Upload
mckenzie-hardin
View
103
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
T.C. SAĞLIK BAKANLIĞI Verem Savaşı Daire Başkanlığı. Uzm. Dr. Feyzullah GÜMÜŞLÜ Verem Savaşı Daire Başkanı. Mikrobakteri Kültürü. Yayma ve Kültürde Duyarlılık. Mikroskopi/Kültür. %25-65 Duyarlılık; Kültüre göre %30-50 Duyarlılık artışı; Mikroskopiye göre %90 Duyarlılık; 5000-10000 Basil/ml - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
T.C.SAĞLIK BAKANLIĞI
Verem Savaşı Daire Başkanlığı
Uzm. Dr. Feyzullah GÜMÜŞLÜVerem Savaşı Daire Başkanı
Mikrobakteri Kültürü
- Özgün - Biyogüvenlik-tehlike
- Duyarlı - Maliyet
- Altın standart - Zaman
- Eğitimli Personel
Yayma ve Kültürde Duyarlılık
Gözlenen Basil Sayısı
1 ml Balgamdaki
tahmini basil miktarı
Pozitif Sonuç ihtimali
300 alanda; 0 1000 den az %10’dan az
300 alanda 1-2 5000-10.000 %50
100 alanda 1-9 Yaklaşık 30.000 %80
10 alanda 1-9 Yaklaşık 50.000 %90
Her alan için 1-9 Yaklaşık 100.000
%96.2
Her alan için 10 veya daha fazla
500.000 %99.95
Mikroskopi/Kültür
%25-65 Duyarlılık; Kültüre göre %30-50 Duyarlılık artışı; Mikroskopiye
göre %90 Duyarlılık; 5000-10000 Basil/ml
%80-82 Birinci inceleme %10-14 İkinci inceleme %5-8 Üçüncü inceleme
Kültür Basamakları
Biyogüvenlik ve Kalite Güvencesi için;1- Laboratuvar yerleşimi ve alt yapı 2- Ekipman yerleşimi3- Gereç kullanımı4- Örnek toplama5- Bekleme ve transport6- Metot seçimi
Dekontaminasyon – HomojenizasyonBesi yeri
Biyogüvenlik ve Hastalık Gelişim Seyri
Basil Miktarı Maruziyetİmmün Sistem Hastalık
Çok Fazla Çok Uzun Çok Zayıf+ + + + + + + + + + + + + + Kesin
Fazla + + + + + +Uzun Zayıf ++
+ +Az Kısa + + İyi + + +
++++
Kuvvetle muhtemel
Çok Az Çok Kısa Çok İyi
Muhtemel
İhtimal dahilinde değil
Biyogüvenlik Düzeyi; BSL1
BSL 1 (WHO) WHO, (2004). Laboratory Biosafety Manual Third Edition WHO/CDS/CSR/LYO/2004.11
1- Laboratuvar yerleşimi ve alt yapı
Biyogüvenlik Düzeyi; BSL2
(WHO) WHO, (2004). Laboratory Biosafety Manual Third Edition WHO/CDS/CSR/LYO/2004.11
Biyogüvenlik Düzeyi; BSL3
(WHO) WHO, (2004). Laboratory Biosafety Manual Third Edition WHO/CDS/CSR/LYO/2004.11
2- Ekipman Yerleşimi
Kalite – Biyogüvenlik laboratuvarı Biyogüvenlik kabini
Class I Class IIA Class IIB
Santrifuj 3000 X g;15 dakika; %95 sediment RFC= 3000 x g, 15 dak. (1500 xg; %20 azalır) Isı artışı(20°, 30°, 40°) (%13, %22, %30) azalır
Koagülatör 80-85° 45 dakika
4- Örnek Toplama
Kap
Örnek türleri
- Balgam
- Non-steril örnekler
- Steril vücut sıvaları
- Steril doku
5- Bekleme ve Transport
