UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN STEVIA (Stevia ...repository.poltekkesbdg.info/files/original/8030ee... · penelitian dan penulisan Karya Tulis Ilmiah. (3) Hanifa Rahma, M.Si.,Apt

UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL

DAUN STEVIA (Stevia rebaudiana Bertoni) TERHADAP

Streptococcus mutans BERDASARKAN WAKTU KONTAK

KARYA TULIS ILMIAH

Disusun oleh :

FEFY FEBRIANI

P17335113054

POLTEKKES KEMENKES BANDUNG

JURUSAN FARMASI

2016

1

i

UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL

DAUN STEVIA (Stevia rebaudiana Bertoni ) TERHADAP


KARYA TULIS ILMIAH

Diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan program Diploma III

Disusun oleh :

FEFY FEBRIANI

P17335113054

POLTEKKES KEMENKES BANDUNG

JURUSAN FARMASI

2016

i

ii

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS

Karya Tulis Ilmiah ini adalah hasil karya saya sendiri,

Dan semua sumber baik yang dikutip maupun

dirujuk Telah saya nyatakan dengan benar.

Nama : Fefy Febriani

NIP : P17335113054

Tanda Tangan :

Tanggal : 14 Juni 2016

ii

v

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis pajatkan kehadirat Allah SWT yang telah memberikan

rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan

penulisan Karya Tulis Ilmiah selsai tepat pada waktunya. Karya Tulis Ilmiah ini

disusun untuk melengkapi salah satu syarat manyelesaikan program Diploma III

jurusan Farmasi pada Program Studi DIII Farmasi Politeknik Kesehatan Bandung, dengan judul “UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN

STEVIA (Stevia rebaudiana Bertoni ) TERHADAP Streptococcus mutans

BERDASARKAN WAKTU KONTAK”

Penulis menyadari bahwa, tanpa bantuan dan bimbingan dari pihak, dari

masa perkuliahan sampai pada penyusunan KTI, sangatlah sulit bagi penulis untuk

menyelesaikan karya tulis ini. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terima kasih

kepada :

(1) Dra Mimin Kusmiyati, M.Si. selaku ketua Jurusan Farmasi Politeknik

Kesehatan Bandung.

(2) Dra Sri Redjeki, M.Si. selaku dosen pembimbing, yang telah

mengarahkan dan memberikan masukan-masukan bagi penulis selama

penelitian dan penulisan Karya Tulis Ilmiah.

(3) Hanifa Rahma, M.Si.,Apt dan Dra.Tita Puspita, Apt.,M.Pharm selaku

penguji yang telah memberikan kritik dan saran yang bermamfaat bagi

penulis; dan

(4) Seluruh dosen dan staff Jurusan Farmasi Poltekkes Bandung yang

senantiasa memberikan dukungan penuh terhadap mahasiswanya untuk

senantiasa menjadi pribadi dan lulusan prodi D-III farmasi yang

terbaik

Akhir kata, penulis berharap Allah SWT berkenan membalas segala

kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga Karya Tulis Ilmiah ini

membawa manfaat bagi pengembang ilmu.

Bandung, 14 Juni 2016

Penulis

v

vii

UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN STEVIA (Stevia rebaudiana Bertoni) TERHADAP


FEFY FEBRIANI

Karies gigi merupakan suatu penyakit infeksi yang dapat menular terutama pada jaringan keras gigi, sehingga terjadi kerusakan jaringan setempat. Proses terjadinya kerusakan pada jaringan keras gigi melalui suatu reaksi kimiawi oleh bakteri. Salah satu bakteri yang dapat menyebabkan karies gigi adalah Streptococcus mutans. Tujuan penelitian adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) terhadap S. mutans dengan berbagai waktu kontak, pengujian dilakukan dengan metode dilusi dengan waktu kontak 5, 10 dan 15 menit. Kerapatan bakteri uji S. mutans yang

digunakan sebanyak 3x106 cfu/ml. Konsentrasi yang digunakan adalah 60, 30, 15,

7,5, 3,75 dan 1,875%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) memiliki aktivitas antibakteri bersifat bakterisid pada konsentrasi 7,5% dengan waktu kontak 10 menit dan konsentrasi 15% dengan waktu kontak 5 menit. Kesimpulan dari penelitian bahwa konsentrasi dan waktu kontak mempengaruhi aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) terhadap S. mutans. Saran: perlu dilakukan pengujian lebih lanjut dengan waktu kontak yang lebih cepat.

Kata kunci : aktivitas antibakteri, daun stevia (Stevia rebaudiana Bertoni),

Streptococcus mutans, waktu kontak.

vii

viii

ASSAY ACTIVITY of ETHANOL EXTRACT The LEAVES of STEVIA (Stevia rebaudiana Bertoni) against

Streptococcus mutans TIME BASED CONTACT

FEFY FEBRIANI

Dental caries is an infectious disease that can be transmitted primarily on dental hard tissues, cause the local tissue damage. The process of occurrence of dental hard tissue damage through a chemical reaction by bacteria. One of the bacteria that cause dental caries is the Streptococcus mutans. The aim of this study was to know the antibacterial activity of ethanol extracts of leaves of Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) against S. mutans with various contact time, testing was performed with dilution method with contact time 5, 10 and 15 minutes. The

density of the bacterium s. mutans trials that used as many as 3x106 cfu/ml.

Concentration used is 60, 30, 15, 7.5, and 3.75,1,875 %. The results showed that the ethanol extract of the leaves of Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) has antibacterial activity are bakterisid on the concentration of 7.5% with 10-minute contact time and concentration of 15% with contact time of 5 minutes. The conclusions of the research that the concentration and contact time influencing the antibacterial activity of ethanol extracts of leaves of Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) against s. mutans. Tip: need to do further testing with a time of contak is faster.

Keywords : antibacterial activity, leaf of Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni),

Streptococcus mutans, the time of contact.

viii

ix

Saya persembahkan Karya Tulis Ilmiah ini kepada keluarga

tercinta terutama kedua orang tua saya, kakak, adik, nenek

yang tidak pernah berhenti memberikan dukungan dan doanya

Terima kasih, kepada Dra Sri Redjeki, M.Si selaku pembimbing

bidang Mikrobiologi yang tidak pernah bosan membimbing kami

dalam penyusunan Karya Tulis Ilmiah ini

Terima kasih juga kepada teman seperjuangan yang selalu memberikan

semangat dan bantuannya dalam menghadapi

segala situasi selama ini bersama-sama.

ix

x

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................. i

LEMBAR PENGESAHAN ...................................................................... iv

KATA PENGANTAR ............................................................................... v

LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH .............. vi

ABSTRAK ................................................................................................. vii

DAFTAR ISI .............................................................................................. x

DAFTAR TABEL ..................................................................................... xii

DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xiii

DAFTAR SINGKATAN ........................................................................... xiv

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ xv

1. PENDAHULUAN .............................................................................. 1

1.1 Latar Belakang ............................................................................ 1

1.2 Rumusan Masalah ...................................................................... 3

1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................ 3

1.4 Manfaat Penelitian ...................................................................... 3

2. TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................... 4

2.1 Tinjauan Pustaka ........................................................................ 4

2.1.1 Karies Gigi ......................................................................... 4

2.1.2 Diagnosis Karies ................................................................ 6

2.1.3 Peran Mikroba Mulut Normal dalam Karies Gigi ............. 6

2.1.4 Streptococcus mutans ........................................................ 7

2.2 Deskripsi Tanaman Stevia rebaudiana ........................................ 10

2.3 Ekstraksi ...................................................................................... 12

2.4 Kerangka Konsep ....................................................................... 14

2.5 Definisi Operasional ................................................................... 15

3. METODE PENELITIAN .................................................................. 16

3.1 Jenis Penelitian ........................................................................... 16

3.2 Populasi dan Sampel ................................................................... 16

x

xi

3.2.1 Populasi ............................................................................. 16

3.2.2 Sampel ............................................................................... 16

3.3 Bakteri Uji .................................................................................. 16

3.4 Tempat dan Waktu...................................................................... 16

3.5 Cara Pengumpulan Data ............................................................. 17

3.5.1 Alat dan Bahan .................................................................. 17

3.5.2 Pengambilan Sampel ......................................................... 17

3.5.3 Pembuatan Serbuk Simplisia ............................................. 17

3.5.4 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Stevia ............................ 18

3.5.5 Pemeriksaan Karakteristik Serbuk Simplisia

dan Ekstrak Etanol Daun Stevia ........................................ 18

3.5.6 Penapisan Fitokimia ......................................................... 19

3.5.7 Sterilisasi Alat dan Media................................................. 20

3.5.8 Pembuatan Media ............................................................. 20

3.5.9 Pewarnaan Gram............................................................... 21

3.5.10 Peremajaan Bakteri .......................................................... 21

3.5.11 Pembuatan Standar Kekeruhan Larutan .......................... 21

3.5.12 Pembuatan Suspensi Bakteri ........................................... 22

3.5.13 Pembuatan Larutan Uji .................................................... 22

3.6 Pengujian Aktivitas Antibakteri Waktu Kontak....................... 22

3.7 Analisis Data ............................................................................ 22

4.HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .............................. 24

5. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................ 31

5.1 Kesimpulan .............................................................................. 31

5.2 Saran ......................................................................................... 31

6. DAFTAR PUSTAKA ...................................................................... 32

7. LAMPIRAN ..................................................................................... 35

xi

xii

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Tabel Definisi Operasional .................................................................. 15

Tabel 4.1 Hasil Pemeriksaan Karakteristik

Ekstrak Etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) .......... 25 Tabel 4.2 Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) ........................................ 26

Tabel 4.3 Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) Dengan Berbagai

Waktu Kontak Pada Media Cair ........................................................ 28

Tabel 4.4 Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) Dengan Berbagai

Waktu Kontak Pada Media Padat ...................................................... 29

xii

xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Streptococcus mutans ............................................................................ 7

Gambar 2. Stevia rebaudiana Bertoni ................................................................... 10

Gambar 3. Kerangka konsep penelitian................................................................. 14

xiii

xiv

DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG

SINGKATAN NAMA Pemakaian pertama

kali pada halaman

S. mutans Streptococcus mutans 1

pH potensial Hidrogen 4

cfu colony forming unit 9

ml mililiter 9

cm centimeter 10

LAF Laminar air flow 20

MHA Muller Hinton Agar 20

MHB Muller Hinton Broth 21

TSA Tryptic Soy Agar 21

ATCC American Type Cultur Collection 21

LAMBANG

0C derajat Celsius 7 < kurang 7 % persen 10

> lebih 10

± kurang lebih 20

µl microliter 20

+ positif 26

- negatif 26

xiv

xv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Gambar Simplisia Kering Daun

Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) .......................................... 35

Lampiran 2 Hasil Determinasi Tumbuhan Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) .......................................... 36

Lampiran 3 Bagan Pembuatan Ekstrak Etanol Daun


Lampiran 4 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun


Lampiran 5 Ekstrak Etanol Daun


Lampiran 6 Perhitungan Rendemen Ekstrak ................................................. 40 Lampiran 7 Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol Daun


Lampiran 8 Pembuatan Variasi Konsentrasi Ekstrak Etanol

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) .............................. 43

Lampiran 9 Pewarnaan Bakteri ......................................................................... 44

Lampiran 10 Pembuatan Media dan Gambar Suspensi Bakteri................. 45

Lampiran 11 Gambar Hasil Penelitian .............................................................. 46

xv

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Gula merupakan bahan pemanis makanan dan minuman yang diproses

secara alami maupun sintetis. Dewasa ini banyak pemakaian bahan pemanis selain

sukrosa dalam pembuatan makanan dan minuman, terutama bahan pemanis

buatan. Gula selain digunakan sebagai makanan pokok juga dikonsumsi sebagai

makanan ringan atau camilan seperti yang terdapat di dalam permen, kue dan

biskuit. Jenis gula yang paling banyak digunakan adalah sukrosa. Sukrosa dalam

makanan adalah penyebab utama karies gigi. Sukrosa mampu difermentasi oleh

bakteri kariogenik sehingga dapat menyebabkan karies gigi (Rukmana, 2011).

Karies gigi merupakan suatu penyakit infeksi yang dapat menular dan

terutama pada jaringan keras gigi, sehingga terjadi kerusakan jaringan setempat.

Proses terjadinya kerusakan pada jaringan keras gigi melalui suatu reaksi kimiawi

oleh bakteri, dimulai dengan proses kerusakan pada bagian anorganik, kemudian

berlanjut pada bagian organik. bakteri berperan penting pada proses terjadinya

karies gigi. Salah satu spesies bakteri yang dominan dalam mulut yaitu Streptococcus mutans (Levelle dalam jurnal Ardo Sabir, 2005).

S.mutans merupakan bakteri anaerob fakultatif Gram positif yang dikenal

dapat menghasilkan asam laktat sebagai bagian dari hasil metabolisme yang

berguna untuk hidup bakteri tersebut. S.mutans memiliki kemampuan untuk

mengikat sukrosa pada permukaan gigi dengan pembentukan glukan tidak larut air

dan polisakarida yang membantu dalam mengikat bakteri pada gigi. S.mutans

dapat menurunkan atau mempertahankan pH mulut pada nilai wajar asam, yang

menyebabkan kondisi yang menguntungkan untuk metabolismenya sendiri dan

tidak menguntungkan bagi spesies lain yang hidup berdampingan. Penurunan pH

yang disebabkan oleh S.mutans dapat memfermentasi gula menjadi asam. Asam

ini menempel pada email gigi yang menyebabkan terjadinya deminerelisasi pada

1

2

gigi dan kanvitas pada gigi. S.mutans juga yang mampu memproduksi glukosil

transferase (GTF) yang dapat mengubah sukrosa menjadi glukan dan selanjutnya

membentuk plak gigi (Simon, 2007).

Mekanisme pembentukan plak gigi terdiri atas dua tahap, pertama

merupakan tahap pembentukan lapisan acquired pelicle sementara tahap kedua

merupakan tahap proliferasi bakteri. Hanya bakteri yang dapat membentuk

polisakarida ekstraseluler yang dapat tumbuh pada tahap pertama, yaitu S.mutans,

S.bovis, S.sanguins, S.salivarius (Putri, 2013). Salah satu kandungan senyawa

kimia yang penting dalam aktivitas antibakteri adalah flavonoid, merupakan salah

satu senyawa fenol alami yang tersebar luas pada tumbuhan (Sabir, 2005).

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) merupakan semak liar keluarga

Asteraceae (Compositae) yang memiliki efek sebagai antibakteri yang dapat

menghambat bakteri penyebab karies pada gigi (Gamboa dan Chaves d, 2012).

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) juga merupakan pemanis alami yang 300

kali lebih manis dari sukrosa dengan karakteristik sebagai antibakteri, antivirus,

anti-inflamasi, antifungi dan antimikroba. Alkaloid, tannin dan flavonoid adalah

zat aktif yang terkandung dalam daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang

bekerja sebagai aktibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri

khususnya bakteri Gram positif dan memiliki aktivitas antiplak. Alkaloid dapat

bekerja sebagai penghambat sintesis dinding sel bakteri, tannin sebagai

penghambat sintesis asam nukleat bakteri dan flavonoid sebagai penghambat

mensintesis protein bakteri (Karao et al., 2006; Dewi et al., 2013 dalam penelitian

Putri,2014).

Berdasarkan uraian tersebut, peneliti tertarik untuk melakukan penelitian

Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) dapat menghambat S.mutans apabila dilihat

berdasarkan waktu dan konsentrasi, sehingga peneliti ingin mengetahui waktu

kontak antara Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) terhadap bakteri S. mutans pada

konsentrasi tertentu.

2

3

1.2 Rumusan Masalah

1. Apakah Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) mempunyai aktivitas sebagai

antibakteri terhadap S.mutans sebagai penyebab karies gigi? 2. Pada konsentrasi berapakah Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) dapat

menghambat S.mutans? 3. Berapa lama waktu kontak Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang

dibutuhkan dalam menghambat pertumbuhan S.mutans?

1.3 Tujuan Penelitian

1. Untuk mengetahui Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) mempunyai

aktivitas sebagai antibakteri terhadap S.mutans sebagai penyebab karies

gigi 2. Untuk mengetahui konsentrasi Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang

dapat menghambat S.mutans 3. Untuk mengetahui waktu kontak Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang

dibutuhkan dalam menghambat pertumbuhan S.mutans? 1.4 Manfaat

1. Bagi Peneliti

Menerapkan ilmu yang diperoleh selama kuliah dalam bentuk aplikasi

penelitian dan tugas akhir berupa Karya Tulis Ilmiah sebagai persyaratan

menyelesaikan Program Diploma III di Politeknik Kesehatan Bandung

Jurusan Farmasi 2. Bagi Lembaga

Sebagai sumber informasi dan tambahan pengetahuan bagi mahasiswa

yang akan melakukan penelitian lebih lanjut 3. Bagi Masyarakat

Sebagai bahan informasi kepada masyarakat bahwa daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni) dapat menghambat bakteri S.mutans pada

pertumbuhan plak dan karies gigi, sehingga dapat mengembangkan inovasi

baru pada sediaan permen antiseptik yang terbuat dari bahan herbal.

3

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Pustaka

2.1.1 Karies Gigi

Karies gigi adalah nama kolektif untuk kerusakan gigi di enamel (zat

mahkota gigi). Gigi dapat berlubang karena bakteri tertentu yang memproduksi

asam laktat dari hasil fermentasi karbohidrat, seperti sukrosa, fruktosa, dan

glukosa. Gigi tediri dari mineral yang secara konstan mengalami proses

demineralisasi. Demineralisasi merupakan proses hilangnya atau terbuangnya

garam mineral yaitu hidroksiapatit pada enamel gigi sedangkan Remineralisasi

merupakan kebalikan dari demineralisasi dimana garam-garam mineral kembali

ke enamel gigi. Demineralisasi terjadi karena pemakaian gigi, terutama karena

makanan yang mengandung asam. Remineralisasi gigi terjadi dengan bantuan air

liur, pasta gigi, dan obat kumur. Ketika pH pada permukaan gigi turun dibawah

5,5 karena asam laktat yang diproduksi bakteri, demineralisasi lebih cepat dari

remineralisasi sehingga gigi “tekor” mineral. Hal ini dapat mengarah ke gigi

berlubang (Putri, 2013).

