2
System EUROArray do diagnostyki łuszczycy Ocena za pomocą EUROArrayScan Protokół dla każdego wyniku badania Zasada działania testu: EUROArray jest testem do oznaczania in vitro alleli HLA-C*06 w ludzkim, genomowym DNA. W pierwszym kroku amplifikowane są, za pomocą rekcji PCR, fragment genu HLA-C oraz gen β-globiny, stanowiący zintegrowaną kontrolę pozytywną. Do amplifikacji fragmentu genu HLA-C dochodzi jedynie, gdy w badanej próbce obecny jest allel HLA-C*06. Wszystkie produkty reakcji PCR znakowane są barwnikiem fluorescencyjnym. Znakowanie odbywa się podczas amplifikacji. W drugim etapie, produkty analizowane są na mikromacierzach opłaszczonych sondą komplementarną do produktów reakcji. Swoiste związanie (hybrydyzacja) znakowanych fluorescencyjnie produktów, do immobilizowanej na mikromacierzy sondy, analizowane jest za pomocą skanera do mikromacierzy EUROIMMUN. Obecność sygnału fluorescencyjnego w miejscu specyficznym dla HLA-C*06 wskazuje na obecność tego allelu w DNA pacjenta. Sygnały fluorescencyjne są oceniane automatycznie za pomocą programu EUROArrayScan. Procedura wykonania testu: Reakcja PCR zachodzi w urządzeniu zwanym termocyklerem. Hybrydyzacja produktów PCR odbywa się za pomocą technologii TITERPLANE TM na szkiełkach EUROArray zawierających mikromacierze. Skanowanie szkiełek i analiza wyników odbywa się za pomocą skanera do mikromacierzy EUROIMMUN i programu EUROArrayScan. Program umożliwia w pełni zautomatyzowaną ocenę szkiełek EUROArray i szczegółową dokumentację wyników. Czułość i specyficzność: System mikromacierzy wykrywa wszystkie istotne podtypy HLA-C*06. Czułość i swoistość testu została potwierdzona w badaniach scharakteryzowanych próbek referencyjnych z zastosowaniem metod genetyki molekularnej i wyniosła 100%. Materiał referencyjny n Metoda referencyjna Czułość Specyficzność Krew pobrana na EDTA od pacjentów i zdrowych dawców, Niemcy (10 próbek scharakteryzowanych, jako HLA-C*06 pozytywne, 10 jako HLA-C*2706 negatywne). 20 Genetyka molekularna 100% 100% DNA pozyskane z International Histocompatibility Working Group (IHWG): “Sequence Polymorphism Reference Panel” i „HLA (Anthropology) Reference Panel” , (8 próbek scharakteryzowanych, jako HLA-C*06 pozytywne, 47 jako HLA-C*06 negatywne). www.ihwg. org 55 Genetyka molekularna 100% 100% Prewalencja: W badaniach 100 losowo wybranych próbek, 18% przypadków dało pozytywny wynik. Wartość ta odpowiada średniej prewalencji HLA-C*06 w populacji Środkowej Europy.

System EUROArray do diagnostyki łuszczycy HLA-Cw6.pdf · testu została potwierdzona w badaniach scharakteryzowanych próbek referencyjnych z zastosowaniem metod genetyki molekularnej

  • Upload
    lykhanh

  • View
    220

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: System EUROArray do diagnostyki łuszczycy HLA-Cw6.pdf · testu została potwierdzona w badaniach scharakteryzowanych próbek referencyjnych z zastosowaniem metod genetyki molekularnej

