utilidad hemograma equinos

8/11/2019 utilidad hemograma equinos

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N M E R O 1 4 P R I M E R C U A T R I M E S T R E 2 0 0 6

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Una de las pruebas laboratoriales ms empleadas por el veterinario especialista en medi-cina equina actualmente es el hemograma, debido a la facilidad y rapidez de su reali-zacin y a la excelente relacin entre su coste y la informacin proporcionada.Los componentes celulares de la sangre pueden reflejar un cambio especfico produci-do en un rgano o sistema corporal o, con ms frecuencia, reflejan una respuesta gene-ral del individuo frente a la enfermedad.En este trabajo revisamos las tcnicas analticas que se utilizan para valorar los diferen-tes parmetros del hemograma, as como la interpretacin de los mismos. Se exponen

tambin las aportaciones que los nuevos analizadores hematolgicos automatizadoshan trado consigo, contribuyendo a mejorar la precisin y exactitud de los parmetrosanalizados y a abrir nuevas expectativas sobre la utilidad prctica de otros parmetrosmenos conocidos.

Rafaela Cuenca Valera, Josep Pastor Miln

Patologa General y Mdica - Facultad de Veterinaria - Universidad Autnoma de Barcelona

R e s u m e n

C a p t u l o I I

U t i l i d a d d e l h e m o g r a m a

e n l a c l n i c a e q u i n a

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a funcin principal de las

pruebas laboratoriales en-tre las que se encuentra elhemograma, es la de ge-nerar una informacin queayude al clnico en los

procesos de diagnstico, toma de decisiones,formulacin del pronstico y manejo y con-trol del paciente (Rowan, 1999). Inclusopara los clnicos con experiencia que confrecuencia son capaces de hacer diagnsti-cos seguros sin contar con pruebas laborato-

riales, entre ellas el hemograma, el uso ade-cuado del mismo le proporciona una dimen-sin aadida en la prctica clnica.

El hemograma, dentro de las pruebaslaboratoriales, es quiz una de las que msse utiliza debido a la facilidad y rapidez desu realizacin y a la excelente relacin entresu coste y la informacin que proporciona.A este respecto, slo en contadas ocasionesun hemograma completo sirve como mto-do diagnstico para una enfermedad con-

creta; con mucha ms frecuencia refleja lacondicin general del individuo o su res-puesta general frente a la enfermedad(Kidd, 1991).

Los resultados del hemograma hande interpretarse teniendo siempre en cuentael paciente (edad, raza, sexo, aptitud, trata-mientos mdicos instaurados, etc.) y losresultados de la exploracin clnica que sele ha realizado. La forma en la que la mues-tra se haya recogido y manejado, y la meto-

dologa empleada en la determinacin delos diferentes parmetros, puede, influirtambin en los resultados obtenidos y, portanto, en su interpretacin.

De todas las variables mencionadas,sin duda las que generan una mayor causade variacin son la edad y el estado emo-cional del animal (Tablas 1 y 2).

Los quidos domsticos presentanentre si tan slo diferencias hematolgicassutiles (Archer y Jefcott, 1977). La nica

diferencia evidente entre los caballos deri-

vados del rabe, denominados de sangrecaliente y los caballos de tiro y ponies, ode sangre fra, es un hematocrito ligera-mente superior en descanso en los primeros(Tabla 3).

La muestra de sangre se ha de reco-ger con el animal en descanso, antes de rea-lizar ejercicio, y bajo unas condiciones quedisminuyan al mximo la probabilidad decausarle temor o excitacin. Con ello seminimiza el efecto de la contraccin espl-

nica (elevara el valor hematocrito, elrecuento de eritrocitos y la concentracin dehemoglobina), y la liberacin de adrenalinao corticosteroides (provocan modificacio-nes en el leucograma). El temperamento delcaballo y la tcnica empleada en la extrac-cin pueden tener un efecto importantetanto en los valores eritrocitarios como leu-cocitarios del hemograma (Archer yClabby, 1965; Stewart et al., 1970).

La extraccin sangunea se ha de rea-lizar, siempre que sea posible, con el animalen ayunas, para evitar la lipemia postpandrialque puede interferir con los resultados deotras determinaciones y provocar la hemli-sis in vitro de la muestra. Se debera evitarrecoger la muestra de sangre en las tres horasinmediatas a la administracin de una comi-da rica en concentrados o una racin de heno,puesto que en este intervalo se produce unincremento importante en el valor hematocri-

to y tambin un incremento del 12% en laconcentracin de protenas plasmticas (Kerry Snow, 1982) debido al aumento de la pro-duccin salivar y a la desviacin de lquidosdesde la circulacin al tracto gastrointestinal(Clarke et al., 1990; 1998).

