UJI EFEK KOMBINASI EKSTRAK METANOL DAUN Piper betle L. … · UJI EFEK KOMBINASI EKSTRAK METANOL DAUN Piper betle L. ... 5. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt dan Ibu Damiana Sapta Candrasari,

UJI EFEK KOMBINASI EKSTRAK METANOL DAUN Piper betle L.

DAN EKSTRAK METANOL DAUN Piper crocatum Ruiz & Pav.

TERHADAP BAKTERI Staphylococcus epidermidis

SKRIPSI

Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Galang Adityas

NIM : 158114030

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2019

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

UJI EFEK KOMBINASI EKSTRAK METANOL DAUN Piper betle L. DAN

EKSTRAK METANOL DAUN Piper crocatum Ruiz & Pav. TERHADAP

BAKTERI Staphylococcus epidermidis

SKRIPSI

Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Galang Adityas

NIM : 158114030

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2019


Persetujuan PembimbingUJI EFEK KOMBINASI EKSTRAK METANOL DAUN Piper betle L.

DAN EKSTRAK METANOL DAUN Piper crocatum Ruiz & Pav.

TERHADAP BAKTERI S tap lry I o c o c c u s e pid e r m idis

Skripsi yang diajukan oleh :

Galang AdityasNIM : 158114030

telah disetujui oleh

Pembimbing utama

(Dr. Yustina Sri Harlini, M.Si., Apt) tanggal 6 Februari 2019


Peuges*han Skripsi BerjudulIlJr f,FEK K{}MBIIEAST EKSTRAK METAIq0L DATIN Piper betleL. rrAN

EKSTRAK METANOL DAUN Piper uocatum Ruiz & Pav. TERHADAP

BAKTERI Staphylococcus epidermidis

Oleh:Galang Adityas

MM : 158114030

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji SkripsiFakultasFarmasi

Universitas Sanata Dharma

Pada tanggal 1 1 Maret 2019

Mengetahui

Sanata Dharma

Panitia Penguji

1. Dr. Yustina SriF{artini; Apt

2. Dr. Erna Tri Wulandari,Apt

3. Damiana Sapta Candrasari, S.Si., M.Sc

111


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Naskah ini kupersembahkan untuk :

Gusti Yesus dan Ibu Maria, Santo Bonifasius, Santa Maria Goreti

Bapak, Ibuk, Sasa, Mas Didit, semua keluarga, semua leluhur

Semua sahabat dan teman-temanku

Alamamaterku Universitas Sanata Dharma


PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

Saya menyatakan dengan sesunggulmya bahwa skripsi yang saya tulis initidak memuatkwya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkandalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah.

Apabila di kernudian hari diternukan indikasi plagiarism dalam naskah ini,maka saya bersedia menanggung segala sanksi sesuai perahran penrndang-

undangan yang berlaku.

Yogyakarta, 21 Desember 2018

Peqglis

$VCalanA Ailityas


LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN

PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

Yang bertanda tangan di bawah ini, saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma :

Nama : Galang AditYas

NomorMahasiswa : 158114030

Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan

Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul :

UJI EBEK KOMBINASI EKSTRAK METANOL DAUN Piper betleL.DAN

EKSTRAK METANOL DAUN Piper crocatum Ruiz & Pav. TERIIADAP

BAKTERI Stuphylococcas epidermidis

beserta perangkat yang diperlukan (bila ada). Dengan demikian saya memberikan

kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dhanna hak untuk menyimpan,

mengalihkan dalam bentuk media lain, mengolahnya dalam bentuk pengkalan

data, mendistribusikannya secara terbatas dan mempublikasikannya di internet

atau media lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta ijin dari saya

maupun memberi royalty kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya

sebagai penulis.

Demikian pernyataan ini yang saya buat dengan sebenarnya.

Dibuat di Yogyakarta

Pada tanggal 21 Desember 2018

Yang penyatakanv

/ \ -tr-\\l*/

\0(Galang Adityas)

v1


vii

PRAKATA

Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa karena berkat dan kasih-Nya

penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Efek Kombinasi

Ekstrak Metanol Daun Piper betle L. dan Ekstrak Metanol Daun Piper

crocatum Ruiz & Pav. terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis” dengan

baik. Penulisan skripsi ini tidak lepas dari dukungan, bimbingan dan bantuan

banyak pihak. Oleh karena itu, ada kesempatan kali ini, penulis ingin

mengucapkan terima kasih kepada :

1. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma

2. Ibu Christine Patramutri, Apt selaku Ketua Program Studi Fakultas

Farmasi Universitas Sanata Dharma

3. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si, M.Sc., selaku Kepala Laboratorium

Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

4. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini selaku dosen pembimbing skripsi atas segala

bimbingan, masukan, kritik, saran dan kesabarannya dalam mendampingi

penelitian dan penyusunan naskah skripsi ini

5. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt dan Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si,

M.Sc., selaku dosen penguji atas segala kritik dan saran selama penelitian

dan penyusunan naskah skripsi ini

6. Mas Antonius Dwi Priyana dan Mas Sarwanto selaku Sekretariat S1

Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

7. Pak Yohanes Wagiran, Kak Intan selaku laboran yang telah banyak

membantu dalam proses penelitian skripsi ini.

8. Seluruh dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

9. Bapak, Ibuk, Sasa, Mas Didit dan semua keluarga yang telah membantu,

memberi dukungan dan semangat selama penelitian dan penyusunan

naskah skripsi

10. Teman-teman Skripsi (Epen, Manda, Nadia, Rian, Pipit, Bryan) yang telah

menemani, mendukung, dan banyak membantu selama penelitian dan

penyusunan naskah skripsi ini


viii

11. Teman-teman praktikum Meja 2 A2 (Tommy, Rian, Thiara, Epen, Cinta,

Misty), teman teman FSM A 2015 dan teman-teman angkatan 15 atas

semua kerjasama selama perkuliahan

12. Nanik, Denis, Karim, Manes, Inge, Yuka, Retno, Dita, Dikta, Zella atas

semua dukungan dan semangat yang diberikan

13. Semua pihak yang telah banyak membantu baik secara langsung dan tidak

langsung dalam proses penelitian dan penyelesaian naskah skripsi

Penulis menyadari bahwa dalam naskah skripsi ini masih terdapat kekurangan.

Oleh karena itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun agar

naskah ini menjadi lebih baik. Akhir kata, penulis berharap agar skripsi ini

bermanfaat bagi pembaca.

Yogyakarta, 21 Desember 2018

Penulis


ix

ABSTRAK

Latar Belakang : Infeksi Staphylococcus epidermidis dapat diatasi dengan

antibiotik. Penggunan antibiotik mengalami masalah resistensi dan dapat diatasi

dengan menggunakan ekstrak tanaman. Penelitian ini akan melihat efek

kombinasi ekstrak metanol daun Piper betle L. (EMDS) dan ekstrak metanol daun

Piper crocatum Ruiz & Pav. (EMDSM) dibandingkan ekstrak tunggal untuk

menghambat Staphylococcus epidermidis serta identifikasi senyawa antibakteri

dalam EMDS, EMDSM dan kombinasinya menggunakan uji KLT dan uji tabung.

Metode : Pengukuran zona hambat dilakukan dengan metode difusi sumuran pada

EMDS tunggal, EMDSM tunggal, dan kombinasi keduanya (1:1; 1:2; 2:1) dan

dianalisis secara statistik menggunakan uji Mann Whitney. Dilakukan uji KLT

dan uji tabung untuk mengidentifikasi senyawa antibakteri dalam EMDS,

EMDSM, dan kombinasi keduanya.

Hasil : Hasil analisis statistik perbedaan zona hambat EMDS tunggal

dibandingkan kombinasi (1:1; 1:2) menghasilkan efek sinergis. Pengujian KLT

mengindikasikan ekstrak tidak mengandung flavonoid kuersetin. Berdasarkan uji

tabung ekstrak kombinasi mengandung tanin, flavonoid, alkaloid, dan minyak

atsiri.

Kesimpulan : EMDS tunggal dibandingkan kombinasi (1:1; 1:2) menghasilkan

efek sinergis, EMDS tunggal dibandingkan kombinasi (2:1) menghasilkan efek

indifferent, EMDSM tunggal dibandingkan kombinasi (1:1; 1:2; 2:1)

menghasilkan efek antagonis. Ekstrak kombinasi mengandung tanin, flavonoid,

alkaloid, dan minyak atsiri.

Kata kunci : Staphylococcus epidermidis, EMDS, EMDSM, kombinasi ekstrak,

zona hambat, KLT, uji tabung


x

ABSTRACT

Background : Staphylococcus epidermidis infection can be treated with

antibiotic. The use of antibiotic has a resistance issue and can be prohibited with

plants extract. This study will learn about the combination effect of Piper betle. L

methanolic extract (EMDS) and Piper crocatum Ruiz & Pav. methanolic extract

(EMDSM) compared to their single extract against Staphylococcus epidermidis

also identify antibacterial compound in EMDS, EMDSM, and their combination

with TLC and tube test

Method : The single EMDS, EMDSM, and their combination’s (1:1;1:2:2:1)

inhibition zone can be found by agar diffusion well test and analyzed statistically

through Mann Whitney test. This study also applies TLC test and tube test

Results : Statistical analyze of the inhibition zone EMDS and combination(1:1;

1:2) result in synergism effect. TLC test identifies that the extracts do not contain

flavonoid quercetin compound. The tube test indicates that the combination

extracts contain tannin, flavonoids, alkaloids, and essential oil.

Conclusion : EMDS and combination (1:1; 1:2) have synergism effect.

Meanwhile, EMDS and combination (2:1) have indifferent effect. Moreover,

EMDSM and combination (1:1; 1:2; 2:1) have antagonism effect. The

combination extracs contain tannin, flavonoids, alkaloids, and essential oil.

