Tecniche per la coltura dei BatteriRoma, 12 marzo 2013

Classi 3 E – 3 I

Con questa esercitazione abbiamo calcolato il numero di batteri (Escherichia Coli) presenti in una coltura (conta vitale) e ne abbiamo saggiato la resistenza a vari antibiotici (antibiogramma)

La conta vitale

Con questa tecnica si contano solo le cellule in grado di dividersi e di dare origine a progenie.

Presupposto: ogni colonia si è generata da una singola cellula batterica.

Necessita di terreni di coltura appropriati• piastramento di superficie • piastramento da inclusione

in entrambi i metodi per ottenere un conteggio valido devono essere presenti sulla piastra da 30 a 300 colonie.

Piastramento di superficieSi prelevano 0,1ml dalla sospensione batterica opportunamente diluita e si deposita su piastra Petri contenente il terreno di coltura appropriato, dopo qualche giorno è possibile osservare le colonie e contarle.

Antibiogramma: con questa analisi si misura la sensibilità di un microrganismo in coltura nei riguardi di diversi antibiotici. Piastramento da inclusioneOperativamente si inocula un terreno di crescita con un microrganismo e si valuta l’effetto inibente la crescita microbica nell’area circostante i vari dischetti di carta contenenti gli antibiotici.

L’ampiezza dell’alone di inibizione della crescita del microrganismodipende dalla sensibilità dell’agente patogeno al particolare antibiotico e dalla sua concentrazione.

Si utilizza per determinare l’attività di un antibiotico verso un microrganismo patogeno

Analisi degli aloni di inibizione

Antibiogramma

I batteri crescono nel terreno formando una patina opaca. L’antibiotico presente nel dischetto diffonde impedendo la crescita

dei batteri

Piastre utilizzate per la conta vitale dei batteri

250 colonie

Piastra con antibiogramma • Antibiotici utilizzati:– Ampicillina (Ap)– Kanamicina (Km)– Tetraciclina (Tc)– Streptomicina (Sm)

• Le concentrazioni di antibiotico contenute nei dischetti sono dosate sulla base delle rispettive quantità utilizzabili in terapia

I nostri risultati

Dati Sperimentali

Conclusioni• Antibiotico migliore per effettuare la terapia:

Ampicillina (alone dell’inibizione della crescita dei batteri statisticamente e sistematicamente maggiore per tutti i gruppi di lavoro)

• In base alla loro efficienza statistica relativa la scelta di un antibiotico alternativo cadrebbe dapprima sulla Kanamicina e infine sulla Tetraciclina

• Batteri resistenti alla Streptomicina (assenza di alone di inibizione batterica)