Süreyya ÖZCANHacettepe Üniversitesi

Gıda Müh. Böl.

HacettepeÜniversitesi

ĐĐççerikerik

• HPLC’nin Tarihçesi

• HPLC’de Ayırma

• Ayırmada Rol Alan Unsurlar

• HPLC Sistemleri

• HPLC’de Kullanılan Dedektörler

• Floresans Dedektör

• HPLC’nin Kullanım Alanları

M.S. Tswett. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24: 384-393 (1906)

1906 - Mikhail Semenovich Tswett

HPLC TarihHPLC Tarihççesiesi

1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919)Calcium Carbonate, Petroleum Ether1931- Kuhn ve Lederer1938 - Ismailov ve Schraiber1940's – Consden, Gordon ve Martin Partisyon veKağıt Kromatografisi1950's – Stahl Gaz, Đnce-Tabaka, Jel-Süzme veGradient Elution Kromatografisi1960's - Ticari HPLC’ye giriş

HPLC TarihHPLC Tarihççesiesi

AyAyıırmarma

ABsorpsiyon ADsorpsiyon

Ayırma, durgun faz ile hareketli faz arasındaki göçe bağlıdır.

Durgun Faz – Kolon içerisinde sabit duran faz ör. C18, Silica

Hareketli Faz –Numuneyi durgun faz üzerinde taşıyan fazdır.

Enjektör

Detektör

Kolon

Solvan

Karıştırıcı

Pompalar

Yüksek Performanslı Sıvı Kromatograf

Atık

AyAyıırmarma

Enjektör

Detektör

Kolon

Solvan

Pompalar

KarıştırıcıEnjeksiyon

mAU

zaman

Afl G2Afl G1

Afl B2

Afl B1AyAyıırmarma

Enjektör

Detektör

Kolon

Solvan

Pompalar

Karıştırıcı

Kromatogram

Enjeksiyon

mAU

zaman

Afl G2Afl G1

Afl B2

Afl B1AyAyıırmarma

Kolon SeçimiDurgun faz, partikül büyüklüğü, vs..Kolon UzunluğuHareketli Faz BileşimiKolon SıcaklığıAkış Hızı

AyAyıırmada Rol Alan Unsurlarrmada Rol Alan Unsurlar

Kontrol Modülü

Çözücü Kabini

Vakum degasser

Pompa

Otoörnekleyici

Kolon kompartmanı

Dedektör

HPLC SistemleriHPLC Sistemleri

UV-VIS65%

RILS

10%

Elektro10%

FLD8%

MS

RayoaktiviteĐletkenlikLC/IR

Genel HPLC DedektGenel HPLC Dedektöörlerirleri

Detektör performans özellikleri:

• Hassasiyet (LOD, LOQ)• Seçicilik• Lineerlik• Kalitatif Bilgi• Güvenilirlik• Kullanım kolaylığı• Üniversal olması

Performans Performans ÖÖzelliklerizellikleri

Flow

Cell

PhotomultiplierTube

LightSource

Excitation

EmissionVariable Excitation

andEmission

Wavelengths

Floresans DedektFloresans Dedektöörr

• Floresans sadece seyreltik çözeltiler için lineerdir.

• Emisyon ölçümü sadece 900’ de yapılmakta ve ağ ile bir tek dalga boyu seçimi yapılmaktadır. Bu sebeple ölçüm çok hassastır.

• Bazı kimyasallar floresansı yok ederek hassasiyeti azaltır (i.e., O2).

• Eksitasyon dalga boyunda absorbsiyon yapan çözücüler kullanılmamalıdır.

• FLD detektörleri akış hızı ve ısı değişikliğinden fazla etkilenmemektedir.

• Seçici detektörlerdir.

Floresans DedektFloresans Dedektöör r ÖÖzelliklerizellikleri

Mikotoksin AnalizleriMikotoksin Analizleri

FLD UygulamalarFLD Uygulamalarıı

Kimyasal

Çevre

Đlaçlar

Tüketici Ürünleri

Klinik

polistirenlerboyalarfitalatlar

tetrasiklinlerhormonlarantidepressantlarbarbituratlar

amino asitlervitaminler

Biyolojik Bilimlerproteinlerpeptidlernucleotidler

yağlarAntioksidan bileşiklerşekerler

poliaromatik hidrokarbonlarInorganik iyonlarherbisitler

HPLC UygulamalarHPLC Uygulamalarıı

Teşekkürler...