System EUROArray do diagnostyki łuszczycy

Ocena za pomocą EUROArrayScan Protokół dla każdego wyniku badania

Zasada działania testu: EUROArray jest testem do oznaczania in vitro alleli HLA-C*06 w ludzkim, genomowym DNA. W pierwszym kroku amplifikowane są, za pomocą rekcji PCR, fragment genu HLA-C oraz gen β-globiny, stanowiący zintegrowaną kontrolę pozytywną. Do amplifikacji fragmentu genu HLA-C dochodzi jedynie, gdy w badanej próbce obecny jest allel HLA-C*06. Wszystkie produkty reakcji PCR znakowane są barwnikiem fluorescencyjnym. Znakowanie odbywa się podczas amplifikacji. W drugim etapie, produkty analizowane są na mikromacierzach opłaszczonych sondą komplementarną do produktów reakcji. Swoiste związanie (hybrydyzacja) znakowanych fluorescencyjnie produktów, do immobilizowanej na mikromacierzy sondy, analizowane jest za pomocą skanera do mikromacierzy EUROIMMUN. Obecność sygnału fluorescencyjnego w miejscu specyficznym dla HLA-C*06 wskazuje na obecność tego allelu w DNA pacjenta. Sygnały fluorescencyjne są oceniane automatycznie za pomocą programu EUROArrayScan.

Procedura wykonania testu: Reakcja PCR zachodzi w urządzeniu zwanym termocyklerem. Hybrydyzacja produktów PCR odbywa się za pomocą technologii TITERPLANETM na szkiełkach EUROArray zawierających mikromacierze. Skanowanie szkiełek i analiza wyników odbywa się za pomocą skanera do mikromacierzy EUROIMMUN i programu EUROArrayScan. Program umożliwia w pełni zautomatyzowaną ocenę szkiełek EUROArray i szczegółową dokumentację wyników.

Czułość i specyficzność: System mikromacierzy wykrywa wszystkie istotne podtypy HLA-C*06. Czułość i swoistość testu została potwierdzona w badaniach scharakteryzowanych próbek referencyjnych z zastosowaniem metod genetyki molekularnej i wyniosła 100%.

Materiał referencyjny nMetoda

referencyjnaCzułość Specyficzność

Krew pobrana na EDTA od pacjentów i zdrowych dawców, Niemcy (10 próbek scharakteryzowanych, jako HLA-C*06 pozytywne, 10 jako HLA-C*2706 negatywne).

20Genetyka

molekularna100% 100%

DNA pozyskane z International Histocompatibility Working Group (IHWG): “Sequence Polymorphism Reference Panel” i „HLA (Anthropology) Reference Panel”, (8 próbek scharakteryzowanych, jako HLA-C*06 pozytywne, 47 jako HLA-C*06 negatywne). www.ihwg.org

55Genetyka

molekularna100% 100%

Prewalencja: W badaniach 100 losowo wybranych próbek, 18% przypadków dało pozytywny wynik. Wartość ta odpowiada średniej prewalencji HLA-C*06 w populacji Środkowej Europy.

Page 2: System EUROArray do diagnostyki łuszczycy HLA-Cw6.pdf · testu została potwierdzona w badaniach scharakteryzowanych próbek referencyjnych z zastosowaniem metod genetyki molekularnej

Charakterystyka testu EUROArray HLA-Cw6

Wskazania: Test służy do oznaczania alleli HLA-C*06 w ludzkim genomowym DNA. Obecność alleli HLA-C*06 może być powiązana z następującymi chorobami: łuszczyca z manifestacją skórną (w szczególności łuszczyca zwykła typu 1, łuszczyca kropelkowata, łuszczyca zwykła typu 2) oraz stawową (zwłaszcza łuszczycowe zapalenie stawów).

