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I
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS CARRERA DE
QUÍMICA Y FARMACIA
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA
OPTAR AL TÍTULO DE QUÍMICA Y FARMACIA
MODO SEMESTRAL
TÍTULO: “EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL ANTIBIÓTICO BETALACTÁMICO (AMOXICILINA) COMO CONTAMINANTE EMERGENTE DEL SUELO
USANDO Raphanus sativus y Lactuca sativa COMO BIOINDICADOR.”
AUTORES:
MUÑOZ TARIRA ANDREA JESSENIA TOMALÁ MUÑOZ ROSA FABIOLA
TUTOR: Q.F. CARLOS VALDIVIEZO ROGEL, Mgs
COTUTOR: Q.F MICHAEL RENDÓN, Mgs
GUAYAQUIL- ECUADOR
CICLO I 2019-2020
AÑO: 2019
II
III
IV
IV
V
VI
VII
VIII
IX
X
XI
XII
DEDICATORIA
El presente trabajo de investigación se lo dedico principalmente a Dios, por
haberme permitido llegar a este esta etapa de mi vida que es uno de los anhelos
más deseados, manteniéndome a lo largo de este tiempo con salud y Fe.
A mi familia, por su comprensión y confianza en todos estos años, gracias a
ustedes he logrado llegar hasta aquí.́
A todas las personas que me han apoyado y han hecho que el trabajo se
realice con éxito en especial a aquellos que estuvieron dispuestos a ayudarnos
y compartir sus conocimientos.
XIII
Rosa Tomalá Muñoz DEDICATORIA
El presente trabajo de investigación se lo dedico a Dios por las oportunidades
brindadas, a mi familia en especial a mis Padres por el apoyo incondicional, a
mis amigos y demás personas que estuvieron durante el desarrollo de mi carrera
profesional.
XIV
Andrea Muñoz Tarira
AGRADECIMIENTO
Agradezco a Dios por las bendiciones, por guiarme a lo largo de mi existencia,
fortaleciéndome en aquellos momentos de dificultad y de debilidad.
Gracias a mi madre y mis hermanos quienes han estado desde el inicio de mi
carrea apoyándome y confiando en mí.
Agradezco al Q.F. Michael Rendón aceptando ser nuestro cotutor,
brindándonos apoyo en el transcurso de la tesis, impartiendo sus conocimientos
y tiempo.
Agradezco al Q.F. Carlos Valdivieso por aceptar ser nuestro tutor de tesis y
colaborar con la misma brindando su apoyo, conocimiento y tiempo.
XV
Rosa Tomalá Muñoz
AGRADECIMIENTO
Agradezco a Dios por las oportunidades brindadas, a mi familia en especial a
mis padres y hermano que han estado conmigo a lo largo de la carrera
apoyándome y brindándome toda la ayuda posible.
Agradezco al Q.F. Michael Rendón cotutor del presente trabajo de
investigación, por el apoyo brindado y los conocimientos impartidos.
Agradezco al Q.F. Carlos Valdivieso tutor del presente trabajo de investigación
por los conocimientos impartidos.
XVI
Andrea Muñoz Tarira
TABLA DE CONTENIDO
RESUMEN ................................................................................................................ XXI
ABSTRACT ................................................................... ¡Error! Marcador no definido.
INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 1
CAPÍTULO I: PROBLEMA ........................................................................................... 2
I.1. Planteamiento y formulación del problema ......................................................... 2
I.2. Justificación e importancia .................................................................................. 3
I.3. Hipótesis ............................................................................................................. 3
I.4. Objetivos............................................................................................................. 4
I.4.1. General .................................................................................................... 4
I.4.2. Específicos .............................................................................................. 4
I.5. Operacionalización de las variables .................................................................... 4
CAPÍTULO II: MARCO TEÓRICO ................................................................................ 5
II.1. Contaminante emergente .................................................................................. 5
II.2. Antibióticos betalactámicos ............................................................................... 5
II.3. Amoxicilina ........................................................................................................ 6
II.3.1. Mecanismo de acción de la amoxicilina ...................................................... 6
II.3.2. Cómo llegan al medio ambiente .................................................................. 7
II.3.3. Persistencia en el ambiente: ....................................................................... 8
II.3.4. Espectro de amoxicilina frente a bacterias .................................................. 9
II.4. Suelo ................................................................................................................. 9
II.4.1. Microbiota del suelo .................................................................................... 9
II.4.2. Propiedades físicas del suelo .................................................................... 10
II.4.3. Propiedades químicas del suelo ............................................................... 10
II.4.4. Nutrientes para las plantas ....................................................................... 11
II.4.5. Niveles críticos (%) de algunos macronutrientes del suelo ........................ 12
II.4.6. Biodiversidad del suelo ............................................................................. 13
II.5. Bioindicadores ................................................................................................. 13
II.5.1. Tipos de bioindicadores ............................................................................ 14
II.6. Descripción del rábano (Raphanus sativus). ................................................... 15
II.6.1. Generalidades .......................................................................................... 15
II.6.2. Origen: ...................................................................................................... 15
II.6.3. Taxonomía ................................................................................................ 16
II.6.4. Morfología ................................................................................................. 16
XVII
II.7. Descripción de la lechuga (Lactuca sativa). ..................................................... 18
II.7.1. Generalidades .......................................................................................... 18
II.7.2. Tipos de Lechuga ..................................................................................... 18
II.7.3. Taxonomía ................................................................................................ 19
II.7.4. Morfología ................................................................................................. 19
CAPÍTULO III: MATERIALESY MÉTODOS ............................................................... 23
III.1. Tipo de investigación .................................................................................... 23
III.2. Equipos, materiales y reactivos .................................................................... 23
III.2.1. Equipos .................................................................................................... 23
III.2.2. Materiales ................................................................................................ 24
III.2.3. Reactivos ................................................................................................. 24
III.3. Muestra ........................................................................................................ 24
III.4. Metodología experimental ............................................................................ 26
III.4.1. Preparación de suelo: ............................................................................ 26
III.4.2. Contaminación de suelo con amoxicilina ............................................... 26
III.4.3. Siembra de bioindicadores .................................................................... 27
III.4.4. Riego ..................................................................................................... 27
III.4.5. Monitoreo de concentración ................................................................... 28
III.4.6. Mediciones: altura y grosor .................................................................... 30
III.4.7. Análisis microbiológico .......................................................................... 30
CAPÍTULO IV: RESULTADOS Y DISCUSIONES ...................................................... 32
IV.1. Monitoreo de la concentración de amoxicilina en suelo ............................. 32
IV.2. Altura de la planta ..................................................................................... 34
IV.2.1. Raphanus sativus (rábano) ................................................................... 34
IV.2.2. Lactuca sativa (lechuga) ....................................................................... 35
IV.3. Grosor del tallo .......................................................................................... 37
IV.3.1. Raphanus sativus (rábano) ................................................................ 37
IV.3.2. Lactuca sativa (lechuga) ..................................................................... 37
IV.4. Microbiología del suelo .............................................................................. 38
IV.5. Escala de severidad .................................................................................. 40
IV.5.1. Raphanus sativus (rábano) ................................................................. 40
IV.5.2. Lactuca sativa (lechuga) ..................................................................... 41
CONCLUSIONES ....................................................................................................... 43
RECOMENDACIONES ............................................................................................... 44
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA ............................................................................... 45
GLOSARIO ................................................................................................................ 49
ANEXOS .................................................................................................................... 51
XVIII
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla I. Taxonomía de Raphanus sativus. .......................................................................... 16
Tabla II. Taxonomía de la Lactuca sativa ............................................................................ 19
Tabla III. Escala de calidad de las hojas. ............................................................................. 20
Tabla IV. Severidad de deterioro en las hojas y severidad general de deterioro en toda
la lechuga. ................................................................................................................................. 21
Tabla V. Monitoreo de concentración de amoxicilina en suelo ......................................... 32
Tabla VI. Datos de la altura de la planta de Raphanus sativus (rábano) ........................ 34
Tabla VII. Promedio de la altura de la planta ...................................................................... 34
Tabla VIII. Datos de la altura de la planta de Lactuca sativa (lechuga). ......................... 36
Tabla IX. Promedio de la altura de la planta ........................................................................ 36
Tabla X. Datos del grosor del tallo de la planta de Raphanus sativus (Rábano) .......... 37
Tabla XI. Datos del grosor del tallo la planta de Lactuca sativa (lechuga) ..................... 38
Tabla XII. Datos microbiológicos de aerobios totales ........................................................ 39
XIX
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Fórmula estructural de la amoxicilina .................................................................... 6
Figura 2. Referencias fotográficas de las escalas de calidad de marchitamiento,