Key words : Staphylococcus epidermidis, EMDS, EMDSM, extract combination,

inhibition zone, TLC, tube test


xi

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL………………………………………………… i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING……………………... ii

HALAMAN PENGESAHAN……………………………………….. iii

HALAMAN PERSEMBAHAN……………………………………... iv

LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA………………….. v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI………... vi

PRAKATA…………………………………………………………… vii

ABSTRAK…………………………………………………………… ix

ABSTRACT…………………………………………………………... x

DAFTAR ISI………………………………………………………… xi

DAFTAR TABEL…………………………………………………… xii

DAFTAR GAMBAR………………………………………………… xiii

DAFTAR LAMPIRAN……………………………………………… xiv

PENDAHULUAN…………………………………………………… 1

METODE PENELITIAN……………………………………………. 3

HASIL DAN PEMBAHASAN……………………………………… 9

KESIMPULAN DAN SARAN……………………………………… 20

DAFTAR PUSTAKA………………………………………………... 21

LAMPIRAN…………………………………………………………. 27

BIOGRAFI PENULIS……………………………………………….. 39


xii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Hasil pengukuran diameter zona hambat (mm) EMDS 50

mg/ml, EMDSM 200 mg/ml, dan kombinasinya…………….

14

Tabel 2. Hasil Pengujian Mann-Whitney ……….……..…………….. 15

Tabel 3. Nilai Rf Uji KLT dan warna bercak standar dan perlakuan

tunggal……………………………………………………....

17

Tabel 4. Nilai Rf Uji KLT dan warna bercak perlakuan kombinasi… 17


xiii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. (a) Kontrol Media; (b) Kontrol Pertumbuhan ..……………... 12

Gambar 2. Uji difusi sumuran EMDS, EMDSM, dan kombinasinya …… 14

Gambar 3. (a) Hasil Pengujian KLT menggunakan detektor UV 254 nm

(b) Hasil Pengujian KLT menggunakan detektor UV 365 nm

(c) Hasil Pengujian KLT menggunakan pereaksi semprot

FeCl3....................................................................................

16


xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Hasil Determinasi Daun Piper betle L……..………….. 27

Lampiran 2. Hasil Determinasi Daun Piper crocatum Ruiz & Pav… 28

Lampiran 3. Hasil Uji Identifikasi Bakteri…………………….……. 29

Lampiran 4. Penetapan kadar air Piper betle L. dan Piper crocatum

Ruiz & Pav.………………….………….……................

30

Lampiran 5. Uji difusi sumuran variasi konsentrasi EMDS dan

EMDSM………………………………………………..

31

Lampiran 6. Data Uji Statistik………………………………………

32

Lampiran 7. Hasil Uji Kualitatif menggunakan Uji Tabung………...

34


1

PENDAHULUAN

Staphylococcus epidermidis adalah koloni bakteri gram positif yang

umumnya terdapat pada kulit dan selaput lendir (Brooks et al, 2013). Bakteri ini

merupakan agen penyebab infeksi yang paling sering terjadi dari perangkat medis.

Setidaknya 22% dari infeksi yang berasal dari perangkat medis disebabkan oleh

Staphylococcus epidermidis dan menyebabkan 13% infeksi endokarditis katup

prostetik, dengan tingkat abses intrakardiak yang tinggi sebesar 38% dan 24%

mortalitas (Otto, 2009).

Pengobatan penyakit yang disebabkan oleh bakteri diatasi dengan antibiotik

(Amenu, 2014). Resistensi terhadap antibiotik semakin berkembang. Semakin

banyak organisme resisten tanpa adanya antibiotik baru yang dapat mengatasinya.

Menurunnya efektivitas antibiotik akan menyebabkan peningkatan morbiditas dan

mortalitas (MacGowan and Macnaughton, 2013). Penggunaan ekstrak tanaman

merupakan terapi alternatif untuk mengatasi masalah resistensi. Resistensi dapat

diatasi dengan terapi kombinasi ekstrak tanaman yang berbeda untuk

mendapatkan efek sinergi bakterisida (Chanda and Rakholiya, 2011). Salah satu

tanaman obat yang mempunyai aktivitas antibakteri adalah tanaman Piper betle L.

dan Piper crocatum Ruiz & Pav. Menurut Nela, Yuniarni and Prayugo (2016),

ekstrak etanol daun Piper betle L. (EEDS) mengandung senyawa alkaloid,

flavonoid, tanin, asam fenolik, monoterpen, sesquiterpen, dan kuinon. Pada

konsentrasi ekstrak sebesar 1 mg/ml mampu memberikan zona hambat sebesar

30,71 mm pada bakteri Staphylococcus epidermidis. Menurut penelitian yang

dilakukan oleh Kusuma, Zuhrotum and Meidina (2016) ekstrak etanol daun Piper

crocatum Ruiz & Pav. (EEDSM) mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tanin,

polifenol, saponin dan steroid. Ekstrak ini mempunyai efek penghambatan pada

bakteri Staphylococcus epidermidis berupa zona hambat pada konsentrasi 20%;

40%; 60%; 80% secara berturut-turut sebesar 15,02-14,88 mm; 17,54-17,26 mm;

18,16-17,73 mm; 20,64-20,36 mm. Pemilihan ekstrak dalam penelitian ini dilihat

dari penelitian yang dilakukan oleh Syahidah et al (2017) dimana dengan motode

KLT ekstrak metanol daun Piper betle L. (EMDS) mengandung senyawa alkaloid,

flavonoid, tanin, saponin, terpenoid, fenol, steroid, dan glikosida. Sedangkan


2

menurut Rinanda, Zulfitri and Alga (2012) dengan metode uji tabung ekstrak

metanol daun Piper crocatum Ruiz & Pav. (EMDSM) mengandung senyawa

alkaloid, flavonoid, saponin, triterpenoid, dan tanin. Kandungan senyawa dari

EEDS dan EEDSM mempunyai kemiripan dengan kandungan senyawa dari

EMDS dan EMDSM. Tidak ditemukan adanya perbedaan signifikan terhadap

aktivitas antibakteri yang ditimbulkan baik oleh ekstrak etanol maupun ekstrak

metanol (Nouri, Nafchi and Karim, 2014). Sehingga pada penelitian ini

menggunakan EMDS dan EMDSM untuk menghambat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus epidermidis.

Penelitian tentang kombinasi tumbuhan yang berbeda dilakukan oleh

Diaseptana (2017) dengan melakukan uji efek penghambatan kombinasi infusa

daun Piper betle L. dan daun Piper crocatum Ruiz & Pav. terhadap bakteri

Staphylococcus epidermidis dibandingkan dengan efek penghambatan ekstrak

tunggalnya. Infusa merupakan teknik ekstraksi dengan cara panas menggunakan

pelarut air pada suhu penangas air (96-98oC) selama 15-20 menit (Departemen

Kesehatan RI. 2000). Hasil penghambatan pada kombinasi infusa tersebut masih

memberi efek antagonis terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis. Metode

ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode maserasi, yaitu

teknik ekstraksi dengan cara dingin yang dilakukan pada suhu kamar (Departemen

Kesehatan RI, 2000).

Menurut Blesson et al (2015), efek kombinasi ekstrak terbagi menjadi efek

sinergis (efek kombinasi lebih kuat daripada efek tunggal), efek indifferent (efek

kombinasi sama dengan efek tunggal), dan antagonis (efek kombinasi lebih lemah

daripada efek tunggal). Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek antibakteri

antara kombinasi EMDS dan EMDSM terhadap bakteri Staphylococcus

epidermidis dengan melihat zona hambatnya menggunakan metode difusi

sumuran. Perbandingan kombinasi ekstrak yang digunakan adalah 1:1; 1:2; dan

2:1 untuk melihat kombinasi ekstrak yang dapat menghasilkan zona hambat

paling baik. Dalam penelitian ini dilakukan uji KLT dan uji tabung untuk

mengetahui profil senyawa yang terdapat dalam EMDS, EMDSM, dan

kombinasinya.


3

METODE PENELITIAN

Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan

rancangan eksperimental sederhana (posttest only control group design).

Alat dan Bahan Penelitian

Alat yang digunakan untuk penelitian ini adalah oven (Memmert), autoclave

(ALP), shaker (Optimal), pengayak nomor mesh 50, saringan, timbangan analitik,

blender, inkubator (Hemmert), rotary evaporator (Buchi), mikropipet, yellow tip,

jarum ose, pelubang sumuran, bunsen, Microbial Safety Cabinet kelas II tipe A2

(Esco), alat destilasi (pendingin air balik, alat penampung, dan tabung penerima),

pemanas listrik, corong buchner, kertas saring, vacuum pump, bunsen,

nephelometer (PhoenixSpec), timbangan analitik (OHAUS), plat KLT silica gel

GF254, alat-alat gelas Pyrex (gelas beaker, tabung reaksi, cawan petri, batang

pengaduk, erlenmeyer, labu takar, labu alas bulat 500 ml).

Bahan yang digunakan antara lain kultur bakteri Staphylococcus epidermidis,

daun Piper betle L. dan daun Piper crocatum Ruiz & Pav., media Nutrient Broth

(Oxoid), media Nutrient Agar (Oxoid) pelarut metanol 70%, larutan standar Mc

Farland 0,5, DMSO 1%, aquades, BPW (Oxoid), serbuk logam Mg, HCl pekat,

HCl 10%, HCl 2N, larutan FeCl3, reagen Mayer, etil asetat, toluen.

Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman Piper betle L. dilakukan di Departemen Biologi

Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Sedangkan determinasi

tanaman Piper crocatum Ruiz & Pav. dilakukan di Fakultas Biologi Universitas

Gadjah Mada Yogyakarta.

