5) Dekok

Membutuhkan waktu lama hingga mencapai titik didih.


15

3. Destilasi Uap

Selama pemanasan, uap terkondensasi dan destilat (terpisah

sebagai 2 bagian yang tidak saling bercampur) ditampung dalam wadah

yang terhubung dengan kondensor. Kerugian dari kedua metode ini adalah

senyawa yang bersifat termolabil dapat terdegradasi.

E. Antimikroba

Secara garis besar antimikroba dibagi menjadi dua jenis yaitu yang dapat

membunuh mikroorganisme (bakterisidal) dan yang hanya mampu

menghambat pertumbuhan mikroorganisme (bakteriostatik). Agen antimikroba

dapat berupa desinfektan, antiseptik maupun antibiotik yang sering digunakan

dalam mengendalikan dan membunuh mikroorganisme (Utami, 2012)..

Adanya zona penghambatan dibuktikan dengan adanya lingkaran berwana

bening disekitar kertas cakram. Hampir semua suatu senyawa mampu menjadi

antibakteri. Penentuan agen antimikroba yang bersifat membunuh bakteri yaitu

dengan memperoleh dan mengetahui nilai KBM (Kadar Bunuh Minimum).

1. Mekanisme Kerja Antimikroba

Mekanisme kerja dari antimikroba dapat diketahui karena adanya

kerusakan suatu komponen penting mikroorganisme hingga terjadi

kematian sel . Mekanismenya antara lain :


16

a. Menghambat sintesis dinding sel

Mekanismenya ditentukan pada adanya peptidoglikan di dinding

sel prokariotik, sedangkan pada eukariotik tidak ada peptidoglikan.

b. Menghambat sintesis asam nukleat

Terjadi penghambatan pada transkripsi dan replikasi DNA yang

disebabkan oleh radiasi maupun pemanasan sehingga sel tidak bisa

bereplikasi.

c. Menghambat sintesis protein

Hidup suatu sel bergantung pada terpeliharanya molekul-molekul

protein dan asam nukleat dalam keadaan alamiahnya. Suatu kondisi atau

substansi yang mengubah keadaan ini, yaitu mendenaturasikan protein

dan asam-asam nukleat dapat merusak sel tanpa diperbaiki kembali.

d. Merusak keutuhan membran sel

Mekanismenya dapat megganggu keutuhan sek bakteri sehingga

komponen-komponen dalam sel (protein, asam nukleat, nukleotida)

keluar.

e. Menghambat sintesis metabolisme esensial

Cara penghambatan apabila suatu bakteri strukturnya hampir sama

dengan substrat.


17

2. Faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Antimikroba

Faktor yang mampu membunuh suatu bakteri antara lain (Midun,

2012) :

a. Konsentrasi Antimikroba

Bisa berpengaruh dalam membunuh bakteri apabila zat

antimikroba yang diberikan konsentrasinya tinggi.

b. Jumlah Mikroorganisme

Semakin banyak jumlah bakteri yang tumbuh maka memerlukan

waktu pembasmian yang cukup lama .

c. Suhu

Jika suhu naik secara optimal maka reaksi kimiawi juga ikut naik.

d. Jenis Mikroorganisme

Kerentanan masing-masing mikroorganisme berbeda-beda

terhadap setiap perlakuan.

e. pH

Apabila suatu bahan sifatnya asam maka apabila dalam suhu

rendah mudah dibanding pH basa.

f. Adanya Bahan Organik

Keefektifan zat kimia dapat diinaktifkan dengan bahan organik

dari bahan alam.


18

3. Metode Pengujian Antimikroba

Metode in vitro bisa dilakukan dengan beberapa cara (Balouiri et al.,

2016) :

a. Metode Penyebaran (diffusion method)

Metode penyebaran ini merupakan metode yang mudah dan biaya

murah.

1). Metode cakram kertas (disc diffusion method)

Metode yang sering atau bahkan umum digunakan untuk

menentukan sensitivitas suatu bakteri yang diinkubasi dan diamati

adanya lingkaran bening disekitar cakram.

2). Metode garis tingkat

Ini merupakan metode yang efektif dalam menghambat

pertumbuhan bakteri dan juga untuk memperoleh nilai KHM (kadar

hambat minimum). Strip plastik yang sudah dicelupkan ke agen

antibakteri dalam media yang sudah ditanami bakteri, lalu diamati

tingkat kekeruhannya.

b. Metode Pengenceran (dilution method)

1). Metode dilusi cair

Dilusi merupakan metode terbaik untuk mengukur KHM dan

KBM. Dilakukan dengan seri pengenceran ditambah bakteri uji,

namun harus sesuai standar Mc Farland 0,5. Larutan uji antimikroba

pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan


19

mikroba uji ditetapkan sebagau KHM, media yang digunakan Muller-

Hilton Borth (MHB). Larutan yang ditetapkan sebagai KHM tersebut

selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa penambahan mikroba

uji ataupun agen antimikroba dan dilakukan selama 18-24 jam. Media

cair yang tetap erlihat jernih setelah diinkubasi ditetapkan sebagai

KBM.

F. Senyawa Fitokimia

Fitokimia merupakan ilmu pengetahuan yang menguraikan aspek kimia

suatu tanaman. Kajian fitokimia meliputi uraian yang mencakup aneka ragam

senyawa organik yang dibentuk dan disimpan oleh organisme, yaitu struktur

kimianya, biosintesisnya, perubahan serta metabolismenya, penyebarannya

secara alamiah dan fungsi biologisnya, isolasi dan perbandingan komposisi

senyawa kimia dari bermacam-macam jenis tanaman.

Menurut Saxena (2013), uji fitokimia dilakukan untuk menentukan

kandungan kimia secara kualitatif untuk mengetahui golongan senyawa yang

terkandung dalam suatu tumbuhan. Melakukan uji fitokimia antara lain.

1. Flavonoid

Senyawa flavonoid terdiri dari C6-C3-C6 dan sering ditemukan di

berbagai macam sayuran, buah-buahan, dan minuman seperti teh, kopi.

Senyawa flavonoid yang sering dijumpai pada tumbuhan dalam bentuk

glikosida atau gugusan gula bersenyawa pada satu atau lebih grup hidroksil

fenolik.


20

2. Alkaloid

Semua alkaloid mengandung paling sedikit satu atom nitrogen

yang biasanya bersifat basa, mengandung satu atau lebih atom nitrogen

biasanya dalam gabungan berbentuk siklik serta bereaksi dengan pereaksi

alkaloid. Menurut sifatnya umumnya berbentuk kristal padat dan sebagian

kecil bersifat cair. Alkaloid bentuk bebas atau basanya mudah larut dalam

pelarut organik dan sukar larut dalam air.

3. Saponin

Saponin merupakan glikosida yaitu metabolit sekunder yang

banyak terdapat di alam, terdiri dari gugus gula yang berikatan dengan

aglikon atau sapogenin. Keberadaan saponin sangat mudah ditandai dengan

pembentukan larutan koloidal dengan air yang apabila dikocok

menimbulkan buih yang stabil. Busa yang ditumbulkan saponin karena

adanya kombinasi struktur senyawa penyusunnya yaitu rantai sapogenin

nonpolar dan rantai samping polar yang larut dalam air.