deterioro y apariencia. ............................................................................................................. 22
Figura 3. Rábano Cherry Belle .............................................................................................. 25
Figura 4. Lechuga Great Lakes ............................................................................................. 25
Figura 5. Mezcla de las tierras de río y de sembrar.......................................................... 26
Figura 6. Blanco, contaminación de 500 mg y1000 mg .................................................... 27
Figura 7. Puntos de siembra .................................................................................................. 27
Figura 8. Obtención de muestra ............................................................................................ 28
Figura 9. Adición de agua destilada más agitación............................................................ 29
Figura 10. Pesado de la muestra .......................................................................................... 29
Figura 11. Primer filtrado de la muestra ............................................................................... 29
Figura 12. Segundo filtrado de la muestra .......................................................................... 29
Figura 13. Lectura en espectrofotómetro 272nm ............................................................... 29
Figura 14. Medición del grosor de la planta ........................................................................ 30
Figura 15. Medición de la altura de la planta ...................................................................... 30
Figura 16. Dilución 1:100 y 1:1000 ....................................................................................... 31
Figura 17. Dilución 1:10 .......................................................................................................... 31
Figura 18. Inoculación de placa, Aerobios totales .............................................................. 31
Figura 19. Incubación de placa, Aerobios totales............................................................... 31
Figura 20. Absorbancia vs tiempo de amoxicilina en concentración 1. .......................... 33
Figura 21.Absorbancia vs tiempo de amoxicilina en concentración 2. ........................... 33
Figura 22. Promedio semanal de la altura de la planta ..................................................... 35
Figura 23. Promedio semanal de la altura de la planta ..................................................... 36
Figura 24. Curva de datos microbiológicos del blanco, concentración 1 y
concentración 2. Lactuca sativa (lechuga) ........................................................................... 39
Figura 25. Blanco de la planta de rábano ............................................................................ 40
Figura 26. Concentración 1 de la planta de rábano ........................................................... 40
Figura 27. Concentración 2 de la planta de rábano ........................................................... 41
Figura 28. Blanco de la planta de lechuga .......................................................................... 41
Figura 29. Concentración 1 de la planta de lechuga ......................................................... 42
Figura 30. Concentración 2 de la planta de lechuga ......................................................... 42
XX
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo A. Análisis inicial de macronutrientes ...................................................................... 51
Anexo B. Espectro de absorción de la amoxicilina ............................................................ 52
Anexo C. Prueba de contraste blanco vs. concentración 1. En relación a la altura
(rábano) ...................................................................................................................................... 52
Anexo D. Prueba de contraste blanco vs. concentración 2. En relación a la altura
(rábano) ...................................................................................................................................... 52
Anexo E. Prueba de contraste blanco vs. concentración 1. En relación a la altura
(lechuga) .................................................................................................................................... 53
Anexo F. Prueba de contraste blanco vs. concentración 2. En relación a la altura
(lechuga) .................................................................................................................................... 53
Anexo G. Prueba de contraste blanco vs. concentración 1. En relación al grosor del
tallo (rábano) ............................................................................................................................. 53
Anexo H. Prueba de contraste blanco vs. concentración 2. En relación al grosor del
tallo (rábano) ............................................................................................................................. 54
Anexo I. Prueba de contraste blanco vs. concentración 1. En relación al grosor del
tallo (lechuga) ............................................................................................................................ 54
Anexo J. Prueba de contraste blanco vs. concentración 2. En relación al grosor del
tallo (lechuga) ............................................................................................................................ 54
1
INTRODUCCIÓN
Actualmente en el país no se cuenta con un sistema de manejo de desechos
de medicamentos que esté en vigencia para que la comunidad lo ponga en
práctica, razón por la cual la manera más común de desechar los medicamentos
cuando ya están en desuso es vertiéndolos en la basura común o directamente
en la tierra cuando se trata de zonas rurales. Además, este tipo de sustancia
puede alcanzar el suelo de otras formas como en los desechos biológicos de los
animales que han sido tratados con este tipo de medicamentos y también
desechos de industrias farmacéuticas.
Por otro lado, se conoce que los antibióticos betalactámicos entre ellos la
amoxicilina son muy usados en los hogares para combatir infecciones
bacterianas, su alto consumo se debe a que la venta de estos antibióticos
betalactámicos se hace de forma libre, es decir, no se requiere de una receta
médica para su obtención. Actualmente no se conoce cuál es el efecto que
pueden tener este tipo de medicamentos sobre la morfología y desarrollo de las
plantas cuando este se encuentra en el suelo en diversas concentraciones. El
presente estudio se realiza para identificar los posibles efectos que pueden tener
las plantaciones en suelos contaminados con amoxicilina.
2
CAPÍTULO I: PROBLEMA
I.1. Planteamiento y formulación del problema
Según “Los Objetivos de Desarrollo Sostenible” (ODS), específicamente el
objetivo 11 tiene como finalidad “conseguir que las ciudades y los asentamientos
humanos sean inclusivos, seguros, resilientes y sostenibles”, entre los cuales se
enmarca la contaminación actual origen de diferentes factores que viven muchas
ciudades (PNUD, 2019).
Hasta el momento en Ecuador no se cuenta con un sistema de gestión de
desechos de medicamentos en los hogares o de los metabolitos producidos en
las excretas de los animales tratados con antibióticos.
Las principales vías de contaminación con contaminantes emergentes están
relacionadas con: la excreción de fármacos o sus metabolitos en orina y heces,
con la eliminación inadecuada o insuficiente de los medicamentos caducados o
no consumidos, con los residuos de medicamentos que se pueden depositar en
el suelo mediante excreción directa (animales) o debido a la reutilización de
residuos orgánicos, y posteriormente filtrarse a aguas superficiales y/o profundas
(INFAC, 2016).
Existe evidencia de la presencia de betalactámicos en el suelo, lugar al que
llegan a través de las heces fecales de ganado vacuno que han sido medicados
para el tratamiento de infecciones (Galego, 2017).
Los residuos que generan las industrias encargadas de la elaboración de
productos farmacéuticos agrícolas y ganaderas generan contaminación
emergente que pueden ser inadvertidos ante la sociedad, ya que no se conoce
los criterios de calidad ambiental. Esto puede llegar a significar gran
preocupación en el campo de la ciencia (Gil, Soto, Usma, & Gutiérrez, 2012).
3
I.2. Justificación e importancia
Los antibióticos betalactámicos son los de mayor consumo animal (abarcando
un 70 %) y humano, donde ocupa el tercer lugar de todos los fármacos utilizados
(Tejada, Quiñonez, & Peña, 2014). Por lo cual se necesita infamación que
indique cuales son los efectos que pueden manifestar en el suelo.
Según el Codex Alimentarius, los LMR referente a ciertos órganos y tejidos
son: 50 ug / kg (hígado, riñón, grasa y músculo) y 4 ug / kg en leche (Alimentarius,
2015). En la revisión bibliográfica no se encontró evidencia científica sobre los
límites máximos residuales (LMR) de antibióticos en suelo.
En la revisión bibliográfica no se ha podido encontrar documento científico que
indique un valor de degradación sobre antibióticos betalactámicos (amoxicilina)
en suelo. Un estudio realizado en la ciudad de Cartagena manifiesta que “La
degradación de amoxicilina por efecto fotolítico no alcanza más del 5.4 %”
(Escorcia & Florez, 2013).
La ingesta de antibióticos no solo puede representar un problema de salud
pública por su uso inadecuado, sino también puede presentar un problema
ambiental; pues por falta de conocimiento o una mala gestión de desechos de
estos llegan a ser parte de la contaminación en aguas y suelos.
I.3. Hipótesis
El antibiótico betalactámico (amoxicilina) no tiene un efecto contaminante
sobre el suelo reflejado en agentes indicadores Raphanus sativus y Lactuca
sativa.
4
I.4. Objetivos
I.4.1. General
Evaluar el efecto del antibiótico betalactámico (Amoxicilina) como
contaminante emergente del suelo usando Raphanus sativus y Lactuca sativa
como bioindicadores.
I.4.2. Específicos
Diseñar el esquema de trabajo para medir el efecto del betalactámico
sobre los bioindicadores Raphanus sativus y Lactuca sativa.
Identificar los efectos morfológicos en los bioindicadores mediante la
medición de los parámetros: color de hoja, altura de la planta, grosor del tallo.
Monitorear el grado de degradación del antibiótico betalactámico en el
suelo durante el tiempo de estudio.
Identificar diferencias significativas entre los resultados de los
bioindicadores.
I.5. Operacionalización de las variables
TIPO VARIABLES CONCEPTUALIZACIÓN INDICADOR
Dependiente
Características
Morfológicas
de las plantas
Tallo: Grosor
Planta: Altura
Hoja: Color
-cm
-cm
-Escala de
severidad.
Independiente
Antibiótico
Betalactámico
Concentración
Partes por millón.
5
CAPÍTULO II: MARCO TEÓRICO
II.1. Contaminante emergente
Se entiende por contaminante emergente una cadena de productos, poco
recientes y de mayor consumo debido a su uso incesante, cuya estructura o
interacciones que causan con otros productos o compuestos, provocan
alteraciones al ecosistema y posteriormente a la salud del hombre, que no se
había tomado importancia hasta la actualidad (Fernández, Consumer, 2017).
El contaminante emergente que presenta mayor interés son los
medicamentos, su importancia radica en su uso para el bienestar del ser vivo,
ignorando su efecto en el ecosistema. El descartar de forma incorrecta las
sustancias medicinales o eliminación por medio de los seres vivos (heces u
orina), llegan de distintas maneras a suelos y aguas (INFAC, 2016).
II.2. Antibióticos betalactámicos
Los antibióticos son medicamentos de distintos tipos de organismos (hongos,
bacterias, especies vegetales, insectos) que combaten, impiden o mata el
crecimiento de algunos microorganismos. El origen de estos medicamentos se
da gracias al científico Fleming por su descubrimiento hacia la penicilina en 1929;
la cual fue creada por el hongo Penicillium notatum, y posteriormente llegan
demás fármacos para combatir infecciones provocadas por distintos
microorganismos.