Gigi merupakan tempat bagi menempelnya mikroba, ada dua spesies

bakteri yang dijumpai berasosiasi dengan permukaan gigi : Streptococcus sanguis

dan Streptococcus mutans yang diduga merupakan unsur etiologi (penyebab)

utama kerusakan gigi, atau pembusuk gigi. Tertahannnya kedua spesies pada

permukaan gigi merupakan akibat sifat adhesif baik dari glikoprotein liur maupun

polisakaride bakteri. Sifat menempel sangat penting bagi kolonisasi bakteri di

dalam mulut. Glikoprotein liur mampu menyatukan bakteri-bakteri tertentu dan

mengikatkan mereka pada permukaan gigi baik S. sanguis dan S. mutans

menghasilkan polisakaride ekstrak selular yang disebut dekstan yang bekerja

seperti perekat, mengikat sel-sel bakteri menjadi satu dan juga melekatkan mereka

4

5

juga pada permukaan gigi. Agregasi bakteri semacam itu serta bahan organik pada

permukaan gigi disebut plak “plague” (Pelczar, 2012).

Karies gigi adalah hasil dari bakteri di permukaan gigi, plak atau biofilm,

dan diet (khususnya komponen karbohidrat yang dapat difermentasikan oleh

bakteri plak menjadi asam, terutama asam laktat dan asetat) sehingga terjadi

demineralisasi jaringan keras gigi dan memerlukan cukup waktu untuk

kejadiannya. Terjadinya karies, harus ada 3 faktor yang ada secara bersama-sama.

Ketiga faktor tersebut adalah: (1) Bakteri kariogenik; (2) permukaan gigi yang

rentan, (3) tersedianya bahan nutrisi untuk mendukung pertumbuhan bakteri. Demineralisasi pada gigi (demineralisasi email gigi terjadi pada pH 5,5 atau

sebagian diantaranya, yang dikenal dengan S. mutans, merupakan organisme

penyebab karies. S. mutans adalah penyebab utama karies gigi pada mahkota

karena sifatnya yang: (1) menempel pada email; (2) menghasilkan dan dapat

hidup dilingkungan asam; (3) berkembang pesat di lingkungan yang kaya sukrosa;

dan (4) menghasilkan bakteriosin, substansi yang dapat membunuh organisme

kompetitornya.

Transfer ion secara terus-menerus terjadi antara plak dan email yang

berhadapan dengannya. Dekalsifikasi awal terjadi di subsurface dan mungkin

terjadi 1-2 tahun sebelum menjadi kavitas. Setelah terjadi kavitas email, dentin

yang mendasari juga sudah terpengaruh oleh destruksi tersebut, dan selanjutnya

Laktobacilus menjadi bakteri utama berikutnya untuk merusak dentin lebih lanjut.

Dengan terpaparnya plak terhadap nutrien (terutama sukrosa),

metabolisme dengan plak menghasilkan asam yang menyebabkan demineralisasi

struktur gigi. Jika nutrien atau plak dihilangkan, ion-ion dari saliva (natrium,

kalium atau kalsium) meremineralisasi struktur gigi, dalam upaya memperbaiki

komponen ion di struktur gigi. Jika terdapat fluoride, bahan ini akan diambil oleh

struktur gigi dan membentuk fluorapatit di email, yang lebih resisten terhadap

serangan demineralisasi berikutnya daripada email normal (Putri, 2013).

5

6

2.1.2 Diagnosis Karies

Dalam mengelola karies, tujuan terfokus pada diagnosa (terutama

mengidentifikasi individu yang beresiko tinggi karies), ukuran-ukuran

pencegahan, dan modalitas perawatan. Pengelolaan karies harus terarah, bukan

hanya sebatas gigi (perawatan tradisional atau tindakan yang menyangkut bedah),

tapi pada keseluruhan pasien (perawatan model medis). Penambalan saja tidak

cukup untuk menangguangi proses karies. Mengidentifikasi dan menghilangkan

faktor-faktor penyebab karies harus menjadi perhatian utama, kemudian baru

memperbaiki kerusakkan akibat karies (Putri, 2013).

2.1.3 Peranan mikroba mulut normal dalam karies gigi

Karies adalah disintegrasi gigi yang dimulai pada permukaan dan

berkembang kedalam. Pertama email permukaan yang secara keseluruhan

nonseluler mengalami demineralisasi, berkaitan dengan efek produksi asam

fermentasi bakteri. Dekomposisi dentin dan semen setelahnya melibatkan

pencernaan matriks protein oleh bakteri.

Plak gigi telah dipandang dan ditangani sebagai biofilm kompleks, yang

dapat didefinisikan secara sederhana sebagai akumulasi mikroba di dalam matriks.

Keuntungan bagi mikroba berada di dalam biofilm meliputi perlindungan dari

bahaya lingkungan (termasuk antimikroba) dan peningkatan efektifitas pengaturan

ruang yang memaksimalkan energi melalui pergerakan zat gizi. Organisme di

dalam biofilm berinteraksi secara dinamis pada berbagai tingkat metabolik dan

molekular. Pada plak gigi organisme yang membentuk kolonisasi pada awalnya

sehingga membentuk lapisan licin terutama kokus gram-positif dan batang gram-

positif yang membentuk mikrokoloni pada permukaan emai yang halus dan keras.

Plak atau biofilm terutama teridiri dari deposit glukan dengan berat molekul tinggi

bererbentuk gelatin tempat bakteri penghasil asam melekat pada email. Polimer

karbohidrat (glukan) tersebut dihasilkan terutama oleh streptokok (streptococcus

mutans, peptostreptokok), mungkin bekerja sama dengan aktinomisetes.

Tampaknya terdapat korelasi yang kuat antara adanya S.mutans dari karies pada

area email spesifik. Langkah kedua yang penting dalam produksi karies

6

7

tampaknya adalah pembentukan sejumlah besar asam (pH

8

Klasifikasi

Kingdom : Monera

Divisio : Firmicutes

Class : Bacilli

Ordo : Lactobacilalles

Family : Streptococcaceae

Genus : Streptococcus

Species : Streptococcus mutans (Ratu Belqis dalam Hertanto,

2008).

S. mutans ini yang mempunyai suatu enzim yang disebut glukosil

transferase di atas permukaannya yang dapat menyebabkan polimerisasi glukosa

pada sukrosa dengan pelepasan dari fruktosa, sehingga dapat mensintesa molekul

glukosa yang memiliki berat molekul yang tinggi yang terdiri dari ikatan glukosa

alfa (1-6) dan alfa (1-3). Pembentukan alfa (1-3) ini sangat lengket, sehingga tidak

larut dalam air. Hal ini dimanfaatkan oleh bakteri S. Mutans untuk berkembang

dan membentuk plak pada gigi.

Satu kelompok bakteri terdiri dari delapan serotype S. mutans telah

diasosiasikan dengan karies. Serotype telah diberi tanda a sampai h. beberapa

serotype telah diturunkan ke status spesies dan diberikan nama: streptococcus

rattus (serotype b), streptococcus cricetus (serotype a), streptococcus ferus (serotype c) dan S. sobrinus (serotype d, g, dan h). semua serotype S. mutans telah

ditunjukkan potensi secara signifikan untuk mengakibatkan karies, tetapi karena

genetic yang signifikan dan perbedaan biokimia, mereka sebaiknya tidak secara

sederhana mengarah pada satu spesies streptococcus mutans. Text ini

menggunakan istilah S. mutans sebagai istilah secara kolektif untuk semua

serotype (Robeson, dalam Hertanto, 2014).

S. mutans dapat menghasilkan asam dalam jumlah banyak, toleran

terhadap keasaman lingkungan, dirangsang secara hebat oleh sukrosa,dan Nampak

sebagai organism yang pertama dihubungkan dengan karies pada manusia.

Organisme yang menyebabkan karies disebut kariogenik. Derajat gigi untuk

menjadi karies biasa disebut potensi kariogenitas. S. mutans hadir sebagai infeksi

pandemic pada manusia. S. mutans ditemukan pada setiap orang tanpa

memperhatikan ras, latar belakang etnik, atau letak geografis daerah asal. S.

8

9

mutans terdapat di mulut tidak secara signifikan komponen kecil dari flora mulut.

Pada pasien dengan beragam lesi karies, S. mutans menjadi yang dominan pada

flora plak. S. mutans yang paling kuat dihubungkan dengan awal terjadinya karies

(Robeson, dalam Hertanto, 2014).

PATOGENITAS

S. mutans adalah mikroorganisme kariogenik yang memecah gula untuk

energi dan menghasilkan lingkungan asam, yang mendemineralisasi struktur

superficial gigi, kemudian melarutkan molekul kalsium menciptakan lubang.

