TUGAS KHUSUS

TUGAS KHUSUS

MEDIUM DARAH ATAU AGAR AGAR DARAHMedia pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroba diperlukan suatu substrat yang disebut media. Akan tetapi yang terpenting medium harus mengandung nutrien yang merupakan substansi dengan berat molekul rendah dan mudah larut dalam air. Nutrien ini adalah degradasi dari nutrien dengan molekul yang kompleks. Nutrien dalam medium harus memenuhi kebutuhan dasar makhluk hidup, yang meliputi air, karbon, energi, mineral dan faktor tumbuh.

Beberapa bakteri membutuhkan nutrisi yang lebih banyak dan lebih baik untuk pertumbuhannya. Salah satu cara untuk mendorong pertumbuhan bakteri pemilih medis penting adalah untuk tumbuh mereka pada medium yang mengandung darah defibrinated ( darah dengan protein pembekuan dihapus ) . Agar darah adalah merah terang , media buram . Berbagai nutrisi kompleks yang ditemukan dalam darah mendukung pertumbuhan sebagian besar bakteri. Media seperti dikatakan kompleks ( tidak mampu yang diciptakan kimia ) dan diperkaya ( yang terdiri dari susunan luar biasa kaya nutrisi).

Darah yang digunakan sebagai media harus baik selama pengumpulan atau dikumpulkan dalam kantong yang berisi antikoagulan untuk mencegah pembentukan gumpalan. Antikoagulan yang paling umum digunakan adalah dekstrosa fosfat sitrat. Asam sitrat sering digunakan dalam industri makanan untuk menghambat pertumbuhan bakteri (8,9) dan karena itu dianggap tidak cocok untuk digunakan dalam media kultur. Laboratorium hewan komersial di negara maju menggunakan pengaduk magnetik untuk menyimpan darah. Peralatan khusus ini tidak mudah didapat di negara berkembang, dan satu-satunya pilihan lain untuk mendapatkan volume besar darah binatang adalah untuk membunuh binatang, yang tidak praktis atau dapat diterima di sebagian besar negara, dan darah sering terkontaminasi.

Agar-agardarah adalah medium pertumbuhan yang solid yang mengandung sel-sel darah merah.media ini digunakan untuk mendeteksibakteriyang memproduksienzimuntuk memecah sel-sel darah.Proses ini juga disebut hemolisis.Sejauh mana sel-sel darah hemolyzed digunakan untuk membedakan bakteri dari satu sama lain. Agar darah merupakan media diferensial,bukan media selektif. Darah agar memungkinkan membedakan bakteri berdasarkan kemampuan mereka untukmelisiskan sel-sel darah merah.

Gambar 1. Agar darah

Media agar darah dipersiapkan dalam proses dua langkah.Pertama, sejumlah bahan yang ditambahkan ke air, termasuk infus jantung, pepton, dan natrium khlorida.Solusi ini disterilkan.Setelahsterilisasi,jumlah diketahui darah steril ditambahkan.Darah dapat berasal dari kelinci atau domba.Rabbit darah lebih disukai jika bakteri target adalah dari kelompok yang dikenal sebagai kelompok AStreptococcus.Sheep darah lebih disukai jika target bakteriHaemophilus parahaemolyticus.Blood agar atau agar darah biasanya dibuat dari Tryptic Soy Agar atau Columbia Agar Base dengan darah domba 5% atau bisa juga darah Kelinci atau kuda dapat digunakan untuk pertumbuhan organisme yang membutuhkan NAD, seperti spesies Haemophilus. Pengunaan darah manusia tidak disarankan karena kemungkinan paparan patogen melalui darah manusia seperti HIV atau hepatitis. Blood agar adalah media mikrobiologi yang kaya nutrient. Secara umum biasanya digunakan sebagai basal media untuk menyiapkan agar darah dengan penambahan supplement darah. Media Mikrobiologi ini juga bisa digunakan sebagai media mikrobiologi untuk penggunaan umum tanpa penambahan darah. Jika media mikrobiologi ini digunakan tanpa penambahan darah, pH harus diatur pada satuan 7,2-7,4 karena kebanyakan bakteri tumbuh pada suhu yang sedikit agak basa.