La función de los betalactámicos es privar la síntesis de la pared bacteriana,
la cual está estructurada por peptidoglucanos. Poder para controlar el desarrollo
o cesar la producción de organismos, combatiendo infecciones (Chicaiza, 2018).
Los medicamentos considerados en tener mayor interés debido a sus efectos
para el ecosistema son los antibióticos betalactámicos, caracterizados por su
6
elevada fabricación y consumo en la parte clínica, siendo preocupante por su
presencia en agua reflejando resistencia a los antimicrobianos; manifestándolos
como uno de los contaminantes emergentes (Tejada, Quiñonez, & Peña, 2014).
Se estima un porcentaje alrededor del 30-80 de que los antibióticos pueden
llegar al suelo y aguas mediante eliminación por micción y defecación de
animales (Galego, 2017).
II.3. Amoxicilina
Es un antibiótico betalactámico, este es un derivado de la penicilina. Actúa
contra un amplio espectro de bacterias, tanto Gram positivos como Gram-
negativos. Denominación de la IUPAC: (2S, 5R, 6R)-6-[[(2R)-2-amino-2-
(4hydroxyphenyl)acetyl]amino]-3,3-dimethyl-7-oxo-4-thia-1-
azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid (Chavez, 2014).
II.3.1. Mecanismo de acción de la amoxicilina
La penicilina en su constitución molecular son la fusión de los anillos
betalactámico y tiazolidínico dando origen al ácido 6-aminopenicilánico, con una
cadena lateral en la posición 6 del anillo, una variación en esta cadena es lo que
Figura 1. Fórmula estructural de la amoxicilina Fuente: Bacsica (2019)
7
forma las diversas familias. Estos antibióticos son muy potentes mostrando
amplio espectro bactericida y de baja toxicidad (Cubas & Asmat, 2016).
Entre las diversas familias se encuentra la amoxicilina, la misma que está
caracterizada por presentar amplio espectro de acción y eficacia al ser
combinadas con inhibidores de las betalactamasas. El mecanismo de acción de
las penicilinas se basa en la inhibición de la última etapa de las síntesis del
péptido glucano, este péptido es quien da la rigidez, estabilidad y forma a la
membrana celular de muchas bacterias (Cubas & Asmat, 2016).
Las bacterias a lo largo del tiempo han logrado desarrollar mecanismos de
resistencia a los antibióticos, entre los cuales están incluidas la familia de las
penicilinas, logran esta resistencia, mediante la ruptura del anillo betalactámico
por la acción de enzimas betalactamasas de las bacterias, también lo pueden
lograr mediante la síntesis de nuevas proteínas ligadoras de penicilinas (PBPs,
por las siglas en inglés de Penicillin Binding Proteins), con menor afinidad por
estas últimas (Cruz & Sanchez, 2009).
II.3.2. Cómo llegan al medio ambiente
Los antibióticos logran alcanzar el medio ambiente por varias vías entre ellas
las aguas residuales, esto es debido al uso doméstico y terapéutico que se le
da a estos antibióticos, residuos de plantas de tratamiento, de efluentes
hospitalarios, de actividades agrícolas y ganaderas, y de tanques sépticos, entre
otros, la cantidad de residuos generados que irán directo al medio ambiente
dependerá de la frecuencia de uso y la dosificación de los mismos
(FundacionMapfre, 2012).
Estudios realizados en España muestran resultados asociados a la densidad
de población y el consumo (frecuencia y cantidad), y el sistema de tratamiento
de las aguas residuales. Así se pudo encontrar diferencias entre las
concentraciones y frecuencias halladas de algunos antimicrobianos en lodos,
8
como, por ejemplo: los macrólidos (32-195 μg / kg), las fluoroquinolonas (40-886
μg / kg) y las sulfonamidas (0-31 μg / kg). Se ha encontrado en suelos hasta 500
μg / kg de acumulación, lo cual sería una cantidad significativa en referencia a
existencia de estos, por su parte las tetraciclinas, han llegado a alcanzar de 86 -
118 mg tetraciclina / kg y 4,6-7,3 mg clortetraciclina / kg (FundacionMapfre,
2012).
II.3.3. Persistencia en el ambiente
Los antibióticos pueden encontrarse frecuentemente diseminados en el
ambiente, son considerados como contaminantes emergentes ya que no existe
un ente regulador que indique las cantidades máximas de estos compuestos en
el ambiente. Existe relativamente poca información en cuanto a su presencia,
impacto y tratamiento (Escorcia & Florez, 2013).
La persistencia de amoxicilina en el ambiente es alta, esto se demostró
mediante un estudio realizado en Cartagena, en el cual se usó 50 ppm de
amoxicilina para la degradación mediante fotólisis, de los cuales solo es 5,4 %
fue degradado, este se considera un porcentaje bastante bajo para en la taza de
degradación, debido a los resultados del estudio llegaron a la conclusión de que
la fotólisis por sí sola no es capaz de degradar a la amoxicilina, lo que resultaría
en la alta persistencia de amoxicilina en el ambiente a condiciones normales
(Escorcia & Florez, 2013).
Por otro lado, en el mismo estudio se demostró que se puede alcanzar hasta
el 45,56 % de degradación de amoxicilina mediante la fotólisis solar heterogénea
usando como catalizador TiO2 y a pH ácido, ya que con este método la molécula
se hidroliza mucho más rápido y la degradación se lleva a cabo con mayor
eficacia, que en condiciones normales.
9
II.3.4. Espectro de amoxicilina frente a bacterias
La amoxicilina es parte de la familia de los Antibióticos beta-lactámicos, esta
posee amplio espectro, activo sobre cocos aerobios gram-positivos y negativos,
a excepción de cepas productoras de penicilinas o B-lactamasas, algunos
bacilos gram-positivos y espiroquetas y buen número de bacilos gram-negativos,
aerobios y anaerobios (Fisterra, 2015).
II.4. Suelo
El suelo es la capa superior de la tierra, la cual es designada en la agricultura
para el desarrollo de las raíces de las plantas, además que es el medio por el
cual las plantas se nutren, obteniendo agua y nutrientes esenciales para su
desarrollo. Por esta razón la importancia del suelo en la agricultura radica en su
aporte al desarrollo de las plantas (FAO, 2013).
La formación del suelo se debe a la descomposición de las rocas, estas se
fragmentan en pedazos más pequeños, esto puede deberse al tiempo, los
vientos, las lluvias, el hombre y la sequía. Todos estos fragmentos comienzan a
mezclarse con restos de vegetales o demás que se encuentran en el medio
ambiente, se requiere de millones de años para que se forme al menos una fina
capa de suelo (FAO, 2013).
II.4.1. Microbiota del suelo
La microbiota del suelo es muy diversa, así tenemos: especies nativas o
autóctonas, están presentes en el suelo y su número se mantiene
aproximadamente constante; especies alóctonas, no participan activamente en
las funciones bioquímicas. De acuerdo con la función tenemos: bacterias
amonificadoras, estas descomponen las sustancias orgánicas nitrogenadas y las
transforman en amonio o en sales amoniacales; bacterias nitrificadoras, oxidan
el amoníaco hasta nitrato; bacterias fijadoras de nitrógeno, toman el nitrógeno
atmosférico (N2) y lo transforman en compuestos aprovechables por los
vegetales; bacterias celulolíticas: degradan la celulosa; bacterias pectinolíticas:
10
degradan la pectina y sus derivados. El género más abundante es Arthrobacter
(UNER, 2017).
II.4.2. Propiedades físicas del suelo
II.4.2.1. Estructura
La estructura nos da información acerca de la salud del suelo, porque nos
indica la forma y los espacios en los que están ordenados las partículas que los
constituyen, por otro lado la textura nos indica los componentes por tamaño de
partículas, como la arena (mayor tamaño), el limo y la arcilla (menor tamaño), en
el suelo, otras propiedades físicas son la permeabilidad, porosidad, el color, la
profundidad y el drenaje, cada una de estas aporta para la diferenciación y
tipificación de los suelos.
II.4.3. Propiedades químicas del suelo
Las propiedades químicas se caracterizan porque no pueden apreciarse a
simple vista, para su detección o determinación se requiere la realización de
análisis, entre las propiedades químicas tenemos: La acidez, la fertilidad, los
macronutrientes entre ellos tenemos nitrógeno, fósforo, potasio, magnesio, y los
micronutrientes entre ellos hierro, magnesio, zinc, boro, cromo, entre otros, que
le dan al suelo características específicas y fertilidad para el desarrollo de las
plantas (FAO, 2013).
La materia orgánica es la descomposición de residuos animal y vegetal en el
suelo, es importante ya que aporta el carbono orgánico al suelo, este carbono
mejora las propiedades físicas del suelo, aumenta la capacidad de intercambio
catiónico, además, por acción de la materia orgánica la lixiviación de
nutrientes se inhibe y es integral a los ácidos orgánicos que disponibilizan los
minerales para las plantas y regulador del pH del suelo (FAO, 2019).
11
II.4.4. Nutrientes para las plantas
La cantidad de nutrientes juega un papel importante en el desarrollo y
crecimiento de las plantas, estos nutrientes están clasificados en
macronutrientes y micronutrientes, esta clasificación se debe al requerimiento de
estos para el desarrollo y crecimiento de las plantas. Los macronutrientes son
aquellos usados en mayor cantidad. Con respecto a los micronutrientes, estos
se encuentran en menor cantidad y la insuficiencia de estos provoca carencia,
por lo contrario, el exceso provoca toxicidad en las plantas. (FAO, 2019).