Las muestras de sangre se recogennormalmente en tubos de cristal en vaco,con la sal del cido etiln diaminotetracti-co (EDTA) como anticoagulante, que pro-longa el tiempo en el que la morfologa

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UTILIDAD DEL HEMOGRAMA EN LA CLNICA EQUINA

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Tabla I. Valores hematolgicos de referencia en potros

Tabla II. Valores hematolgicos de normalidad en potros Pura Sangrey Cuarto de Milla de ambos sexos (media 1SD)

Parmetros Nacimiento 24 horas 7 das +

Recuento de eritrocitos (x1012/L) 9,0-13,0 8,0-11,0 7,5-10,5Concentracin de hemoglobina (g/L) 120-180 130-155 115-175Valor hematocrito (L/L / %) 0,40-0,52 0,34-0,46 31-40Volumen Corpuscular Medio (fl) -- 37-49 --Concentracin Corpuscular Media

de Recuento total de leucocitos (x109/L) 5,5-11,5 -- 7,0-12,0

Recuento diferencial de leucocitosLinfocitos (x109/L) 1,8-3,0 1,8-3,0 2,0-4,0Monocitos (x109/L) -- 0,2 --Neutrfilos (x109/L) 3,5-10,0 3,0-9,6 7,0-10,0Eosinfilos (x109/L) -- 0,0-0,1 --Basfilos (x109/L) -- 0,1 --

Recuento de plaquetas (x109/L) 100-250 125-300 100-400

Datos obtenidos de Knottenbelt, D. C. ; Holdstock, N. y Madigan, J. E. (2004).

Parmetros 1er dia 2-7 dias 8-14 das 21-30 das 1-3 meses

(promedio 5) (promedio 9) (promedio 28) (promedio 51)

n=34 n=16 n=15 n=8 n=14

Recuento de eritrocitos (x106/L) 10,51,4 9,50,8 9,00,8 11,21,3 11,91,3

Concentracin de hemoglobina (g/dL) 14,21,3 12,70,9 11,81,2 13,11,1 13,41,6

Valor hematocrito (%) 41,73,6 37,12,8 34,93,7 37,83,3 38,34,1

VCM (fl) 40,13,8 39,22,8 39,12,2 34,20,4 32,41,9

CCMH (%) 9.6023.372 9.3002.346 9,4832.196 9.6881.940 10.8932.977

Recuento total de leucocitos /l

Recuento diferencial de leucocitos

Linfocitos 2.192891 2.420739 2.633933 3.823863 5.0861.419

Monocitos 414373 308172 302124 266192 348175

Neutrfilos 6.8242.757 6.4482.128 6.3381.849 5.5011.346 5.3152.437

Eosinfilos 0 3034 2138 4853 11588

Basfilos 1478 4144 2950 1129 122

Datos obtenidos de Feldman, B. F.; Zinki, J. G. y Jain, N. C. (2000).

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celular se mantiene intacta. Dado que elEDTA puede causar pseudotrombocitopenia(Hinchcliff et al., 1993) se puede recogertambin un tubo adicional en citrato sdicopara asegurar la fiabilidad del recuento pla-quetario. El anlisis debe realizarse tanpronto como sea posible tras la recogida,puesto que los componentes celulares de la

sangre sufren cambios degenerativos a laspocas horas. Si el examen no puede realizar-se rpidamente es mejor hacer una extensinsangunea y adjuntarla al tubo de sangrepara asegurar, al menos, que los cambiosque se obervan en la extensin no son varia-ciones provocadas por el almacenaje.

El hemograma comprende la cuanti-ficacin de los componentes sanguneos, ascomo la observacin de las alteraciones ensu composicin o morfologa. En su estudio

se incluye el recuento de eritrocitos, el valorhematocrito, la concentracin de la hemo-globina, el volumen corpuscular medio(VCM), la concentracin corpuscular mediade hemoglobina (CCMH), el recuento totaly diferencial de leucocitos, el recuento deplaquetas y el estudio de la morfologa celu-lar en las tres lneas.

Los recuentos celulares de eritroci-tos, leucocitos y plaquetas se pueden reali-zar de forma manual con cmara hemocito-mtrica de Neubauer y distintos diluyenteso bien de forma automatizada mediantecontadores celulares (vase a continuacin)que han aumentado la fiabilidad de losresultados obtenidos y disminuido el tiempoempleado en el anlisis. El nmero de pla-quetas en el caballo es relativamente bajo,comparado con el de otras especies (Fig. 1).

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Tabla III. Rangos hematolgicos de normalidad para el caballo

Parmetros Razas de Sangre Caliente Razas de Sangre Fra

(Basado en 147 caballos (Recogido de la literatura)

clnicamente normales)

Recuento de eritrocitos (x106/L) 6,8-12,9 5,5-9,5

Concentracin de hemoglobina (g/dL) 11,0-19,0 8,0-14,0

Valor hematocrito (%) 32,0-53,0 24-44

VCM (fl) 37,0-58,5 --CCMH (%) 31,0-38,6 --

Recuento total de leucocitos/l 5.400-14.300 6.000-12.000

Recuento diferencial de leucocitos

Linfocitos 15.000-7.700 --

Monocitos 0-1.000 --

Neutrfilos 2.260-8.580 --

Eosinfilos 0-1.000 --

Basfilos 0-290 ---

Datos obtenidos de Feldman, B. F.; Zinkl, J. G. y Jain, N. C. (2000).