Kandungan beef extract dan tryptose pada media mikrobiologi agar darah menghasilkan karbon, nitrogen . asam amino dan vitamin. Kandungan natrium chloride membantu mempertahankan keseimbangan osmotik dari medium. Penambahan darah membuat media mikrobiologi Blood Agar Base lebih kaya nutrient dengan memberikan tambahan faktor- faktor pertumbuhan yang dibutuhkan .Penambahan darah juga membantu visualisasi reaksi hemolitik yang terjadi jika ada pertumbuhan bakteri patogen. Reaksi hemolitik akan bergantung pada darah binatang yang digunakan. Darah domba akan memberikan hasil terbaik untuk group A streptococcus. Sebaliknya darah domba tidak akan memberikan hasil yang baik untuk analisa Haemophillus Haemolyticus karena kurangnya kandungan pyridine nucleotides.

Agar darah merupakan sumber makanan yang kaya untuk bakteri.Jadi, dapat digunakan untuk kultur primer, yaitu, sebagai alat untuk memperoleh berbagai selebarpertumbuhan bakteridari sampel mungkin.Hal ini biasanya tidak digunakan untuk tujuan ini. Namun dibandingkan dengan biaya medium yang lain, agar darah lebih murah.Selain itu agar darah lebih mudah dalam menetukan hemolisis.Medium diferensial adalah medium yang dapat ditumbuhi semacam mikroorganisme dengan memberikan ciri tertentu. Mikroorganisme tersebut mampu menguraikan salah satu bahan pembuat medium dimana mikroorganisme yang lain yang sama-sama tumbuh di situ tidak mampu. Contohnya adalah agar darah. Sebuah media pertumbuhan dianggap berbeda jika, ketika mikroba tertentu ini, koloni media atau bakteri sendiri menunjukkan perubahan warna yang memberikan informasi tentang identitas mereka.Agar darah (BAP) adalahpertumbuhan diferensial mediayang digunakan untuk membedakan mikrobiologi bakteri klinis yang signifikan dari budaya dan dahak tenggorokan.BAP berisi darah domba 5%.Bakteri tertentu menghasilkan enzim (hemolysins) yang bekerja pada sel darah merah terhadap pelet atau menghancurkan mereka.

Agar darah merupakan media yang paling banyak digunakan unuk penanaman bakteri yang sukar tumbuh karena pada agar darah domba mengandung nutrisi yang dibutuhkan bakteri. Kemudian pula koloni yang tumbuh pada media ini biasanya spesifik dan mudah dikenali. Media pada dasarnya terdiri dari sumber protein(pepton), protein kedelai olahan (mengandung KH),NaCl, agar dan darah domba 5%. Bakteri penghasil enzim ekstraseluler yang dapat melisiskan sel darah merah domba pada agar (hemolisis). Aktifitas ini ditandai adanya zona jernih di sekeliling koloni (beta hemilisis), kehijauan (alpha hemolisis) dan untuk bakteri yang tidak menghemolisa darah tidak terjadi perubahan pada sekeliling koloni bakteri. Gambar 2. Identifikasi mikroba pada medium agar darah Agar darah yang digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri yang sukar tumbuh dalam medium biasa ini memiliki banyak jenis. Jenis-jenis yang sering dipakai antara lain :a) Agar Darah Plat (Blood Agar Plate)

Berisi darah mamalia (biasanya domba atau kuda), biasanya diperkaya pada konsentrasi berkisar antara 5-10%. Media diferensial digunakan untuk mengisolasipemilihorganisme dan mendeteksi hemolitikaktivitas.Aktivitas -hemolitik akan menunjukkan lisis dan pencernaan lengkap isi sel darah merah sekitar koloni.Contohnya termasukHaemolyticus Streptococcus.-hemolisis akan hanya sebagian melisiskan (sel-sel yang baik segaris atau tidak-itu adalah pencernaan yang mungkin tidak lengkap) hemoglobin dan akan muncul hijau.

Gambar 3. Media BAPb) Agar Cokelat (Chocolate Agar)Jenis agar-agar darah ini di mana sel darah telahsegarisdengan memanaskan sel pada suhu berkisar pada 56C.Agar cokelat digunakan untuk menumbuhkan bakteri pernafasan, sepertiHaemophilus influenzae.Warna coklat pada agar-agar ini bukan disebabkan agar tersebut terbuat dari cokelat, itu adalah nama untuk pewarnaan saja. Media agar coklat (Thayer-Martin) merupakan media terpilih untuk genus Neisseria. Untuk pertumbuhannya diperlukan suasana anaerob(fakultatif) dengan sedikit gas CO2 dan tidak boleh kekeringan, sehingga pembiakan yang cocok digunakan dalam eksikator yang diberi kapas basah pada bagian bawah petri yang berisi biakan.c. Tiosulfat Sitrat Bile Sucrosa Agar (TCBS Agar) TCBS diperkaya untuk meningkatkan pertumbuhanVibriospp, termasukcholerae Vibrio. Agar TCBS (thiosulfat citrat bile sucrose), mengandung gelatin agar yang mengandung Na-tourokholat, digunakan untuk mengisolasi genus Vibrio. Setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC di atas media berwarna hijau kehitaman koloni akan terlihat bundar berwarna kuning muda, permukaannya akan terlihat rata.