II.4.4.1. Nitrógeno
Es uno de los elementos más importantes en la nutrición de las plantas, se
encuentra en gran cantidad en la naturaleza, pero no puede ser asimilado por
las plantas directamente ya que se encuentra en la naturaleza de forma
inorgánica, por lo cual se asimila en forma catiónica de amonio NH4+ o aniónica
de nitrato NO3-, los microorganismos intervienen en el proceso, captando el
nitrógeno y fijándolo en el suelo para la transformación y asimilación (FAO,
2019).
II.4.4.2. Fósforo
El fósforo es un elemento irremplazable para la planta, ya que entre sus
funciones está su intervención en el transporte de energía en los diversos
procesos metabólicos de las plantas, se absorbe principalmente por la raíz, ya
que esta puede disolver el fosfato lábil presente en el suelo por medio de la
exudación de ácidos orgánicos (Kali, 2017).
Los niveles de fósforo en suelo son muy variables, estos dependen de
factores como las propiedades del suelo, las condiciones ambientales y también
las propiedades de las plantas, por lo cual en algunos casos se hace estudio de
la dinámica de fósforo en el tiempo a diferentes niveles de compactación de suelo
(Vásquez & Tancredi, 2019).
12
II.4.4.3. Potasio
La cantidad de potasio presente en el suelo es de mucha importancia como
fertilizante, ya que este interviene en la nutrición de la planta, que lo obtiene de
la absorción directa del suelo, entre las funciones del potasio tenemos que
activar más de 50 enzimas en la planta para los procesos metabólicos, mejora el
aprovechamiento del agua por parte de la planta, aumenta la resistencia natural
de las plantas contra enfermedades (Kali, 2017).
II.4.5. Niveles críticos (%) de algunos macronutrientes del suelo
II.4.5.1. Nitrógeno: Muy pobre de 0.00 – 0.10 %; pobre de 0.10 – 0.15 %;
mediano de 0.15 – 0.25 %; rico de 0.25 – 0.30 %; muy rico mayor a 0.30 %, el
déficit de nitrógeno puede reflejarse en el crecimiento retrasado decoloración
amarillenta de las hojas a partir de la punta (clorosis). Las hojas más bajas
pueden morir prematuramente mientras la cima de la planta permanece verde
(FAO, 2013).
II.4.5.2. Fósforo: Se encuentra en sedimentos, materia orgánica dispersa, y
es considerado como el elemento número 11 con respecto a su abundancia en
la corteza terrestre, los niveles normales de fósforo para suelos están entre 0.02-
0.09. (Fosfatos, 2019).
II.4.5.3. Potasio: Bajo menor del 0.12 %; medio de 0.12 – 0.3 %; alto, mayor
a 0.3 %; La deficiencia de potasio se muestra en crecimiento reducido o
enanismo, obscurecimiento y sequedad del borde de las hojas, (necrosis de los
bordes) frutos pequeños (FAO, 2013).
13
II.4.5.4. Materia orgánica: Bajo menor a 1.2 %; medio de 1.2 – 2.8 %; alto,
mayor a 2.8 %. La materia orgánica ayuda al aprovechamiento de los fertilizantes
en el suelo, con la disminución de la materia orgánica aumentan los procesos de
lixiviación y se presenta la reducción de liberación de fósforo en el sistema
radicular (FAO, 2013).
II.4.6. Biodiversidad del suelo
La biodiversidad se refiere a la variedad de organismos vivos que posee el
suelo, esos no están a simple vista, las raíces de las plantas también se pueden
considerar como organismos por su relación simbiótica y su interacción con otros
componentes del suelo.
Estos organismos interactúan formando un complejo sistema de actividad
biológica, aportando una serie de servicios fundamentales para la sostenibilidad
de todos los ecosistemas. Actúan como agentes primarios para la conducción
del ciclo de los nutrientes, la regulación de la dinámica de la materia orgánica del
suelo, el secuestro del carbono en el suelo y las emisiones de gases
invernaderos, modifica la estructura física del suelo y el almacenamiento de
agua, aumentando la cantidad y disponibilidad de nutrientes para la vegetación y
aumentando la salud de la planta (FAO, 2019).
II.5. Bioindicadores
A causa de muchos factores como fábricas, hábitos de consumo, medios de
transporte, entre otros; el ecosistema ha presentado varias alteraciones por lo
cual se han realizado seguimientos de las mismas y mediante este panorama se
determinaron varios bioindicadores.
14
El fin de un bioindicador (organismo) es facilitar la determinación de algún
cambio presente en el medio ambiente o polución; manifestando alteraciones
fisiológicas, fallecer o hasta mejorar su desarrollo (González, 2014).
II.5.1. Tipos de bioindicadores
Las plantas son generalmente utilizadas por varios investigadores debido a
que son de fácil obtención, bajo costo y con técnicas sencillas. Para la evaluación
de efectos en la atmósfera se utilizan: hojas de tabaco, Tradescantia
(consecuencia mutagénica); para azufre y metales pesados usan como
bioindicador la Ray grass; para la presencia de hidrocarburos el organismo a
utilizar son los líquenes, así también como para efectos de cambio climático se
prueba al pingüino rey (Fernández, Consumer, 2008).
Otros Bioindicadores de contaminación atmosférica son la zanahoria, pimienta
perejil, algodón, arroz, frutilla, lechuga y rábano siendo consideradas esta última
como un excelente bioindicador para el medio ambiente ya que es sensible a
diversos contaminantes atmosféricos especialmente con el Ozono, además
siendo muy útil por su rápida germinación y crecimiento (Anze, y otros, 2007).
Un estudio realizado en la Universidad Industrial de Santander de Colombia
indica que la OECD (Guide-lines for theTesting of Chemicals), los bioindicadores
de excelencia para la determinación de tóxicos tanto en aguas como en suelos,
son las especies de lechuga (Lactuca sativa) y cebolla (Allium cepa) (Ortiz &
Reyes, 2011).
En la facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad técnica de Ambato, se
realizó un estudio de Evaluación de los Bioindicadores de Calidad del Suelo en
Tres Zonas Altitudinales de Tungurahua, Ecuador; donde se utilizó como
bioindicador lombriz de tierra (Lumbricus terrestres); demostrando ser de
excelencia para determinar la calidad del suelo; la permanencia de los productos
del suelo es intervenida por la inoculación de lombrices. Diversas experiencias
15
de mando agrícola pueden afectar la disposición de las lombrices de tierra, la
cual destaca la relación entre lombrices y la feracidad del suelo (Yánez,
Pomboza, Valle, Villacis, & Frutos, 2018).
II.6. Descripción del rábano (Raphanus sativus).
II.6.1. Generalidades
El rábano una hortaliza cuya raíz es comestible, esta pertenece a la familia de
las brasicáceas, conocidas antiguamente como crucíferas, guardando
emparentado con las coles, la coliflor, el nabo, entre otros (FYC, 2019). A
continuación de describen los tipos de rábanos existentes:
El Daikon, o rábano blanco, chino o japonés. Este tiene forma de
zanahoria grande y posee color blanco, es de sabor es suave y ligero, usado
generalmente en la comida japonesa.
Los rabanitos, Poseen piel rosada, morada o blanca, son de forma
esférica u ovalada de carne blanca.
El rábano negro, este es cilíndrico y redondeado de carne blanca y piel
negra resulta difícil de digerir. Esta variedad de rábano es muy utilizada con fines
terapéuticos (FYC, 2019).
II.6.2. Origen:
Es originario de China, aunque son los antiguos egipcios y babilónicos los
primeros que supieron aprovechar sus virtudes, a tenor de los registros que se
conservan de la época, el médico italiano Matthaeus Platerius en el siglo XII,
escribió acerca del rábano y sus virtudes medicinales, entre sus escrituras
expresó “cuando se come rábano negro cocido es eficaz contra la tos provocada
por grandes humores”. (FYC, 2019).
16
II.6.3. Taxonomía
Tabla I. Taxonomía de Raphanus sativus.
Clasificación Taxonómica
Reino Vegetal
División Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Orden Brassicales
Familia Brassicacese
Género Raphanus
Especie sativus
Fuente: Cando (2016)
II.6.4. Morfología
Sistema radicular: Posee raíz gruesa y carnosa, tiene forma y tamaño
variable, la piel puede ser roja, rosada, blanca, pardo-oscura o manchada de
diversos colores (InfoAgro, 2019).
Tallo: pequeño de poca altura justo antes de la floración, revestido de una
roseta de hojas, al florecer la planta este se alarga y alcanza una altura de 0,50
a 1 m, tomando una coloración glauco y algo pubescente (InfoAgro, 2019).
Hojas: son basales, pecioladas, glabras o con unos pocos tricomas, de
lámina lobulada o pinnatipartida, con 1-3 pares de segmentos laterales de borde
irregularmente dentado; el segmento terminal es orbicular y más grande que los
17
laterales; hojas caulinas escasas, pequeñas, oblongas, glaucas, algo
pubescentes, menos lobuladas y dentadas que las basales (InfoAgro, 2019).