%1 Cetylpyridinium Chlorid, %2 NaCl içinde 50 mg/2 ml Anhydrous Sodium Carbonate %23 Sodium Triphosphate 0,01- 0,02 ml/ml Potasium Oxalate 0,2 mg/ml Heparin
6- Metot Seçimi
Homojenizasyon – Dekontaminasyon Toksisite
%30-60 canlı Basil kaybı %2-3 kontaminasyon %5-10 bekleyenler için; Maruziyet süresi
Dekontaminasyon Metotları
Modifiye Petroff NALC – NaOH Zephiran trisodium phosphate Oxalic acid Sulphuric acid
Modifiye Petroff
Avantajları Basit, ucuz, etkili dekontaminasyon 1/1 saat; 20/2 saat Solüsyon stabil
Dezavantajları Maruziyet süresi titizlik ister Güçlü dekontaminasyon; %60 basil
kaybı
NALC - NaOH
Avantajları Homojenizasyon güçlü Petroff’ da ki %60 kayıp %30 1 örnek /40 dk. , 20 örnek /1 saat
Dezavanjları Stabil olmayan solüsyon Bovin albumin, filtre gereği (pahalı) Kontaminasyon oranı fazla
Diğerleri
Zephiran Trisodium Phosphate Maruziyet süresi kritik değil Basil kaybı %30 1 örnek /2 saat; 20 örnek /4 saat
Oxalic acid İnatçı pseudomonas
kontaminasyonlarında Sulphuric acid
İdrar ve AMS (bazen)
Metot Seçimi/Besiyerleri
İçerik Görünüm Amaç
- Sentetik - Katı - İzolasyon
- Yarı sentetik - Sıvı - İdentifikasyon
- Kompleks - Karışık - Üretim
İdeal Besiyeri
Az sayıda (10-100) basil üreyebilmeli Ekonomik olmalı İdentifikasyona yardımcı olmalı Kontaminanları inhibe edebilmeli İlaç duyarlılık testleri için kullanılabilmeli
Diagnostik Besiyerleri
Yumurta bazlı besiyeri (L J, Ogawa) Agar bazlı besiyeri (MB7H10-11) Sıvı besiyerleri
Herman – Kirschner sıvı besiyeri Dubos OAA sıvı besiyeri Middlebrook 7H12 BACTEC 12B MGIT
Yumurta bazlı Besiyeri
Avantajları Kolay, ucuz, Uzun süre saklanabilir, Kontaminasyona dirençli,
Koagülasyon Malaşit yeşili
Santrifuj ve nötralizasyon gerekmeksizin ekim (Ogawa)
Yumurta bazlı Besiyeri
Dezavantajları 6 - 8 Hafta üreme süresi
Özellikle az basil içeren örneklerde Sert dekontaminasyon prosedürlerinde
Kontaminasyonda örnek kaybı Uygulama hataları
Godeler ve hava kabarcıkları
Agar Bazlı Besiyeri
Avantajları Daha erken üreme Tanımlayıcı koloni yapısı
Dezavantajları Pahalı CO2 gereksinimi Gün ışığından ve ısıdan etkilenme
Sıvı Besiyerleri(Radyometrik – Florasan indikatörlü)
Avantajları Erken üreme
5-7 gün ; BACTEC, 11-12 gün; MGIT
Özgün - duyarlı Dezavantajları
Hem besiyeri hem cihaz pahalı MTB – MOTT ayırımı ilave süreç ister Radyometrik atık (BACTEC)
DEĞERLENDİRME
Hem Dekontaminasyon – Homojenizasyon prosedürü için hem de besiyeri için pek çok metot kullanılmıştır. Ancak hiçbirine üniversal olarak en iyi denilememiştir. Çünkü metotların uygunluğu teknik kapasite, eğitilmiş laboratuvar personeli, uygun ekipman tipi ve kalibrasyonu ile yakından ilgilidir.