4. Tanin

Tanaman yang memiliki tanin sebagai komponen utama yang ada

pada zat dari alam dan digunakan untuk mengobati gangguan usus seperti

diare dan disentri. Di Jepang dan Cina, ekstrak tumbuhan yang mengandung

tanin digunakan sebagai pengobatan diare, anti inflamasi, melawan tumor

perut dan duodenum. Tanin biasanya ditemukan dalam buah-buahan seperti

anggur, kesemek, blueberry, teh, coklat, kacang polong, pohon legum

seperti Acacia spp., Sesbania spp., di rerumputan seperti sorgum, jagung


21

dan lain-lain. Tanin merupakan senyawa fenolik yang larut dalam air.

Senyawa ini banyak terdistribusi pada daun, buah, batang dan biji,

umumnya berasa sepat.

G. Bakteri Shigella dysenteriae

1. Deskripsi Umum

Gambar 2.3 Shigella dysenteriae

Sumber : Kurniasih, 2014

Bakteri Shigella dysentriae termasuk bakteri Gram negatif, berbentuk

kokus atau batang, tidak berspora, tidak berflagel, fakultatif anaerob. Pada

manusia menyebabkan disentri basiler dengan masa inkubasi 1-7 hari.

Bentuk koloni dari Shigella dysenteriae konveks, bulat, transparan dengan

tepi yang utuh dan mencapai diameter kira-kira 2 mm dalam 24 jam

(Shrotriya, 2015).

Shigella dysenteriae mampu memfermentasikan glukosa, sehingga

membentuk asam dari karbohidrat. pH pertumbuhan Shigella dysenteriae 6-

8, suhu pertumbuhan optimum 370C dan akan mati pada suhu 55

0C serta

kurang tahan terhadap agen kimia. Infeksi yang disebabkan bakteri Shigella


22

dysenteriae hampir selalu terbatas pada saluran pencernaan. Bakteri ini

mengasilkan endotoksin dan eksotoksin. Endotoksin berperan menimbulkan

iritasi pada dinding usus, sedangkan eksotoksin yang dikeluarkan Shigella

dysenteriae tidak tahan panas yang dapat mengenai usus dan sistem saraf

pusat. Setelah masa inkubasi yang pendek (1- 4 hari), akan menimbulkan

nyeri perut, demam dan tinja encer (Kurniasih, 2014).

Menurut WHO (2016), infeksi yang disebabkan oleh bakteri Shigella

dysenteriae umumnya dapat disembuhkan dengan antibiotik ciprofloxacin,

pivmecillinam atau ceftriaxone telah dilaporkan mampu menekan

pertumbuhan Shigella dysenteriae dan memperpendek durasi gejala dalam

persentae 96 %.


23

2. Klasifikasi

Adapun klasifikasi menurut Microbesinfo, 2015 :

Kingdom : Monomychota

Divisi : Scizomycetea

Class : Scizomycetes

Ordo : Eubacteriales

Family : Enterobacteriaceae

Genus : Shigella

Spesies : Shigella dysenteriae

H. Patogenitas Shigella dysenteriae

Shigella dysenteriae adalah bakteri kelompok gram negatif dan bersifat

fakultatif anaerobik yang dapat hidup dalam usus manusia dan termasuk flora

normal. Bakteri ini dapat menyebabkan shigellosis pada manusia. Shigellosis

disebut juga disentri basiler. Kombinasi diare yang disebabkan oleh Shigella

dysenteriae yaitu tinja teksturnya lembek dan berdarah, diare teksturnya cair

dan kombinasi tekstur lembek berdarah dan cair (Shrotriya, 2015).

Pada awalnya Bakteri ini masuk dan berada di usus halus, menuju

terminal ileum dan kolon, melekat pada permukaan mukosa dan menembus

pada lapisan epitel kemudian berkembang biak di dalam lapisan mukosa.

Berikutnya adalah terjadinya reaksi peradangan hebat yang menyebabkan


24

terlepasnya sel-sel dan timbulnya tukak pada permukaan mukosa usus (WHO,

2016).

Shigella dysenteriae mampu memproduksi endotoksin dan eksotoksin.

Endotoksin berperan menimbulkan iritasi pada dinding usus, sedangkan

eksotoksin akan merangsang produksi suatu antitoksin sehingga banyak

mematikan pasien (WHO, 2016).

Toksin (shigatoksin) dapat dihasilkan oleh golongan dari Shigella sp.

didalam jejunum bakteri melakukan multipikasi tanpa invasi di dalam

jejunum. Toksin ini menyebabkan kondisi awal ditandai dengan tekstur diare

menjadi cair (WHO, 2016). Selanjutnya menyerang usus besar sehingga

gejalanya Nampak semakin parah.


25

BAB III

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESA PENELITIAN

A. Kerangka Konsep

Gambar 3.1 Kerangka Konsep Penelitian

DIARE

Tanin

Mengerutkan

dinding sel

bakteri

sehingga

dapat

mengganggu

permeabilitas

sel.

Alkaloid

Menggangu

komponen penyusun

peptidoglikan pada

sel bakteri, sehingga

lapisan dinding sel

tidak terbentuk

secara utuh dan

menyebabkan

kematian sel.

Saponin

Menganggu

permeabilitas

membran sel

bakteri

sehingga

menyebabkan

sel bakteri lisis.

Flavonoid

Penghambat

an fungsi

DNA gyrase

bakteri

sehingga

kemampuan

replikasi dan

translasi

bakteri

dihambat.

Pertumbuhan dihambat dan

dibunuh (KHM dan KBM)

Pengobatan Kimiawi Pengobatan Alami

Ekstrak Biji Kelor

Uji Aktivitas

Antibakteri


26

B. Hipotesa Penelitian

H0 : Tidak ada beda rata-rata kemampuan ekstrak biji kelor (Moringa oleifera

Lmk.) pada beberapa konsentrasi dalam menghambat dan membunuh

bakteri Shigella dysenteriae.

H1 : Ada beda rata-rata kemampuan ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.)

pada beberapa konsentrasi dalam menghambat dan membunuh bakteri

Shigella dysenteriae.


27

BAB IV

METODE PENELITIAN

A. Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan eksperimental laboratorium menggunakan desain

penelitian rancangan acak lengkap (RAL) dengan tiga kali pengulangan.

Sebagaimana yang tergambar pada tabel berikut :

Tabel 4.1 Pengulangan Uji Aktivitas Antibakteri

Konsentrasi

Pengulangan

1 2 3

P

P1

P2

P3

P4

N

Keterangan :

P (+) : Kontrol positif yang diberi 50µL ciprofloxacin dan 1 ml

suspensi mikroba

P1 : Konsentrasi ekstrak biji kelor 75 mg/ml dan 1 ml suspensi

mikroba


mikroba


28


mikroba


mikroba

N (-) : Kontrol negatif yang diberi aquades steril dan 1 ml suspensi

mikroba

B. Waktu dan Lokasi Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Universitas Islam

Negeri Sunan Ampel Surabaya. Jadwal pelaksanaan penelitian dapat dilihat

pada tabel dibawah ini.