Flores: dispuestas sobre pedicelos delgados, ascendentes, en racimos
grandes y abiertos; sépalos erguidos; pétalos casi siempre blancos, a veces
rosados o amarillentos, con nervios violáceos o púrpura; 6 estambres libres;
estilo delgado con un estigma ligeramente lobulado (InfoAgro, 2019).
Fruto: silícula de 3-10 cm de longitud, esponjoso, indehiscente, con un
pico largo. Semillas globosas o casi globosas, rosadas o castaño-claras, con un
tinte amarillento; cada fruto contiene de 1 a 10 semillas incluidas en un tejido
esponjoso (InfoAgro, 2019).
Con respecto a su uso, es para consumo alimenticio, generalmente se
consume solo la raíz, esta es consumida en ensaladas cruda y en ocasiones se
puede cocinar, a menudo, hay quienes la utilizan para la elaboración de
infusiones usando la hoja. No presenta toxicidad, pero su contenido en fibra y
azufre puede provocar flatulencia (FYC, 2019).
El rábano es adaptable a todo tipo de clima, teniendo de preferencia en
ambiente cálido (20-25°C) para una buena germinación, ya que su tiempo de
madurez está relacionado con el clima pudiendo ser un mínimo de 20 días hasta
mayor de los 70 días. Así también como adaptarse a todo tipo de suelo, siendo
el óptimo uno arcilloso (Cando, 2016).
18
II.7. Descripción de la lechuga (Lactuca sativa).
II.7.1. Generalidades
El origen de la lechuga no parece estar muy claro, aunque algunos autores
afirman que procede de la India, aunque hoy día los botánicos no se ponen de
acuerdo, por existir un seguro antecesor de la lechuga, Lactuca scariola L., que
se encuentra en estado silvestre en la mayor parte de las zonas templadas.
Mallar (1978), siendo las variedades cultivadas actualmente una hibridación
entre especies distintas.
El cultivo de la lechuga se remonta a una antigüedad de 2.500 años, siendo
conocida por griegos y romanos. Las primeras lechugas de las que se tiene
referencia son las de hoja suelta, aunque las acogolladas eran conocidas en
Europa en el siglo XVI (InfoAgro, 2019).
II.7.2. Tipos de Lechuga
L. sativa L. var. Longifolia este tipo de lechuga presenta hojas alargadas,
un tallo de mayor longitud que en otras variedades y permanece protegido por el
conjunto de hojas, las que forman una cabeza coniforme por su posición erguida.
Lactuca sativa L. var. capitata (L.) Janchen este tipo de lechuga se
caracteriza por que presenta un ciclo de madurez más corto de 55-70 días,
presentan hojas aceitosas, extendidas y llanas que forma un cogollo.
Lactuca sativa L. var. crispa L. Este tipo corresponde a las Great Lakes
que presenta primero un alargamiento de las hojas y llegando a su etapa de
maduración (más de 100 días) incrementa la cantidad de hojas y su grosor;
cuando alcanza alrededor de doce hojas estas se curva y se encierran creando
una cabeza redonda. Y por último Lactuca sativa L. var. Acephala Dill. Este tipo
19
de lechuga se manifiesta por no formar envoltura de hojas, planas (Saavedra,
2017).
II.7.3. Taxonomía
Tabla II. Taxonomía de la Lactuca sativa
Clasificación Taxonómica
Reino Plantae
División Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Orden Asterales
Familia Asteraceae
Género Lactuca
Especie Lactuca sativa L
Fuente: Saavedra (2017)
II.7.4. Morfología
Pertenece a la familia, Compositae y cuyo nombre botánico es Lactuca
sativa L., es una planta anual y autógama.
Raíz: esta nunca pasa los 25 cm, es pivotante, corta y posee muchas
ramificaciones.
Hojas: estas están colocadas en roseta, desplegadas al principio, el borde
de los limbos pueden ser liso, ondulado o aserrado.
Tallo: es de forma cilíndrica y posee varias ramificaciones (InfoAgro,
2019)
20
Con respecto a su uso, esta es usada únicamente con fines alimentarios, se
consume la hoja cruda en ensaladas (InfoAgro, 2019).
II.7.5. Factores de deterioro de la lechuga
La lechuga es una hortaliza con alto metabolismo, esto significa que tiende a
eliminar existencias nutritivas y malograrse de forma acelerada. Esta hortaliza
no tiene la ventaja de que alguna estructura la proteja del medio ambiente,
presentándose a varios factores de deterioro como: facilidad de perder agua
mostrando un aspecto y textura desagrádale; debido a la recolección se pueden
dar quiebres y deformación de las hojas beneficiando a la entrada fácil de
microorganismo como hongos: Botrytis cinérea, Sclerotiniaspp. y Alternariaspp.;
y bacterias: Pseudomonasspp. y Erwiniasppa que logran disminuir la calidad de
la hortaliza presentando un color amarilloso, manchas cafés de las hojas (Quirós,
2000).
Tabla III. Escala de calidad de las hojas.
Clasificación Descripción y Ejemplos de Grado de Marchitamiento Referencias Fotográficas
5 Ninguno: Prácticamente no presenta marchitamiento; puede tener a lo sumo dos hojas con las puntas un poco hulosas
Figura 4 (A)
4 Leve: no objetable
2 hojas totalmente marchitas, o
1 hoja totalmente marchita más 2 hojas medio hulosas, o
4 hojas media hulosas.
Figura 4 (B)
3 Moderado: casi objetable
3 o 4 hojas totalmente marchitas, o
4 hojas no totalmente marchitas más 2 hojas medio hulosas.
Figura 4 (D)
2 Severo: definitivamente objetable
5 a 7 hojas totalmente marchitas, o
4 hojas excesivamente marchitas.
1 Extremo: no aceptable. 8 a 10 hojas excesivamente marchitas. Casi toda la lechuga se encuentra marchita, generalmente llegan a este estado las q no tienen repollo formado.
Fuente: Quirós (2000).
21
Tabla IV. Severidad de deterioro en las hojas y severidad general de deterioro en toda la lechuga.
Numero de Hojas Afectadas y Severidad de Deterioro
Severidad General de Deterioro
Referencias Fotográficas
Ninguna hoja con deterioro Ninguno
Desde: 1,2 o 3 hojas con deterioro muy leve, hasta 1 hoja con deterioro moderado, ó 2 hojas con deterioro leve.
Muy leve, mínimo. Figura 4 (A)
Desde: 2 hojas con deterioro leve a moderado, hasta 2 hojas con deterioro moderado, ó 3 hojas con deterioro leve, ó 3 hojas con deterioro leve a moderado.
Leve. Figura 4 (B)
Desde: 4 hojas con deterioro leve, hasta 2 hojas con deterioro severo, ó 3 hojas con deterioro moderado, ó 4 hojas con deterioro leve a moderado.
Moderado.
Desde: 4 hojas con deterioro moderado, hasta 4 hojas con deterioro moderado a severo, ó 5 hojas con deterioro moderado.
Severo. Figura 4 (E)
Desde: 4 hojas con deterioro severo, hasta 5 hojas con deterioro moderado a severo, ó 4 hojas con deterioro severo a extremo, ó 6 hojas con deterioro moderado, ó 5 hojas con deterioro severo.
Extremo. Figura 4 (F)
Fuente: Quirós (2000
22
Figura 2. Referencias fotográficas de las escalas de calidad de marchitamiento, deterioro y apariencia. Fuente: Quirós (2000).
23
CAPÍTULO III: MATERIALES Y MÉTODOS
III.1. Tipo de investigación
Investigación exploratoria: el tipo de investigación que se realizó en este
estudio fue exploratoria. Porque este tipo de investigación permite conocer el
contexto sobre un tema que es objeto de estudio, su objetivo es encontrar todas
las pruebas relacionadas con el fenómeno del que no se tiene ningún
conocimiento y aumentar la posibilidad de realizar una investigación completa.
Con este tipo de investigación o bien se obtiene la información inicial para
continuar con una investigación más rigurosa, o bien se deja planteada y
formulada una hipótesis.
Investigación experimental: es la alteración de una variable experimental o
varias al mismo tiempo, en un ambiente estrictamente vigilado por la persona
que realiza el experimento, de esta manera el investigador puede evaluar de qué
forma o por qué razón sucede algo en particular. Este tipo de investigación es
provocado, lo que permite que se modifiquen las variables en intensidad,
pudiendo evaluar las causas y consecuencias de los resultados.
III.2. Equipos, materiales y reactivos
III.2.1. Equipos
Para el monitoreo de la concentración de amoxicilina en suelo utilizó una
balanza analítica marca Mettler Toledo, modelo Al204; y un espectrofotómetro
de marca Thermo Scientific cuyo modelo es Genesys 10s UV-Vis; este
equipamiento fue proporcionado por el laboratorio de instrumental de la facultad
de Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil.
El análisis microbiológico se realizó en un laboratorio privado de la ciudad de
Guayaquil, el equipo utilizado fue: refrigeradora de marca Indurama, incubadora,
pipeta automática, esterilizador de marca MPC, autoclave perteneciente al
modelo LEQUEUX y balanza de marca Mettler Toledo.
24
III.2.2. Materiales
Los maceteros con las especies a monitorear fueron colocados en las áreas
verdes facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil. Las
características de los maceteros de plástico fueron: de 19 cm de largo, 15 cm de
alto, y 61 cm de ancho. La tierra fue adquirida en un vivero de la ciudad dos tipos
de tierra: tierra de rio y tierra de sembrar. Las semillas de rábano y lechuga fueron
adquiridas por la industria ECUAQUIMICA. El antibiótico amoxicilina, jeringas de
10 ml, 2 pliegos de papel filtro, fundas de polietileno, alcohol para la desinfección
de material, botellones de agua, flexómetro y un tubo de 1.5 cm de ancho y 10
cm de largo para la obtención de la muestra fueron adquiridos en el marcado
local.