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El recuento manual en cmara llevaasociado un error que puede oscilar entre el10-25%, segn la serie celular. Con la utili-zacin de los mtodos electrnicos losrecuentos pueden verse sometidos a gran-des errores sobre todo si no se realiza uncontrol diario y una calibracin peridicadel analizador.

VALOR HEMATOCRITO

Este parmetro es especialmentetil en el caballo puesto que permite valo-rar y controlar el estado de hidratacin deun animal con sntomas de clico, procesoque es frecuente en esta especie. El valorhematocrito se define como el volumenque ocupan los eritrocitos contenidos en100 ml de sangre (expresado en porcenta-

jes). Se obtiene al centrifugar la sangre conanticoagulante en un capilar de microhe-

matocrito para conseguir la separacin desta en sus tres componentes principales.La sangre se ha de centrifugar aproxima-damente entre 12.000-15.000 rpm durante5. En la parte distal del tubo se acumulanlos glbulos rojos, separados del plasmapor una capa delgada blanco-griscea queincluye los leucocitos y las plaquetas. Enla parte superior la apariencia macroscpi-ca del plasma, permite obtener informa-cin adicional al poder detectar si existe

ictericia, hemlisis o lipemia. ste es el

mtodo considerado goal standard paraesta determinacin.

El valor hematocrito es el parmetroms fiable del hemograma al estar sujeto amenor error tcnico que el recuento eritro-citario y la concentracin de hemoglobina.Sin embargo, es un parmetro muy pocoestable en el animal, especialmente en razasequinas muy excitables. La contraccinesplnica, cuando se produce, hace que encuestin de minutos entre en masa en el

torrente circulatorio un gran reservorio deeritrocitos que normalmente estn secues-trados en este rgano (pueden producirseincrementos superiores al 15%).

Los contadores hematolgicos elec-trnicos dan un valor hematocrito al que sele denomina packed cell volumen (PCV),que se calcula matemticamente a partir delnmero de eritrocitos que el aparato detectay de su tamao (VCM).

CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA

La hemoglobina se determina espec-trofotomtricamente mediante el mtodo dela cianometahemoglobina. Los contadoreshematolgicos actualmente disponibles enel mercado tambin utilizan este mtodo.

La hemoglobina ocupa aproximada-mente un tercio del volumen eritrocitario;por lo tanto, en la mayor parte de las mues-

tras sanguneas, el valor que se obtengadividiendo el hematocrito por tres se apro-ximar al contenido de hemoglobina en elanimal.

Cuando las muestras presenten hem-lisis, lipemia o un alto nmero de cuerpos deHeinz, hay que tener cuidado en la interpre-tacin del parmetro, puesto que en estassituaciones varan las propiedades pticas dela sangre y las lecturas que se realizan de lahemoglobina no son fiables.

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Fgura 1. Plaquetas 100X, Diff-Quick.

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VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO

Y CONCENTRACIN MEDIADE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR

El VCM da idea del tamao medio delos eritrocitos. Los equinos tienen un VCMde 44-54 fL. LA CMHC expresa la relacinentre el peso de la hemoglobina y el volumende los eritrocitos y es un parmetro muysemejante en todas las especies domsticas.Los nuevos contadores hematolgicos derayo lser miden el VCM automticamente,

y el valor de la CMHC lo miden directamen-te del anlisis clula a clula, aunque tam-bin se puede calcular matemticamente:

VCM (fl) = PCV% : n. eritrocitos x106 /l X 10

CMHC (g/dl) = Hb (g/dl): PCV% x 100

Estos parmetros, que principalmenteen pequeos animales ayudan a valorar la res-puesta medular frente a las anemia, son menos

tiles en la especie equina puesto que, a dife-rencia de los primeros, en el caballo no se pro-duce la liberacin de eritrocitos inmaduros ynucleados en sangre ante una anemia. ElVCM y la CCMH se consideran indicadorespoco sensibles de regeneracin perifrica,puesto que se requiere de un gran nmero deeritrocitos macrocticos e hipocrmicos paradetectar modificaciones en sus valores. ElVCM en un caballo anmico podra aumentaralgo, antes de que el valor hematocrito se

incremente (Weiser et al., 1983). Este cambio,de pequea magnitud, se demuestra conmayor claridad cuando se utilizan analizado-res automticos que producen eritrogramasdonde se muestra la distribucin del tamaode los eritrocitos (Brown and Darien, 1989).