Tabel 4.2 Timeline Penelitian

No Kegiatan Bulan

1 2 3 4 5

1. Pengumpulan alat dan

bahan

2. Persiapan ekstraksi

3. Ekstraksi dan Uji fitokimia

4. Persiapan penelitian

5. Uji aktivitas antimikroba

difusi dan dilusi

6. Pengumpulan data

penelitian

7. Pemasukan data penelitian


29

C. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah 300 gram serbuk

biji kelor (Moringa oleifera Lmk.), media Salmonella Shigella Agar (SSA),

media Muller Hinton Agar (MHA) dan Muller Hinton Broth (MHB),

biakan Shigella dysenteriae,aquades, spirtus, 600 ml pelarut metanol,

ciprofloxacin, alkohol 70%, HCl, pereagen wagner, HCl pekat, FeCl3.

2. Alat Penelitian

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Autoklaf, laminar

air flow (LAF), cawan petri, tabung reaksi, jarum ose, Erlenmeyer, vortex,

jangka sorong, inkubator, neraca analitik, pinset, bunsen, colony counter,

kaca arloji, spreader, spatula, gelas ukur, gelas beker, cuvet glass, botol

kultur (100 ml) rak tabung reaksi, serangkaian alat rotary evaporator, hot

plate, magnetic stirrer, water bath, kertas saring, kertas cakram, korek

api,alumunium foil, kertas coklat, plastik wrap, kertas label, tissue, kamera,

mikropipet 1000 µL, tip pipet.

D. Variabel Penelitian

1. Variabel Bebas

Ekstrak biji kelor (Moringa oleífera Lmk.) dengan variasi

konsentrasi 75 mg/ml, 100 mg/ml, 200 mg/ml, 400 mg/ml serta cakram

antibiotik 50µL siprofloksasin sebagai kontrol positif dan aquades steril

sebagai kontrol negatif.


30

2. Variabel Terikat

Diameter zona penghambat (mm), kadar hambat minimum (KHM)

dan kadar bunuh minimum (KBM) oleh bakteri Shigella dysenteriae.

3. Variabel Terkendali

Volume ekstrak (ml), diameter kertas cakram (mm), suhu inkubasi,

waktu inkubasi, media inkubasi dan kepadatan mikroba uji (Optical

density).

E. Prosedur Penelitian

1. Koleksi Tumbuhan

Biji kelor (Moringa oleífera Lmk.) yang digunakan dalam

penelitian ini diperoleh dari PT. Moringa Organik Indonesia, Blora-Jawa

Tengah.

2. Ekstraksi Tumbuhan

Biji kelor (Moringa oleífera Lmk.) dikeringkan menggunakan oven

pada suhu 35°C - 40°C hingga kering dan selanjutnya digiling untuk

dijadikan serbuk dengan mesin stainless steel. Biji kelor yang sudah halus

ditimbang sebanyak 1.200 gram menggunakan neraca analitik dan

dipindahkan ke dalam gelas beker. Biji kelor diberi pelarut metanol

sebanyak 2.400 ml sampai serbuk biji kelor terendam sempurna dan

diaduk-aduk, lalu gelas beker ditutup alumunium foil. Proses maserasi

dilakukan selama 24 jam pada suhu ruangan dan terlindung dari cahaya

matahari langsung. Setelah 24 jam dimaserasi, filtrat disaring


31

menggunakan kertas saring untuk memisahkan filtrat dan residunya.

Kemudian residu diremaserasi dengan pelarut metanol selama 24 jam.

Pelarut pada filtrat diuapkan dengan rotary evaporator (50°C). Hasil

penguapan dengan rotary evaporator dituang ke dalam cawan porselin

kemudian penguapan disempurnakan dengan menggunakan waterbath

hingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak yang diperoleh sebanyak 60 gr

dikerok dan dimasukkan kedalam botol ekstrak.

Pembuatan larutan induk, sebanyak 20 gr ekstrak metanol

dilarutkan ke dalam 50 ml aquades, sehingga didapat larutan induk dengan

konsentrasi 400 mg/ml, dilanjutkan pengenceran untuk berbagai

konsentrasi sesuai perhitungan dibawah ini :

a. Konsentrasi 200 mg/ml b. Konsentrasi 100 mg/ml

V1.M1 = V2.M2 V1.M1 = V2.M2

V1.400 = 50.200 V1.400 = 50.100

V1 = 10000

400 V1 =

5000

400

= 25 ml = 12,5 ml

c. Konsentrasi 75 mg/ml

V1.M1 = V2.M2

V1.400 = 50.75

V1 = 3750

400

= 9,3 ml


32

3. Uji Fitokimia

Uji fitokimia pada ekstrak biji kelor dengan pelarut metanol dengan

uji kualitatif diantaranya :

a. Uji Alkaloid

Sebanyak 5 gram ekstrak dimasukkan dalam tabung reaksi,

ditambahkan HCl 2 M, dipanaskan sambil diaduk kemudian

didinginkan dan disaring, filtrat ditambahkan HCl 10 tetes dan reagen

Wagner (Yodium-Kalium iodida), apabila terbentuk endapan kuning

menunjukkan positif terhadap alkaloid.

b. Uji Flavonoid

Sebanyak 5 gram ekstrak dimasukkan dalam tabung reaksi,

ditambahkan 10 tetes larutan FeCl3, apabila terbentuk warna merah

kehitaman atau ungu menunjukkan positif terhadap flavonoid.

c. Uji Saponin

Sebanyak 5 gram ekstrak, ditambahkan 5 ml aquades dalam tabung

reaksi, kemudian kocok kuat selama 10 detik sampai terbentuk buih

yang stabil.

d. Uji Tanin

Sebanyak 5 gram ekstrak dimasukkan dalam tabung reaksi

ditambahkan 10 tetes larutan FeCl3 1 %. Terbentuknya warna biru

kehitaman, hijau atau biru kehijauan dan endapan menunjukkan adanya

tanin.


33

4. Sterilisasi Alat dan Bahan

Sterilisasi bahan dan alat yang sudah dicuci, dikeringkan,

dibungkus kertas coklat dan plastik tahan panas menggunakan Autoclave

diatur tekanan 1 atm, waktu 20 menit dan temperatur 121 °C.

5. Pembuatan Stok Bakteri

Diambil satu koloni bakteri Shigella dysenteriae dengan

menggunakan jarum ose steril, lalu digoreskan secara aseptis didekatkan

dengan api bunsen pada tabung reaksi miring yang berisi media Salmonella

Shigella Agar (SSA) , setelah itu diinkubasi dalam inkubator dengan suhu

37°C selama 18-24 jam.

6. Pembuatan Suspensi Mikroba Uji

Suspensi mikroba dibuat dengan memindahkan beberapa ose

bakteri kedalam botol kultur berukuran 100 ml yang berisi air aquades,

campuran bakteri tersebut dihomogenkan menggunakan vortex. Suspensi

mikroba tersebut kemudian dimasukkan ke dalam tabung kuvet beberapa

ml untuk diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer sesuai

dengan standar Mc Farland 0,5 (setara dengan ± 108 CFU/ml atau 5x10

6

CFU/ml, λ625 nm = 0.08-0.1 untuk bakteri dan λ600 nm = 0.08-0.1 untuk

fungi). Penambahan mikroba atau aquades terus dilakukan hingga OD

mencapai 0,1.