Pengumpulan bahan uji

Daun Piper betle L. diperoleh dari daerah Sleman Yogyakarta. Daun Piper

betle L. yang dipilih adalah daun dengan permukaan halus, tidak berlubang, dan

berwarna hijau muda, panjang 7-15 cm dan lebar 5-14 cm. Daun Piper crocatum

Ruiz & Pav. diperoleh dari daerah Sleman Yogyakarta. Daun Piper crocatum

Ruiz & Pav. yang dipilih adalah daun dengan permukaan halus, tidak berlubang,

warna dasar hijau, bagian atas hijau dengan garis merah jambu kemerahan,


4

permukaan bagian bawah hijau merah tua keunguan, panjang 6,1-14,6 cm dan

lebar 4-9,4 cm.

Pembuatan simplisia daun Piper betle L. dan Piper crocatum Ruiz & Pav.

Daun dipisahkan dari bahan pengganggu seperti tanah, rumput, bagian

tanaman yang tidak dibutuhkan (batang), dan bagian yang rusak, lalu dicuci

dengan air mengalir sambil dibersihkan sebanyak 3 kali. Kemudian daun dipotong

melintang dengan ukuran sedang hingga kecil. Setelah dipotong, kedua daun sirih

tersebut dikeringkan dalam oven dengan suhu 40oC. Daun Piper betle L. dan daun

Piper crocatum Ruiz & Pav. yang telah kering dipisahkan dari bahan-bahan

pengganggu yang masih tersisa, kemudian dibuat serbuk dengan menggunakan

blender, lalu diayak dengan pengayak nomor mesh 50 dan kemudian disimpan

(Direktorat Jendral Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011).

Penetapan kadar air pada simplisia kering daun sirih

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode destilasi toluena menurut

Farmakope Herbal Indonesia. Pereaksi toluen jenuh air dibuat terlebih dahulu

dengan cara mengocok toluen P dengan sedikit air kemudian dibiarkan terpisah

dan lapisan air dibuang. Tabung penerima dan pendingin dibersihkan dengan

asam pencuci lalu dibilas dengan air, kemudian dikeringkan dalam lemari

pengering. Setelah itu, 10 gram simplisia kering daun sirih dan 200 ml toluen

jenuh air dimasukan dalam labu. Toluen jenuh air dimasukan ke tabung penerima

melalui pendingin sampai leher alat penampung dan labu dipanaskan hati-hati

selama 15 menit. Setelah toluen mulai mendidih, penyulingan diatur dengan

kecepatan lebih kurang 2 tetes tiap detik, hingga sebagian besar air tersuling,

kemudian kecepatan penyulingan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Penyulingan

dilanjutkan selama 5 menit lalu tabung penerima didinginkan hingga suhu ruang.

Volume air dibaca setelah air dan toluen memisah sempurna. Kadar air dihitung

dalam % v/b (Direktorat Jendral Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011).

Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Piper betle L. (EMDS) dan Ekstrak

Metanol Daun Piper crocatum Ruiz & Pav. (EMDSM)

Pembuatan EMDS dan EMDSM menggunakan metode maserasi.

Sebanyak 10 gram simplisia ditimbang kemudian diekstraksi dengan 100 ml


5

pelarut metanol dalam shaker pada suhu ruang dengan tingkat pengadukan

konstan 200 rpm. Sampel dibiarkan selama 24 jam. Hasil maserat disaring

menggunakan corong Buchner yang dilapisi dengan kertas penyaring Whatmann

nomor 1 sambil divakum (Thangaraj, 2016). Serbuk hasil penyarian kemudian

dimaserasi kembali dengan pelarut sebanyak 75 ml selama 24 jam. Kemudian

dilakukan remaserasi lagi dengan pelarut baru sebanyak 25 ml selama 24 jam.

Hasil maserasi kemudian diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu

65oC dimana titik didih metanol menurut Pubchem (2018) memiliki titik didih

65oC, kemudian dilanjutkan dengan pemanasan menggunakan waterbath pada

suhu 65oC sampai didapatkan ekstrak kental dengan bobot tetap (Badan Pengawas

Obat dan Makanan, 2010). Selanjutnya dihitung persen rendemen yang didapat

(Direktorat Jendral Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011).

Pembuatan larutan stok EMDS dan EMDSM

Pembuatan larutan stok diadaptasi dari penelitian Madduluri, Rao, and

Siratam (2013), dengan cara 4 gram ekstrak kental ke dalam 10 ml DMSO 1%

steril hingga diperoleh konsentrasi larutan stok 400 mg/ml. Larutan stok disimpan

pada botol yang tertutup hingga siap digunakan.

Penyiapan stok dan suspensi bakteri uji Staphylococcus epidermidis

Penyiapan bakteri uji mengikuti pedoman Clinical and Laboratory

Standards Institute (2018). Kultur bakteri Staphylococcus epidermidis diambil 2-

3 ose dari Nutrient Agar ke Nutrient Broth steril kemudian diinkubasi (37°C, 24

jam) untuk mendapatkan stok bakteri. Sebelum digunakan, stok bakteri diambil

secukupnya dan diencerkan dengan Buffered Pepton Water (BPW) kemudian

disetarakan kekeruhannya dengan larutan standar Mc Farland 0,5 (1,5 x 108

CFU/ml) dengan nephelometer agar jumlah bakteri yang digunakan untuk

perlakuan tetap sama.

Pengukuran efek antibakteri EMDS dan EMDSM dengan difusi sumuran

a. Pembuatan konsentrasi EMDS

Konsentrasi EMDS yang dibuat adalah 50 mg/ml. Caranya adalah larutan

stok 400 mg/ml diambil 1,25 ml dan ditambahkan DMSO 1% steril hingga

10 ml sehingga konsentrasi 50 mg/ml.


6

b. Pembuatan konsentrasi EMDSM

Konsentrasi EMDSM yang dibuat adalah 200 mg/ml. Caranya adalah

larutan stok 400 mg/ml diambil 5 ml dan ditambahkan DMSO 1% steril

hingga 10 ml sehingga konsentrasi 200 mg/ml.

c. Pembuatan kontrol media dan kontrol pertumbuhan bakteri

Pembuatan kontrol media bertujuan untuk melihat sterilitas media yang

akan digunakan. Caranya adalah dengan pembuatan media Nutrient Agar

(NA) tanpa diberikan perlakuan lain dan diinkubasi selama 20 jam pada

suhu 37oC. Kontrol pertumbuhan bakteri digunakan untuk melihat apakah

bakteri yang digunakan dapat tumbuh dalam media Nutrient Agar (NA).

Caranya media NA dimasukkan ke dalam petri yang dicampurkan dengan

bakteri dengan cara pour plate.

d. Pengukuran zona hambat menggunakan metode difusi sumuran

Pertama-tama dilakukan uji aktivitas antibakteri dari masing-masing EMDS

dan EMDSM dengan berbagai varian konsentrasi (200 mg/ml; 100 mg/ml;

50 mg/ml; 25 mg/ml) yang bertujuan sebagai optimasi untuk mendapatkan

konsentrasi ekstrak terkecil yang dapat menghambat bakteri. Pemilihan

variasi konsentrasi EMDSM dalam optimasi ini diadaptasi dari penelitian

yang dilakukan oleh Kusuma, Zuhrotum and Meidina (2016) dimana

EMDSM konsentrasi 200 mg/ml sudah mampu memberikan zona hambat

terhadap bakteri Staphylococus epidermidis. Pemilihan variasi konsentrasi

EMDS dalam optimasi ini berdasarkan trial and error mengadaptasi

penelitian Santoso (2017) dimana EMDS 25 mg/ml mampu memberikan

penghambatan terhadap bakteri Staphylococus aureus. Pengujian kemudian

dilanjutkan dengan pengujian efek kombinasi dengan menggunakan

konsentrasi ekstrak terkecil yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri

dari masing-masing ekstrak. Pengukuran zona hambat dilakukan dengan

menggunakan metode difusi sumuran. Suspensi bakteri yang telah

disetarakan dengan Mc Farland 0,5 diambil 1 ml kemudian ditambahkan

pada media NA steril, divortex dan dipindahkan ke cawan petri. Setelah

media memadat, dibuat sumuran dengan 3 kali replikasi. Perlakuan yang


7

diujikan dengan metode difusi sumuran adalah kontrol negatif (berisi

masing-masing 15 μl DMSO 1%, aquadest, dan BPW); EMDS tunggal 50

mg/ml (sebanyak 15 μl); EMDSM tunggal 200 mg/ml (sebanyak 15 μl);

Kombinasi EMDS 50 mg/ml (sebanyak 15 μl) dan EMDSM 200 mg/ml

(sebanyak 15 μl) dengan perbandingan 1:1; Kombinasi EMDS 50 mg/ml

(sebanyak 15 μl) dan EMDSM 200 mg/ml (sebanyak 30 μl) dengan

perbandingan 1:2; Kombinasi EMDS 50 mg/ml (sebanyak 30 μl) dan

EMDSM 200 mg/ml (sebanyak 15 μl) dengan perbandingan 2:1.

Cara pengukuran zona hambat dalam penelitian ini adalah dengan

pengukuran diameter yang paling panjang dikurangi diameter pelubang

sumuran (a mm) dan diameter yang paling pendek dikurangi diameter

pelubang sumuran (b mm). Hasil pengukuran keduanya dijumlah dan dibagi

dua. Diameter zona hambat (x) diukur dengan rumus:

x = 𝑎+𝑏

2 (Sendy, Pujiastuti, dan Ernawati, 2014).

Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Larutan uji berupa ekstrak kental EMDS dan EMDSM diencerkan dengan

menggunakan pelarut DMSO 1%. Larutan uji ditotolkan sesuai dengan perlakuan

pada difusi sumuran yakni konsentrasi daya hambat terkecil dari masing-masing

ekstrak (50 mg/ml untuk EMDS dan 200 mg/ml untuk EMDSM) serta kombinasi

masing-masing ekstrak dengan perbandingan 1:1; 1:2; dan 2:1. Fase diam yang

digunakan adalah silika gel 60 GF254. Setelah itu, dilakukan optimasi fase gerak

dengan mencampurkan etil asetat dan toluen dengan perbandingan 9:1 dan 1:9.