FROTIS SANGUNEO

La evaluacin morfolgica celularen la extensin de sangre es una parte

importante del hemograma que sirve para

identificar anormalidades no documentadasen los valores cuantitativos obtenidos. Lalectura de la extensin de sangre se ha dehacer de forma sistematizada para evitarpasar por alto algn detalle importante.

A pocos aumentos, utilizando elobjetivo de x10 se observan los bordes de lapreparacin para buscar parsitos, clulasparasitadas, grandes clulas atpicas y agre-gacin plaquetar o leucocitaria. En estazona de la extensin las cllulas suelen estar

deformadas o incluso rotas.La zona adecuada para realizar el

recuento diferencial es aqulla en la que loseritrocitos estn muy cercanos, tocndosepero sin llegar a superponerse. En el cuerpode la preparacin las clulas tienden a amon-tonarse, siendo difcil apreciar los detalles.

Con el objetivo de x40 se puedeobtener una impresin del recuento de leu-cocitos (bajo, normal o alto) y podramosrealizar el recuento diferencial leucocita-rio, aunque ciertas clulas se deben identi-ficar con el objetivo de inmersin. Final-mente, con este ltimo objetivo se lleva acabo el diferencial leucocitario, se examinala morfologa celular y se realiza, si esnecesario, una estimacin del nmero deplaquetas.

Serie eritrocitaria

Los eritrocitos del caballo tienenforma discoide bicncava, y un tamao de5-6 m de dimetro. De forma fisiolgicase observa la presencia de rouleaux o pilasde moneda, hileras de eritrocitos super-puestos los unos a los otros (Fig. 2), lo quegenera que la sangre de esta especie sedi-mente de forma rpida y que los eritrocitosse separen ms rpidamente del plasma enlas muestras anticoaguladas, que en otrasespecies.

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Entre los cambios morfolgicos quese pueden observar en los eritrocitos equi-nos (Latimer y Andreasen, 2002; Prasse etal., 1981; Korbutiak y Schneiders, 1994)destacamos los siguientes:

Hipocromia. Son eritrocitos con unazona aumentada de palidez central,indicativos de una deficiencia dehierro. En el caballo, la prdida cr-

nica de sangre a travs del tractogastrointestinal, producida por para-sitacin, es probablemente la causams frecuente de la deficiencia enhierro.

Anisocitosis. Indica la presencia deeritrocitos de diferentes tamaos.Tiene poca importancia para el clni-co porque tan slo informa de laexistencia de algn cambio morfol-gico que debe ser detectado.

Policromasia. No se observa en losfrotis sanguneos de caballo puestoque, como se ha mencionado ante-riormente, los quidos no liberan deforma temprana eritrocitos inmadu-ros de la mdula ante una situacinde anemia. Indica la presencia deeritrocitos jvenes que han sidoliberados de forma temprana y quese tien de tonalidad ms azulada alas clulas maduras por la presencia

de organelas como ribosomas y

mitocondrias. Esquistocitos. Son fragmentos de eri-

trocitos que se producen por desgarrode stos, debido a un trauma intra-vascular. Aparecen en animales conneoplasias muy vascularizadas(hemangiosarcoma), con coagula-cin intravascular diseminada o bienen las deficiencias por hierro.

Acantocitos. Son eritrocitos espicu-lados que presentan una serie de pro-

yecciones de superficie distribuidasde forma no uniforme. Se producenpor alteraciones en la concentracinde fosfolpidos-colesterol a nivel dela membrana eritrocitaria.

Equinocitos (crenacin). Son eritro-citos que presentan numerosas pro-yecciones en la superficie, cortas,puntiagudas y uniformes en cuantoal tamao y la forma. Su formacinpuede ser artefactual o estar asociadaa enfermedad renal, linfoma, picadu-ra de serpiente o producirse en res-puesta al ejercicio (Weiss et al.,1994) asociado aparentemente conalteraciones electrolticas, especial-mente hiponatremia.

Esferocitos. Son eritrocitos que setien de una tonalidad ms intensa ala normal porque tienen un rea desuperficie disminuida respecto al

volumen, como resultado de unafagocitosis parcial producida por lapresencia de anticuerpos o comple-mento en su superficie. Su presenciaen la sangre equina no se detecta confacilidad al ser los eritrocitos equi-nos ms pequeos y no tener unapalidez central tan evidente como loseritrocitos caninos. Su presenciasugiere una anemia hemoltica inmu-nomediada, producida en el potro

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Fgura 2. Pilas de moneda 100X, Diff-Quick.