34

7. Penentuan Aktivitas Antimikroba

Untuk mengetahui aktivitas antimikroba ekstrak biji kelor

(Moringa oleífera Lmk.) digunakan metode cakram kertas dan metode

pengenceran dalam tabung.

a. Metode Cakram Kertas / Disc diffusion method

Langkah awal yang dilakukan adalah menyiapkan media Mueller

Hinton Agar (MHA) untuk uji antimikroba. Mengatur rapat optis

(Optical Density) suspensi bakteri 0,1 pada λ625 nm untuk bakteri setara

dengan standar Mc Farland 0,5 (108 CFU/ml),1 ml suspensi dimasukkan

ke cawan petri steril ditambah 15 ml media Mueller Hinton Agar

(MHA), kemudian menggerakan cawan petri membentuk angka delapan

agar homogen, ditunggu hingga memadat. Sebanyak 3x pengulangan, 3

kertas cakram (6mm) diinjeksikan sebanyak 50µL ekstrak biji kelor yang

sudah dilarutkan aquades pada masing-masing cawan petri membentuk

segitiga. Konsentrasi ekstrak biji kelor 75 mg/ml, 100 mg/ml, 200

mg/ml, 400 mg/ml. Cawan petri kemudian dinkubasi suhu 37°C hingga

48 jam. Selanjutnya zona hambat disekitar cakram diukur menggunakan

jangka sorong (mm).

b. Metode Pengenceran Dalam Tabung/ Dilusi

Menyiapkan 10 ml suspensi bakteri dalam media Mueller Hinton

Broth (MHB) diukur rapat optis (Optical Density) setara dengan standar

Mc Farland 0,5 (108

CFU/ml). 1 ml masing-masing ekstrak biji kelor


35

dimasukkan ke tabung reaksi yang terisi 1 ml suspensi bakteri,

dihomogenkan dan inkubasi 24 jam. Apabila larutan terlihat jernih

berarti tidak ada aktivitas antimikroba. 1 ml suspensi semua konsentrasi

ditanam di media Mueller Hinton Agar (MHA). Setelah inkubasi 24 jam

dilihat pertumbuhnnya, jika ada pertumbuhan adalah nilai KHM, jika

tidak ada berarti nilai KBM.

F. Analisis Data

Data dianalisis Normalitas dan Homogenitasnya, kemudian dilakukan uji

lanjutan menggunakan uji Kruskall-Wallis untuk melihat beda rerata setiap

konsentrasi. Jika terdapat perbedaan pada konsentrasi, dilakukan uji lanjutkan

uji Mann-Whitney untuk mengetahui data pada konsentrasi mana yang

memiliki perbedaan signifikan.


36

BAB V

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil

1. Hasil Uji Difusi Kertas Cakram (disc diffusiom method) terhadap Shigella

dysenteriae

Tabel 5.1 Hasil Pengukuran Uji Difusi Kertas Cakram (disc diffusion

method)

No Konsentrasi Pengulangan

1 2 3

1 Ciprofloxacin (+) 8,0 mm 8,5 mm 9,0 mm

2 75 mg/ml 6,5 mm 6,8 mm 7,0 mm

3 100 mg/ml 7,0 mm 7,0 mm 7,2 mm

4 200 mg/ml 7,1 mm 7,3 mm 7,5 mm

5 400 mg/ml 7,6 mm 7,8 mm 8,0 mm

6 Aquades (-) 0 mm 0 mm 0 mm

Hasil pengukuran diameter zona hambat pada masing-masing

konsentrasi dikurangi dengan diameter kertas cakram 6 mm. Pada masing-

masing konsentrasi dilakukan pengulangan kertas cakram sebanyak 3x.

Zona hambat terbesar ditunjukkan pada perlakuan kontrol (+) menggunakan

antibiotik ciprofloxacin, sedangkan pada kontrol (-) menggunakan aquades

tidak menunjukkan adanya zona hambat.


37

Diameter zona hambat pertumbuhan Shigella dysenteriae disajikan

dalam bentuk grafik dapat dilihat pada Gambar 5.2.

Gambar 5.2 Grafik diameter daerah penghambatan pertumbuhan Shigella

dysenteriae pada setiap konsentrasi ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.)

Selanjutnya untuk data diameter zona hambat (mm) dilanjutkan ke uji

analisis statistik yakni uji normalitas dan uji homogenitas. Uji normalitas

data dengan menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov dan didapatkan

signifikansi sebesar 0,012. Nilai tersebut lebih kecil dari α=0,05. Hal ini

menunjukkan bahwa data berdistribusi normal. Tahap selanjutnya yaitu

melakukan uji Homogeneity of variances. Dari hasil uji homogenitas

didapatkan nilai sebesar 0,000 pada ekstrak biji kelor (Moringa oleifera

Lmk.). Nilai tersebut lebih kecil dari α = 0,05. Hal ini menunjukkan bahwa

012345678910

Dia

met

er

Zo

na

Ha

mb

at

(mm

)

Konsentrasi Ekstrak mg/ml

Grafik Zona Hambat Pertumbuhan

Shigella dysenteriae

Pengulangan 1

Pengulangan 2

Pengulangan 3


38

data tidak homogen. Sehingga dilanjutkan dengan uji non parametrik

alternatif yaitu uji Kruskal-Wallis.

Hasil uji Kruskal-Wallis menunjukkan bahwa, nilai signifikansi

perbedaan rata-rata diameter zona hambat pada setiap kelompok perlakuan

sebesar 0,006. Konsentrasi ekstrak biji kelor memiliki pengaruh terhadap

diameter zona hambat. Selanjutnya analisis dilanjutkan dengan uji Mann-

Whitney untuk mengetahui beda pengaruh antar perlakuan. Hasil uji beda

rata-rata diameter zona hambat Shigella dysenteriae pada setiap konsentrasi

dapat dilihat pada Tabel 5.3.

Tabel 5.3 Rata-rata diameter zona hambat pertumbuhan Shigella

dysenteriae pada setiap konsentrasi

No Konsentrasi

Ekstrak (mg/ml)

Rata-Rata

Diameter Zona Hambat

(mm)

Sig.

1 Ciprofloxacin (+) 8,5ab

0,006

2 75 6,7c

3 100 7,0ade

4 200 7,3f

5 400 7,8dg

6 Aquades (-) 0bcefg

Keterangan : a,b,c,d,e,f,g berbeda signifikan.

Pada Tabel 5.4 dapat diketahui bahwa rata-rata diameter zona hambat

biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) memiliki perbedaan yang signifikan pada

masing-masing konsentrasi ekstrak saat dilakukan analisis data dengan

Mann-Whitney. Zona hambat perbedaan yang signifikan tersebut terlihat

pada pengujian kelompok 3 terhadap 1 dan 5 , kelompok 6 terhadap seluruh

kelompok.