Seseorang dengan flora mulut yang sehat akan berisi kurang lebih sekitar 10,000

CFU/ml S. mutans dalam mulut mereka. S. mutans memiliki tiga faktor virulensi

yaitu pelarutan glycans, toleransi asam, dan produksi asam laktat. Sakit gigi

adalah gejala yang paling umum dari kerusakan gigi, infeksi atau iritasi pulpa gigi

biasanya menyebabkan rasa sakit. Dokter gigi biasanya mendiagnosa kerusakan

gigi seseorang dengan menggunakan X-Rays, dapat mendeteksi sebelum

pembentukan lubang sepenuhnya, karena setiap manusia memiliki bakteri dalam

mulut mereka, satu-satunya pencegahan untuk mengurangi dampak dari

fermentasi asam adalah dengan berlatih menjaga kebersihan mulut yang cukup

(Zelnick, 2014).

S. mutans merupakan bakteri yang paling banyak dalam mulut. Dalam

rangka mengurangi bakteri, setiap orang didorong untuk memiliki 10.000 Cfu/ml

air liur S. mutans di mulut mereka. Colony Forming Unit S. mutans / ml air liur

sebagai berikut.

1. kelas 0-1 : < 100.000 CFU/ml

2. kelas 2 : 100.000 – 1.000.000 CFU/ml

3. kelas 3 : > 1.000.000 CFU/ml

Kelas 0-3 mengacu pada berapa banyak S. mutans berada dimulut dengan

kelas 0-1 bertindak sebagai kasus dengan kebersihan mulut yang baik, sedangkan

kelas 3 bertindak sebagai kasus terburuk penyebab karies gigi (Zelnick, 2014).

9

10

2.2 Deskripsi Tanaman Stevia rebaudiana Bertoni

Menurut Geuns (2003), Stevia rebaudiana Bertoni adalah tanaman semak

yang berasal dari daerah Amerika Selatan (daerah perbatasan antara Paraguay dan

Brazil). Daun stevia mengandung steviosida yang merupakan komponen utama

pemberi rasa manis. Kandungannya antara 4 – 20 % dari berat kering daun stevia

(tergantung dari kondisi penanaman dan pertumbuhannya). Komponen lain

pemberi rasa manis pada daun stevia tetapi dalam kadar yang lebih rendah, yaitu

steviolbiosida rebaudiosida

Gambar 2. Stevia rebaudiana Bertoni

Stevia merupakan tanaman terna yang tumbuh tegak, memiliki banyak

cabangan, memiliki ketinggian antara 30cm -90 cm, dan berbunga sepanjang

tahun. Stevia dapat mencapai ketinggian antara 60-90 cm. Batang tanaman Stevia

berbentuk bulat lonjong dan berbulu halus. Daun berbentuk lonjong langsing

sampai oval, bergerigi halus, dan terletak berhadapan. Bunga Stevia merupakan

bunga sempurna (hermaphrodite) dengan mahkota berbentuk tabung. Perkaran

tanaman Stevia merupakan akar serabut yang terbagi menjadi dua bagian, yaitu

perakaran halus dan perakaran tebal (Rukmana,2003).

10

11

Klasifikasi

Kingdom : Plantae (tumbuh-tumbuhan)

Devisi : Spermatophyta

Kelas : Dicotyledonae

Sub-devisi : Angiospermae (berbiji tertutup)

Kelas : Dicotyledonae (biji berkeping dua)

Ordo : Campanulatae

Famili : Composite

Genus : Stevia

Spesies : Stevia rebaudiana Bertoni M. sin Eupatorium

rebaudiana (Rukmana,2003).

Manfaat Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

Steviosida merupakan bahan pemanis alami yang tidak berkalori sehingga

tidak menaikkan kadar gula dalam darah dan tidak memungkinkan pertumbuhan

bakteri dan ragi pada produk pangan yang menggunakan stevia sebagai pemanis.

Steviosida juga memiliki manfaat menekan jumlah bakteri Streptococcus mutans

sebagai salah satu kuman penyebab karies gigi, menghambat pertumbuhan plak,

mencegah keasaman plak gigi, dan mempercepat proses pembentukan kembali

mineral gigi (remineralisasi) (Mousumi, 2008:46).

Beberapa zat yang terkandung di dalamnya seperti Tanin, Xantin, dan

Flavanoid memiliki aktivitas antiplak. Berikutnya, steviosida, zat utama yang

terkandung dalam stevia memiliki enzim yang berfungsi untuk melakukan

dekomposisi gula, menginaktivasi dekstran sukrase sehingga bisa menghambat

kerja fermentasi bakteri kariogenik. Pomaret dan Lavieille juga menyebutkan

bahwa steviosida tidak dapat terhidrolisis dan tidak dapat difermentasi oleh

bakteri. Steviosida bisa menjadi pemanis pengganti sukrosa yang aman bagi tubuh

karena steviosida berkalori rendah, toksisitas rendah, dan memiliki kestabilan

kimiawi yang tinggi ketika diproses menjadi sebuah produk makanan (Yabu M,

Takase M, Toda K, Tanimoto K, Yasutake A, 1977:15).

11

12

2.3 EKSTRAKSI

1. Definisi Ekstraksi

Ekstraksi merupakan proses pemisahan bahan dari campurannya dengan

menggunakan pelarut. Ekstrak adalah sediaan yang diperoleh dengan cara

ekstraksi tanaman obat dengan ukuran partikel tertentu dan menggunakan medium

pengekstraksi (menstrum) yang tertentu pula (Agoes, 2009).

Ekstraksi dapat dilakukan menurut berbagai cara. Ekstrak yang diperoleh

sesudah pemisahan cairan dari residu tanaman obat “micella”. Micella ini dapat

diubah menjadi bentuk obat siap pakai, seperti ekstrak cair dan tintura atau

sebagai produk/bagan antara yang selanjutnya dapat diproses menjadi ekstrak

kering (Agoes, 2009).

2. Metode Ekstraksi

1) Ekstraksi dengan Menggunakan Pelarut

Cara Dingin

a. Maserasi

Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan

pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur

ruangan. secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian

konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan

yang kontinu (terus-menerus). Remaserasi berarti dilakukan penyaringan maserat

pertama, dan seterusnya (Ditjen POM, 2000).

b. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai

sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur

ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara,

tahap perkolasi sebenarnya (penetesan / penampungan ekstrak), terus menerus

sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan (Ditjen POM,

2000).

12

13

Cara Panas

a) Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,

selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan

adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses ekstraksi

sempurna (Ditjen POM, 2000).

b) Soxhlet

Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang

umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan

jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Ditjen POM,

2000).

c) Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada

temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum

dilakukan pada temperatur 40-500C (Ditjen POM, 2000).

d) Infus

Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air

(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 96-980C)

selama waktu tertentu (15-20 menit) (Ditjen POM, 2000).

e) Dekok

Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (>300 C dan temperatur

sampai titik didih air (Ditjen POM, 2000).

2) Destilasi Uap

Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan menguap (minyak

atsiri) dari bahan (segar atau simplisia) dengan uap air berdasarkan peristiwa

tekanan parsial senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari katel secara

kontinu sampai sempurna dan diakhiri dengan kondensasi fase uap campuran

(senyawa kandungan yang memisah sempurna atau memisah sebagian

Destilasi uap, bahan (simplisia) benar-benar tidak tercelup ke air yang

mendidih, namun dilewati uap air, bahan (simplisia) bercampur sempurna atau

13

14

sebagian dengan air mendidih, senyawa kandungan menguap tetap kontinu ikut

terdestilasi.

Destilasi uap, bahan (simplisia) bercampur sempurna atau sebagian dengan

air mendidih, senyawa kandungan menguap tetap kontinu ikut terdestilasi (Ditjen

POM, 2000).

2.4 Kerangka Konsep

Variabel independen :

konsentrasi ekstrak etanol

daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni)

Variabel dependen : waktu

kontak Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni)

terhadap S.mutans

Gambar 3. Kerangka konsep penelitian

14

15

2.5 Definisi Operasional

Tabel 2.1. Definisi Operasional Penelitian

Variabel Definisi Cara ukur Alat ukur Hasil Skala

ukur

Variabel ekstrak yang Ekstrak Melihat Diperoleh Skala

independen: dibuat dari daun ditambahkan tumbuh beberapa kategorik

konsentrasi Stevia (Stevia pelarut tidaknya konsentrasi (rasio)

ekstrak rebaudiana DMSO koloni ekstrak

etanol daun Bertoni) dengan untuk dalam

Stevia manggunakan membuat bentuk

(Stevia pelarut etanol variasi persentase

rebaudiana dengan berbagai konsentrasi

Bertoni) konsentrasi dengan cara

pengenceran

Variabel Pengujian Metode Pengukuran Tumbuh Skala

dependen : aktivitas dilusi pada secara visual atau kategorik

waktu antibakteri media padat dengan tidaknya (ordinal)

kontak dengan melihat ada koloni

Stevia menggoreskan atau pada

(Stevia satu ose larutan tidaknya media

rebaudiana pada berbagai pertumbuhan padat

Bertoni) konsentrasi koloni

terhadap dengan bakteri pada

S.mutans memperhitungkan media padat

waktu kontak

15

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan adalah penelitian deskriptif. Penelitian

dilakukan di laboratorium dengan sampel ekstrak daun Stevia (Stevia rebaudiana

Bertoni) yang dibuat dengan metode ekstraksi menggunakan pelarut etanol 70%.