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ocasionalmente como consecuencia

de la isoeritrolisis neonatal. Cuerpos de Heinz. Son inclusiones

pequeas, eccntricas, de hemoglo-bina precipitada que protruyen lige-ramente desde el margen celular,provocadas por un dao oxidativodebido a la exposicin a agentes oxi-dantes. Se forman por la desnaturali-zacin oxidativa de la hemoglobinay su presencia hace que las clulassean menos deformables y, por tanto,

ms susceptibles a la hemlisis.Cuando se tien con una tincin vitalcomo el nuevo azul de metileno,aparecen de color azul, ms eviden-tes que en las tinciones Roma-nowsky. Se pueden forman por laingesta de plantas de la familia

Allium (cebollas y ajos silvestres),de hojas secas de arce (Acerrubrum), o como consecuencia de laadministracin de fenotiacina o azulde metileno (Carlson, 2002; Boyer etal., 2002).

Eccentrocitos. Son eritrocitos quetienen una zona del citoplasma claray la restante ocupada por Hb con-densada. Son tambin indicativos deuna exposicin a agentes oxidantes yse cree que se forman por alteracio-nes de la membrana eritrocitaria(Stockham et al., 1994).

Aglutinacin. Los eritrocitos apare-cen agregados de forma irregular,como racimos de uva, indicativo deanemia hemoltica inmunomediada(AHIM), que puede estar inducidapor la administracin de frmacos,causada por infecciones por Clostri-dium o bien ser idiopticas. Esimportante distinguir esta alteracinen la que los eritrocitos se agregande forma desorganizada, de las pilas

de moneda, caractersticas de la san-

gre de esta especie. Para ello se mez-cla una parte de sangre con 4-5 par-tes de solucin salina, que desharlas pilas, pero no la aglutinacin.

Cuerpos de Howell-Jolly. Son rema-nentes nucleares, pequeos, redon-dos y de color prpura. Un incre-mento de su concentracin se produ-ce en los casos de anemias regenera-tivas, esplenectoma y supresin dela funcin esplnica.

Inclusiones. Babesia caballi, Theile-ria equi yEhrlichia spp.

Serie leucocitaria

La morfologa de los leucocitos equi-nos es similar en muchos aspectos a la deotras especies. Las membranas nucleares delos neutrfilos son ms irregulares que lasde otras especies, dndole a estos ncleosuna apariencia multilobulada que no debeconfundirse con hipersegmentacin. Losmonocitos son similares a los de otras espe-cies. Aparecen tanto linfocitos pequeoscomo de tamao moderado. Los linfocitosson clulas de vida larga (de semanas aaos) que recirculan entre los tejidos linfoi-des y la sangre. El eosinfilo es caractersti-co, debido a sus mltiples y grandes grnu-los de color rosa-anaranjado. Los basfilosse reconocen con facilidad por sus grnulos

mltiples de color prpura (Figs. 3 a 7).

Cambios txicos. Los PMNs txicospresentan cambios morfolgicoscausados normalmente por infeccio-nes bacterianas. Entre estos cambiosest la granulacin txica. Su pre-sencia en el caballo sugiere infeccio-nes por bacterias gram negativas oanomalas intestinales que generanuna absorcin alta de endotoxinas.

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Hipersegmentacin. Es el resultadode un tiempo de trnsito aumentadode los neutrfilos en sangre; lamayora de veces por administracinde corticoides o su liberacin end-gena. El ncleo del PMN presenta

cinco ms lbulos unidos por fila-mentos finos.

Linfocitos reactivos. Presentan unacantidad aumentada de citoplasmaazul oscuro y, en ocasiones, unazona perinuclear clara. Se producencuando hay estimulacin antignica.

En ocasiones se pueden observar en

las extensiones de sangre mrulas de Ehrli-chia ewengi, que aparecen en PMNs y enocasiones en los eosinfilos; o bienE. risticii,que se presenta en monocitos y linfocitos.Aparecen como cuerpos de inclusin pleo-mrficos de color azul grisceo a azul oscuro.

Interpretacin leucocitaria

Durante el primer ao de vida elrecuento total de leucocitos no cambia de

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Fgura 3. Linfocito 100X, Diff-Quick.

Fgura 4. Monocito 100X, Diff-Quick.

Fgura 5. Polimorfonuclear neutrfilo 100X, Diff-

Quick.

Fgura 6. Eosinfilo 100X, Diff-Quick.

Fgura 7. Basfilo 100X, Diff-Quick.

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forma significativa, pero si lo hacen los

diferentes tipos leucocitarios. Amedida queel potro madura, el recuento de neutrfilostiende a disminuir y el de linfocitos y eosi-nfilos a aumentar (alcanza la meseta a losseis meses). Desde los ocho meses hastauno o dos aos, la relacin N:L es de 1:1;luego el nmero de linfocitos disminuyelentamente y la ratio N:L aumenta gradual-mente hasta alcanzar 2:1 en caballos demayor edad.