Perbandingan fase gerak etil asetat : toluen (1:9) tidak dapat mengelusi perlakuan

(standar kuersetin, EMDS tunggal 50 mg/ml, EMDSM tunggal 200 mg/ml,

kombinasi ekstrak dengan perbandingan 1:1; 1:2; dan 2:1) sedangkan

perbandingan fase gerak etil asetat : toluen (9:1) dapat mengelusi perlakuan,

sehingga fase gerak yang dipilih adalah etil asetat : toluen (9:1). Fase gerak

tersebut kemudian dimasukkan ke dalam chamber. Plat kemudian ditotol

menggunakan standar pembanding kuersetin untuk mengidentifikasi senyawa

flavonoid, EMDS 50 mg/ml, EMDSM 200 mg/ml, kombinasi EMDS 50 mg/ml

dan EMDSM 200 mg/ml 1:1, kombinasi EMDS 50 mg/ml dan EMDSM 200


8

mg/ml 1:2, kombinasi EMDS 50 mg/ml dan EMDSM 200 mg/ml 2:1 dengan

jarak antar totolan sebesar 1 cm. Plat dielusi menggunakan fase gerak hingga 10

cm kemudian diamati pada detektor UV 254 nm dan 365 nm. Kemudian

disemprot dengan reagen FeCl3 untuk mempertegas bercak yang diperoleh.

Bercak dilihat kembali pada detektor UV 254 nm dan 365 nm (Susanti dkk, 2017 ;

Reveny, 2011). Parameter yang diukur dalam identifikasi senyawa aktif adalah

warna bercak dibandingkan dengan pembanding atau pustaka yang digunakan dan

nilai Rf bercak yang terelusi (Direktorat Jendral Bina Kefarmasian dan Alat


Identifikasi senyawa antibakteri menggunakan uji tabung

a. Uji identifikasi flavonoid

Sebanyak 0,5-1 ml larutan uji dengan pemanasan, kemudian ditambahkan

serbuk logam Mg 0,1 gram dan 5-6 tetes asam klorida. Dalam waktu 2

menit larutan akan berubah warna menjadi warna merah untuk flavonol

dan warna oranye untuk flavonon (Hartini et al, 2016 ; Departemen


b. Uji identifikasi tanin

Sebanyak 0,5-1 ml larutan uji dilarutkan dalam air (1-2 ml) kemudian

ditambahkan larutan besi III klorida (FeCl3) 2-3 tetes. Timbulnya warna

biru kehitaman menunjukkan adanya tanin falat dan jika warnanya hijau

kehitaman menunjukkanadanya senyawa tanin katekol (Hartini et al, 2016

; Kursia, 2016).

c. Uji identifikasi alkaloid

Sebanyak 5 ml larutan uji ditambah asam klorida 10% (1,25-2,5 ml)

kemudian dimasukkan ke dalam 2 tabung. 1 tabung ditetesi 2-3 tetes

reagen Mayer dan 1 tabung sebagai pembanding, terbentuknya endapan

berwarna kuning keputihan menunjukkan keberadaan alkaloid (Hartini et

al, 2016 ; Departemen Kesehatan RI, 1979).

d. Uji identifikasi saponin

Sebanyak 2 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian

ditambahkan air sebanyak 2 ml (perbandingan 1:1) sambil dikocok selama


9

5 menit, terbentuknya buih setinggi 1-10 cm menunjukkan adanya

senyawa saponin. Pada penambahan asam klorida 2 N, buih tidak hilang

(Hartini et al, 2016 ; Departemen Kesehatan RI, 1979 ; Kursia, 2016).

e. Uji identifikasi minyak atsiri

Sebanyak 1 ml larutan uji dimasukkan ke cawan porselen, kemudian

diuapkan hingga diperoleh residu. Adanya bau khas yang dihasilkan oleh

residu tersebut menandakan adanya minyak atsiri (Ciulei, 1984).

Teknik Analisis Data Penelitian

Analisis data pengukuran efek dalam kombinasi diukur secara statistik

yang diawali dengan menguji distribusi normalitas dengan uji Shapiro-Wilk. Uji

homogenitas dilakukan dengan uji Levene. Apabila didapati data terdistribusi

normal dan variansi data homogen, maka dilanjutkan dengan uji One Way

ANOVA. Apabila ditemukan perbedaan, maka dilanjutkan Post-Hoc Tukey pada

taraf kepercayaan 95%. Apabila didapatkan data terdistribusi tidak normal, maka

dilanjutkan dengan uji Kurskal-Wallis, dan apabila ditemukan perbedaan, maka

dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney pada taraf kepercayaan 95%.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Tanaman Piper betle L. dan Piper crocatum Ruiz & Pav yang digunakan

untuk penelitian ini telah melalui proses determinasi untuk memastikan daun

tanaman yang dipakai benar-benar merupakan daun Piper betle L. dan Piper

crocatum Ruiz & Pav. Hasil determinasi ditunjukkan pada surat keterangan

(Lampiran 1 dan 2).

Daun Piper betle L. dan Piper crocatum Ruiz & Pav yang dipilih didapat

dari daerah Sleman Yogyakarta. Daun tersebut kemudian disortasi basah untuk

memisahkan kotoran atau bahan asing. Tahap selanjutnya adalah dilakukan

pencucian untuk menghilangkan kotoran yang melekat pada daun. Setelah dicuci,

daun kemudian dikeringkan dan dipotong melintang. Daun yang sudah dipotong

kemudian dikeringkan dengan menggunakan oven dengan suhu sekitar 400C

selama 24 jam untuk mengurangi kadar air simplisia dan memudahkan proses

penyerbukan. Selanjutnya, dilakukan penyerbukan dengan menggunakan blender


10

dan serbuk diayak menggunakan ayakan nomor mesh 50 untuk mendapatkan

serbuk halus yang akan digunakan untuk proses ekstraksi.

Pada penelitian ini dilakukan penetapan kadar air dengan menggunakan

metode destilasi toluena karena bahan uji mengandung minyak atsiri yang tidak

tahan dengan suhu tinggi dan bersifat volatil (World Health Organization, 2011).

Apabila terdapat kelebihan air pada simplisia akan memudahkan pertumbuhan

mikroba, menurunkan mutu simplisia dan menyebabkan kerusakan pada simplisia

(Departemen Kesehatan RI, 1985). Kadar air di hitung dengan rumus berikut:

%Kadar air =volume air (ml)

berat simplisia yang ditimbang (g) x 100%

Volume air yang didapat pada penetapan kadar serbuk simplisia daun sirih

adalah 0,4 ml dan berat serbuk yang ditimbang 10,3271 gram sehingga % kadar

air yang didapat adalah 3,8733%. Volume air yang didapat pada penetapan kadar

serbuk simplisia daun sirih merah adalah 0,5 ml dan berat serbuk yang ditimbang

10,2294 gram sehingga % kadar air yang didapat adalah 4,8879%. Kadar air yang

baik menurut Badan Pengawas Obat dan Makanan (2014) adalah ≤ 10% sehingga

kadar air yang didapatkan sudah memenuhi persyaratan tersebut. Gambar

penetapan kadar air dapat dilihat pada Lampiran 4.

Ekstraksi serbuk dilakukan dengan metode maserasi. Ekstraksi merupakan

pemisahan bagian aktif dari jaringan tanaman dari komponen yang tidak

aktif/inert dengan menggunakan pelarut selektif (Pandey and Tripathi, 2014).

Metode maserasi dilakukan dengan perendaman bahan tanaman dalam wadah

tertutup dengan pelarut. Maserasi dimaksudkan untuk melunakkan dan

menghancurkan dinding sel tanaman untuk melepaskan senyawa aktif tanaman

yang dapat larut (Handa et al, 2008). Serbuk daun yang sudah diayak dimaserasi

menggunakan pelarut metanol 70% karena memiliki kepolaran lebih tinggi

daripada metanol 100% sehingga lebih banyak menarik senyawa metabolit

sekunder. Maserasi dilakukan selama 24 jam kemudian diremaserasi sebanyak 3

kali. Hasil maserat kemudian disaring menggunakan corong Buchner untuk

memisahkan filtrat cair dan serbuk. Hasil ekstraksi kemudian dihilangkan

pelarutnya menggunakan rotary evaporator pada suhu 650C karena titik didih


11

metanol pada suhu tersebut. Selanjutnya hasil ekstrak dipanaskan di waterbath

hingga bobot tetap dan didapatkan ekstrak kental. Bobot tetap diperoleh apabila

selisih dua kali penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan selama 1 jam

tidak lebih dari 0,5 gram atau 0,25% dari penimbangan sebelumnya. Penimbangan

bobot tetap ini dimaksudkan untuk memastikan bahwa sudah tidak didapatkan

cairan penyari dan didapatkan ekstrak murni. Persen rendemen didapat dengan

rumus bobot ekstrak kental (g) dibagi bobot simplisia yang ditimbang (g). Bobot

ekstrak kental daun sirih yang didapat adalah 12,5453 gram dan berat serbuk yang

ditimbang adalah 60,9073 gram sehingga didapatkan persen rendemen sebesar

20,5973%. Bobot ekstrak kental daun sirih merah yang didapat adalah 25,5670

gram dan berat serbuk yang ditimbang adalah 134,5500 gram sehingga didapatkan

persen rendemen sebesar 19,0018 %.

Bakteri Staphylococcus epidermidis yang digunakan dalam penelitian telah

melalui uji identifikasi bakteri untuk memastikan bahwa bakteri uji benar-benar

merupakan bakteri Staphylococcus epidermidis (Lampiran 3). Stok bakteri yang

akan digunakan untuk penelitian diperoleh dari kultur murni dan dikulturkan pada

media Nutrient Broth selama 24 jam. Selanjutnya stok bakteri uji diencerkan

menggunakan Buffered Pepton Water (BPW) kemudian disetarakan kekeruhannya

dengan larutan standar Mc Farland 0,5 dengan nephelometer.