Los materiales utilizados para monitorear la concentración de amoxicilina
fueron: espátula, vaso de precipitación de 500 ml, matraz de 100 ml, probeta de
250 ml, agitador, filtro hidrofílico de 0.45 um, cubetas de cuarzo.
Los materiales utilizados para el análisis microbiológico se usó: placa petrifilm
aerobios de la casa comercial 3M petrifilm aerobic count, agua de peptona de la
casa comercial Acumedialab, fundas para muestra de los proveedores
Expoplast, puntas azules de marca PIPETTE TIP.
III.2.3. Reactivos
Para el análisis de concentración de amoxicilina se necesitó agua destilada,
suministradas por el laboratorio de instrumental y para el análisis microbiológico
se usó agua de peptona.
III.3. Muestra
Para este estudio se utilizaron dos bioindicadores: Raphanus sativus (rábano)
y Lactuca sativa (lechuga).
25
El tipo de rábano que se utilizó fue rábano Cherry Belle (Figura 3), se
desarrolla bien en condiciones climáticas cálidas, su ciclo productivo esta dado
entre los 20 y 70 días, adaptándose a cualquier tipo de suelo, donde el tallo
puede alcanzar una altura máxima de 1.5 m. La medición del grosor del tallo es
un parámetro importante debido a que es allí donde se encuentran los
nutrimentos derivados por medio de la fotosíntesis (Cando, 2016).
La lechuga usada fue la de tipo Great Lakes (iceberg) (Figura 4), se
caracteriza por tener buena afinidad a todo tipo de suelo y a climas cálidos,
presenta un periodo de madurez hasta más de 100 días, llegando hasta ese
tiempo el tallo puede llegar hasta los 1m de altura (Saavedra, 2017).
Figura 3. Rábano Cherry Belle
Figura 4. Lechuga Great Lakes
26
III.4. Metodología experimental
III.4.1. Preparación de suelo:
Se mezclaron dos tipos de tierra (río y de sembrar) de forma uniforme, de tal
manera que sumen 5 kg en cada una de las 6 gavetas (Figura 5).
Se realizó un análisis inicial de macronutrientes para comprobar la calidad del
suelo. Los análisis fueron realizados en un laboratorio acreditado y privado
donde utilizaron las siguientes metodologías: fósforo (Standard Methods 4500-
O-C), potasio (Standard Methods 3500-K-B), materia orgánica (Norma mexicana
NMX-AA-021) y nitrógeno (AOAC 955.04) (Anexo A).
III.4.2. Contaminación de suelo con amoxicilina
Se usaron 3 gavetas por especie con un total de 6 gavetas, 2 gavetas para
blanco de cada especie y las otras 2 fueron contaminadas con cantidades
diferentes de amoxicilina: 500 mg / 5 Kg y 1000 mg / 5 Kg tanto para el rábano
como para la lechuga, ver figura 6.
Figura 5. Mezcla de las tierras de río y de sembrar.
27
III.4.3. Siembra de bioindicadores
Se realizó 3 puntos de siembra por gaveta ver figura 7.
Para el rábano se sembró 3 semillas por punto (9 semillas por gaveta) y para
la lechuga cuatro semillas por punto (12 semillas por gaveta). Se sembró tal
cantidad de semillas para obtener una mayor proporción de crecimiento.
III.4.4. Riego
El riego del suelo se realizó con agua libre de cloro, tres veces por semana.
Figura 7. Puntos de siembra
Figura 6. Blanco, contaminación de 500 y1000 mg
28
III.4.5. Monitoreo de concentración
Para el monitoreo de la concentración se eligió las dos gavetas de rábano
contaminadas con amoxicilina (concentración 1 y concentración 2).
El primer mes se realizó el monitoreo tres veces por semana y al segundo
mes se lo realizó una vez a la semana.
Para el análisis se tomó muestras de las gavetas utilizando un tubo
asegurando obtener una muestra representativa, abarcando desde la parte
superior hasta la inferior de la gaveta (Figura 8).
La muestra obtenida se colocó en una funda de polietileno y se llevó para el
respectivo análisis en el laboratorio. Se pesó en un vaso de precipitación 10 g de
la muestra (Figura 9), y se le agregó 90 ml de agua destilada, se mezclaron con
la ayuda de un agitador (Figura 10).
Figura 8.Obtención de muestra
29
Se filtró la muestra en un matraz aforado, usando un embudo y papel filtro
(Figura 11) y posteriormente se filtró con un filtro hidrofílico de 0.45 um de
diámetro de porosidad directamente en la cubeta de cuarzo (Figura 12) y por
último, se leyó en el espectrofotómetro a 272 nm (Figura 13).
Figura 10. Pesado de la muestra Figura 9. Adición de agua destilada más agitación.
Figura 11. Primer filtrado de la muestra
Figura 12. Segundo filtrado de la muestra
Figura 13. Lectura en espectrofotómetro
272nm
30
III.4.6. Mediciones: altura y grosor
Se realizó una medición por semana de la altura y grosor de las plantas, para
medir la altura se utilizó un flexómetro y se midió desde la parte inferior del tallo
hasta la hoja más larga (figura 14) y para el grosor se usó un calibrador vernier,
este se midió tomando como referencia la base del tallo (figura 15).
III.4.7. Análisis microbiológico
Se seleccionó las gavetas de lechuga para análisis microbiológico.
En el muestreo se usó un tubo (lavado y desinfectado con alcohol) para la
toma de muestra de forma uniforme (Figura 8) esta se colocó en una funda de
polietileno.
Se pesó 10 gr de la muestra y se le agregó 90 ml de agua de peptona (dilución
1:10), ver figura 16, se tomó 1 ml de la solución anterior y se depositó en un
matraz con 9ml de agua de peptona (dilución 1:100), se homogenizó, se tomó 1
ml de la solución anterior y se depositó en un matraz con 9 ml de agua de
peptona (dilucion1:1000), ver figura 17, posteriormente se cogió 1ml de la
Figura 15. Medición de la altura de la planta
Figura 14. Medición del
grosor de la planta
31
dilución 1:1000 y se inoculó en una placa petrifilm para aerobios, ver figura 18,
finalmente se lo llevó a la incubadora a una temperatura de 35 + / - 1 °C por 48
horas (Figura 19).
Figura 16. Dilución 1:100 y 1:1000
Figura 18. Inoculación de placa, aerobios totales
Figura 19. Incubación de placa, aerobios totales
Figura 17. Dilución 1:10
32
CAPÍTULO IV: RESULTADOS Y DISCUSIONES
IV.1. Monitoreo de la concentración de amoxicilina en suelo
Al no contar con un estándar de amoxicilina esta se monitoreó a partir de su
absorbancia, ya que de acuerdo a la ley de Beer la absorbancia es directamente
proporcional a la concentración. Los resultados obtenidos muestran que hasta la
tercera semana se observó la disminución en la absorbancia de amoxicilina, para
las cinco semanas restantes los niveles de absorbancia no variaron de manera
significativa, ver figura 25; estos resultados demuestran que la amoxicilina no se
degrada fácilmente en el medio ambiente. Esta baja degradabilidad puede
deberse a que al efectuar el riego de la tierra la amoxicilina viaja hacia la parte
inferior del suelo donde no es alcanzada por los factores degradantes naturales
como la luz solar y el oxígeno del ambiente; resultados concuerdan con un
estudio realizado anteriormente (Escorcia & Florez, 2013) el cual indica que, la
amoxicilina presenta alta persistencia en el medio ambiente debido a que la
intensidad de los rayos UV no tiene la suficiente energía para romper los enlaces
aromáticos del fármaco.
Tabla V. Monitoreo de concentración de amoxicilina en suelo
CONC 1: suelo contaminado con 500 mg. CONC 2: suelo contaminado con 1000 mg.
SEMANA
#6
#7
#8
ABSORBANCIAS DE LA AMOXICILINA EN SUELO
FECHA CONC. 1 CONC. 2
#1
8/5/2019 0,392 0,447
10/5/2019 0,349 0,390
#2
13/5/2019 0,120 0,153
15/5/2019 0,126 0,140
17/5/2019 0,090 0,113
#3
20/5/2019 0,106 0,093
22/5/2019 0,103 0,093
#4
27/5/2019 0,134 0,113
29/5/2019 0,126 0,113
#5
3/6/2019 0,132 0,111
5/6/2019 0,107 0,087
24/6/2019 0,133 0,130
10/6/2019 0,091 0,100
17/6/2019 0,122 0,108
33
Figura 20. Absorbancia vs tiempo de amoxicilina en concentración 1.
Figura 21.Absorbancia vs tiempo de amoxicilina en concentración 2.
34
IV.2. Altura de la planta
IV.2.1. Raphanus sativus (rábano)
A la altura final de la planta de rábano de las tres macetas, se les realizó una
prueba T para comprobar si existe diferencia significativa entre la altura de la
planta del macetero del blanco vs los maceteros contaminados. Los resultados
indicaron que de acuerdo a los datos obtenidos nuestro T de contraste es menor
al T crítico, se halló que no existe diferencia significativa entre la altura de la
planta del macetero del blanco y las muestras en los maceteros contaminados,
ver anexo C y D.
