-
VAJA 3
FOTOSINTEZNI PIGMENTI
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
-
Fotosintezni pigmenti
Klorofili: klorofil aklorofil b
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
Karotenoidi karoteni (-karoten)ksantofili (lutein, violaksantin,
zeaksantin, anteraksantin, )
-
karotenoidi
klorofil b
klorofil a
antenskikompleks
reakcijskicenter reakcijski
center
svetlobasvetloba
zman
j e v
a nje
e ne r
gije
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
Fotosintezni pigmenti sodelujejo pri absorpciji svetlobe
-
klorofil a bakterioklorofil aklorofil b
Klorofili
-
Ksantofili:
lutein
Karoteni:
-karoten
Karotenoidi
neoksantin
-
valovna dolina (nm)
abso
rpci
jaIRUV
spekter vidne svetlobe
bakterioklorofil aklorofil b
klorofil a
-
2) Loba - kromatografijaSilikagel G(stacionarna faza)
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
Vaja 4.1: Absorpcijske lastnosti asim. pigmentov
1) Ekstrakcija
hladen aceton tema, MgHCO3, Na2SO4
kloroform
15 mm10
0 m
m30
mm
-
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
2) Loba - kromatografija
ab
retenzijski faktorRf = b / a
+ aceton 5mlheksan/ dietileter/ aceton (6: 3 :2)(mobilna
faza)
centrifugiranjesupernatant
Merjenje absorpcijskih spektrov na spektrofotometru(350-700
nm)
-
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
monokromatskavpadna svetloba
monokromatorsvetlobni vir prizma
vzorecprepuena svetloba detektor zapisovalnik /
raunalnik
Spektrofotometer
Absorbanca:
A = log I0 / I A = c l Beer-ov zakon
c = koncentracija, l = dolina poti, ki jo opravi svetloba skozi
vzorec, = molarni ekstincijski kolinik
-
valovna dolina (nm)
abso
rpci
jaIRUV
spekter vidne svetlobe
bakterioklorofil aklorofil b
klorofil a
-
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
Vaja 4.2: Kvantitativno doloevanje asim. pigmentov
hladen aceton tema, MgHCO3, Na2SO4 Izmerimo volumen
ekstrakta (V)
vakuum
vakuumska filtracija
Vzorec znane mase (G)
Meritev absorpcije na spektrofotometru pi 470, 645 in 662 nm
-
klorofil a: Ca = 11.24 x A662 - 2.04 x A645
klorofil b: Cb = 20.13 x A645 - 4.19 x A662
karotenoidi: Cx+c = (1000 x A470 - 1.9 x Ca - 63.14 x Cb) /
214
Dokonne vsebnosti pigmentov v mg g-1 dobimo po upotevanju svee
mase tkiva (ali e bolje suhe mase, e smo jo doloili), iz katerega
smo naredili ekstrakt = G (g) in ob upotevanju volumna ekstrakta,
t.j. volumna porabljenega acetona = V (ml).
Cy x Vkonna koncentracija: C = --------------------
G x 1000
y = a, b, x+c
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
-
SPAD vrednost
Klo
rofil
(g
cm-2
)
Merjenje klorofila s klorofilmetrom (SPAD Minolta)
Fiziologija rastlin laboratorijske vaje 2005/2006
VAJA 3FOTOSINTEZNI PIGMENTIFotosintezni pigmenti
