Transcript
Page 1: Automatizacion Del Hemograma

Automatización del hemograma

por: Lisseth Samudio

Page 2: Automatizacion Del Hemograma

¿Qué es el hemograma?

• Análisis en que se miden de forma global y en porcentaje los tres tipos básicos de células sanguíneas:– Serie eritrocitaria o serie

roja – Serie leucocitaria o serie

blanca – Serie plaquetaria

Page 3: Automatizacion Del Hemograma

Hemograma

• CBC: Complete blood count• CSC: conteo sanguíneo

completo.• BH o BHC: biometría

hemática o biometría hemática completa.

• Sangre anticoagulada de preferencia con etilendiaminotetracético.

Page 4: Automatizacion Del Hemograma

EDTA

• Anticoagulante sólido recomendado por varias razones:– No produce dilución de la sangre.– Respeta la morfología eritrocitaria y leucocitaria.– Asegura la conservación de las células durante 24

horas.– Inhibe la agregación de las plaquetas, facilitando

el recuento de las mismas.

Page 5: Automatizacion Del Hemograma

Estudio de la serie Roja

• Se cuantifica: – Globulos rojos– Hemoglobina.– Hematocrito.– Índices hemáticos (algunos calculados):• VCM: volumen corpuscular medio.• HCM: hemoglobina corpuscular media.• CHCM: concentración de hemoglobina corpuscular

media.• IDE: índice de distribución eritrocitaria.

Page 6: Automatizacion Del Hemograma

Estudio de la Serie Blanca

• Se cuantifica:– Cifra total de glóbulos

blancos.– Fórmula leucocitaria

diferencial (neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos)

Page 7: Automatizacion Del Hemograma

Estudio de la Serie Plaquetaria

Se cuantifica:• Plaquetas• VPM: volúmen plaquetario medio• PCT: plaquetocrito.• IDP: índice de distribución de plaquetas.

Page 8: Automatizacion Del Hemograma

Recuento automatizado – Historia-

• 1949 con Wallace Coulter (desarrollo el principio de resistencia eléctrica o impedancia).

• A principio de los 60 ´s los equipos suministraron las principales magnitudes.

• En los 70 recuento de plaquetas.• 1953 Parker y Horts, recuento mediante luz

halógena (previa tinción)• 1965 katmentsky introdujo la espectrofotometría

y el principio del fondo oscuro.

Page 9: Automatizacion Del Hemograma

Recuento automatizado – Historia-

• 1966 cambios en ondas de radiofrecuencias.

• 1980 citometría de flujo.

Page 11: Automatizacion Del Hemograma

COMPAÑÍAS FABRICANTES DE AUTOANALIZADORES

• Grifols International ES • Horiba ABX FR • Olympus JP • RAL Tecnicas para el Laboratorio SA ES • Roche Diagnostics Corporation EUR• Spinreact SA ES • Sysmex JP

Page 12: Automatizacion Del Hemograma

Principios de medición más empleados

• Contador hematológico que realiza el conteo por variación de impedancia.

• Conteo óptico.• Contador hematológico que realiza el conteo

mediante utilización de citometría de flujo.• Contadores celulares centrífugos.

Page 13: Automatizacion Del Hemograma

Equipos de hematología

• Según el tipo de ondas electromagnéticas empleadas se utilizan individual o combinadas las siguientes metodologías básicas: – Impedancia (corriente directa)– Dispersión lumínica.– Fluorescencia (mejora la sensibilidad y precisión).

Page 14: Automatizacion Del Hemograma

Automatización

• Para obtener cantidad y volumen de los componentes sanguíneos los analizadores hematológicos automatizados utilizan las variaciaciones que ejercen las células al atravesar campos magnéticos.

• Las condiciones son estrictas y constantes.• Los datos cuantitativos se expresan en tablas,

histogramas y citogramas.

Page 15: Automatizacion Del Hemograma

VARIACIÓN DE IMPEDANCIA

• El contador de impedancia eléctrica trabaja mediante la suspensión de las células sanguíneas en un líquido electrónicamente conductor. Cada partícula es forzada a atravesar un par de electrodos produciendo un cambio en la resistencia eléctrica entre los electrodos. Cada célula produce un pulso eléctrico específico que permite su clasificación y conteo.

Page 16: Automatizacion Del Hemograma

IMPEDANCIA

Page 17: Automatizacion Del Hemograma

Impedancia • Los impulsos generados son directamente

proporcionales al tamaño de la célula y el número de partículas que atraviesa el orificio de apertura por unidad de tiempo es proporcional a su concentración en el medio electrolito.