3. 2 Populasi dan Sampel

3.2.1 Populasi

Populasi pada penelitian adalah daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

yang diperoleh dari pusat penelitian Teh dan Kina Gambung Desa Mekarsari

Kecamatan Pasir Jambu Kabupaten Bandung.

3.2.2 Sampel

Sampel pada penelitian yaitu simplisia daun Stevia (Stevia rebaudiana

Bertoni) yang dibuat ekstrak dengan cara dimaserasi menggunakan etanol 70%.

3.3 Bakteri Uji

Bakteri uji merupakan strain murni Streptococcus mutans yang didapat

dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Gigi Unpad Bandung.

3.4 Tempat dan Waktu

Penelitian dilakukan pada tanggal 1 Mei sampai tanggal 8 Juni 2016 di

Laboratorium Fitokimia, Laboratorium Mikrobiologi dan Laboratorium Kimia

Analisis Jurusan Farmasi Poltekkes Kesehatan Bandung.

16

17

3.5 Cara Pengumpulan Data/ Metode Pemeriksaan

3.5.1 Alat dan Bahan

Alat

Alat yang digunakan adalah inkubator (Memmert®)

, Oven (Memmert®)

,

Biosafety Cabinet (Thermo®

), autoclave (Hirayama®

), rotary evaporator (Ika®

),

blender (National®

), hotplate (Kris®

), mikroskop (Olympus®

), timbangan

analitik (Mettler Toledo®

), magnetic stirrer, clinipette 10-100 μl, object glass,

cover glass, cawan uap, cawan petri, pipet tetes, wadah/ toples kaca, gelas ukur 10

ml (pyrex®

), gelas ukur 100 ml (pyrex®

), gelas ukur 1 L (pyrex®

), gelas kimia

100 ml (pyrex®

), gelas kimia 250 ml (pyrex®

), gelas kimia 500 ml (pyrex®

),

gelas kimia 1 L, erlenmeyer 250 ml (pyrex®

), erlenmeyer 500 ml (pyrex®

), botol

semprot, tabung reaksi, rak tabung reaksi, corong, lemari asam, lemari pendingin,

api bunsen, jarum ose, kapas lidi steril, kapas steril, vial 10 ml, stopwatch, kertas

saring, kain batis, perkamen, tissue.

Bahan

Bahan tanaman yang digunakan adalah Daun Stevia (Stevia rebaudiana

Bertoni), bakteri yang digunakan adalah Streptococcus mutans ATCC 25175.

Bahan-bahan yang digunakan terdiri dari media pertumbuhan bakteri Mueller

Hinton Agar, Mueller Hinton Broth, Trypcase Soy Agar darah. Bahan kimia yang

digunakan terdiri atas etanol 70%, Alkohol 96%, pereaksi Mayer ,pereaksi

Dragendorf, HCL 10 %, serbuk Mg, FeCl3 1%, crystal violet, safranin, iodin,

H2SO4 pekat, H2SO4 1%, BaCl2 1 %, Pb Asetat 1%, aqua destilata.

3.5.2 Pengambilan Sampel

Sampel yang digunakan dalam penelitian adalah Daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni) yang diperoleh dari Pusat Penelitian Teh dan Kina Gambung

Desa Mekarsari Kecamatan Pasri Jambu Kabupaten Bandung.

3.5.3 Pembuatan Serbuk Simplisia

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang masih segar disortasi basah

dan ditimbang, selanjutnya dilakukan proses pencucian dengan menggunakan air

17

18

bersih mengalir, kemudian dikeringkan dengan cara diangin-angin atau dijemur

dibawah sinar matahari secara tidak langsung sampai kering. Daun yang telah

kering dilakukan proses pemilihan (sortasi kering) dan ditimbang, kemudian daun

dipotong-potong dan diserbukkan dengan menggunakan blender sampai halus

(Agoes, 2009).

3.5.4 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

Simplisia kering Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) ditimbang

sebanyak 500 gram kemudian dimasukkan ke dalam wadah dan ditambahkan

etanol 70% sebanyak 2 liter. Ekstrak dibuat dengan metode maserasi direndam

dalam etanol 70% menggunakan botol tertutup minimal selama 3 hari.

Perendaman dilakukan selama 24 jam hasil maserasi disaring dengan corong Buchner sehingga didapatkan filtrat dan residu kemudian filtrat dipekatkan

mengunakan alat rotary evaporator pada suhu tidak lebih dari 500 C, sehingga

pelarut etanol terpisah dengan ekstrak tumbuhan dan didapatkan ekstrak kental.

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) (Dapartemen Kesehatan RI, 2000).

3.5.5 Pemeriksaan Karakteristik Serbuk Simplisia dan Ekstrak Etanol

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

1) Organoleptik

Pemeriksaan ini dilakukan dengan mengamati bentuk, warna, bau dan rasa

dari serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni).

2) Rendemen Ekstrak

Rendemen ekstrak etanol daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

dihitung dengan membandingkan bobot awal simplisia dengan bobot akhir ekstrak

yang dihasilkan.

Rendemen Ekstrak = bobot ekstrak yang dihasilkan

x 100% bobot simplisia yang diekstraksi

18

19

3.5.6 Penapisan Fitokimia

Penapisan fitokimia meliputi pemeriksaan alkaloid, saponin, flavonoid,

tanin, triterpenoid dan steroid terhadap ekstrak etanol daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni).

1) Pemeriksaan Alkaloid

Ekstrak ditambahkan dengan beberapa tetes larutan asam klorida encer

(1%) kemudian disaring. Filtrat yang diperoleh selanjutnya dapat diuji kandungan

alkaloidnya dengan ditambahkan beberapa ml reagen Hager (adanya alkaloid

ditandai dengan terbentuknya endapan berwarna kuning).

2) Pemeriksaan Saponin

Sebanyak 1 ml ekstrak dan 1 ml etanol dituangkan ke dalam tabung uji,

selanjutnya 20 ml air suling ditambahkan ke dalamnya kemudian dikocok kuat-

kuat selam 15 menit. Kandungan saponin ditandai dengan terbentuknya busa yang

stabil setinggi ±1 cm selama kurang lebih 20 menit.

3) Pemeriksaan Flavonoid

Sebanyak 1 ml larutan timbal asetat ditambahkan ke dalam 5 ml larutan

ekstrak. (adanya kandungan flavonoid ditandai dengan timbulnya flok flok

endapan berwarna putih).

4) Pemeriksaan Tannin

Sebanyak 1 ml ekstrak etanol ditambahkan kedalam 2ml air suling di

dalam sebuah tabung uji. Dua tiga tetes larutan FeCL3 1% ditambahkan ke dalam

larutan ekstrak tersebut. Jika terbentuk warna biru hijau, maka ekstrak hitam maka

ekstrak tersebut mengandung tannin (cathechic tannin), sedangkan jika terbentuk

biru hitam maka ekstrak tersebut mengandung tannin (gallic tannin).

19

20

5) Pemeriksaan Steroid dan Triterpenoid

Sebanyak 2 ml asam asetat anhidrat dan 2 ml asam sulfat pekat

ditambahkan ke dalam 0,5 ml filtrat ekstrak etanol dari bagian tanaman.

Terjadinya perubahan warna dari violet (ungu) menjadi biru atau hijau

menunjukan adanya kandungan steroid, sedangkan jika terbentuk warna kuning

pada lapisan bawah, maka ekstrak tersebut mengandung triterpenoid.

3.5.7 Sterilisasi Alat dan Media

Alat-alat yang digunakan untuk uji aktivitas antibakteri disterilkan terlebih

dahulu. Alat-alat gelas dibungkus dengan perkamen dan disterilkan menggunakan

oven pada suhu 1600 C selama 2 jam. Alat yang terbuat dari karet disterilkan

dengan cara direndamkan dalam alkohol 70%.

Media disterilkan menggunakan otoklaf pada suhu 1210 C selama 20

menit. Jarum ose dan pinset dibakar dengan pembakaran langsung pada nyala api

bunsen. Pengerjaan uji aktivitas antibakteri dilakukan secara aseptis di dalam

Laminar Air Flow (LAF) yang sebelumnya telah disinari dengan lampu UV yang

dinyalakan 90 menit sebelum digunakan dan meja kerja dibersihkan dengan

alkohol 70%.

3.5.8 Pembuatan Media

1. Pembuatan Agar Darah

Sebanyak 40 g Tryptic Soy Agar (TSA) dilarutkan kedalam 1 L aquadest,

kemudian dipnaskan selanjutnya disterilkan di otoklaf pada suhu 1210C selama 20

menit, kemudian darah domba segar dituangkan ke dalam labu berisi TSA

sebanyak 5% kemudian dituangkan ke dalam tabung dengan kemiringan ±300.