En el caballo se pueden observar tres

respuestas leucocitarias:

Leucocitosis fisiolgica, bastante fre-cuente en caballos de menos de dosaos. En esta situacin se incrementael nmero de PMNs maduros y/o lin-focitos (Rossdale et al., 1982). Seproduce por la liberacin de adrena-lina como consecuencia del temor, laexcitacin o el ejercicio fsico, queprovocan un aumento de la presinsangunea y la frecuencia cardaca ygeneran una contraccin esplnica.La respuesta se produce en segundosy se observa sobre todo en animalesmuy nerviosos. Es transitoria, puestoque tras 20-30 de producido el est-mulo, la cifra de PMNs vuelve a lanormalidad. La de linfocitos tardaaproximadamente una hora.Otras situaciones en las que se

puede producir neutrofilia son en lasleucocitosis mediadas por corticoi-des o las generadas en procesosinflamatorios, si bien en este ltimocaso la neutrofilia es persistente yno transitoria como la de la leucoci-tosis fisiolgica.Las linfocitosis se pueden generartambin en casos de estimulacin anti-gnica crnica (enfermedades vricas)o en la insuficiencia adrenocortical.

Leucocitosis en respuesta a corticoi-

des, se caracteriza por neutrofilia(normalmente sin desviacin a laizquierda) y linfopenia, con eosino-penia. El recuento total de leucocitosno suele exceder de 20.000/l. Larespuesta est causada por la admi-nistracin de corticoides exgenos osu liberacin endgena y se produceentre las dos y cuatro horas, desapa-reciendo a las 24 horas de haberseeliminado el estmulo.

Cuando se presenta esta respuestahay que considerar tambin que elanimal puede tener un proceso infla-matorio crnico, donde hay neutrofi-lia con estrs asociado que generalinfopenia. Otras pruebas laborato-riales confirmarn o descartarn unau otra situacin.Otras causas de linfopenia, puedenser las infecciones sistmicas agudas,las enfermedades vricas agudas (her-pesvirus, influenza) o la prdida delinfocitos en las cavidades corporales.

Leucocitosis de la respuesta inflama-toria, el indicador ms sensible y espe-cfico de inflamacin en el caballo esla presencia de un nmero alto de neu-trfilos inmaduros circulantes. En unarespuesta inflamatoria se puede verleucocitosis, leucopenia o un nmeronormal de leucocitos circulantes,

dependiendo del equilibrio entre lademanda tisular y/o el secuestro indu-cido por endotoxinas y el nivel de pro-duccin de PMNs en la mdula. Si laproduccin medular excede el nivel dedemanda tisular o de secuestro se pro-duce una leucocitosis y neutrofilia. Sise genera la situacin inversa el resul-tado es una leucopenia con neutrope-nia. Si, finalmente, la demanda o elsecuestro son similar a la produccin

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de la mdula sea, el recuento de

leucocitos y neutrfilos podra sernormal.En la especie equina, la leucopenia yneutropenia se producen con fre-cuencia en problemas gastrointesti-nales en individuos adultos (salmo-nelosis, impactacin grave, estran-gulacin, etc.) y en los problemasgastrointestinales y las septicemias,normalmente por microorganismosgram negativos, en potros. En estas

situaciones se produce una demandaintensa de neutrfilos por parte delos tejidos y/o una endotoxemiagrave que genera, marginacin delos neutrfilos en los pequeosvasos.En estos casos es frecuente observarneutrfilos txicos, debido a la parti-cipacin de bacterias y sus toxinasen la patogenia de la leucopenia.Otras causas de neutropenia, acom-paada con frecuencia de linfopenia,son las enfermedades vricas agudascomo la arteritis, la infeccin porherpesvirus 1 -EHV 1- y la anemiainfecciosa equina (Duncan y Prasse,1986). La neutropenia se producetambin en la ehrlichiosis granuloc-tica (Madigan y Gribble, 1987) ydurante las primeras fases de la ehr-lichiosis monoctica.

La monocitosis se produce durantela inflamacin crnica, especialmen-te aquellas que se asocian a necrosistisular (Jain, 1986; Tyler et al.,1987).La situacin de eosinofilia se produ-ce en enfermedades de origen alrgi-co (dermatitis por Culicoides) o para-sitario (vermes pulmonares y sca-ris). Los estados intraluminales delos parsitos gastrointestinales no

suelen inducir eosinofilia (Jain,

1986); s lo hace en cambio la migra-cin larvaria, sobre todo si es masiva.

Fibringeno

El fibringeno es una protena defase aguda que suele utilizarse junto con elleucograma para valorar la inflamacin. Sudeterminacin resulta especialmente tilcuando el proceso inflamatorio no se acom-paa de cambios en el leucograma. No obs-

tante, no todos los procesos inflamatorioscursan con aumento de fibringeno, por loque un valor normal de dicho parmetro nopermite descartar la inflamacin. El interva-lo de referencia en quidos va de 100-400mg/dl. Su concentracin plasmtica empie-za a aumentar a las 48 horas del inicio de lainflamacin y alcanza un pico mximo (quepuede exceder los 1.000 mg/dl) entre loscinco y siete das.