Uji aktivitas antibakteri EMDS dengan EMDSM dilakukan dengan metode

difusi sumuran. Metode difusi sumuran dipilih karena metode ini secara luas

digunakan dalam pengukuran aktivitas antibakteri dari tanaman atau ekstrak

tanaman (Balouiri, Sadiki, and Ibnsouda, 2016). Media yang digunakan adalah

media Nutrient Agar karena menurut ATCC (2018), media tersebut dapat

digunakan sebagai media tumbuh Staphylococcus epidermidis. Kontrol media

dibuat untuk melihat sterilitas media yang akan digunakan. Kontrol pertumbuhan

digunakan untuk memastikan bahwa bakteri Staphylococcus epidermidis dapat

tumbuh dengan baik pada media Nutrient Agar.


12

(a)

(b)

Gambar 1. (a) Kontrol Media dan (b) Kontrol Pertumbuhan Bakteri

Kontrol negatif yang digunakan yaitu DMSO 1%, aquades steril, dan BPW.

Aquades steril digunakan untuk mengencerkan DMSO 100%, DMSO 1%

digunakan untuk melarutkan ekstrak, dan BPW digunakan untuk mengencerkan

bakteri. Kontrol negatif berguna untuk mengetahui apakah pelarut yang digunakan

mempunyai aktivitas antibakteri atau tidak.

Penelitian ini menggunakan pengujian difusi sumuran untuk melihat zona

hambat yang dihasilkan oleh EMDS, EMDSM dan kombinasinya terhadap bakteri

Staphylococcus epidermidis. Pengujian difusi sumuran diawali dengan optimasi

pengujian aktivitas antibakteri masing-masing ekstrak tunggal dengan berbagai

varian konsentrasi (25 mg/ml, 50 mg/ml. 100 mg/ml, dan 200 mg/ml) yang

bertujuan untuk mendapatkan konsentrasi ekstrak terkecil yang dapat

menghambat bakteri. Zona hambat yang dihasilkan oleh EMDS secara berturut-

turut adalah 0 mm ± 0; 1,33 mm ± 0,577; 1,66 mm ± 0,577; 2 mm ± 1. Zona

hambat yang dihasilkan oleh EMDSM secara berturut-turut adalah 0 mm ± 0; 0

mm ± 0; 0 mm ± 0; 1 mm ± 0. Konsentrasi terkecil yang dapat menghambat

bakteri Staphylococcus epidermidis pada EMDS adalah 50 mg/ml sedangkan pada

EMDSM adalah 200 mg/ml. Gambar uji difusi sumuran variasi konsentrasi

EMDS dan variasi konsentrasi EMDSM dapat dilihat pada Lampiran 5.

Berdasarkan studi literatur, kandungan senyawa ekstrak etanol daun Piper

betle L. (EEDS) dan ekstrak etanol daun Piper crocatum Ruiz & Pav. (EEDSM)

memiliki kemiripan dengan kandungan senyawa ekstrak metanol daun Piper

betle L. (EMDS) dan ekstrak metanol daun Piper crocatum Ruiz &

Pav.(EMDSM). Hal ini dapat terlihat dari penelitian Nela, Yuniarni and Prayugo


13

(2016), EEDS mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, asam fenolik,

monoterpen, sesquiterpen, dan kuinon. Menurut penelitian yang dilakukan oleh

Kusuma, Zuhrotum and Meidina (2016), EEDSM mengandung senyawa alkaloid,

flavonoid, tanin, polifenol, saponin dan steroid. Sedangkan menurut Syahidah et

al (2017) dengan motode KLT EMDS mengandung senyawa alkaloid, flavonoid,

tanin, saponin, terpenoid, fenol, steroid, dan glikosida dan menurut Rinanda,

Zulfitri and Alga (2012) dengan metode uji tabung EMDSM mengandung

senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, triterpenoid, dan tanin. Dengan adanya

kemiripan kandungan senyawa yang dapat ditarik oleh pelarut etanol ataupun

pelarut metanol, diharapkan efek antibakteri yang dihasilkan akan mirip Hal ini

terlihat dalam penelitian yang dilakukan oleh Nouri, Nafchi and Karim, (2014)

dimana tidak ditemukan adanya perbedaan signifikan terhadap aktivitas

antibakteri yang ditimbulkan baik oleh ekstrak etanol maupun ekstrak metanol.

Menurut penelitian Nela, Yuniarni and Prayugo (2016), konsentrasi EEDS

sebesar 1 mg/ml mampu menghasilkan zona hambat sebesar 30,71 mm pada

bakteri Staphylococcus epidermidis. Sedangkan menurut Kusuma, Zuhrotum and

Meidina (2016) EEDSM konsentrasi 200 mg/ml mampu menghasilkan zona

hambat sebesar 15,02-14,88 mm. Dalam penelitian ini, EMDSM 200 mg/ml

mampu menghasilkan zona hambat sebesar 1 mm ± 0. Akan tetapi, EMDS 1

mg/ml tidak menunjukkan aktivitas antibakteri pada Staphylococcus epidermidis

yang diujikan dalam penelitian ini dengan menghasilkan zona hambat sebesar 0

mm ± 0. Hal ini disebabkan oleh perbedaan tempat pengumpulan sampel uji yang

digunakan dan perbedaan cara ekstraksi. Perbedaan tempat pengumpulan sampel

dapat memengaruhi konsentrasi senyawa metabolit yang dihasilkan, dimana

peningkatan intentitas cahaya akan meningkatkan konsentrasi senyawa alkaloid

dan fenol yang dihasilkan; penurunan suhu tempat tumbuh dapat menurunkan

konsentrasi senyawa alkaloid yang dihasilkan; penurunan kandungan air tanah

dapat meningkatkan konsentrasi senyawa fenol yang dihasilkan (Yang et al,

2018). Selain itu, adanya perbedaan cara ekstraksi dapat memengaruhi persen

rendemen yang didapatkan. Pada penelitian Nela, Yuniarni and Prayugo (2016)

ekstraksi dilakukan menggunakan metode sokletasi dan pada penelitian ini


14

menggunakan metode maserasi. Menurut penelitian Sa’adah, Nurhasnawati dan

Permatasari (2017), persen rendemen yang didapatkan melalui metode sokletasi

lebih banyak daripada persen rendemen yang didapatkan melalui metode

maserasi. Semakin banyak persen rendemen yang didapatkan maka metabolit

sekunder yang terekstrak juga semakin banyak.

Pengujian difusi sumuran dilakukan dengan 3 kali replikasi perlakuan.

Berdasarkan hasil pengamatan, didapatkan zona hambat yang diukur

menggunakan penggaris dengan satuan millimeter (mm).

Keterangan :

A : Kontrol negatif

B : Kombinasi EMDS 50 mg/ml dengan

EMDSM 200 mg/ml (1:1)

C : Kombinasi EMDS 50 mg/ml dengan


D : Kombinasi EMDS 50 mg/ml dengan


E : EMDSM 200 mg/ml

F : EMDS 50 mg/ml

*EMDS = Ekstrak Metanol Daun Piper betle L.

*EMDSM = Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum Ruiz & Pav.

Gambar 2. Uji difusi sumuran EMDS, EMDSM, dan kombinasinya

Tabel 1. Hasil pengukuran diameter zona hambat (mm) EMDS 50 mg/ml,

EMDSM 200 mg/ml, dan kombinasinya

Replikasi K(-) EMDS EMDSM 1:1 1:2 2:1

1 0 1 7,5 6 6 2,5

2 0 3 8 5,5 7 4,5

3 0 1,5 8 6 6 4,5

Rata-rata ± SD 0 1,83 ±

1.04

7,83 ±

0,28

5,83 ±

0,28

6,33 ±

0,57

3,83 ±

1,15

Keterangan : EMDS = Ekstrak metanol daun Piper betle L. 50 mg/ml;

EMDSM = Ekstrak metanol daun Piper crocatum Ruiz & Pav 200 mg/ml

K(-)= Aquades,BPW,dan DMSO 1%

Data zona hambat yang didapat kemudian dianalisis secara statistik

(Lampiran 6). Data diuji distribusi normalitas menggunakan uji Shapiro Wilk dan

didapatkan hasil data tidak terdistribusi normal (p < 0,05). Pengujian dilanjutkan

dengan uji levene untuk melihat homogenitas varian data dan didapatkan hasil

data tidak homogen. Hasil uji menunjukkan data tidak terdistribusi normal dan


15

tidak homogen, maka pengujian dilanjutkan dengan uji non-parametrik yaitu uji

Kruskal-Wallis. Hasil yang didapatkan ada perbedaan sehingga dilanjutkan

dengan uji Mann-Whitney pada taraf kepercayaan 95%. Hasil yang didapat pada

uji Mann-Whitney adalah :

Tabel 2. Hasil Pengujian Mann-Whitney

Perlakuan yang dibandingkan Nilai p Makna

EMDS tunggal

50 mg/ml

Kombinasi EMDS:EMDSM (1:1) 0,046 BB


Kombinasi EMDS:EMDSM (2:1) 0,121 TB

EMDSM

tunggal 200

mg/ml




Keterangan : BB= Berbeda bermakna; TB= Tidak Berbeda Bermakna

Berdasarkan pengujian, EMDS 50 mg/ml menunjukkan adanya pelebaran

zona hambat dibandingkan dengan kombinasi 1:1 dan 1:2 (berbeda bermakna)

sehingga menhasilkan efek sinergis. EMDS 50 mg/ml dibandingkan kombinasi

2:1 tidak menunjukkan pelebaran zona hambat (tidak berbeda bermakna) sehingga

menghasilkan efek indifferent. Kombinasi 1:1; 1:2; 2:1 dibandingkan dengan

EMDSM 200 mg/ml tidak menunjukkan adanya pelebaran zona hambat (berbeda

bermakna) sehingga menghasilkan efek antagonis. Dalam penelitian Hartini

(2018), infusa daun sirih dengan infusa daun sirih merah menghasilkan efek

antagonis jika dibandingkan dengan infusa tunggal karena adanya interaksi antar

senyawa yang terdapat dalam kedua infusa. Dalam penelitian ini, efek indifferent

dan antagonis yang dihasilkan disebabkan oleh adanya interaksi antar senyawa

yang terdapat dalam kedua ekstrak. Pengujian tidak dilanjutkan dengan metode

checkerboard karena dalam pengujian beberapa kombinasi yang diujikan tidak

menghasilkan pelebaran zona hambat jika dibandingkan dengan ekstrak

tunggalnya.

