Embed Size (px)
Citation preview
VAJA 3
FOTOSINTEZNI PIGMENTI
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Fotosintezni pigmenti
Klorofili: klorofil aklorofil b
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Karotenoidi karoteni (β-karoten)ksantofili (lutein, violaksantin, zeaksantin, anteraksantin, …)
karotenoidi
klorofil b
klorofil a
antenskikompleks
reakcijskicenter reakcijski
center
svetlobasvetloba
zman
j še v
a nje
e ne r
gije
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Fotosintezni pigmenti sodelujejo pri absorpciji svetlobe
klorofil a bakterioklorofil aklorofil b
Klorofili
Ksantofili:
lutein
Karoteni:
β-karoten
Karotenoidi
neoksantin
valovna dolžina (nm)
abso
rpci
jaIRUV
spekter vidne svetlobe
bakterioklorofil aklorofil b
klorofil a
2) Ločba - kromatografijaSilikagel G(stacionarna faza)
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Vaja 4.1: Absorpcijske lastnosti asim. pigmentov
1) Ekstrakcija
hladen aceton tema, MgHCO3, Na2SO4
kloroform
15 mm10
0 m
m30
mm
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
2) Ločba - kromatografija
ab
retenzijski faktorRf = b / a
+ aceton – 5mlheksan/ dietileter/ aceton (6: 3 :2)(mobilna faza)
centrifugiranjesupernatant
Merjenje absorpcijskih spektrov na spektrofotometru(350-700 nm)
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
monokromatskavpadna svetloba
monokromatorsvetlobni vir prizma
vzorecprepuščena svetloba detektor zapisovalnik /
računalnik
Spektrofotometer
Absorbanca:
A = log I0 / I A = ε • c • l Beer-ov zakon
c = koncentracija, l = dolžina poti, ki jo opravi svetloba skozi vzorec, ε = molarni ekstincijski količnik
valovna dolžina (nm)
abso
rpci
jaIRUV
spekter vidne svetlobe
bakterioklorofil aklorofil b
klorofil a
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
Vaja 4.2: Kvantitativno določevanje asim. pigmentov
hladen aceton tema, MgHCO3, Na2SO4 Izmerimo volumen
ekstrakta (V)
vakuum
vakuumska filtracija
Vzorec znane mase (G)
Meritev absorpcije na spektrofotometru pi 470, 645 in 662 nm
klorofil a: Ca = 11.24 x A662 - 2.04 x A645
klorofil b: Cb = 20.13 x A645 - 4.19 x A662
karotenoidi: Cx+c = (1000 x A470 - 1.9 x Ca - 63.14 x Cb) / 214
Dokončne vsebnosti pigmentov v mg g-1 dobimo po upoštevanju sveže mase tkiva (ali še bolje suhe mase, če smo jo določili), iz katerega smo naredili ekstrakt = G (g) in ob upoštevanju volumna ekstrakta, t.j. volumna porabljenega acetona = V (ml).
Cy x Vkončna koncentracija: C = --------------------
G x 1000
y = a, b, x+c
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
SPAD vrednost
Klo
rofil
(μg
cm-2
)
Merjenje klorofila s klorofilmetrom (SPAD Minolta)
Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006