Aportacionesde los nuevos analizadores

La necesidad de producir resultadosfiables, que a su vez sean efectivos en tiem-po y coste, ha impulsado el desarrollo desistemas hematolgicos automatizados,puesto que el recuento manual tiene pocaprecisin (ICSH, 1994). Los nuevos anali-zadores hematolgicos tienen una alta

reproductividad y exactitud respecto a losrecuentos manuales puesto que evalanmiles de clulas de cada muestra.

En 1956, durante la ConferenciaAnual Electrnica de Chicago, USA, se pre-sent un sistema de recuento basado en unamedida de resistencia o conductividad(impedancia). Esta tecnologa utiliza el prin-cipio de que las clulas son malas conducto-ras elctricas. En estos instrumentos la san-gre se diluye en un medio elctricamente

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conductor y se la fuerza a pasar a travs de

un pequeo orificio entre dos electrodos.Las clulas desplazan una pequea cantidadde lquido conductor e incrementan la resis-tencia elctrica causando un cambio depotencial entre los electrodos, con la consi-guiente produccin de un pulso, en donde laamplitud es proporcional al tamao de laclula y la cantidad de impulsos, al nmerode clulas.

Los eritrocitos y plaquetas se sepa-ran basndose en el tamao y los leucocitos

se determinan tras lisar los eritrocitos conunas gotas de saponina, dejando los ncleoscelulares libres (que es lo que realmente secuenta). Estos analizadores permiten dife-renciar dos poblaciones leucocitarias que sibien no facilitan datos fiables en las espe-cies canina y felina respecto al diferencialleucocitario (Pastor et al., 1999a, 1999b), slo hacen en el caso de la especie equina(Pastor et al., 1992).

La anchura de distribucin del histo-grama de hemates (RDW) informa sobre elgrado de anisocitosis eritrocitaria presenteen la muestra. En veterinaria no se disponede suficientes datos publicados para facili-tar la interpretacin de la RDW; sin embar-go, s se ha confirmado ste como un par-metro til para evaluar anemias por defi-ciencia en hierro muy poco frecuente enlos quidos, eritropoyesis activa y, enmuestras almacenadas, casos en los cuales

se produce un aumento de la anisocitosis(Weiser, 1982; Tvedten, 1993).El histograma de la concentracin de

hemoglobina y el ancho de distribucin delmismo (HDW) proporcionan informacinsobre la anisocroma de la muestra. Sinembargo, su utilidad e interpretacin enmedicina veterinaria debe evaluarse todava,debido a que slo son capaces de determi-narla los analizadores de rayo lser. A prin-cipios de la dcada de los 80 se desarroll el

mtodo de recuento denominado anlisis

cuantitativo del buffy-coat. Este sistema sebasa en que la diferente densidad de cadagrupo de clulas sanguneas hace que secoloquen en bandas diferenciadas, cuando lasangre se coloca en un tubo de hematocritoy se somete a centrifugacin. La anchura decada banda refleja el nmero de clulas pre-sentes en cada poblacin.

La citometra de flujo es el ltimoavance en la tecnologa de analizadoreshematolgicos. Dentro de ellos, los que uti-

lizan doble ngulo de luz lser son los msnovedosos. En este sistema, las clulaspasan a travs de un haz de luz lser que esabsorbido y dispersado por la clula. Lasinterrupciones en el haz de luz se utilizanpara determinar el recuento celular, mien-tras que los cambios en la dispersin de laluz se utilizan para determinar el tamaocelular y su complejidad interna o densidad.

Los modernos analizadores de rayolser con tinciones de peroxidasa y basofiliapermiten realizar el diferencial leucocitarioen prcticamente todas las especies doms-ticas con gran precisin y exactitud (Tved-ten y Haines, 1994; Tvedten et al., 2000)(Fig. 8).

Una aportacin novedosa y de apli-cacin prctica importante, en un futuromediato, es la informacin que proporcio-nan estos analizadores de rayo lser sobre lapresencia de reticulocitos circulantes. Como

se ha mencionado anteriormente, la mdulasea del caballo responde a la prdida desangre incrementando la eritropoyesis yproduciendo reticulocitos; sin embargo,stos no son liberados durante la homeosta-sis o las situaciones de anemia suave omoderada (Jeffcott, 1977; Fernndez yGrindem, 2000).

Hasta muy recientemente, la tincinmanual, incubando la sangre con un coloran-te vital (como el nuevo azul de metileno),

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especfico para cidos nuclicos, y el recuen-to manual de los eritrocitos que contienen el

precipitado de colorante (Deiss y Kurth,1970; Fernndez y Grindem, 2000), no per-mitan detectar reticulocitos en el caballo,incluso cuando el animal presentaba una ane-mia grave (Smith y Agar, 1976).