Gambar 4. Agar TCBS

d. Agar Darah Telurit Untuk megisolasi Corynebacterium digunakan agar darah telurit (Mc Leod), sebagai media selektif, setelah inkubasi selama 24 jam koloni bakteri terlihat berwarna abu-abu tua-hitam. Selanjutnya untuk biakan murni Corynebacterium digunakan media perbenihan Loeffler dalam tabung.

e. Thayer Martin agar(TM Agar)

Media agar coklat (Thayer-Martin) merupakan media terpilih untuk genus Neisseria. Untuk pertumbuhannya diperlukan suasana anaerob dengan sedikit gas CO2 dan tidak boleh kekeringan, sehingga pembiakan yang cocok digunakan dalam eksikator yang diberi kapas basah pada bagian bawah petri yang berisi biakan.

Gambar 5. Media cokelat dan Media Thayer-Matin

Salah satu proses yang bisa dilakukan dalam membuat agar darah adalah hemolisis. Hemolisis adalah memecah membran sel darah merah oleh protein bakteri yang dikenal sebagai hemolisin, yang menyebabkan pelepasan hemoglobin dari sel darah merah.Banyak jenis bakteri dimiliki protein hemolitik.Protein ini berpikir untuk bertindak dengan mengintegrasikan ke dalam membran sel darah merah dan baik meninju lubang melalui membran atau mengganggu struktur membran dalam beberapa cara lain.Rincian molekul tepat tindakan hemolisin masih belum terselesaikan. Darah yang digunakan dalam agar-agar juga diperlakukan terlebih dahulu untuk menghapus molekul yang disebut fibrin, yang berpartisipasi dalam pembekuan darah.Tidak adanya fibrin memastikan bahwa pembekuan darah tidak terjadi dalam agar-agar, yang dapat mengganggu deteksi visual dari reaksi hemolitik. Ada tiga jenis hemolisis yang meliputi alpha hemolisis, beta hemolisis, dan gama hemolisis.

Alpha hemolisis mengacu pada lisis parsial atau lisis sebagian dari sel darah merah dan hemoglobin. Hal ini menghasilkan perubahan warna disekitar koloni menjadi abu abu kehijauan. Hemolisis alpha adalah perubahan warna kehijauan yang mengelilingi sebuahkolonibakteri yang tumbuh di agar-agar.Jenis hemolisis merupakan dekomposisi sebagian dari hemoglobin sel darah merah.hemolisis Alpha karakteristik danStreptococcus pneumoniasehingga dapat digunakan sebagai fitur diagnostik dalam identifikasi strain bakteri.

Bakteri yang tergolong hemolitik adalah bakteri yang memiliki kemampuan parsial menghemolisis media agar darah dan mengekspresikan zona kehijauan disekitar koloni. Alpha hemolisis disebabkan oleh oksidasi besi dalam hemoglobin, memberikan warna kehijauan pada agar darah. Alfa hemolisis juga mengacu pada lisis parsial/ lisis sebagian dari sel darah merah dan hemoglobin. Hal ini menghasilkan perubahan warna di sekitar koloni menjadi abu-abu kehijauan.

Beta hemolisis merupakan lisis lengkap sel darah merah dan hemoglobin. Darah secara lengkap digunakan oleh mikroba. Media yang ada koloninya menjadi tidak berwarna. hemolisis Beta merupakan rincian lengkap dari hemoglobin sel darah merah di sekitar koloni bakteri.Ada kliring dari agar-agar di sekitar koloni.hemolisis Beta karakteristikStreptococcus pyogenesdan beberapa strain dariStaphylococcus aureus. Bakteri hemolitik adalah bakteri yang mengekspresikan zona bening disekitar koloni. Beta hemolisis juga merupakan lisis lengkap sel darah merah dan hemoglobin. Darah secara lengkap digunakan oleh mikroba. Media yang ada koloninya menjadi tidak berwarna.Gamma hemolisis yaitu tidak terjadi hemolisis, dimana tidak ada perubahan warna dalam medium. Hemolisis gamma adalah kurangnya hemolisis di daerah sekitar koloni bakteri.Sebuah plat agar darah hemolisis menampilkan gamma sebenarnya muncul kecoklatan.Ini adalah reaksi normal darah dengan kondisi tumbuh yang digunakan (37 C di hadapan karbon dioksida).Hemolisis gamma merupakan karakteristik dariEnterococcufaecalis.