• Para el recuento correcto necesitamos corriente directa y que las células sigan una trayectoria uniforme por el detector.

Page 18: Automatizacion Del Hemograma

Impedancia

• Ejemplos de instrumentos con este principio son el Contador Coulter, los instrumentos TOA Sysmex y los instrumentos Abbot Cell-Dyn.

Page 19: Automatizacion Del Hemograma

Contadores celulares centrífugos

Basado en la densidad variable de los componentes celulares al ser colocados en un capilar de micro hematocrito y ser sometidos a centrifugación. Un flotador cilíndrico específicamente colocado entre la capa de eritrocitos y el plasma expande en distintas capas de los componentes leucocitarios.

Page 20: Automatizacion Del Hemograma

BUFFY COAT• Los resultados

contenidos comprenden hematocrito, hemoglobina, número de células rojas, número de leucocitos, granulocitos totales, neutrófilos, eosinófilos y porcentaje de reticulocitos

Page 21: Automatizacion Del Hemograma

Contadores celulares centrífugos

• La diferenciación se logra mediante el uso de reactivos y colorantes (naranja de acridina, oxalato potásico y un anticuerpo monoclonal) que cubren internamente el tubo o capilar.

• Los componentes una vez teñidos son expuestos a una fuente de luz azul violeta y la fluorescencia permite distinguir los componentes celulares.

Page 22: Automatizacion Del Hemograma

Contadores láser o citometría de flujo

• El principio de trabajo de estos equipos radica en la dispersión de la luz sobre una célula.

• Las interrupciones del láser pueden ser usadas para el conteo celular.

• Los cambios en la refracción de la luz brindan información de tamaño celular o complejidad y densidad interna.

Page 23: Automatizacion Del Hemograma

Tres haces de luz blanco al pasar por un coloide de partículas de azufre en un liquido, se convierten en anaranjados, rosados y azul verdosos.

Citometría de flujo

Page 24: Automatizacion Del Hemograma

Citometría de flujo

• Para ello hacemos pasar dichas células, a velocidad constante de varios miles por segundo a través de un cámara de flujo laminar sobre la que incide un haz de luz a una longitud de onda específica “Láser”.

• Como consecuencia del impacto, se produce una dispersión de luz policromática generada por los diferentes fluorocromos que es captada por diversos detectores de gran sensibilidad.

Page 25: Automatizacion Del Hemograma

Citometría de flujo• Los detectores convierten las señales en

señales electrónicas que posteriormente serán digitalizadas para permitir la medida simultánea de varios parámetros en la célula.

• Estos parámetros son:- características intrínsecas de la célula: tamaño y la complejidad de su núcleo y citoplasma. - Características antigénicas de cada célula.

Page 26: Automatizacion Del Hemograma

Citometría de flujo• Analizar cada señal permite conocer

propiedades celulares y el comportamiento al ponerlas en contacto con diferentes sustancias o marcadores.

• Las señales pueden ser de dispersión (interactúa la partícula con la luz y produce cambios de dirección en el espacio) o de fluorescencia (interacción del fluorocromo con la luz y emisión de energía radiante).

Page 27: Automatizacion Del Hemograma

Citometría de flujo

Page 28: Automatizacion Del Hemograma

Citometría de flujo

• La citometría de flujo se utiliza en muy diversas aplicaciones, que van desde inmunofenotipado, muerte celular, contaje celular, expresión de genes reporteros, etc.

Page 29: Automatizacion Del Hemograma

Determinación de la Hemoglobina

• Ferrocianuro potásico oxida la hemoglobina a hemiglobina (metahemoglobina).

• Cianuro de potasio para formar el compuesto cromogénico (HiCN).

• Se mide por espectrofotometría a una longitud de onda de 550 nm.

• Resultado final: valor de absorbancia x coeficiente de calibración.

Page 30: Automatizacion Del Hemograma

Reactivos empleados• EQUIPOS DE TRES PARTES:– Diluyente– Lisante– Detergente.

• EQUIPOS DE CINCO PARTES:– Diluyente.– Lisante.– Detergente limpiador o cleaner.– Reactivos con fluorocromos.

Page 31: Automatizacion Del Hemograma

Presentación de los resultados

• Tablas numéricas.• Histogramas.• Diagrama de

dispersión.

Page 32: Automatizacion Del Hemograma

Limitaciones

• Mantenimiento.• Muestras de sangre.• Interferencias.• Limitaciones del

operador.

Page 33: Automatizacion Del Hemograma

Gracias…