Identifikasi senyawa yang diduga mempunyai aktivitas antibakteri dalam

EMDS, EMDSM, dan kombinasinya dilakukan dengan sistem KLT. Fase diam

yang digunakan adalah silika gel 60 F254 dan fase gerak etil asetat : toluena (9:1).

Senyawa standar yang digunakan adalah senyawa flavonoid kuersetin karena


16

senyawa ini merupakan senyawa yang umum terdapat dalam tanaman obat

(Panche, Diwan and Chandra, 2016) dan dapat menghambat Staphylococcus

epidermidis dengan merusak membran sitoplasma (Siriwong et al, 2016). EMDS

50 mg/ml, EMDSM 200 mg/ml, serta kombinasinya ditotolkan pada plat

kemudian dielusi hingga jarak 10 cm menggunakan fase gerak. Plat KLT diamati

menggunakan detektor UV 254 nm dan UV 365 nm serta dideteksi dengan

pereaksi semprot FeCl3. Senyawa flavonoid mampu menyerap sinar ultraviolet,

sehingga umumnya dapat dideteksi oleh detektor UV. Senyawa flavonoid (flavon

dan flavonol) biasanya terdeteksi pada 254–280 nm atau 340–360 nm (Feng, Hao

and Li, 2017). Pada detektor UV 254 nm senyawa flavonoid akan menyebabkan

peredaman fluoresensi (Kesarkar et al, 2009). Pada detektor UV 365 nm,

gabungan emisi beberapa flurofor seluler universal seperti senyawa fenolik,

alkaloid, terpenoid, NADH, dan koenzim flavin akan menghasilkan fluoresensi

biru (Talamond, Verdeil and Conejero, 2015). Reagen yang digunakan untuk

senyawa fenolik adalah FeCl3. Senyawa fenolik ketika direaksikan dengan FeCl3

akan membentuk kompleks warna 3 piridinium hidroklorida sehingga

pembentukan kompleks warna ini yang dijadikan sebagai penanda adanya

senyawa fenolik (Aljamali, 2015). Senyawa flavonoid dapat ditunjukkan dengan

adanya warna kekuningan, abu-abu dan coklat tua pada detektor UV 254 nm

(Skorek et al , 2016); warna biru, ungu, hijau dan kuning gelap pada detektor UV

365 nm (Dwiatmaka, 2010; Kesarkar et al, 2009) dan warna hitam, abu-abu, dan

coklat kehitaman pada pereaksi FeCl3(Susanti dkk, 2017; Sonam, Singh and

Pooja, 2017). Parameter yang diamati adalah nilai Rf yang dibandingkan dengan

senyawa pembanding (Susanti dkk,2017 ; Reveny, 2011; Direktorat Jendral Bina

Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011).


17

(a)

(b)

(c)

Gambar 3. Hasil pengujian KLT dengan fase diam silika gel 60

F254 ; fase gerak etil asetat : toluene (9:1). (a) detektor UV 254 nm,

(b) detektor UV 365 nm, (c) pereaksi semprot FeCl3

Keterangan :

A. Standar kuersetin

B. EMDS 50 mg/ml

C. EMDSM 200 mg/ml

D. Kombinasi EMDS dan EMDSM 1:1

E. Kombinasi EMDS dan EMDSM 1:2

F. Kombinasi EMDS dan EMDSM 2:1

Tabel 3. Nilai Rf Uji KLT dan warna bercak standar dan perlakuan tunggal

Deteksi No Kuersetin EMDS 50

mg/ml

EMDSM 200

mg/ml

Rf

(cm)

Warna

bercak

Rf

(cm)

Warna

bercak

Rf

(cm)

Warna

bercak

UV

254 nm

1 - - - - 0,79 KC

2 - - - - 0,72 KC

3 0,67 C - - -

4 - - - - 0,58 U

UV

365 nm

1 - - - - 0,79 U

2 - - 0,73 U - -

3 0,67 U - - - -

FeCl3 1 - - - - 0,79 KH

2 - - 0,73 A 0,72 A

3 0,67 CH - - - -

Keterangan : C= coklat; U= ungu; CH= coklat kehitaman; A= abu-

abu; KC= kuning kecoklatan; KH= kuning kehijauan


18

Tabel 4. Nilai Rf Uji KLT dan warna bercak perlakuan kombinasi

Deteksi No Kombinasi 1:1 Kombinasi 1:2 Kombinasi 2:1

Rf

(cm)

Warna

bercak

Rf

(cm)

Warna

bercak

Rf

(cm)

Warna

bercak

UV

254 nm

1 0,8 KC 0,79 KC 0,79 KC

2 0,72 KC 0,72 KC 0,72 KC

3 - - - - - -

4 0,59 U 0,57 U 0,59 U

UV

365 nm

1 0,8 U 0,79 U 0,79 UM

2 0,72 U 0,72 UM 0,72 UM

3 - - - - - -

FeCl3 1 0,8 KH 0,79 KH 0,79 KH

2 0,72 A 0,72 A 0,72 A

3 - - - - - -

Keterangan : U= ungu; A= abu-abu; KC= kuning kecoklatan; KH=

kuning kehijauan; UM= ungu kemerahan

Hasil pengujian KLT menunjukkan bahwa perlakuan tidak terdeteksi

mengandung senyawa flavonoid kuersetin karena tidak menunjukkan bercak dan

nilai Rf yang menyerupai baku kuersetin. Pada pengamatan detektor UV 254 nm

terdapat senyawa flavonoid lain bukan kuersetin yang ditunjukkan dengan adanya

warna kekuningan (Skorek et al , 2016). Pada pengamatan detektor UV 365 nm

terdapat senyawa flavonoid yang ditunjukkan dengan adanya warna ungu

(Dwiatmaka, 2010). Selain itu terdeteksi juga adanya senyawa klorofil atau

senyawa lain yang tertutup klorofil yang ditunjukkan dengan adanya warna

kemerahan (Wagner, Bladt and Zgainski, 1983). Pada pengamatan dengan FeCl3

terdapat senyawa fenol yang ditunjukkan dengan adanya warna abu abu dan

coklat kehitaman (Sonam Sonam, Singh and Pooja, 2017).

Menurut literatur, EMDS mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tanin,

saponin, terpenoid, fenol, steroid, dan glikosida (Syahidah et al, 2017). Menurut

Rinanda, Zulfitri and Alga (2012), EMDSM mengandung senyawa alkaloid,

flavonoid, saponin, triterpenoid, dan tanin. Sedangkan menurut Hartini et al

(2016) EMDSM mengandung minyak atsiri dan tanin. Senyawa alkaloid

mempunyai mekanisme untuk menghambat sintesis asam nukleat dan pembelahan

sel bakteri (Cushnie, Cushnie and Lamb, 2014); senyawa flavonoid menghambat


19

sintesis asam nukleat, menghambat fungsi membran sitoplasma, menghambat

metabolisme energi dari bakteri (Xie et al, 2015); senyawa saponin mempunyai

mekanisme mengubah permeabilitas membran sel sehingga menyebabkan

perubahan morfologi sel dan sel menjadi lisis (Godstime et al, 2014); senyawa

minyak atsiri memiliki mekanisme mendegradasi membran sitoplasma (Nazzaro

et al, 2013); senyawa tanin memiliki mekanisme menganggu permeabilitas sel

(Rinanda, Zulfitri and Alga, 2012).

Hasil pengujian menggunakan uji tabung dilihat dalam Lampiran 7. Hasil

uji menunjukkan bahwa EMDS mengandung senyawa tanin ditandai dengan

timbulnya warna hijau kehitaman; flavonoid ditandai dengan timbulnya warna

merah; minyak atsiri ditandai dengan timbulnya bau khas. EMDSM mengandung

senyawa tanin ditandai dengan timbulnya warna hijau kehitaman; alkaloid

ditandai dengan timbulnya endapan berwarna kuning keputihan ; flavonoid

ditandai dengan timbulnya warna merah; saponin ditandai dengan timbulnya buih

yang mencapai 2 cm; dan minyak atsiri ditandai dengan timbulnya bau khas.

Kombinasi EMDS dan EMDSM perbandingan 1:1; 1:2; dan 2:1 mengandung

senyawa tanin ditandai dengan timbulnya warna hijau kehitaman; alkaloid

ditandai dengan timbulnya endapan berwarna kuning keputihan ; flavonoid

ditandai dengan timbulnya warna merah; dan minyak atsiri ditandai dengan

timbulnya bau khas.