39

2. Hasil Uji Dilusi (tube dilution method) terhadap Shigella dysenteriae

Konsentrasi ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) yang diujikan

aktivitas anti-bakteri dilakukan dengan metode pengenceran dalam tabung

(tube dilution method) 1 ml ekstrak ditambah 1 ml suspensi bakteri

dimasukkan ke tabung reaksi dan pengenceran dilakukan bertingkat

sebanyak 106. Setelah diinkubasi selama 24 jam dan diamati secara visual.

Tabel 5.4 Visualisasi Kultur Uji Dilusi Shigella dysenteriae setelah 24

jam dengan Penambahan Variasi Ekstrak Biji Kelor (Moringa oleifera

Lmk.).

Konsentrasi

Perlakuan

Pengamatan

75 (mg/ml) 1 ml suspensi bakteri + 1 ml

ekstrak

Kuning Kecoklatan (+),

tidak terdapat lapisan

putih


ekstrak

Kuning keruh (+),

terdapat lapisan putih

(++)


ekstrak

Kuning keruh (+),


(+++)


ekstrak

Kuning keruh (++),


(++)


ekstrak

Kuning keruh (+++),


(+) Keterangan :

(+) : Menandakan tingkat kekeruhan dan tingkat ketebalan lapisan putih.

Hasil uji Dilusi pada ke-lima konsentrasi dilakukan pengenceran hingga

pengenceran 106. Selanjutnya dari pengenceran 10

4, 10

5, dan 10

6 Media NA

bakteri ditanam dan diinkubasi 24 jam lalu dihitung (Colony Counter).


40

Tabel 5.5. Nilai Total Plate Count (TPC) dan Log TPC Shigella

dysenteriae pada kultur uji dilusi ekstrak biji kelor dengan berbagai

variasi konsentrasi.

Konsentrasi

(mg/ml)

Nilai TPC

Log TPC

75 41 x 106 7,61

60 56 x 106 7,74

45 100 x 106 8

30 120 x 106 8,07

15 212 x 106 8,32

Nilai TPC dan Log TPC dapat dilihat pada tabel 5.3. Log TPC terendah

dari ekstrak biji kelor adalah 7,61 pada konsentrasi 75 mg/ml.

B. Pembahasan

1. Pembahasan Uji Difusi Kertas Cakaram (disc diffusiom method) terhadap

Shigella dysenteriae

Berdasarkan grafik 5.1 zona hambat pada masing-masing pengulangan

menunjukkan diameter zona hambat tertinggi pada kontrol positif

menggunakan antibiotik ciprofloxacin dengan diameter berturut-turut yaitu

8 mm, 8,5 mm dan 9 mm. Pada konsentrasi 75 mg/ml diameter berturut-

turut yaitu 6,5 mm, 6,8 mm dan 7 mm. Pada konsentrasi 100 mg/ml

diameter berturut-turut yaitu 7 mm, 7 mm dan 7,2 mm. Pada konsentrasi

200 mg/ml diameter berturut-turut yaitu 7,1 mm, 7,3 mm dan 7,5 mm. Pada

konsentrasi 400 mg/ml diameter berturut-turut yaitu 7,6 mm, 7,8 mm dan 8

mm. Kontrol negatif menggunakan aquades tidak menunjukkan adanya zona


41

hambat pertumbuhan terhadap bakteri Shigella dysenteriae. Ini

menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.)

yang semakin tinggi maka semakin besar kemampuan dalam menghambat

suatu mikroorganisme (Rahmah et al, 2017).

Pada penelitian ini kontrol positif yang digunakan yaitu antibiotik

ciprofloxacin sebagai kontrol positif. Ciprofloxacin termasuk ke dalam

golongan kuinolon yang sangat aktif terhadap golongan bakteri gram negatif

dan bersifat bakterisidal dengan menghambat DNA girase (Andries et al,

2014). Menurut WHO (2016), infeksi yang disebabkan oleh bakteri Shigella

dysenteriae sendiri umumnya dapat disembuhkan dengan antibiotik

ciprofloxacin yang telah dilaporkan mampu menekan pertumbuhan Shigella

dysenteriae dan memperpendek durasi gejala sebesar 96 %. Aquades pada

penelitian ini digunakan sebagai kontrol negatif yang menunjukkan tidak

adanya zona hambat. Hal ini mengindikasikan bahwa kontrol yang

digunakan tidak memiliki aktivitas anti-bakteri.

Kelemahan pada penelitian ini adalah zona hambat yang dihasilkan

sangat kecil, ini dimungkinkan karena suhu inkubator tidak optimal untuk

pertumbuhan bakteri (Suriani, 2013). Pada saat penelitian inkubator

laboratorium terjadi pemadaman, sehingga suhu turun. Namun kelebihan

penelitian ini yaitu saat diberikan perlakukan pada konsentrasi 75 mg/ml

ekstrak biji kelor menghambat Shigella dysenteriae, sedangkan Lar et al

(2011) pada Escherichia coli, Shigella flexneri dan Salmonella typhi pada

konsentrasi 100 mg/ml.


42

Penelitian Bukar et al., (2010) menggunakan ekstrak biji kelor lebih

baik dibandingkan menggunakan ekstrak daun kelor. Daya hambat berturut-

turut yang diperoleh pada saat diujikan pada E. coli, biji kelor sebesar 10

mm, 11 mm , 11 mm, 11 mm dan daun kelor sebesar 6 mm, 6 mm, 6 mm, 6

mm. Perbandingan penelitian lain yang dilakukan oleh Sayeed et al (2012),

dengan ekstrak buah kelor (Moringa oleifera Lmk.) yang sama-sama

menggunakan bakteri Shigella dysenteriae konsentrasi 30 μg/disc, 50

μg/disc dan 100 μg/disc, menunjukan adanya zona hambat pada konsentrasi

100 μg/disc, namun penelitian ini tidak melakukan uji fitokimia dan uji

dilusi untuk menentukan nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan

Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM).

2. Pembahasan Uji Dilusi (tube dilution method) terhadap Shigella dysenteriae

Teknik perhitungan koloni bakteri dilakukan secara sederhana dengan

metode TPC, selanjutnya secara deskriptif dijabarkan bahwa Shigella

dysenteriae yang telah ditambah biji kelor pada beberapa konsentrasi pada

media MHA (Muller Hinton Agar) dan dihitung tiap koloni (Rofi’i, 2009).

Satuan perhitungan koloni CFU (Colony Forming Unit) untuk populasi

mikroba. Metode TPC merupakan solusi terbaik dalam mengetahui

banyaknya populasi bakteri dan diukur sebagai nilai OD (Bichi et al., 2012).

Pada konsentrasi 75 mg/ml didapatkan nilai TPC 41x 106.

merupakan

nilai KHM tertinggi, dengan adanya penurunan nilai TPC. Nilai TPC bisa

memperkuat uji dilusi. Konsentrasi tinggi mampu menekan bakteri untuk


43

tumbuh (Andries et al, 2014). Perlu melakukan uji lanjutan untuk

memperoleh nilai KBM. Konsentrasi yang diujikan pada penentuan nilai

KBM kurang tinggi, sehingga perlu meningkatkan konsentrasi melebihi

KHM (Julianti et al., 2017).