Tabla VI. Datos de la altura de la planta de Raphanus sativus (rábano)
BR: Blanco Rábano, RC1: Rábano Control 1, RC2: Rábano Control 2; R1: Rábano punto 1, R2: Rábano punto 2, R3: Rábano punto 3. *sin germinar
Tabla VII. Promedio de la altura de la planta
BR: Blanco Rábano, RC1: Rábano Control 1, RC2: Rábano Control 2
R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3
#1 8/5/2019 * * * * * * * * *
#2 17/5/2019 9,6 7,0 8,2 6,5 5,5 7,5 6,5 5,0 7,0
#3 22/5/2019 11,2 8,5 9,5 8,2 7,6 8,4 7,8 6,3 8,2
#4 27/5/2019 13,5 11,5 11,5 9,5 9,0 11,5 9,0 7,5 10,5
#5 3/6/2019 17,0 18,2 19,4 15,7 16,5 16,2 16,5 14,5 15,0
#6 10/6/2019 18,5 19,0 19,5 18,5 19,5 19,0 19,0 20,0 25,0
#7 17/6/2019 21,0 19,5 20,0 20,1 23,0 19,5 24,0 25,5 26,0
#8 24/6/2019 24,0 20,0 22,0 22,5 23,0 23,0 24,5 26,0 26,0
#9 1/7/2019 25,5 20,5 22,5 23,8 23,2 24,5 25,0 26,2 26,0
#10 8/7/2019 26,0 20,5 23,0 24,5 23,2 24,5 25,5 26,2 26,0
#11 17/7/2019 26,5 20,5 23,0 25,0 23,6 25,0 28,0 28,5 28,0
TAMAÑO DE PLANTA (cm)
SEMANA FECHA
BR RC1 RC2
SEMANA BR RC1 RC2
#1 * * *
#2 8,3 6,5 6,2
#3 9,7 8,1 7,4
#4 12,2 10,0 9,0
#5 18,2 16,1 15,3
#6 19,0 19,0 21,3
#7 20,2 20,9 25,2
#8 22,0 22,8 25,5
#9 22,8 23,8 25,7
#10 23,2 24,1 25,9
#11 23,3 24,5 28,2
35
IV.2.2. Lactuca sativa (lechuga)
A la altura final de la planta de lechuga de las tres macetas, se les realizó una
prueba T para comprobar si existe diferencia significativa entre la altura de la
planta del macetero del blanco vs los maceteros contaminados. Los resultados
indicaron que no existe diferencia significativa entre la altura de la muestra del
macetero blanco y la muestra del macetero de concentración 1, salvo la muestra
del macetero blanco y la muestra del macetero de concentración 2., ver anexo E
y F. Esto puede deberse a que la amoxicilina presenta amplio espectro
antimicrobiano sobre microorganismos gran positivas y gran negativos (ANMAT,
2015), entre ellos se encuentran encasillados microorganismos conocidos como
fitopatógenos que intervienen afectando el crecimiento y desarrollo de las
plantas, así como en el desarrollo del fruto (Ruíz & Ornelas, 2018).
Figura 22. Promedio semanal de la altura de la planta
36
Tabla VIII. Datos de la altura de la planta de Lactuca sativa (lechuga).
BL: Blanco Lechuga, LC1: Lechuga Control 1, LC2: Lechuga Control 2; L1: Lechuga punto 1, L2: Lechuga punto 2, L3: Lechuga punto 3. *sin germinar
Tabla IX. Promedio de la altura de la planta
BL: Blanco Lechuga, LC1: Lechuga Control 1, LC2: Lechuga Control 2
L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3
#1 27/5/2019 * * * * * * * * *
#2 3/6/2019 7,5 8,0 7,5 7,5 8,0 6,0 9,0 7,8 10,0
#3 10/6/2019 9,5 10,0 9,8 11,0 12,0 10,8 12,0 10,6 11,5
#4 17/6/2019 14,2 14,0 14,0 15,5 14,0 13,5 16,0 15,0 15,5
#5 24/6/2019 17,5 15,5 16,0 17,0 20,0 18,2 17,0 17,2 17,0
#6 1/7/2019 19,5 18,6 19,2 19,5 20,5 21,8 19,8 20,0 22,5
#7 8/7/2019 21,5 20,5 21,0 20,0 21,2 23,5 21,8 21,5 24,0
#8 17/7/2019 24,0 22,5 23,5 21,0 22,0 26,5 27,0 22,0 26,0
#9 23/7/2019 26,8 25,5 26,9 23,0 24,5 33,5 28,5 30,0 30,0
TAMAÑO DE PLANTA (cm)
SEMANA FECHA
BL LC1 LC2
SEMANA BL LC1 LC2
#1 0 0 0
#2 7,7 7,2 8,9
#3 9,8 11,3 11,4
#4 14,1 14,3 15,5
#5 16,3 18,4 17,1
#6 19,1 20,6 20,8
#7 21,0 21,6 22,4
#8 23,3 23,2 25,0
#9 26,4 27,0 29,5
Figura 23.Promedio semanal de la altura de la planta
37
IV.3. Grosor del tallo
IV.3.1. Raphanus sativus (rábano)
Al grosor final de la planta de rábano de las tres macetas, se les realizó una
prueba T para comprobar si existe diferencia significativa entre el grosor del tallo
de la planta del macetero del blanco vs los maceteros contaminados. Los
resultados indicaron que no existe diferencia significativa entre el grosor de las
muestras en el macetero blanco y las muestras en los maceteros contaminados.
Aceptando la hipótesis, ver anexo G y H.
Tabla X. Datos del grosor del tallo de la planta de Raphanus sativus (Rábano)
BR: Blanco Rábano, RC1: Rábano Control 1, RC2: Rábano Control 2; R1: Rábano punto 1, R2: Rábano punto 2, R3: Rábano punto 3. *sin germinar IV.3.2. Lactuca sativa (lechuga)
Al grosor final de la planta de lechuga de las tres macetas, se les realizó una
prueba T para comprobar si existe diferencia significativa entre el grosor del tallo
de la planta del macetero del blanco vs los maceteros contaminados. Los
resultados indicaron que no existe diferencia significativa entre el grosor de las
muestras en el macetero blanco y las muestras en los maceteros contaminados.
Aceptando la hipótesis, ver anexo I y J.
R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3
#1 8/5/2019 * * * * * * * * *
#2 17/5/2019 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1
#3 22/5/2019 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
#4 27/5/2019 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,1 0,2
#5 3/6/2019 0,2 0,3 0,4 0,3 0,4 0,2 0,2 0,3 0,4
#6 10/6/2019 0,3 0,5 0,4 0,3 0,6 0,3 0,3 0,4 0,4
#7 17/6/2019 0,3 0,5 0,4 0,4 0,8 0,4 0,4 0,6 0,6
#8 24/6/2019 0,5 0,5 0,5 0,5 0,8 0,4 0,4 0,6 0,8
#9 1/7/2019 0,5 0,6 0,5 0,5 0,8 0,5 0,5 0,6 0,8
#10 8/7/2019 0,5 0,7 0,7 0,7 0,8 0,5 0,7 0,8 0,8
#11 17/7/2019 0,5 0,9 1 0,8 1 0,5 0,8 0,8 0,9
GROSOR (cm) Rábano
SEMANA FECHA
BR CR1 CR2
38
Tabla XI. Datos del grosor del tallo la planta de Lactuca sativa (lechuga)
BL: Blanco Lechuga, LC1: Lechuga Control 1, LC2: Lechuga Control 2; L1: Lechuga punto 1, L2: Lechuga punto 2, L3: Lechuga punto 3. *sin germinar
IV.4. Microbiología del suelo
Se realizó un análisis semanal de aerobios totales en el suelo verificar el
espectro antimicrobiano que tiene la amoxicilina frente a colonias de estos
microorganismos. En el número de colonias de aerobios y el suelo no
contaminado los resultados no variaron entre la maceta del blanco y las macetas
contaminadas, ver figura 23. La diferencia hallada en los resultados entre
semana de análisis podría deberse a las condiciones del análisis y al tiempo que
transcurrió desde que se tomó la muestra hasta la siembra, ya que según el
manual de la FAO cuando la muestra es recolectada en lugar lejano al del
análisis se deben seguir procedimientos especiales: la temperatura sea de 2-8
°C, atmósfera controlada de 1, el contenedor de la muestra este cerrado
herméticamente para la conservación de la misma, esto explica que los
resultados microbiológicos hallados si se correspondan entre ellos y no entre
semana.