Hasil uji tabung dalam penelitian ini mempunyai perbedaan antara ekstrak

tunggal dengan ekstrak kombinasi dimana pada pengujiam senyawa saponin

memberikan hasil positif dalam ekstrak tunggal EMDSM 200 mg/ml, akan tetapi

dalam ekstrak kombinasi antara EMDS dengan EMDSM kombinasi 1:1; 1:2; dan

2:1 senyawa saponin memberikan hasil negatif. Menurut Bottcher and Drusch

(2015), pembentukan dan stabilitas buih dalam pengujian saponin salah satunya

dipengaruhi oleh pH. Penurunan pH dapat meningkatkan stabilitas buih yang

terbentuk. Kombinasi antara ekstrak yang berbeda juga dapat menyebabkan

perbedaan pH antara ekstrak tunggal dengan ekstrak kombinasi. Dalam penelitian

yang dilakukan oleh Yatmaz and Gokoglu (2015), pH ekstrak teh hijau tunggal

adalah 4,03; pH rosemari tunggal adalah 5,06; pH sodium metabisulfit 4,22; pH


20

kombinasi ekstrak teh hijau dan ekstrak rosemari 3,95; dan pH kombinasi ekstrak

teh hijau, ekstrak rosemary dan sodium metabisulfit adalah 4,56. Perbedaan hasil

pengujian senyawa saponin dalam penelitian ini dapat disebabkan oleh adanya

perbedaan pH antara ekstrak tunggal EMDSM 200 mg/ml dengan ekstrak

kombinasi, sehingga pada perlakuan kombinasi memberikan hasil negatif dan

berbeda dengan ekstrak tunggal EMDSM.

Pengujian menggunakan uji tabung mengidentifikasi adanya senyawa

flavonoid. Akan tetapi dalam pengujian KLT, tidak teridentifikasi adanya

senyawa flavonoid kuersetin dalam EMDS 50 mg/ml; EMDSM 200 mg/ml; serta

kombinasi EMDS dan EMDSM perbandingan 1:1; 1:2; dan 2:1. Berdasarkan hasil

tersebut, dapat terlihat bahwa senyawa flavonoid dalam EMDS 50 mg/ml;

EMDSM 200 mg/ml; serta kombinasi EMDS dan EMDSM perbandingan 1:1; 1:2;

dan 2:1 yang teridentifikasi dalam uji tabung bukan merupakan senyawa

flavonoid kuersetin.

KESIMPULAN DAN SARAN

EMDS tunggal dibandingkan kombinasi (1:1; 1:2) menghasilkan efek

sinergis, EMDS tunggal dibandingkan kombinasi (2:1) menghasilkan efek

indifferent, EMDSM tunggal dibandingkan kombinasi (1:1; 1:2; 2:1)

menghasilkan efek antagonis. Ekstrak kombinasi EMDS dan EMDSM

perbandingan 1:1; 1:2; dan 2:1 mengandung senyawa tanin, flavonoid, alkaloid,

dan minyak atsiri. Perlu peningkatan konsentrasi ekstrak tunggal maupun ekstrak

kombinasi agar pengukuran zona hambat dan profil senyawa antibakteri dapat

terdeteksi dengan jelas. Selain itu juga perlu dilakukan identifikasi kandungan

senyawa antibakteri dalam ekstrak yang akan digunakan sebelum dilakukan

pengujian dengan difusi sumuran.


21

DAFTAR PUSTAKA

Aljamali, N. M., 2015. Identification of Unknown Organic Compound.

Internatonal Journal of Medical Research and Pharmaceutical., 2(2), 1-

7.

Amenu, D., 2014. Antimicrobial Activity of Medicinal Plant Extracts and Their

Synergistic Effect on Some Selected Pathogens. American Journal of

Ethnomedicine., 1 (1), 18-29.

ATCC, 2018. Staphylococcus epidermidis (ATCC® 12228™). ATCC

(Online),https://www.atcc.org/products/all/CRM12228.aspx#culture

method, accessed 28 Maret 2019.

Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010. Acuan Sediaan Herbal. Volume 5.

Edisi 1. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 6-8.

Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2014. Peraturan Kepala Badan Pengawas

Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor 12 Tahun 2014 Tentang

Persyaratan Mutu Obat Tradisional. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan

Makanan, 9-11.

Balouiri, M., Sadiki, M., Ibnsouda, S. K., 2016. Methods for in vitro evaluating

antimicrobial activity : A review. Journal of Pharmaceutical Analysis.,

6, 71-79.

Blesson, J., Saji, C. V., Nivya, R. M., Kumar, R., 2015. Synergistic Antibacterial

Activity of Natural Plant Extracts and Antibiotics Against Methicillin

Resistant Staphylococcus aureus (MRSA). World Journal of Pharmacy

and Pharmaceutical Sciences., 4 (3), 741-763.

Bottcher, S., Drusch, S., 2015. Interfacial Properties of Saponin Extract and Their

Impact on Foam Characteristic. CrossMark.,1-10.

Brooks, G.F., Carroll, K.C., Butel, J.S., Stephen A. Morse, S.A., Timothy A.

Mietzner, T.A., 2013. Medical Microbiology. 26th

ed., USA: McGraw-

Hill Companies, 199.

Chanda, S., Rakholiya, R., 2011. Combination therapy: Synergism between

natural plant extracts and antibiotics against infectious diseases. Science


https://www.atcc.org/products/all/CRM12228.aspx#culture method

https://www.atcc.org/products/all/CRM12228.aspx#culture method

22

against microbial pathogens: communicating current research and

technological advances A. Méndez-Vilas (Ed.)., 520-528.

Ciulei, J. 1984. Methodology for Analysis of Vegetables and Drugs. Bucharest:

Faculty of Pharmacy. pp. 11-26.

Clinical and Laboratory Standards Institute, 2018. Performance Standards for

Antimicrobial Susceptibility Testing. 27th

ed. USA: Clinical and

Laboratory Standards Institute, 38, 54.

Cushnie, T. P. T., Cushnie, B., and Lamb, A. J., 2014. Alkaloids : An overview

of their antibacterial, antibiotic-enhancing and antivirulence activities.

International Journal of Antimicrobial Agent., 44, 377-386.

Departemen Kesehatan RI, 1979. Materia Medika Indonesia. Jilid 3. Jakarta :

Departemen Kesehatan RI, 168-171.

Departemen Kesehatan RI, 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta :

Departemen Kesehatan RI, 1-18.

Departemen Kesehatan RI, 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan

Obat. Cetakan 1. Jakarta: Departemen Kesehatan RI, 10-11.

Diaseptana, Y. M. S., 2017. Perbandingan Aktivitas Antibakteri Infusa

Kombinasi Daun Sirih (Piper betle L.) dan Daun Sirih Merah (Piper

crocatum Ruiz & Pav.) Dengan Infusa Tunggalnya Terhadap Bakteri

Staphylococcus epidermidis. Yogyakarta: Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma., 11-14.

Direktorat Jendral Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011. Farmakope

Herbal. Suplemen II. Edisi I, Jakarta: Kementerian Kesehatan RI, 105-

111.

Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 2008. Farmakope Herbal

Indonesia. Edisi I, Jakarta : Departemen Kesehatan RI, Jakarta, hal 174.

Dwiatmaka, Y., 2010. Identifikasi Flavonoid Herba Pegagan Embun (Hydrocotyle

sibthorpiodes Lmk.) Hasil Isolasi Secara KLTP Serta Uji Kemurniannya

dengan HPLC. SIGMA., 13(2), 167-177.

Feng, W., Hao, Z., Li, M., 2017. Isolation and Structure Identification of

Flavonoids. INTECH., 18-34


23

Godstime, O., Felix, E., Augustina, J., Christopher, E., 2014. Mechanisms of

Antimicrobial Actions of Phytochemical against Enteric Pathogens-A

Review. Journal of Pharmaceutical, Chemical and Biological

Science., 2(2), 77-85.

Handa, S. S., Khanuja, S. P. S., Longo, G., Rakes, D. D., 2008. Extraction

Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. Italy: United Nations

Industrial Development Organization and the International Centre for

Science and High Technology, 22, 31.

Hartini, Y. S., Diaseptana, Y. M. S., Putri, R. N., Susanti, L. E., 2018.

Antagonistic Antibacterial Effect of Betel and Red Betle Combination

Againts Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria. International

Journal of Current Microbiology and Aplied Sciences., 7(5), 267-272.

Hartini, Y. S., Wahyuono, S., Widyarini, S., Yuswanto, A., 2013. Uji Aktivitas

Fagositosis Makrofag Fraksi-fraksi dari Ekstrak Metanol Daun Sirih

Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) Secara In Vitro. Jurnal Ilmu

Kefarmasian Indonesia., 11(2), 108-115.

Kesarkar, S., Bhandage, A., Deshmukh, S., Shevkar, K., Abhyankar, M., 2009.

Flavonoids: An Overview. Journal of Pharmacy Research., 2(6), 1148-

1154.

Kursia, S., Lebang, J. S., Taebe, B., Rahim, A. B. W. O. R., Nursamsiar., 2016.

Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etilasetat Daun Sirih Hijau (Piper

betle L.) terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis. IJPST., 3(2)., 72-

76

Kusuma, S. F. K., Zuhrotun, A., Meidina, F.B., 2016. Antibacterial Spectrum of

Ethanol Extract of Indonesian Red Piper Betel Leaf (Piper crocatum

Ruiz & Pav) Against Staphylococcus species. International Journal of

Pharma Sciences and Research., 7 (11), 448-451.

MacGowan, A., and Macnaughton, E., 2013. Antibiotic Resistance. Prevention

and Control of Infection., 41 (11), 642-648.

Madduluri, S., Rao, K. R., and Siratam, B., 2013. In Vitro Evaluation of

Antimibacterial Activity of Five Indigenous Plants Extracts Against


24

Five Bacterial Pathogens of Human. International Journal of

Pharmacy and Pharmaceutical Sciences., 5 (4), 679-684.

Nazzaro, F., Fratianni, F., Martino, L. D., Coppola, R., Feo, V. D., 2013. Effect

of Essential Oils on Pathogenic Bacteria. Pharmaceutical., 6, 1451-

1474.

Nela., Yuniarni, U., and Prayugo, D., 2016. Antibacterial Activity of Pluchea

indica and Piper betle Ethanol Extract on Staphylococcus epidermidis

and Pseudomonas aeruginosa. Pharmacology and Clinical Pharmacy

Research., 2614 (20), 62-67.