2. Pembuatan Muller Hinton Agar (MHA)

Ditimbang sebanyak 38 gram Muller Hinton Agar (Merck) dan dilarutkan

dengan 1 L aquadest kemudian dipanaskan hingga semuanya larut, selanjutnya

dimasukkan ke dalam erlenmeyer, ditutup dengan kapas, dibungkus dengan

perkamen lalu disterilkan dengan menggunkan otoklaf pada suhu 1210 C selama

20

21

20 menit. Setelah disterilkan media dituang kedalam cawan petri masing-masing

sebanyak ±20ml.

3. Pembuatan Mouller Hinton Broth (MHB)

Ditimbang sebanyak 21 gram dan dilarutkan dalam 1 L aquadest. Larutan

dipanaskan hingga semuanya larut, selanjutnya dimasukkan ke dalam tabung

reaksi ±2ml dan disterilkan dalam otoklaf pada suhu 1210 C selama 20 menit.

3.5.9 Pewarnaa Gram

Bakteri S. mutans berumur 24 jam diambil menggunakan ose,

disuspensikan kedalam NaCl steril kemudian diambil sebanyak 1 ose dioleskan

pada objek glas dilewatkan diatas nyala api perlahan-lahan. Tambahkan 1-2 tetes

Kristal violet biarkan selama 1 menit kemudian dibilas dengan air, tambahkan 1-2

tetes larutan lugol selama 1 menit, dibilas dengan air kemudian diteteskan alkohol

70% dan dibilas dengan air, diteteskan safranin biarkan selama 1 menit dan dibilas

dengan air, kemudian dikeringkan kaca objek dekat nyala api, ditetesi minyak

mersi, diamati secara mikroskopik.

3.5.10 Peremajaan Bakteri Uji

Bakteri Streptococcus. mutans ATCC 25175 diremajakan pada medium

Agar Darah dengan cara menggoreskan satu ose bakteri pada permukaan Agar

Darah, kemudian diinkubasi pada suhu 370C selama 18-24 jam.

3.5.11 Pembuatan Standar Kekeruhan Larutan (Larutan Mc. Farland)

Jumlah bakteri disesuaikan dengan standar Mc Farland 1 dengan

kekeruhan 3x108 cfu/ml. Larutan H2SO4 1% sebanyak 99,5 ml dicampurkan

dengan BaCl2 0,1% sebanyak 1,175% dalam sebuah tabung, dan terbentuk larutan

yang keruh. Kekeruhan dipakai sebagai standar kekeruhan bakteri.

21

22

3.5.12 Pembuatan Suspensi Bakteri Uji

Bakteri uji yang telah diremajakan diambil dengan ose steril lalu

disuspensikan ke dalam tabung yang berisi 10 ml larutan MHB hingga diperoleh

kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan Mc Farland 1. Standar kekeruhan

larutan Mc Farland 1 setara dengan kerapatan bakteri sebanyak 3x108 CFU/ml.

Dari suspensi bakteri bakteri uji Mc Farland 1 diambil 0,1µl dimasukkan kedalam

MHB 10 ml sehingga kerapatan bakteri setara dengan 3x106 CFU/ml.

3.5.13 Pembuatan Larutan Uji

Ekstrak 100% dibuat dengan menimbang 37 gram ekstrak etanol Daun

Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) ditambahkan larutan DMSO sebanyak 15ml.

Kemudian dibuat variasi konsentrasi dari larutan uji 100% dengan menggunakan

pelarut NaCl 0,9%.

3.6 Pengujian Aktivitas Antibakteri Waktu Kontak

Pengujian Aktivitas waktu kontak dilakukan dengan menggunakan metode

dilusi cair. Disiapkan 4 deret tabung reaksi yang setiap deretnya terdiri dari 6

tabung reaksi berisi 2 ml Mouller Hinton Broth (MHB) kemudian ditambahkan

larutan uji pada deret pertama sebanyak 1ml, dari tabung pertama kemudian

dipindahkan ke tabung berikutnya, prosedur yang sama dilakukan sampai tabung

terakhir, volume dari tabung terakhir kemudian dibuang sebanyak 1ml. Pada

masing-masing tabung yang berisi media MHB dan larutan uji dengan berbagai

konsentrasi kemudian ditambahkan 10 ul suspensi bakteri dengan interval waktu

30 detik. Tepat pada menit ke 5, diambil 1 ose dari tabung pertama deret pertama

dimasukkan kedalam tabung pertama deret kedua dan seterusnya. Prosedur yang

sama dilakukan pada menit ke 10 dan 15, setelah selsai tabung reaksi diinkubasi

selama 18-24 jam.

3.7 Analisis Data

Rancangan penelitian yang digunakan yaitu analisis laboratorium. Hasil

penelitian diperoleh setelah sampel yang diberi perlakuan dengan cara dibuat

22

23

beberapa macam konsentrasi di uji aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus

mutans dengan berbagai waktu kontak 5, 10, dan 15 menit. Nilai ukur yang

digunakan yaitu ada tidaknya pertumbuhan koloni bakteri pada media cair dan

akan dipastikan dengan cara digoreskan pada media padat. Apabila media tempat

digoreskan larutan ekstrak dan bakteri di tumbuhi koloni bakteri maka tidak

memiliki aktivitas antibakteri, namun apabila media tempat digoreskan larutan

ekstrak dan bakteri tidak ditumbuhi koloni bakteri maka memiliki aktivitas

antibakteri. Pengukuran data dilakukan secara manual, data akan disajikan dalam

bentuk tabel yang dianalisa secara deskriptif.

23

BAB IV

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

4.1 Penyiapan Bahan Uji

Sampel yang digunakan pada penelitian yaitu simplisia Daun Stevia

(Stevia rebaudiana Bertoni) didapat dari Pusat penelitian Teh dan Kina Gambung

Desa Mekarsari Kecamatan Pasir Jambu Kabupaten Bandung (Lampiran 2).

Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) merupakan semak yang berasal dari daerah

Amerika Selatan (daerah perbatasan antara Paraguay dan brazil). Daun Stevia

(Stevia rebaudiana Bertoni) mengandung zat Steviosida yang merupakan

komponen utama pemberi rasa manis alami namun tidak seperti sukrosa karena

steviosida tidak dapat difermentasi menjadi asam oleh bakteri kariogenik dan juga

memiliki aktivitas anti plak, dimana Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) dapat

mencegah keasaman mulut dan mempercepat proses pembentukan kembali

mineral gigi (Remineralisasi), oleh karena itu perlu penelitian untuk mengetahui

aktivitas antibakteri terhadap bakteri mulut yaitu S. mutans (Rukmana, 2003).

4.2 Ekstraksi Simplisia Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang masih segar disortasi basah

dan ditimbang. Sortasi basah dilakukan untuk memisahkan cemaran, setelah

ditimbang dicuci menggunakan air bersih kemudian dilakukan pengeringan

selama 2-3 hari. Daun dikeringkan dengan sinar matahari secara tidak langsung

dan diangin-anginkan Daun yang telah kering disortasi kering dan ditimbang,

diperoleh Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) kering, kemudian Daun

diserbukkan dengan menggunakan blender sampai halus kemudian dilakukkan

ekstraksi dengan cara maserasi. Hasil maserasi berupa filtrat berwarna hijau

kehitaman, kemudian diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 500C,

hingga diperoleh ekstrak kental.

24

25

4.3 Uji Karakteristik Ekstrak Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

Dilakukan pemeriksaan karakteristik ekstrak etanol Daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni) meliputi pemeriksaan organoleptik dan perhitungan

rendemen ekstrak (Lampiran 6). Hasil karakteristik ekstrak etanol Daun Stevia

(Stevia rebaudiana Bertoni) dapat dilihat pada tabel 4.1.

Tabel 4.1. Hasil Pemeriksaan Karakteristik Ekstrak Etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

Karakteristik Ekstrak Etanol Daun

Stevia(Stevia rebaudiana B.)

Organoleptik

Bentuk Ekstrak kental

Warna Hijau Kehitaman

Bau Khas

Rasa Manis agak pahit

Rendemen 23, 14%

Ekstraksi dilakukan untuk menarik senyawa metabolit sekunder didalam

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang memiliki aktivitas antibakteri.

Metode pembuatan ekstrak dilakukan dengan cara maserasi menggunakan etanol

70%. Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan

pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruang

(kamar) selama beberapa waktu selain itu maserasi juga merupakan metode yang

paling praktis dan ekonomis (Departemen RI,2000).

Pada saat proses maserasi, pelarut yang digunakan akan menembus

dinding sel dan masuk ke dalam sel yang penuh dengan zat aktif dan karena ada

pertemuan antara zat aktif dan penyari itu terjadi proses pelarutan (zat aktif larut

dalam penyari) sehingga penyari yang masuk ke dalam sel tersebut akhirnya akan

mengandung zat aktif, sementara penyari yang berada diluar sel belum terisi zat

aktif, akibat adanya perbedaan konsentrasi zat aktif di dalam dan diluar sel ini

akan muncul gaya difusi. Larutan yang terpekat akan didesak menuju keluar

berusaha mencapai keseimbangan konsentrasi zat aktif di dalam dan di luar sel.

