STANDARDIZACIJA TESTOV ZA DOLOؤŒITEV 2016. 5. 13.آ  Grobin B. Standardizacija testov za doloؤچitev antioksidacijskega

  • View
    0

  • Download
    0

Embed Size (px)

Text of STANDARDIZACIJA TESTOV ZA DOLOؤŒITEV 2016. 5. 13.آ  Grobin B. Standardizacija testov za...

  • 1

    UNIVERZA V LJUBLJANI

    BIOTEHNIŠKA FAKULTETA

    ODDELEK ZA ŽIVILSTVO

    Blaž GROBIN

    STANDARDIZACIJA TESTOV ZA DOLOČITEV

    ANTIOKSIDACIJSKEGA POTENCIALA

    MAGISTRSKO DELO

    Magistrski študij - 2. stopnja Živilstvo

    Ljubljana, 2016

  • 2

    UNIVERZA V LJUBLJANI

    BIOTEHNIŠKA FAKULTETA

    ODDELEK ZA ŽIVILSTVO

    Blaž GROBIN

    STANDARDIZACIJA TESTOV ZA DOLOČITEV ANTIOKSIDACIJSKEGA

    POTENCIALA

    MAGISTRSKO DELO

    Magistrski študij - 2. stopnja Živilstvo

    STANDARDIZATION OF THE ASSAYS FOR THE EVALUATION OF

    ANTIOXIDANT POTENTIAL

    M. Sc. THESIS

    Master Study Programmes: Field Food Science and Technology

    Ljubljana, 2016

  • Grobin B. Standardizacija testov za določitev antioksidacijskega potenciala.

    Magistrsko delo (Du2). Ljubljana, Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Oddelek za živilstvo, 2016 II

    Magistrsko delo je zaključek magistrskega študijskega programa 2. stopnje Živilstvo. Delo

    je bilo opravljeno na Katedri za biokemijo in kemijo živil na Oddelku za živilstvo

    Biotehniške fakultete Univerze v Ljubljani.

    Komisija za študij 1. in 2. stopnje je za mentorja magistrskega dela imenovala izr. prof. dr.

    Blaža Cigića, za somentorico izr. prof. dr. Heleno Abramovič in za recenzentko prof. dr. Leo

    Demšar

    Mentor: izr. prof. dr. Blaž CIGIĆ

    Somentorica: izr. prof. dr. Helena ABRAMOVIČ

    Recenzentka: prof. dr. Lea DEMŠAR

    Komisija za oceno in zagovor:

    Predsednik:

    Član:

    Član:

    Član:

    Datum zagovora:

    Podpisani izjavljam, da je naloga rezultat lastnega raziskovalnega dela. Izjavljam, da je

    elektronski izvod identičen tiskanemu. Na univerzo neodplačno, neizključno, prostorsko in

    časovno nemejeno prenašam pravici shranitve avtorskega dela v elektronski obliki in

    reproduciranja ter pravico omogočanja javnega dostopa do avtorskega dela na svetovnem

    spletu preko Digitalne knjižnice Biotehniške fakultete.

    Blaž Grobin

  • Grobin B. Standardizacija testov za določitev antioksidacijskega potenciala.

    Magistrsko delo (Du2). Ljubljana, Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Oddelek za živilstvo, 2016 III

    KLJUČNA DOKUMENTACIJSKA INFORMACIJA

    ŠD Du2

    DK UDK 663.094.3.097.8:5771:543.637(043)=163.6

    KG živila/čaj/kava/pivo/jabolčni sok/ prehransko dopolnilo/antioksidanti/analizne

    metode/ABTS/DPPH/Folin-Ciocalteu

    AV GROBIN, Blaž dipl. inž. živ. in preh. (UN)

    SA CIGIĆ, Blaž (mentor) / ABRAMOVIČ, Helena (somentorica) / DEMŠAR, Lea

    (recenzentka)

    KZ SI-1000 Ljubljana, Jamnikarjeva 101

    ZA Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Oddelek za živilstvo

    LI 2016

    IN STANDARDIZACIJA TESTOV ZA DOLOČITEV ANTIOKSIDACIJSKEGA

    POTENCIALA

    TD Magistrsko delo (Magistrski študij - 2. stopnja Živilstvo)

    OP XII, 58 str., 18 pregl., 28 sl., 12 pril., 121 vir

    IJ sl

    JI sl/en

    AI V okviru magistrske naloge smo analizirali vpliv izbora metode in sestave topila na

    reaktivnost modelnih antioksidantov in vzorcev pijač ter prehranskih dopolnil v prisotnosti

    2,2'-azino-bis-3-etilbenzotiazolin-6-sulfonske kisline (ABTS), 2,2-difenil-1-pikrilhidrazila

    (DPPH) in Folin-Ciocalteau (FC) reagenta. Ugotovili smo, da imata tako izbor testa kot

    sestava topila velik vpliv na reaktivnost modelnih antioksidantov, z izjemo 6-hidroksi-