L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3
#1 27/5/2019 * * * * * * * * *
#2 3/6/2019 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1
#3 10/6/2019 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1
#4 17/6/2019 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1
#5 24/6/2019 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
#6 1/7/2019 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
#7 8/7/2019 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3
#8 17/7/2019 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,3 0,4 0,3 0,3
#9 23/7/2019 0,4 0,4 0,5 0,4 0,3 0,3 0,4 0,3 0,4
GROSOR (cm) Lechuga
SEMANA FECHA
BL LC1 LC2
39
Tabla XII. Datos microbiológicos de aerobios totales
Figura 24. Curva de datos microbiológicos del blanco, concentración 1 y concentración 2. Lactuca sativa (lechuga)
Plomo: Blanco
Naranja:
concentración 2
Azul:
Concentración 1
SEMANA FECHA CONC. 1 CONC. 2 BLANCO
#1 29/5/2019 28000 16000 45000
#2 3/6/2019 80000 60000 100000
#3 10/6/2019 25000 32000 28000
#4 17/6/2019 45000 47000 67000
#5 24/6/2019 180000 140000 200000
#6 1/7/2019 120000 80000 120000
#7 8/7/2019 180000 140000 200000
#8 17/7/2019 100000 80000 90000
#9 23/7/2019 62000 65000 80000
DATOS MICROBIOLÓGICOS (Aerobios)
40
IV.5. Escala de severidad
IV.5.1. Raphanus sativus (rábano)
No existe una escala de severidad para la plata de rábano, pero se pudo
relacionar mediante el cuadro de escala de severidad (figura 2) presentada por
Quirós, las condiciones de la planta de rábano y en qué estado de severidad se
encuentra. El blanco presenta 2 hojas hulosas y 1 hoja marchita (Figura 27). El
blanco (Figura 24) no presenta hojas defectuosas por lo tanto muestra ser una
planta totalmente sana. La gaveta de concentración 1 (Figura 25) se logra
observar una hoja con mancha y otra empezando a marchitarse, inclinándose a
un estado de severidad muy leve. Y por último la gaveta de concentración 2
(Figura 26), presenta dos hojas medio hulosas. Se demuestra que la severidad
de las hojas no presenta un estado defectuoso relacionado al antibiótico, sino
más bien debido a factores externos como los rayos solares provocando
deshidratación en la planta perdiendo su color.
Figura 26. Concentración 1 de la planta de rábano
Figura 25. Blanco de la planta de rábano
41
IV.5.2. Lactuca sativa (lechuga)
Mediante el cuadro de escala de severidad junto a las referencias fotográficas
en relación con el deterioro de las hojas (tabla II y figura 2) presentada por
Quirós, se logra evidenciar las condiciones de la planta de lechuga y en qué
estado de severidad se encuentra. El blanco presenta 2 hojas hulosas y 1 hoja
marchita (Figura 27) considerándola en escala de severidad muy leve. La gaveta
de concentración 1 (Figura 28) se logra observar 2 hojas poco hulosas
declarándola en estado de severidad muy leve y terminando con la gaveta de
concentración 2 (Figura 29) se observó que esta presento un estado de
severidad leve, observándose 1 hoja totalmente marchita y 2 hojas con puntas
hulosas. Se demuestra que el estado de las hojas no presenta un estado
defectuoso relacionado al antibiótico, sino más bien debido a factores externos
como los rayos solares provocando deshidratación en la planta, mostrando
marchitamiento de las mismas.
Figura 27. Concentración 2 de la planta de rábano
Figura 28. Blanco de la planta de lechuga
42
Figura 29. Concentración 1 de la planta de lechuga
Figura 30.Concentración 2 de la planta de lechuga
43
CONCLUSIONES
Se diseñó un esquema de trabajo para medir el efecto del betalactámico sobre
los Bioindicadores Raphanus sativus y Lactuca sativa, utilizando diferentes
concentraciones de amoxicilina.
De acuerdo a los resultados morfológicos en los bioindicadores se evidenció
que el color de hoja mediante una escala de severidad no presentó ningún factor
defectuoso relacionadas al antibiótico (amoxicilina), la altura de la planta se
encontró diferencia significativa positiva solo entre el contraste del blanco y la
concentración 2, demostrando de esta manera que la amoxicilina mostró un
efecto favorable en la altura de la planta, mientras que en el grosor del tallo no
hubo diferencia significativa entre los resultados hallados, aceptando la
hipótesis.
En el monitoreo del grado de degradación del antibiótico betalactámico, los
resultados confirman una baja taza de biodegradabilidad en el ambiente.
En el presente proyecto se evaluó los efectos del antibiótico betalactámico
(Amoxicilina) como contaminante emergente del suelo utilizando Raphanus
sativus y Lactuca sativa como bioindicadores, donde se observó que en las
concentraciones ensayadas se evidenció efectos adversos en las plantas
monitoreadas.
44
RECOMENDACIONES
Continuar el estudio con otros bioindicadores con la finalidad de recopilar la
mayor cantidad de información.
Investigar si existe algún impacto negativo en la salud de los seres humanos
y animales, considerando que podría quedar residuo del antibiótico en la planta.
Realizar el estudio con otro antibiótico, hormonas o medicamentos en general.
45
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49
GLOSARIO
Antibiótico: Son medicamentos potentes que combaten las infecciones
bacterianas, actúan matando las bacterias o impidiendo que se reproduzcan.
Bioindicador: Organismo vivo que se utiliza para determinar y evaluar el
índice de contaminación de un lugar, especialmente de la atmósfera o del agua.
Contaminante emergente: Son compuestos cuyo vertido puede suponer un
problema sanitario y ambiental que aún no está suficientemente investigado ni
regulado
Contraste: Es la Oposición o diferencia notable de una persona o cosa con
otra, el Contraste separa las características más esenciales de un elemento o
puede realizarse la evaluación de similitud de las cosas.
Biodegradación: Permite calificar a la sustancia que se puede degradar
mediante el accionar de un agente biológico.
Desechos biológicos: Todas aquellas materias de desecho producidas en
actividades sanitarias y de investigación fisiológica de seres humanos, u otros
seres vivos, así como los derivados del contacto y/o exposición contaminante
con restos segregados por los anteriores
Antibiótico de amplio espectro: Se refiere a un antibiótico que actúa contra
una amplia gama de bacterias patógenas, tanto contra bacterias grampositivas
como gramnegativas
Excreción: Acción por la que el organismo excreta sustancias de desecho.
Fotolisis: Descomposición química que, durante el proceso de fotosíntesis,
sufre una molécula de agua debido a la acción de los rayos ultravioleta.
Individuo: Ser vivo, animal o vegetal, perteneciente a una especie o género,
considerado independientemente de los demás.
Macronutrientes: Son sustancias necesarias para el crecimiento, el
metabolismo y otras funciones, se necesitan en grandes cantidades.
Micción: Es un proceso mediante el cual la vejiga urinaria elimina la orina
50
Micronutrientes: Son aquellas sustancias químicas que, en pequeñas
cantidades, permiten regular los procesos metabólicos y bioquímicos de los
organismos.
Persistencia: Duración o existencia de una cosa por largo tiempo.
Residuos: Parte o porción que queda de un todo después de quitar otra parte,
materia inservible que resulta de la descomposición o destrucción de una cosa.
Severidad: Rigor excesivo al juzgar las faltas y debilidades.
Vigencia: Que tiene cualidad de vigente, es decir, que permanece actual, que
todavía cumple con sus funciones aún con el tiempo transcurrido.
ODS: (objetivos de desarrollo sostenibles), conjunto de objetivos globales
para erradicar la pobreza, proteger el planeta y asegurar la prosperidad para
todos como parte de una nueva agenda de desarrollo sostenible.
51
ANEXOS
Anexo A. Análisis inicial de macronutrientes
52
Anexo B. Espectro de absorción de la amoxicilina
Anexo C. Prueba de contraste blanco vs. concentración 1. En relación a la
altura (rábano)
Anexo D. Prueba de contraste blanco vs. concentración 2. En relación a la
altura (rábano)
Variables BR RC1
Media 23,33 24,53
Varianza (S²) 9,08 0,65
Des. Estándar (S) 3,01 0,81
n
T calculado
T crítico
3
0,67
2,92
Variables BR RC2
Media 23,33 28,17
Varianza 9,08 0,08
Des. Estándar 3,01 0,29
n
T calculado
T crítico 2,92
3
2,77
53
Anexo E. Prueba de contraste blanco vs. concentración 1. En relación a la
altura (lechuga)
Anexo F. Prueba de contraste blanco vs. concentración 2. En relación a la
altura (lechuga)
Anexo G. Prueba de contraste blanco vs. concentración 1. En relación al
grosor del tallo (rábano)
Variables BL LC1
Media 26,40 27,00
Varianza 0,61 32,25
Des. Estándar 0,78 5,68
n
T calculado
T crítico
3
0,18
2,92
Variables BL LC2
Media 26,40 29,50
Varianza 0,61 0,75
Des. Estándar 0,78 0,87
n
T calculado
T crítico 2,92
3
4,60
Variables BR RC1
Media 0,80 0,77
Varianza 0,07 0,06
Des. Estándar 0,26 0,25
n
T calculado
T crítico
3
0,16
2,92
54
Anexo H. Prueba de contraste blanco vs. concentración 2. En relación al
grosor del tallo (rábano)
Anexo I. Prueba de contraste blanco vs. concentración 1. En relación al grosor
del tallo (lechuga)
Anexo J. Prueba de contraste blanco vs. concentración 2. En relación al
grosor del tallo (lechuga)
Variables BR RC2
Media 0,80 0,83
Varianza 0,07 0,00
Des. Estándar 0,26 0,06
n
T calculado
T crítico
3
0,21
2,92
Variables BL LC1
Media 0,43 0,33
Varianza 0,00 0,00
Des. Estándar 0,06 0,00
n
T calculado
T crítico
3
2,12
2,92
Variables BL LC2
Media 0,43 0,37
Varianza 0,00 0,00
Des. Estándar 0,06 0,06
n
T calculado
T crítico
3
1,41
2,92