25

26

Proses keseimbangan akan berhenti, setelah terjadi keseimbangan konsentrasi

(jenuh). Dalam konsentrasi ini, proses ekstraksi dinyatakan selesai, maka zat aktif

di dalam dan diluar sel akan memiliki konsentrasi yang sama (Siregar, 2011).

4.3 Penapisan Fitokimia Ekstrak Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

Metabolit sekunder yang terkandung dalam Daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni) diketahui dengan melakukan penapisan fitokimia meliputi

pemeriksaan alkaloid, saponin, flavonoid, tannin, steroid dan triterpenoid. Hasil

penapisan fitokim ekstrak etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) dapat

dilihat pada tabel 4.2.

Tabel 4.2. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

Golongan senyawa Ekstrak Etanol Daun Stevia

(Stevia rebaudiana Bertoni)

Alkaloid -

Flavonoid +

Saponin -

Tannin +

Triterpen dan Steroid +

Keterangan : (+) Menunjukkan reaksi positif

(- ) Menunjukkan reaksi negatif

Senyawa metabolit sekunder Tannin yang terdapat pada ekstrak etanol

Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang berhubungan dengan kemampuan

untuk menginaktifkan enzim dan mengganggu transport protein pada lapisan sel.

Selain itu Tannin juga mampu mengganggu pembentukkan dinding sel sehingga

menjadi kurang sempurna (Cowan, 1999 dalam Rijyanti, 2014). Mekanisme kerja

flavonoid sebagai antimikroba dapat dibagi menjadi 3 yaitu menghambat sintesis

asam nukleat, menghambat fungsi membran sel dan menghambat metabolit energi

(Hendra dkk,2011 dalam Rijayanti, 2014).

26

27

4.4 Uji Aktivitas Antibakteri

Ekstrak etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang diperoleh

dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 70% dibuat larutan uji dengan

berbagai variasi konsentrasi 60, 30, 15, 7,5, 3,75 dan 1,875% menggunakan

pelarut NaCl 0,9%. Larutan uji kemudian diuji aktivitas antibakteri dengan

menggunakan metode dilusi dengan berbagai waktu kontak, yaitu 5, 10 dan 15

menit. Bakteri uji yang digunakan yaitu Streptococcus mutans dengan kerapatan

bakteri sebanyak 3x106 CFU/ml.

Pembuatan suspensi bakteri dilakukan dengan cara diambil dengan ose

lalu disuspensikan ke dalam tabung yang berisi 10 ml larutan MHB hingga

diperoleh kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan Mc Farland 1, dengan

kerapatan bakteri sebanyak 3x108 CFU/ml. Dari suspensi bakteri bakteri uji Mc

Farland 1 diambil 10µl dimasukkan kedalam MHB 10 ml sehingga kerapatan

bakteri setara dengan 3x106 CFU/ml. Pembuatan suspensi bakteri uji dengan

kerapatan 3x106 CFU/ml merupakan banyaknya jumlah bakteri yang menjadi

penyebab karies gigi (Zelnick, 2014).

Pengujian dilakukan dengan cara mengambil satu ose larutan uji dan

tanamkan dalam media cair MHB pada menit ke 5,10 dan 15 interval waktu 30

detik, kemudian diinkubasi selama 18-24 jam. Hasil uji aktivitas antibakteri

diketahui dengan mengamati adanya pertumbuhan koloni bakteri yang ditandai

dengan kekeruhan setelah diinkubasi.

Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode waktu kontak yang

ditanam pada media cair kemudian ditanam kembali pada media padat. Waktu

kontak perlu diketahui untuk mendapatkan efek antibakteri yang maksimal,

karena setiap zat kimia memiliki kecepatan menghambat atau membunuh yang

berbeda-beda terhadap bakteri. Dalam pengujian digunakan 3 waktu kontak antara

ekstrak dan bakteri, yaitu 5, 10 dan 15 menit.

Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol Daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni) terhadap S. mutans dengan menggunakan metode dilusi cair

dengan berbagai waktu kontak. Pengamatan dilakukan dengan melihat

27

28

ada/tidaknya pertumbuhan koloni bakteri pada media cair dan padat dilihat pada

tabel 4.3.

Tabel 4.3. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Stevia

(Stevia rebaudiana Bertoni) Dengan Berbagai Waktu Kontak Pada Media Cair

Konsentrasi Ekstrak Waktu Kontak (menit)

(%)

5

10

15

60 - - -

30 - - -

15 - - -

7,5 + - -

3,75 + - -

1,875 + - -

Kontrol (+) +

Kontrol (- ) -

Keterangan: (+) Menunjukkan adanya kekeruhan

(-) Menunjukkan kejernihan

Berdasarkan tabel 4.3 pada konsentrasi 1,875, 3,75 dan 7,5% jika dilihat

pada media cair terlihat keruh itu artinya masih ada pertumbuhan bakteri,

sedangkan pada konsentrasi 15, 30 dan 60% pada waktu kontak 5 menit terlihat

jernih, dan waktu kontak 10 dan 15 menit semua konsentrasi tidak ditemukan

adanya pertumbuhan bakteri. Hasil pengujian aktivitas antibakteri dengan

menggunakan metode dilusi cair maupun padat dapat digunakan untuk

mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol Daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni).

Pengujian menunjukan bahwa semakin bertambahnya waktu kontak,

pertumbuhan koloni bakteri semakin berkurang, selain itu semakin besar

konsentrasi akan mempengaruhi terhadap aktivitas antibakteri. Dibuktikan pada

28

29

waktu kontak 10 menit jumlah bakteri berkurang atau bahkan mati dan hasilnya

lebih baik dibandingkan dengan 5 menit. Variasi konsentrasi ekstrak etanol Daun

Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang digunakan juga berpengaruh terhadap

pertumbuhan bakteri, dengan konsentrasi 1,875% lebih banyak pertumbuhan

bakterinya dibandingkan dengan ekstrak etanol konsentrasi 3,75%, 7,5%, 15%,

hingga seterusnya sampai 60% Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) tidak

terdapat pertumbuhan bakteri.

Dari hasil uji aktivitas antibakteri pada media cair ditanamkan kembali

pada media padat untuk mengetahui pertumbuhan koloni yang ditanam pada

media Muller Hinton Agar dapat dilihat pada tabel 4.4.

Tabel 4.4. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Stevia

(Stevia rebaudiana Bertoni) Dengan Berbagai Waktu Kontak Pada Media Padat

Konsentrasi Ekstrak Waktu Kontak (menit)

(%) 5

10

15

60 - - -

30 - - -

15 - - -

7,5 + - -

3,75 + - -

1,875 + + -

Kontrol (+) +

Kontrol (- ) -

Keterangan : (+) Menunjukkan adanya pertumbuhan koloni

(- ) Menunjukkan tidak adanya pertumbuhan koloni

Berdasarkan dari hasil pengamatan pada media padat hasilnya tidak jauh

berbeda dengan penanaman pada media cair. Tidak terdapatnya pertumbuhan

bakteri pada media MHA menunjukan ekstrak Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) dapat membunuh bakteri (Dzen, 2003).

29

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

1. Ekstrak etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) memiliki aktivitas

antibakteri terhadap Streptococcus mutans. 2. Ekstrak etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) konsentrasi pada

15% sudah memiliki aktivitas antibakteri 3. Pada konsentrasi 15% dengan waktu kontak 5 menit masih terdapat

pertumbuhan bakteri pada media padat namun konsentrasi 7,5% pada

waktu kontak 10 menit tidak terdapat pertumbuhan bakteri.

5.2 Saran

1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui aktivitas

antibakteri dari Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) dengan waktu

kontak yang lebih cepat dan konsentrasi yang lebih tinggi untuk

mengefektifkan sebuah alternatif baru mengenai obat kumur dari herbal

Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni).

30

31

DAFTAR PUSTAKA

Agoes, Goeswin. 2009. Seri Farmasi Industri-2: Teknologi Bahan Alam (Edisi Revisi dan Perluasan). Cetakan II. Bandung: Penerbit ITB.

Cappucino, James G dan Nataline Sherman. 2013. Manual Laboratorium Mikrobiologi. Cetakan 2014. Jakarta: EGC

Cowan, M.M. 1999. Plant Products as Antimicrobial Agent. Clinical Microbiology Reviews; 12: 564-582.

Debnath, Mousumi. 2008. “Clonal Propagation And Antimicrobial Activity Of An Endemic Medicinal Plant Stevia Rebaudiana”. Dalam Journal of Medicinal Plants Research Vol. 2(2), halaman 045-051.

Departemen Kesehatan RI. 2000. Invetaris Tanaman Obat Indonesia (1) Jilid 1. Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.

Departemen Kesehatan RI. 1977. Materia Medika Indonesia. Jilid I-IV. Jakarta : Mentri Kesehatan Republik Indonesia

Ditjen POM. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama. Jakarta: Depkes RI.