    2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksilne kisline (Troloks), ki smo ga posledično uporabili kot

    standard za določitev antioksidativnega potenciala (AOP). Pri analizi kinetičnega poteka

    reakcije vzorcev v ABTS in DPPH testih smo ugotovili, da hitri sledi počasna faza, ki v

    večini primerov tudi po treh urah še ni zaključena. Vsem vzorcem smo po enourni inkubaciji

    določili AOP z različnimi metodami in ugotovili velika odstopanja v odvisnosti od izbora

    testa in topila. Največje razlike smo ugotovili pri svetlem pivu, kjer je bil razpon AOP več

    kot 7-kraten, najmanjše pa pri zelenem čaju, kjer je največji določen AOP približno

    dvakratnik najmanjšega. V povprečju smo največje AOP določili s FC metodo, najmanjše

    pa z DPPH metodo v metanolu. Korelacijska analiza je razkrila veliko stopnjo korelacije v

    okviru DPPH in ABTS testov. Rezultati FC testa pa najbolje korelirajo z ABTS in DPPH

    testi, ki so izvedeni pri pH 7,4. Izbor metode ima podoben vpliv na reaktivnost strukturno

    podobnih vzorcev, saj je v takšnih primerih stopnja korelacije zelo velika.

  • Grobin B. Standardizacija testov za določitev antioksidacijskega potenciala.

    Magistrsko delo (Du2). Ljubljana, Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Oddelek za živilstvo, 2016 IV

    KEY WORDS DOCUMENTATION

    ND Du2

    DC UDC 663.094.3.097.8:5771:543.637(043)=163.6

    CX foods/tea/coffee/beer/apple juice/ dietary supplements/antioxidants/analitycal

    methods/ABTS/DPPH/Folin-Ciocalteu

    AU GROBIN, Blaž

    AA CIGIĆ, Blaž (supervisor) / ABRAMOVIČ, Helena (co-advisor) / DEMŠAR, Lea

    (reviewer)

    PP SI-1000 Ljubljana, Jamnikarjeva 101

    PB University of Ljubljana, Biotechnical Faculty, Department of Food Science and

    Technology

    PY 2016

    TY STANDARDIZATION OF THE ASSAYS FOR THE EVALUATION OF

    ANTIOXIDANT POTENTIAL

    DT M. Sc. Thesis (Master Study Programmes: Field Food Science and Technology)

    NO XII, 58 p., 18 tab., 28 fig., 12 ann., 121 ref.

    LA sl

    Al sl/en

    AB In the master's thesis, we have analysed the influence of the selected method and

    composition of the solvent on the reactivity of model antioxidants, liquid samples

    and dietary supplements in the presence of 2,2'-azino-bis-3-etilbenzotiazolin-6-

    sulfonic acid (ABTS), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and the Folin-

    Ciocalteu (FC) reagent. We have found that both, different tests and solvents have a

    large influence on the reactivity of model antioxidant, with the exception of 6-

    hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (Trolox), which was

    consequently used as a standard for determining the antioxidant potential (AOP). In

    analyzing the kinetic reaction of samples in ABTS and DPPH tests we found that

    rapid phase is followed by slow one that in most cases after three hours has not been

    completed. The AOP of samples was determined with different methods after one-

    hour incubation. A large deviation between the AOP values depending on the

    selection of the test and the solvent was observed. The largest difference (more than

    7-fold) of AOP was found in the light beer, and the smallest in green tea, where the

    highest AOP is approximately twice the higher of the smallest one. In average we

    determine the largest AOP in FC method and the smallest AOP with DPPH method

    in methanol. Correlation analysis revealed a high degree of correlation within DPPH

    and ABTS tests. The results of FC test have the highest correlation with ABTS and

    DPPH tests at pH 7.4. The selection of the method has a similar effect on the

    reactivity of structurally similar samples and in such cases the degree of correlation

    is very high.

  • Grobin B. Standardizacija testov za določitev antioksidacijskega potenciala.

    Magistrsko delo (Du2). Ljubljana, Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Oddelek za živilstvo, 2016 V

    KAZALO VSEBINE

    KLJUČNA DOKUMENTACIJSKA INFORMACIJA ................................................ III

    KEY WORDS DOCUMENTATION .............................................................................. IV

    KAZALO VSEBINE .......................................................................................................... V

    KAZALO PREGLEDNIC ............................................................................................. VIII

    KAZALO SLIK ................................................................................................................. IX

    KAZALO PRILOG ........................................................................................................... XI

    OKRAJŠAVE IN SIMBOLI .......................................................................................... XII

    1 UVOD ....................................................................................................................... 1

    1.1 NAMEN DELA ......................................................................................................... 1 1.2 DELOVNE HIPOTEZE ............................................................................................ 1 2 PREGLED OBJAV ................................................................................................. 2

    2.1 OKSIDACIJA IN ANTIOKSIDANTI ...................................................................... 2 2.2 RADIKALI ................................................................................................................ 2

    2.3 ANTIOKSIDANTI V ANALIZIRANIH VZORCIH ................................................ 2

    2.3.1 Zeleni in črni čaj ...............