Berdasarkan analisis statistik pada uji difusi hasil positif diperlihatkan

dengan adanya zona hambat konsentrasi ekstrak biji kelor pada Gambar 5.1,

dimulai dari 75 mg/ml, 100 mg/ml, 200 mg/ml, 400 mg/ml.

Menurut Bangkele et al (2015), menggunakan ekstrak lengkuas putih

(Alpinia galangal [L] Swartz, dilakukan uji fitokimia dan uji dilusi untuk

menentukan nilai Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh

Minimum (KBM). Hasil uji fitokimia ditemukan adanya senyawa flavonoid

dan tanin. Sedangkan pada uji dilusi dengan konsentrasi 6,25%, 12,5%, 25%

dan 50% didapatkan nilai KHM pada konsentrasi 25% sudah tidak terjadi

kekeruhan dibanding konsentrasi 6,25%, 12,5% dan dari hasil perhitungan

dengan Colony Counter didapatkan konsentrasi 50% sudah tidak terdapat

pertumbuhan koloni ini berarti menunjukkan nilai KBM, karena syarat

KBM yaitu tidak ada pertumbuhan koloni (Julianti et al., 2017).

Hasil penelitian ini berkaitan dengan keberadaan senyawa fitokimia

yang terkandung didalam ekstrak biji kelor yang dianalisis secara kualitatif.

Menurut Saxena (2013), uji fitokimia dilakukan untuk menentukan

kandungan kimia secara kualitatif untuk mengetahui golongan senyawa

yang terkandung dalam suatu tumbuhan. Pemeriksaan uji fitokimia meliputi


44

kandungan senyawa alkaloid, flavonoid, tanin dan saponin. Senyawa

fitokimia dalam biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) mendukung penelitian

ini seperti yang disajikan pada Tabel 5.6.

Tabel 5.6 uji fitokimia ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.)

Golongan

Senyawa

Perlakuan

Hasil Fitokimia

Alkaloid 5 gr ekstrak + HCl 2 M

+ HCl + reagen Wagner

+

(Endapan kuning)

Flavanoid 5 gr ekstrak + FeCl3 +

(Merah kehitaman)

Saponin 5 gr ekstrak + aquades +

(Terbentuk buih

yang stabil)

Tanin 5 gr ekstrak + FeCl3 1% +

(Hijau atau biru

kehijauan)

Pada Tabel 5.6 dapat diketahui bahwa ekstrak biji kelor yang di

esktraksi dengan pelarut metanol dapat mengangkat senyawa alkaloid,

flavonoid, saponin dan tanin. Sedangkan pada penelitian yang dilakukan

oleh Bukar et al (2010) menggunakan pelarut kloroform hanya mampu

mengangkat senyawa saponin. Hasil uji fitokimia yang dilakukan pada

pelarut yang berbeda akan menunjukkan hasil yang berbeda dalam kekuatan

sinyal yang diidentifikasi, yaitu tingkat kepekatan yang berbeda pada setiap

pelarut. Senyawa polar hanya akan larut pada pelarut polar seperti metanol.


45

Sehingga senyawa alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin dapat terangkat

karena merupakan senyawa polar (Egwaikhide dan Gimba, 2007).

Alkaloid mengganggu penyusunan peptidoglikan pada dinding sel

sehingga terjadi kematian sel (Dima et al, 2016).

Flavonoid merupakan golongan senyawa polar yang dapat larut dalam

pelarut polar etanol, metanol, DMSO dan lain-lain. Flavanoid merupakan

bagian dari senyawa fenol yang dapat bersifat sebagai anti-bakteri.

Mekanisme kerja dari flavonoid yaitu melalui penghambatan fungsi DNA

gyrase sehingga menurunkan kemampuan replikasi dan translasi bakteri

(Wulandari et al, 2012).

Saponin mampu mengeluarkan busa seperti sabun. Efek dari saponin

mengganggu permeabilitas sel bakteri sehingga membran sel rusak dan lisis

(Sulastrianah et al, 2014).

Shigella dysenteriae adalah Gram negatif lapisan peptidoglikan tipis

tersusun pada dinding sel. Mekanisme awal penghancuran dinding sel

Shigella dysenteriae akan diikuti kerusakan yang lain (Nurhasanah, 2014).

Pengaruh ekstraksi dan pelarut metanol yang digunakan akan

mempengaruhi aktivitas antibakteri. Ngazizah (2016), menyatakan

perbedaan sensitivitas antibakteri terhadap dinding sel bakteri Gram negatif

dan bakteri Gram positif.


46

Pengobatan merupakan suatu usaha yang dilakukan untuk

menyembuhkan diri dari suatu penyakit. Pada dasarnya pengobatan secara

tradisional diperbolehkan dalam ajaran islam selama tidak menjurus kepada

kemusyrikan. Nabi Muhammad saw telah menjelaskan bahwa ada dua

macam penyakit pada diri manusia, yaitu penyakit jasmani dan rohani.

Pengobatan untuk penyakit rohani adalah Al-Qur’an, sedangkan untuk

pengobatan jasmani adalah dengan apa yang Allah ciptakan.

Pada dasarnya semua penyakit berasal dari Allah, maka hanya Allah lah

yang dapat menyembuhkannya. Akan tetapi untuk mencapai kesembuhan,

seorang hamba harus mengusahakannya. Sesungguhnya Allah

mendatangkan penyakit maka bersamaan dengan itu Allah juga

mendatangkan obat. Hal ini sesuai dengan riwayat Imam Muslim dari Jabir

bin Abdillah dia berkata bahwa Rasulullah saw bersabda :

اء ب رأ بإذن الله عز وجل لكل داء دواء، فإذا أصيب دواء الد

“Setiap penyakit ada obatnya. Apabila obat itu tepat untuk suatu penyakit,

penyakit itu akan sembuh dengan seizin Allah 'azza wajalla.” (HR.Muslim)

Berdasarkan hadist diatas dapat diartikan bahwa Allah swt tidak akan

menurunkan penyakit apapun kecuali Allah juga menurunkan obatnya baik

itu penyakit yang muncul pada zaman Nabi maupun sesudahnya. Setiap

penyakit pasti ada obatnya, tergantung bagaimana cara mengatasi penyakit

tersebut sehingga penyakit tersebut bisa sembuh atas izin Allah swt.


47

BAB VI

PENUTUP

A. Simpulan

1. Konsentrasi ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) mempengaruhi

diameter zona hambat pertumbuhan Shigella dysenteriae. Rerata diameter

daerah zona hambat terbesar pada konsentrasi 400 mg/ml sebesar 7,8 mm.

2. Nilai KHM (Konsentrasi Hambat Minimum) ekstrak biji kelor (Moringa

oleifera Lmk.) yaitu pada konsentrasi 75 mg/ml.

3. Belum ditemukan nilai KBM (Konsentrasi Bunuh Minimum) terhadap

Shigella dysenteriae.

B. Saran

1. Penelitian lebih lanjut ekstrak biji kelor (Moringa oleifera Lmk.) sangat

penting dilakukan untuk mencari nilai KBM.

2. Perlu dilakukan uji fitokimia secara kuantitatif agar diperoleh hasil yang

lebih akurat terkait pengaruh senyawa fitokimia terhadap bakteri Shigella

dysenteriae.