Nouri, L., Nafchi, A. M., and Karim, A. A., 2014. Phytochemical, antioxidant,

antibacterial, and α-amylase inhibitory properties of different extract

from betel leaves. Industrial Crops and Product., 62, 47-52.

Otto, M., 2009. Staphylococcus epidermidis the accidental pathogen. Nature

Reviews Microbiology., 7 (8), 555-567.

Panche, A. N., Diwan, A. D., Chandra, S. R., 2016. Flavonoids: An Overview.

Journal of Nutritional Science, 5(47), 1-15.

Pandey, A., and Tripathi, S., 2014. Concept of standardization, extraction and pre

phytochemical screening strategies for herbal drug. Journal of

Pharmacognosy and Phytochemistry., 2 (5), 115-119.

Pubchem, 2018. Methyl Alcohol. Pubchem (Online),

https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/methanol#section,

accessed 12 Desember 2018.

Reveny, J., 2011. Daya Antimikroba Ekstrak dan Fraksi Daun Sirih Merah.

Journal Ilmu Dasar., 12 (1), 6-12.

Rinanda, T., Zulfitri., Alga, D. M., 2012. Antibacterial activity of red betel (Piper

crocatum) leaf methanolic extracts aginst methicillin resistant

Staphylococcus aureus. In: Proceeding - The 2nd Annual International

Conference Syiah Kuala University 2012 & The 8th IMT-GT Uninet

Biosciences Conference., 2(1), 270-275.

Sa’adah, H., Nurhasnawati, H., dan Permatasari, V., 2017. Pengaruh Metode

Ekstraksi terhadap Kadar Flavonoid Ekstrak Etanol Umbi Bawang


https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/methanol#section

25

Dayak (Eleutherine palmifolia(L.)Merr) dengan Metode

Spektrofotometri. Jurnal Borneo Journal of Pharmascientech., 1(1), 4-8.

Santoso, A. R., 2017. Uji Efek Kombinasi Antibiotik Ampicilin dengan Ekstrak

Metanol Daun Sirih (Piper betle L.) terhadap Pertumbuhan

Staphylococcus aureus. Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas

Sanata Dharma., 8-14.

Sendy, A. A. A., Pujiastuti, P., dan Ernawati, T., 2014. Daya Antibakteri Ekstrak

Daun Sirih Merah (Pipper crocatum) Terhadap Porphyromonas

gingivalis (Antibacterial Power of Red Betel Leaf Extract Against

Porphyromonas gingivalis). Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa.

Siriwong, S., Teethaisong, Y., Thumanu, K., Dunkhunthod, B., Eumkeb, G.,

2016. The synergy and mode of action of quercetin plus amoxicillin

against amoxicillin-resistant Staphylococcus epidermidis. BMC

Pharmacology and Toxicology., 2-14.

Skorek, M., Jurczyk, K., Sajewicz, M., and Kowalska, T., 2016. Thin-Layer

Chromatographic Identification of Flavonoids and Phenolic Acids

Contained in Cosmetic Raw Materials. Journal of Liquid

Chromatography & related Technologies., 39 (5-6), 286-291.

Sonam, M., Singh, R. P., Pooja, S., 2017. Phytochemical Screening and TLC

Profiling of Various Extracts of Reinwardtia indica. International

Journal of Pharmacognosy and Phytochemical Research., 9(4), 523-527.

Susanti, N. M. P., Dewi, L. P. M. K., Manurung, H. S., dan Wirasuta, I. M. A. G.,

2017. Identifikasi Senyawa Golongan Fenol Dari Ekstrak Etanol Daun

Sirih Hijau (Piper betle Linn.) dengan Metode KLT-

spektrofotodensitometri. Journal Metafora Journal of Biological

Sciences., IV (1), 108-113.

Syahidah, A., Saad, C. R., Hassan, M. D., Rukayadi, Y., Norazian, M. H.,

Kamarudin, M. S., 2017. Phytochemical Analysis, Identification and

Quantification of Antibacterial Active Compounds in Betel Leaves,

Piper betle Methanolic Extract. Research Article., 20(2), 70-81.


26

Talamond, P., Verdeil, J. L., Cenejero, G., 2015. Secondary Metabolite

Localization bt Autofluorescence in Living Plant Cells. Molecules., 20,

5024-5037.

Thangaraj, P., 2016. Pharmacological Assays of Plant-Based Natural Products.

Switzerland: Springer International Publishing., 12.

Wagner, H., Bladt, S., and Zgainski, E. M., 1983. Plant Drug Analysis, A Thin

Layer Chromatography Atlas. 2nd

edition. Berlin:Springer Verlag., 90.

World Health Organization, 2011. Quality Control for Herbal Material.

Switzerland: World Health Organization., 1-51.

Xie, Y., Yang, W., Tang, F., Chen, X., Ren, L., 2015. Antibacterial Activities

of Flavonoids : Structure-Activity Relationship and Mechanism.

Current Medical Chemistry., 22, 132-149.

Yang, L., Wen, K. S., Ruan, X., Zhao, Y. X., Wei, F., Wang, Q., 2018.

Response of Plant Secondary Metabolites to Environmental Factors.

MPDI., 23(762), 1-26.

Yatmaz, H. A., Gokoglu, N., 2015. Effects of Plant Extract-Sulphide

Combinations on Melanosis Inhibition and Quality in Shrimp (Aristeus

antennatus). International Journal of Food Properties., 1-14.


27

LAMPIRAN

Lampiran 1. Hasil Determinasi Daun Piper betle L.


28

Lampiran 2. Hasil Determinasi Daun Piper crocatum Ruiz & Pav.


29

Lampiran 3. Hasil Uji Identifikasi Bakteri


30

Lampiran 4. Penetapan kadar air Piper betle L. dan Piper crocatum Ruiz & Pav.

(a)

Penetapan kadar air Piper betle L.

(b)

Penetapan kadar air Piper crocatum Ruiz

& Pav.


31

Lampiran 5. Uji difusi sumuran variasi konsentrasi EMDS dan EMDSM

Keterangan :

A : Kontrol negatif

B : EMDS 25 mg/ml

C : EMDS 50 mg/ml

D : EMDS 100 mg/ml

E : EMDS 200 mg/ml

*EMDS = Ekstrak Metanol Daun

Piper betle L.

(a). Uji difusi sumuran variasi konsentrasi EMDS

Keterangan :

A : Kontrol negatif

B : EMDSM 25 mg/ml

C : EMDSM 50 mg/ml

D : EMDSM 100 mg/ml

E : EMDSM 200 mg/ml

*EMDSM = Ekstrak Metanol Daun

Piper crocatum Ruiz & Pav.

(b). Uji difusi sumuran variasi konsentrasi EMDSM


32

Lampiran 6. Data Uji Statistik


33

Test Statisticsa,b

Zona Hambat

Kruskal-Wallis H 16.334

df 5

Asymp. Sig. .006


34

Lampiran 7. Hasil Uji Kualitatif menggunakan Uji Tabung

a. EMDS 50 mg/ml

Jenis Skrining Sebelum Sesudah Hasil

Uji Tanin

+

Positif

Uji Alkaloid

-

Negatif

Uji Saponin

-

Negatif

Uji Flavonoid

+

Positif

Uji Minyak

Atsiri

+

Positif

Pem

ban

din

g

Alk

aloid


35

b. EMDSM 200 mg/ml


Uji Tanin

+

Positif

Uji Alkaloid

+

Positif

Uji Saponin

+

Positif

Uji Flavonoid

+

Positif

Uji Minyak

Atsiri

+

Positif

Pem

ban

din

g

Alk

aloid


36

c. Kombinasi perbandingan1:1


Uji Tanin

+

Positif

Uji Alkaloid

+

Positif

Uji Saponin

_

Negatif

Uji Flavonoid

+

Positif

Uji Minyak

Atsiri

+

Positif

Pem

ban

din

g

Alk

aloid


37

d. Kombinasi perbandingan 1:2


Uji Tanin

+

Positif

Uji Alkaloid

+

Positif

Uji Saponin

_

Negatif

Uji Flavonoid

+

Positif

Uji Minyak

Atsiri

+

Positif

Pem

ban

din

g

Alk

aloid


38

e. Kombinasi perbandingan 2:1


Uji Tanin

+

Positif

Uji Alkaloid

+

Positif

Uji Saponin

-

Negatif

Uji Flavonoid

+

Positif

Uji Minyak

Atsiri

+

Positif

Pem

ban

din

g

Alk

alo

id


39

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi bernama Galang Adityas, lahir di Yogyakarta

pada tanggal 5 Juni 1997. Penulis merupakan anak pertama

dari dua bersaudara dari pasangan TH. CH. Seta Nugraha dan

Lucilla Mintati. Penulis menempuh pendidikannya di SD

Kanisius Ganjuran, SMP Kanisius Bambanglipura, SMA

Negeri 1 Bantul, dan pada tahun 2015 melanjutkan pendidikan

di Program Studi Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Selama

perkuliahan, penulis aktif mengikuti kegiatan seminar dan kepanitiaan

seperti Seminar Nasional 2016 Intraprofesional Health Care “Good Team Good

Work, Good Result for the Better Future, Seminar Nasional 2017 “Peran Farmasis

dalam Industri Kosmetik”, anggota seksi panitia AKSI Osteoporosis JMKI,

koordinator seksi panitia Desa Mitra 1, anggota seksi panitia Desa Mitra 2,

anggota seksi panitia Seminar Nasional 2017 “Peran Farmasis dalam Industri

Kosmetik”, anggota seksi panitia Herbal Cosmetic Competition, Volunteer

Kampanye Informasi Obat Tuberkulosis, dan berbagai kepanitiaan di gereja dan

lingkungan rumah.


Documents

UJI EFEK KOMBINASI EKSTRAK METANOL DAUN Piper betle L. … · UJI EFEK KOMBINASI EKSTRAK METANOL DAUN Piper betle L. ... 5. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt dan Ibu Damiana Sapta Candrasari,