Por tanto, la forma, de comprobar elgrado de regeneracin eritropoytica en laespecie equina se limitaba al anlisis deltamao de los eritrocitos, es decir, de suvolumen (VCM) indicador tardo de rege-neracin, de la anchura de distribucin de

la serie roja, es decir, del grado de anisoci-tosis que muestran los eritrocitos (RDW),

de los citogramas eritrocitarios o de los his-togramas de la distribucin del volumen

parmetros todos ellos que aportan losnuevos analizadores hematolgicos (Tved-ten y Weiss, 2000).

Mediante la observacin de biopsiasde mdula sea (Lumsden et al., 1975; Eas-ley, 1985; Radin et al., 1986; Malikides etal., 2000) donde se determina la relacinmieloide:eritroide (la relacin normal es de0,5:1,5), asumiendo que el comportamiento

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Fgura 8. Ejemplo de diferencial leucocitario obtenido con el ADVIA 120 con sangre de caballo.

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mieloide es normal, se puede tambin valo-

rar el grado de respuesta eritropoytica. Unaratio < a 0,5 supone que hay un incrementoen la serie eritroide y, por tanto, una anemiaregenerativa. Otra forma de valorar la eritro-poyesis en esta especie es contar los reticulo-citos mediante preparaciones de mdula seateidas con nuevo azul de metileno (Schalm,1975). Un caballo normal tiene hasta un 3%de reticulocitos en mdula sea y su incre-mento sugiere un aumento de la eritropoye-sis (Lassen y Swardson, 1995; Schalm,

1980; Tablin y Weiss, 1985).En la actualidad, al aumentar la sensi-

bilidad de los analizadores hematolgicosautomatizados ms actuales, como el ADVIA120 que cuantifican aquellos eritrocitos quecontienen cidos nuclicos por citometra deflujo, se ha detectado la presencia de reticulo-citos en sangre de quidos con anemia grave(Weiss y Moritz, 2003).

Este analizador determina las propor-ciones de reticulocitos por la combinacin de

la aborcin de la luz y su dispersin en dos

ngulos (el bajo que mide el tamao de la

clula y el alto que mide su cantidad dehemoglobina), mediante la deteccin de lasclulas que fluorescen, tras incubarlas con uncolorante de cidos nuclicos catinico, oxa-zina 750 (Tvedten, 1993; Weiss, 2002), quetie las clulas de acuerdo a su cantidad deARN. Esto permite que el analizador informesobre los reticulocitos con baja (reticulocitosmaduros), media (reticulocitos de madurezintermedia) y alta absorbancia (reticulocitosinmaduros) (Fig. 9).

Estos mtodos automatizados identi-fican la proporcin de clulas que contienencido nuclico en > 40.000 eritrocitos (Coo-per et al., 2005), dependiendo de la densidaderitrocitaria de la muestra, en lugar de en1.000 eritrocitos como sucede en el mtodomanual. Adems, la medida directa deltamao y concentracin de hemoglobina deun gran nmero de reticulocitos, que llevana cabo estos contadores, permite analizar deforma automatizada la variacin de estos

parmetros, lo que no era posible realizar

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Fgura 9. Ejemplo de recuento de reticulocitos. Se identifican varias poblaciones segn la cantidad de gr-

nulos. EjeY = densidad celular, EjeX = tamao celular.

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con la determinacin manual de reticuloci-

tos y slo en una medida limitada en los apa-ratos que utilizan un sistema de funciona-miento de impedancia elctrica (Knoll,2000; Waters y Seal, 2001).

Cooper et al. (2005) comprobaronmediante el uso del analizador de citometrade flujo ADVIA 120 que en caballos a losque se les haba provocado una anemiagrave por sangra, se produca un incremen-to en los parmetros de reticulocitos estudia-dos por el aparato, principalmente en el

volumen corpuscular medio del reticulocito(MCVr) y en la concentracin de hemoglo-bina reticulocitaria (CHr). En los animales alos que se le impuso un tratamiento con eri-tropoyetina se comprob el incremento delnmero de reticulocitos y la modificacin delos parmetros reticulocitarios proporciona-dos por el analizador (MCVr, CHr, RDWr

anchura de distribucin de reticulocitos,HDWr anchura de distribucin del conteni-do en hemoglobina de los reticulocitos).

En conclusin, el examen laboratorialde la sangre equina proporciona una informa-cin que contribuye a reducir la lista de diag-nsticos potenciales o, en menor nmero deocasiones, a realizar un diagnstico especfi-co. La incorporacin en los laboratorios denuevos analizadores hematolgicos ha contri-buido a mejorar la precisin y exactitud de losparmetros analizados y a abrir nuevasexpectativas sobre la utilidad prctica de

otros parmetros menos conocidos.

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