Djajadi. 2014. Pengembangan Tanaman Pemanis Stevia rebaudiana Bertoni di

Indonesia. Vol 13. No 1/Juni 2014. http://perkebunan.litbang.pertanian.go.id/wp-content/uploads/2015/04/3.-

perkebunan_Djajadi-Pengembangan1.pdf

Dzen, S.M dkk. 2003. Bakteriologi Medik. Cetakan Pertama. Malang: Bayumedia Publishing.

Gamboa, Fredy dan Margarita Chaves. 2012. “Antimicrobial Potential of Extracts from Stevia Rebaudiana Leaves Againts Bacteria of Importance in Denital

Caries” Dalam jurnal Ponitificia Universidad Jveriana ( Vol 25/No 2/ 2012/ hal 171-175)

Hendra R, Ahmad S, Sukari A, Shukor MY, Oskooueian E. 2011. Flavonoid analyses and antimicrobial activity of various part of Phaleria macrocarpa Boerl fruit. int J Mol sci. 12: 3422-3431.

Heryanto, Aditya Fendy (2014) Optimalisasi Produksi Steviosida dari Kalus Daun Stevia rebaudiana Bertoni dengan Variasi Kombinasi Zat Pengatur Tumbuh. Jurnal Teknobiologi. (Vol .1-13)

Jawetz, Melnick, Adelberg. 2002. Mikrobiologi Kedokteran. Cetakan 2014.

Jakarta: EGC

31

http://perkebunan.litbang.pertanian.go.id/wp-content/uploads/2015/04/3.-perkebunan_Djajadi-Pengembangan1.pdfhttp://perkebunan.litbang.pertanian.go.id/wp-content/uploads/2015/04/3.-perkebunan_Djajadi-Pengembangan1.pdfhttp://perkebunan.litbang.pertanian.go.id/wp-content/uploads/2015/04/3.-perkebunan_Djajadi-Pengembangan1.pdf

32

Lemus-Mondaca, R; A. Vega-Galvez, L. Zura-Bravo, K. Ah-Hen.2012. Stevia

rebaudiana Bertoni, source of a high-potency natural sweetner: A comphresive review on the biochemical, nutritional and funcional aspects.

Food Chemistry 132:11211132. Mpila, D.A., Fatimawali, Wiyono, W.I. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak

Etanol Daun Mayana (Coleus atropurpureus [L] Benth) Terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa

Secara In-vitro. Pharmacon. Vol.1, No.1, 13-21. Nwokocha, Blessing, A., Agbagwa, I.O., Okoli, BE, 2011. Comparative

Phytochemical Screnning of Jatropha multifida L. Species in the Niger Delta. Research Journal of Phytochemistry. Vol.5(2) : 107-114.

Palezar, M.J., Chan, E.C.S. 2012. Dasar-dasar Mikrobiologi. Cetakan 2012. Jakarta : UI Press

Putri, Megananda Hirayana dkk. 2013. Ilmu Pencegahan Penyakit Jaringan Keras dan Jaringan Penduduk Gigi. Cetakan 2013. Jakarta: EGC

R. D. Ratnani dan R. Anggraeni. 2005. “Ekstraksi Gula Stevia dari Tanaman Stevia rebaudiana Bertoni”. Dalam jurnal Momentum (Vol.1/No 2/Oktober 2005/hal 27-32)

Rukmana, H. Rahmat. 2003. Budi Daya Stevia. Cetakan 1. Yogyakarta: Kanisius Roberson MT, Heymann OH, Swift JE. Sturdevant’s Art and Science of Operative

Dentistry. 4th

ed. St Louis : CV Mosby Co. 2002. pp 65-7

Sabir, Ardo. 2005. Aktivitas antibakteri flavonoid propolis Trigona sp terhadap Streptococcus mutans (in vitro). (Vol 38. No 3/Juli).

Sichani, Maryam Mohammadi dkk. 2012. “Effect of different extracts of Stevia rebaudiana leaves on Streptococcus mutans growth”. Dalam Jurnal of Medicial Plants Research (Vol. VI (32)/22 August).

Simon, Lisa. 2007. The Role of S. mutans and Oral Ecologi In The Formation Of dental Caries. LethBridge Under Grad. research Jour., Vol 2.

Siregar, Bella. 2011. Daya antibakteri Ekstrak Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans (in vitro). Skripsi. Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatra Utara Medan.

Streptococci and oral streptococci. Available from : http://www.ncl.ac.uk/dental/oralbiol/oralenv/tutorials/streps.htm accessed December 17, 2010

Susiyanto, Azib. 2013. Hijama Or Oxidant Drainage Theraphy. Cetakan 2. Jakarta: Gema Insani

Wulandari, Ari Suparni. 2012. Herbal Nusantara. Edisi I. Yogyakarta: Rapha Publishing.

Yabu M, Takase M, Toda K, Tanimoto K, Yasutake A.1977. “Studies On

Steviosı´Deo, Natural Sweetener. Effect On Thegrowth Of Some Oral

32

http://www.ncl.ac.uk/dental/%20oralbiol/oralenv/tutorials/streps.htm

33

Microorganisms”. Dalam Journal Hiroshima Daigaku Shigaku Zasshi Vol 9.h.12–17

Zelnicek, Taylor. (2014). Streptococcus mutans- Tooth Decay. MicrobeWiki (2015, Desember 16) https://microbewiki.kenyon.edu/ index.

php/Streptoccocus_mutans_ToothDecay.

33

https://microbewiki.kenyon.edu/

34

LAMPIRAN

Lampiran 1. Simplisia Kering Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

34

35

Lampiran 2. Determinasi Tanaman

35

36

Lampiran 3. Bagan Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni)

500 gram serbuk simplisia Daun

Stevia (Stevia rebaudiana

Dimaserasi + etanol 70%

Filtrate I

ampas


Filtrate ampas


Filtrate III ampas

Penguapan pelarut

Ekstrak Etanol

Filtrat I, II, III

Daun Stevia

menggunakan rotary

(Stevia

evaporator rebaudiana

36

37

Lampiran 4. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana

Bertoni)

pro

ses maserasi rendaman ekstrak kemudian disaring

Proses penguapan menggunakan rotary evaporator

37

38

Lampiran 5. Ekstrak Etanol Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni)

Ekstrak kental Daun Stevia (Stevia rebaudiana B)

38

39

Lampiran 6. Perhitungan Rendemen Ekstrak

Serbuk simplisia Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) sebanyak 500 gram,

diekstraksi dengan menggunakan etanol 70%. Hasil penguapan pelarut diperoleh

ekstrak Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) sebanyak

= bobot ekstrak yang dihasilkan 100% bobot awal simplisia

=

65,5723 g

100%

500 g

= 13, 11446 %

39

40

Lampiran 7. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Stevia (Stevia

rebaudiana Bertoni)

Pemeriksaan alkaloid dengan hasil

negatif ditandai dengan tidak ada

endapan setelah ditambahkan

pereaksi Dragendorf dan pereaksi

mayer

Pemeriksaan flavonoid dengan hasil

positif ditandai dengan timbul

endapan putih setelah ditambah Pb

asetat

Pemeriksaan flavonoid dengan hasil

positif ditandai dengan timbul warna

kuning

Pemeriksaan tannin dengan hasil

positif ditandai dengan warna biru

kehitaman setelah ditambah FeCl3

40

40

Pemeriksaan steroid dengan hasil

positif ditandai dengan warna merah

setelah ditambah HCl pekat

40

Lampiran 8. PembuatanVariasi Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Stevia

(Stevia rebaudiana Bertoni)

Konsentrasi 100%

37 gram ekstrak etanol daun stevia

ditambah 15 ml DMSO

dibuat konsentrasi 60%

diambil ekstrak sebanyak 3ml

diadd NaCl sampai 5ml

60% 30% 15% 7,5% 3,75% 1,875%

dibuang

1ml 1ml

1ml 1ml 1ml 1ml

41

42

Lampiran 9. Pewarnaan Bakteri

Hasil pewarnaan bakteri Gram positif ditandai dengan warna unggu dan bakteri

yang digunakan adalah Streptococcus mutans.

43

Lampiran 10. Pembuatan Media dan Gambar Suspensi Bakteri

Alat

dan

Media akan disterilisasi

menggunakan otoklaf

Gambar Suspensi Bakteri 3x108 setara dengan

Standar kekeruhan Mc.Farland 1

44

Lampiran 11. Hasil Penelitian Metode Waktu Kontak dan KHM

a. Metode Waktu Kontak pada Media Cair

KHM

(5 menit)

(10 menit)

45

(15 menit)

46

b. Metode Kontak pada Media Padat (MHA)

waktu kontak 5 menit pada media MHA



47

kontrol positif dan kontrol negatif

pada media padat pada media cair

Documents

UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN STEVIA (Stevia ...repository.poltekkesbdg.info/files/original/8030ee... · penelitian dan penulisan Karya Tulis Ilmiah. (3) Hanifa Rahma, M.Si.,Apt