Bakteri gamma hemolitik atau non hemolitik adalah bakteri yang tidak mampu melisis darah pada media agar. Bakteri non-hemolitik lebih bersifat virulen dibandingkan tipe -hemolitik. Tidak terjadinya hemolisis ditandai dengan tidak ada perubahan warna dalam medium. Gamma hemolisis sebenarnya adalah kurangnya hemolisis di daerah sekitar koloni bakteri yang tumbuh pada agar darah. Biakan bakteri pada agar darah untuk tujuan klasifikasi hemolisis dilakukan pada 37oC di dalam suasana CO2 5%. Hasil Damma hemolisis ini ditunjukkan adanya perubahan warna dari merah menjadi kecoklatan pada agar darah.

Gambar 6. Tiga jenis hemolisisReaksi Hemolytic juga dapat menampilkan sinergi beberapa.Artinya, kombinasi reaksi menghasilkan reaksi yang lebih kuat daripada reaksi baik saja.Beberapa spesies bakteri, seperti kelompok B Strep (misalnya n adalahStreptococcus agalactiae)adalah lemah beta-hemolitik.Namun, jika bakteri berada di dekat dengan strain Staphylococcus yang betahemolysins dari dua organisme yang dapat bergabung untuk menghasilkan reaksi hemolitik beta intens.Ini akan menjadi dasar uji yang disebut tes CAMP.Penentuan hemolisis dan reaksi hemolitik ini berguna dalam membedakan berbagai jenis bakteri.pengujian biokimia selanjutnya dapat mempersempit identifikasi lebih jauh.Sebagai contoh, reaksi hemolitik beta merupakan indikasi dari Streptococcus.Pengujian organisme Streptococcus dengan bacitracin sering langkah berikutnya.Bacitracin merupakan antimikroba yang dihasilkan oleh bakteriBacillus subtilis. Streptococcus pyogenesstrain hampir uniformally sensitif terhadap bacitracin.Namun kelompok-kelompok antigenik lain Streptococcus tidak bacitracin sensitif.Dasar agar-agar darah biasanya dilengkapi dengan 5 - 10% darah domba, darah kelinci, atau darah kuda untuk digunakan dalam mengisolasi, budidaya,dan menentukan reaksi hemolitik mikroorganisme patogen teliti.Tanpa pengayaan, darah agar-agar dapat digunakan sebagai media umum. Pada tahun 1919, Brown bereksperimen dengan formulasi agar darah dengan dampak dari pembentukan koloni dan hemolisis. Pertama kali diisolasi oleh Robert Koch dari paru tuberkel hancur baru setelah 10 hari inkubasi menggunakan dikoagulasi domba dan sapi sedang panas serum dalam tabung.Isolat juga ditemukan dengan menggunakan agar darah, tetapi ini diganti oleh berbasis agar-agar telur yang, tahun 1920, menjadi standar yang direkomendasikan media untuk isolasi primerM.tuberkulosiskarena kemudahan dalam mensterilkan berbasis media telur. Tidak ada studi banding membandingkan efektivitas berbasis agar darah dan berbasis agar telur telah dilakukan. Agar darah merupakan alternatif yang sesuai untuk isolasi primerM.tuberkulosisdan bahkan mungkin lebih unggul berbasis agar-agar telur untuk subkultur organisme.Agar darah juga memfasilitasi pemulihan lain pemilih, lambat tumbuh organisme yang mungkin ada di sampingM.TB,seperti sppBartonella.. Namun, karena agar-agar darah tidak media selektif, mungkin lebih cocok untuk spesimen noncontaminated.Inokulasi agar darah bisa dilakukan segera untuk menghindari keterlambatan dalam pengiriman spesimen klinis untuk laboratorium rujukan dengan media khususPercobaan lanjutan yang telah banyak dilakukan oleh para peneliti dibandingkan pertumbuhan 38 kelenjar getah beningM.pernapasan danTBisolat ketika subkultur pada dua media.Setelah 6 hari inkubasi, 21 dari 38 isolat telah tumbuh pada agar darah, dan jumlah koloni rata-rata secara signifikan lebih besar pada agar darah dari pada yang berbasis media telur(P