Znaczenie kliniczne: EUROArray HLA-Cw6 został zaprojektowany do wykrywania alleli HLA-C*06 kodujących antygen tkankowy HLA-Cw6. Allele HLA-C*06 odpowiadają za predyspozycję genetyczną do zachorowania na łuszczycę. W 40% przypadków łuszczyca jest chorobą rodzinną. Potwierdzeniem genetycznego uwarunkowania łuszczycy są obserwacje bliźniąt, wykazujące znacząco wyższy współczynnik zgodności (concordance rate) występowania choroby u bliźniąt jednojajowych (62-75%) w porównaniu do bliźniąt dwujajowych (21-25%). Najnowsze doniesienia potwierdzają, że spośród wszystkich loci genowych, HLA-C wykazuje najwyższą asocjację z łuszczycą, a HLA-C*06 uznawany jest za najważniejszy marker genetyczny tej choroby. Około 67% pacjentów cierpiących na łuszczycę jest nosicielami allelu HLA-C*06 w porównaniu do częstości występowania rzędu 10-20% w ogólnej populacji. Obecność allelu HLA-C*06 w populacji kaukaskiej zwiększa 10-krotnie ryzyko rozwoju łuszczycy.

W przewlekłych zapalnych schorzeniach skóry oznaczenie allelu HLA-C*06 ma ogromne znaczenie w diagnostyce różnicowej. Obecność antygenu HLA-Cw6 jest silnie związana z łuszczycą zwykłą typu 1 (OR 16.0) i łuszczycą kropelkowatą (OR 33.6), natomiast słabsza korelacja (OR 2.6) dotyczy łuszczycy zwykłej typu 2. W łuszczycy zwykłej typu 1 około 83% pacjentów posiada allel HLA-C*06 podczas, gdy w typie 2 liczba pacjentów HLA-Cw6 pozytywnych wynosi 44%. Typ 1 łuszczycy zwykłej ma bardziej agresywny przebieg w porównaniu z typem 2. W związku z tym przyjmuje się, że występowanie HLA-Cw6 związane jest z ciężkim przebiegiem łuszczycy.

Ludzkie antygeny leukocytarne (HLA – ang. Human Leukocyte Antigens) są antygenami głównego układu zgodności tkankowej (MHC – ang. Major Histocompatibility Complex), który zlokalizowany jest na krótszym ramieniu chromosomu 6. HLA-C należy do antygenów HLA klasy I (tzw. antygeny MHC I), obok HLA-B i HLA-A. Antygeny tkankowe HLA obecne są we wszystkich ludzkich komórkach zawierających jądra. Ich funkcją jest kontrola odpowiedzi immunologicznej związanej z limfocytami T. Oznaczanie swoistości alleli HLA ma znaczenie diagnostyczne ze względu na istnienie szeregu chorób związanych z obecnością HLA.

Zastosowanie EUROArray HLA-Cw6: HLA-Cw6 może być dokładnie i precyzyjne oznaczany za pomocą technik biologii molekularnej poprzez wykrycie odpowiedniego allelu (HLA-C*06) w ludzkim genomowym DNA. Metody genetyczne skutecznie konkurują z testami mikrolimfocytotoksycznymi i cystometrią przepływową, wykrywającymi antygen HLA na powierzchni komórki.

W przypadku immunofenotypowania, istnieje ryzyko reakcji krzyżowych i fałszywie negatywnych, zwłaszcza gdy ekspresja HLA-C*06 jest niska. Genetyczne oznaczenie HLA-C*06 jest metodą bardziej czułą i swoistą w porównaniu do technik serologicznych. W teście firmy EUROIMMUN startery są zaprojektowane i zoptymalizowane tak, aby amplifikowały się wszystkie obecnie poznane podtypy HLA-C*06.

Dane techniczne:Substrat Jednoniciowe DNA, długość: 20 do 50 nukleotydów

Procedura 60 min (PCR)/ 60 min (hybrydyzacja)/ 5 min (odczyt)

Reagenty Gotowe do użycia

Kontrola Zintegrowana w teście kontrola pozytywna

Certyfikaty CE-IVD Cały proces włącznie z ekstrakcją DNA

Format 5, 10 lub 20 szkiełek, każde zawiera 5 pól z mikromacierzami

Numery zamówień MN 5410-0505, MN 5410-1005 lub MN 5410-2005

PCR (łańcuchowa reakacja polimerazy)

Hybrydyzacja DNA na mikromacierzy

Automatyczna analiza wyniku (EUROArrayScan)

Próbka DNA