48

DAFTAR PUSTAKA

Abdillah, M., Nazilah, N.R.K., E. Agustina. 2017. Identifikasi Senyawa Aktif

Dalam Ekstrak Metanol Daging Buah Kurma Jensi Ajwa (Phoenix

dactylvera L.) . Jurnal Prosiding Seminar Nasional III. UIN Sunan Ampel

Surabaya, Surabaya.

ssAbdullah, A.Z., Arsin, A.A., and L. Dahlan. 2012. Faktor Resiko Diare

Shigellosis Pada Anak Balita. Jurnal Kesehatan Masyarakat 7 (1) : -.

Amjad, M. S., Qureshi H. Arsyad, S.K. Chaudhari, and M. Masood .2015. The

Incredible Queen Of Green: Nutritive Value And Therapeutic Potential Of

Moringa Oleifera Lam. Journal Of Coastal Life Medicine 3(9): 744-751.

Andries, J.R., Gunawan, P.N., A. Supit. 2014. Uji Efek Antibakteri Ekstrak Bunga

Cengkeh terhadap Bakteri Streptococcus mutans secara In Vitro. Jurnal e-

Gigi, 2 (2) : -

Aney, J., Rashmi, T., Maushumi, K and Kiran, B. 2009. Pharmacological and

Pharmaceutical Potential of Moringa oleifera. A Review Journal

Pharmacist Research. 2 (9) : 1424-1426.

Anwar, F., Latif, S., Ashraf, M., and A.H, Gilani. 2007. Moringa oleifera: A Food

Plant with Multiple Medicinal Use. Journal Phytotherapy Research, 21 :

17-25.

Arthasari, D.A.A. 2015. Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanol Biji Dan

Batang Pepaya (Carica Papaya L.) Terhadap Bakteri Shigella Dysenteriae

Dan Streptococcus Pyogenes Serta Bioautografinya. Naskah Publikasi.

Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.

Bangkele, E.Y., Nursyamsi, S. Greis. 2015. Efek Anti Bakteri Dari Ekstrak

Lengkuas Putih (Alpinia Galangal [L] Swartz) Terhadap Shigella

Dysenteriae. Jurnal Kesehatan Tadulako, 1 (2) : 1- 78.

Balouiri, M., Sadiki, M., S.K, Ibnsouda. 2016. Methods for in vitro evaluating

antimicrobial activity. Journal of Pharmaceutical Analysis, 6 : 71–79.

Bichi. M. H., Agunwambas. J. C., S. A. Muyibi., M. I. Abdulkarim. 2012. Effect

of Extraction Method on the Antimicrobial Activity of Moringa oleifera

Seeds Extract. Journal of American Science. 8 (9) : -


49

Bukar, A., Uba, A., Oyeyi, T.I. 2010. Antimicrobial Profile of Moringa oleifera

Lam. Extracts Against Some Food-Borne Microorganisms. Journal

Bajopas, 3 (1) : 43-48.

Chukwuebuka,E. 2015. Moringa oleifera “The Mother’s Best Friend”.

International Journal of Nutrition and Food Sciences 4(6) : 624-630.

Dima, L.L.R.H., Fatmawati., and W.A, Lolo.2016. Uji Aktivitas Antibakteri

Ekstrak Daun Kelor (Moringa oleifera L.) Terhadap Bakteri Escherichia

coli dan Staphylococcus aureus. Jurnal Ilmu Farmasi, 5 (92) : - .

Egwaikhide, P.A., C.E Gimba. 2007. Analysis of thr Phytochemical Content and

Anti-microbial Activity of Plectranthus glandulosis Whole Plant. Journal

of Scientific Research, 2 (3-4) : 135-138.

Folkard, G., Sutherland, J. 2005. Moringa oleifera a multipurpose tree. Journal

Tropical Medicine Hygiene, 90 : 101-109.

Gupta, R., Sharma, A.K., Dobhal, M.P., Sharma, M.C., and R.S. Gupta. 2011.

Antidiabetic And Antioxidant Potential Of Sitosterol In Streptozotocin-

Induced Experimental Hyperglycemia. J. Diabetes 3 : 29–37. Diakses

Selasa, 6 Juni 2017.<https://Www.Ncbi.Nlm.Nih.Gov/Pubmed/21143769>

Hamza, A.A. 2010. Ameliorative Effects Ofmoringa Oleifera Lamseed Extract On

Liver Fibrosis In Rats. Food Chem. Toxicol. 2010, 48 : 345–355. Diakses

pada 6 Juni 2017. <https://Www.Ncbi.Nlm.Nih.Gov/Pubmed/19854235>.

Julianti. E., Kasturi K. R., Irda. F. 2017. Antibacterial Activity Of Ethanolic

Extract Of Cinnamon Bark, Honey and Their Combination Effects Against

Acne-Causing Bacteria. Journal Sci.Pharm. 85 (19) : -.

Kheir, S.M., Kafi S. K and H. Elbir. 2015. Evaluation Of The Antifungal Activity

Of Moringa Oleifera Seeds, Leaves And Flowers. World Journal Of

Pharmaceutical Research. 4 (2) : 18-25.

Khotimah , K. 2016. Skrining Fitokimia Dan Identifikasi Metabolit Sekunder

Senyawa Karpain Pada Ekstrak Metanol Daun Carica Pubescens Lenne &

K. Koch Dengan Lc/Ms (Liquid Chromatograph-Tandem Mass

Specttrometry). Skripsi . Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam

Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang.

Krisnadi, A. D. 2015. “Kelor Super Nutrisi”. Diakses Minggu, 15 Januari 2017.

<http://Kelorina.com/Blog/Ebook-Super-Nutrisi.com>

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Pubmed/21143769


http://kelorina.com/blog/ebook-super-nutrisi.com


50

Kurniasih, D. 2014. Efektivitas Ekstrak Lidah Buaya (Aloe Vera) Sebagai

Antibakteri Pada Pertumbuhan Shigella dysenteriae Secara In Vitro.

Skripsi. Fakultas Keguruan Dan Ilmu Pendidikan, Universitas Pasundan.

Bandung.

Kusumaningsih, A. 2010. Beberapa Bakteri Patogenik Penyebab FoodBorne

Disease Pada Bahan Pangan Asal Ternak. Jurnal Wartazoa, 20 (3) : -.

Lar, P.M ., Ojile, E.E, E. Danshe., and J.N Oluoma. 2011. Antibacterial Activity

Of Moringa Oleifera Seed Extracts On Some Gram Negative Bacterial

Isolates. African Journal Of Natural Sciences, 14: 57-62.

Leone, A., Alberto, S., A. Battezzati, A. Schiraldi, J. Aristil and S. Bertoli. 2016.

Moringa Oleifera Seeds And Oil: Characteristics And Uses For Human

Health. International Journal Of Molecular Sciences. 17 (12) : 2141.

Lutz. M., Hernandez. J., Carolina. H. 2015. Phenolic Content and Antioxidant

Capacity in Fresh and Dry Fruits and Vegetables Grown in Chile. Journal

of Food. 13(4) : 541-547.

Maharani, K. 2012. Uji Aktivitas Ekstrak Kulit Buah Dan Biji Manggis (Garcinia

mangostana) Pada Bakteri Penyebab Jerawat (Staphylococcus

epidermidis) Dengan Menggunakan Solven Etanol. Skripsi. Fakultas Sains

dan Teknologi, Universitas Airlangga, Surabaya.

Mahajan, S.G., Mali, R.G., and A.A. Mehta. 2007. Effect Of Moringa Oleifera

Lam. Seed Extract On Toluene Diisocyanateinduced Immune-Mediated

Infla Mmatory Responses In Rats. Juornal Immunotoxicol. 4 : 85–96.

Diakses Selasa, 6 Juni 2017.

<https://Www.Ncbi.Nlm.Nih.Gov/Pubmed/18958717>.

Microbesinfo. 2014. Definition, Classification, Morphology And Cultural

Characteristics Of Shigella. Microbiology And Infectious Diseases.

Diakses Minggu, 4 Juni 2017. <http:// Microbesinfo.com.>.

Midun, 2012. Uji Efektivitas Ekstrak Lengkuas Merah (Alpina purpurata K.

Schum) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus

dan Bakteri Escherichia coli dengan Metode Disc Difussion. Skripsi.

Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah,

Jakarta.

Munfaati, P.N., Ratnasari, E and G. Trimulyono. 2015. Aktivitas Senyawa

Antibakteri Ekstrak Herba Meniran (Phyllanthus Niruri) Terhadap

Pertumbuhan Bakteri Shigella Dysenteriae Secara In Vitro. Jurnal

LenteraBio, 4 (1) : 64-71.


http://microbesinfo.com/


51

Ngazizah, F.N., Ekowati, N., A.T, Septiana. 2016. Potensi Daun Trembilungan

(Begonia hirtella Link) sebagai Antibakteri dan Antifungi. Jurnal Biosfera,

33 (3) : 126-133.

Novalina, D., Sugiyarto, A. Susilowati. 2012. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun

Carica pubescens dari Dataran Tinggi Dieng terhadap Bakteri Penyebab

Penyakit Diare. Jurnal pasca sarjana uns.ac.id, 1 (1) : 1-12.

Nurhasanah. 2014. Antimicrobial Activity of Nutmeg (Myristica fragrans Houtt)

Fruit Methanol Extract Againts Growth Staphylococus aureus and

Eschericia coli. Jurnal BIOedukasi, 3 (1) : -.

Pakki. E., Kasim Syaharuddin. K., Muzakkir. R., Sony. K. 2009. Uji Aktivitas

Antibakteri Enzim Papain Dalam Sediaan Krim Terhadap Staphylococcus

aureus. Majalah Farmasi dan Farmakologi. 3 (1) : -.

Perwira, I.D. 2013. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak N-Heksana, Etil Asetat Dan

Etanol 70% Daun Binahong (Anredera Cordifolia (Ten.) Steenis)

Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus Aureus Secara In Vitro. Skripsi.

Fakultas Farmasi, Universitas Jember, Jember.

Rofi’i. F. 2009. Hubungan Antara Jumlah Total Bakteri dan Angka Katalase

Terhadap Daya Tahan Susu. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan, Institut

Pertanian Bogor, Bogor.

Sari, M. 2015. Uji Bakteriologis dan Resistensi Antibiotik Terhadap Bakteri

Escherichia coli dan Shigella sp Pada Makanan Gado-Gado di Kantin UIN

Syarif Hidayatullah Jakarta. Skripsi. Fakultas Kedokteran dan Ilmu

Kesehatan, Uin Syarif Hidayatullah, Jakarta.

Sarker, S.D, Latif, Z., Gray A.I. 2006. Natural Products Isolation. Journal, 6 : 10-

18.

Saxena, M., Saxena, J., R. Nema, D. Singh, A. Gupta. 2013. Phytochemistry of

Medicinal Plants. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry. 1 (6) : -

Sayeed, M.A., Hossain, M.S., M.E.H, Chowdhury, M. Haque. 2012. In Vitro

Antimicrobial Activity of Methanolic Extract of Moringa oleifera Lam.

Fruits. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 1(4) : -

Shrotriya, A. 2015. An Introduction To Shigellosis And Strategies Against Potent

Drug. International Journal Of Pharmacy & Life Sciences. 6 : 8-9.

Sulastrianah, Imran, E.S, Fitria. 2014. Uji Daya Hambat Ekstrak Daun Sirsak

(Annona muricata L.) dan Daun Sirih (Piper betle L.) terhadap

Pertumbuhan Bakteri Eschericia coli. Jurnal, 1 (1) : -


52

Sulaeman, L.P. 2015. Deteksi Bakteri Eschericia Coli Dan Shigella Sp Dalam

Telur Balado Serta Resistensinya Terhadap Beberapa Antibiotik. Skripsi.

Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah,

Jakarta.

Suriani. S., Soemarno, Suharjono. 2013. Pengaruh Suhu dan pH Terhadap Laju

Pertumbuhan Lima Isolat Bakteri Anggota Genus Pseudomonas Yang

Diisolasi Dari Ekosistem Sungai Tercemar Deterjen Di Sekitar Kampus

Universitas Brawijaya. Jurnal-PAL. 3 (2) : -

Threenesia, A. 2017. Perbandingan Efek Pemberian Ekstrak Etanol Daun

Kemangi (Ocimum Sanctum L.) Terhadap Daya Hambat Pertumbuhan

Staphylococcus Aureus Dan Salmonella Typhi Secara In Vitro. Skripsi .

Fakultas Kedokteran, Universitas Lampung, Bandar Lampung.

Utami, E.R. 2012. Antibiotika, Resistensi dan Rasionalitas Terapi. Jurnal Saintis,

1 (1) : -

Vimalkumar, C.S., V.B Hosagaudar., S.R Suja., V.Vilash., N.M Krishnakumar.,

and P.G, Latha. 2014. Comparative preliminary phytochemical analysis of

ethanolic extracts of leaves of Olea dioica Roxb., infected with the rust

fungus Zaghouania oleae (E.J. Butler) Cummins and non-infected plants.

Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry 3 (4) : 69-72.

Walter, A., Samuel, W., Peter, A And O. Joseph. 2011. Antibacterial Activity Of

Moringa Oleifera And Moringa Stenopela Methanol And N-Hexane Seed

Extracts On Bacteria Implicated In Water Borne Diseases. African Journal

Of Microbiology Research 5 (2) : 153-157.

WHO. 2016. Dysenterie (Shigellosis). Diakses Selasa, 6 Juni 2017.

http://www.who.int/selection_medicines

Wulandari, P., Suswati, E., Misnawi., and A. Rianul. 2012. Antibacterial Effect

Of Ethanol Extract Cocoa Beans (Theobroma Cacao) On Growth In Vitro

By Shigella Dysentriae. Jurnal Medika Planta 1 (5) : -.

Zhou, G., Shi, Q.S., X.M. Huang., X.B. Xie. 2015. The Three Bacterial Lines of

Defense Against Antimicrobial Agents. Journal of Molecular Sciences, 16

: 21711-21733.