Upload
a-valerio
View
212
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
����� ����� ������ �� ����� ��� �������� ������� ����� �������� � ������ ��� � ���� ������� ������
A. Valerio1*, D. Basso2, S. Mazza2, G. Baldo3, A. Tiengo1, S. Pedrazzoli3, R. Seraglia4
and M. Plebani21Department of Clinical and Experimental Medicine, University of Padova, Italy2Department of Laboratory Medicine, University of Padova, Italy3Department of Medical and Surgical Sciences, University of Padova, Italy4CNR, CSSRCC, Padova, Italy
�������� �� �� � �� ������� �� ������� � �� �������� �� ������� � �
� �� ����� �� ��� ���� ����� ��� �������� ������ � ���� ����� �������� �� �� ����
������� ������ ���� ������� �� ���� !� ��� �� �� �� �����"����� #$%&'�( �� ���!
��������) *�� $%&'� �� ������ ��+����� ��� ��� ��� �� �+���� ��� ��������� ����� ������ �
���� ���� ��� ���� �������� ��� ��� ��� ���� ���� ����������� ����� ) , ��� �����
��� ��� ������ ���� �� ��+�� ��� ������ ���� �� ���� �� �� ��� ��� ���� ��� ���
� �� � ) *��������� $%&'� ���� �� ��� ��� ��������� ����� ������ #������ '�( �� ��� ����
����� ��� �������� � �� � ������ � �� ����� ��� ��� ��� �� ��� � �� �!������� ���
�� �� � ��� ��� ��������� �� �� ����� ������ ) -������� � .��� /�� 0��� 1 �� � &��)
�� �� ���� ����� ���� �� ������� ���� ������� ������� �� �
������ ������ ���������� ���� ���� ���� �� ���� ���
������� ������������ ��������!�"# $������ ���� �������
��� ���������� ���� ������� ��������% ���� ��� �� &���'
��������( �������� ��� �������� �� ������� ����( �� ���� ���
�� �������� ������� �� ��� �������������� �� ������� ��)����
����� ���� ���������� �� � �� �������� ��������!� �� ����
*������ �� ���� �� ��� �� ��� �������������� �� �����������
���� ��� ��� ��� ����� �� ���������� ������ +,-. ��� ���
��� ������������ ��� ����� �� ���� ���� ����� ���� �������
������������ +-,.!/
$���� ��� �������� ��� �� ���� ���� �������� �� ������ ���
���� ��� ������� ���������� �� ����� ����� ��� � �� �������0
����! �� ������� ������1(2 �� ������������( �� �� �����
�3���������( ��� �������� �� � ����������� ��� �� �������
�� ��� ����� ����� ����������� ���� � ���������� ������
���� ����( ���� �� ���� �� �������� ����� ���������� ��
�������� ��� ������� ��� �����������! 4� ���������5�� ����
���������� ������ ����� ��� ������� ��������� ��������(
�������� ������ ���� ��� �������� ����������!
$�� 6�78� ���� ������������� �������� �� ���� ��
�������� ��� ����������5� ��� ������� �������� ������� ��
���� ������� ��������( �� ������������ �� -����� �� �9
��� :������ �� �� $�� ��� �� ��� ������� ���� ��� ���������
�� �����5� �� 6�78� ���� ������������ ��� ���� �������
�������� �� �������� ���� ���������� ������ ��� �������
������������( �� ���������� ���� ����� �������� ���� �������
��)����( �� ����� �� ������ ��� � ������ ���� ������ ���
����������5����� �� ����� ��� ������� ���� ���������� ��� ��
������ ��� �������� �������� �� �� ������� ������� �������!
$%*23�%&� %4' $2*5,'�
������� :����� ���� ������� ���� �������� ���� � ����� �� #�
��)����! $������� �������� +1 �����( 2 �������( � � ��� �
//"2� �����. ��� ���������� ������( ������� ������ ���������
�� �� ���� ���������! ;��� �������� +9 �����( � ������( � �
��� � ��"1� �����. ��� � ��� ����� �� ������� ������������
���� �� ��� ����� �� �������� ������ ���� �� ����� ��� �� ���
�������� ����������% ����� ������� <0��� ��� ����������
��������������( ���������� �������� �����( ������� �3���
���� �����( ��� ���������� ����� ���� ������ �� �������0
�� �����! $�� ������� ��� ��������� �� � ������� ��������
+/ �����( / �������( � � ��� � # "// �����.!
$����� 6�78� ���� ������������ ����������� ���� ���������
��� � �=:7=< ����0��0��� �� ��������� +>����0:���5��
��������( >�����( ?������. �*����� ���� � @-�A$ ���
�����( �������� �� �������� ������ ����! ���� ������ ��
� ����� AB ����� ���� +����� �� �����( � ##2 ��. ����
����������� �� �/ �B! ,���� ��� �3�������� +,�=. ��� ��0
������( �� ������� � ����� � �� ���� �#!�/ �B �� ��� ������
��� ��� �/ ��! @�������� ���� +@� �� -��������( @� 7���(
6�( A@�. +�������� ������� �� ������������C����� / %/
�C� ��������� !�D �������������� ����. ��� ��� �� �����3!
>����� �������� �� 6�78�06@ ��� ���� ������� ����
������ �%# ���� ������ ������� ������ ��� ����� +# ���
� 8�. �� �������������� ���� ������� �� ������ �������
+�������( 6�������� -����������( >������( 6�( A@�.! $��
*������ ������� ��% �! B������( 8����������� �� 6������� -������� @�����������( B�� ?��������� �( #/��9 ,�����( �����!=0����% ����!�������E����!��
8��%� !� �C���!/�9 -����� �� � � � ��� 4���� F @���( 7��!
��,�8 -�66A;�-�$��;@ �; 6�@@ @,=-$��6=$�G
�� �� ������ ���� � ������ � �� �6% ��� "���/
Figure 1. MALDI spectrum of sera from (a) healthy subject (sample 2), (b) a chronic pancreatitis patient (sample 15), and (c) apancreatic carcinoma patient (sample 30) of �10000 Da protein fractions.
-����� �� � � � ��� 4���� F @���( 7��! �� �� ������ ���� � ������ � �� �6% ��� "���/
@��� ������� ���H��� ��� ���������� ������ ��� ������� ������������ ����
Tab
le1.
Pro
tein
profi
leof
sera
from
heal
thy
(1–1
0),c
hron
icpa
ncre
atiti
s(1
1–19
)an
dpa
ncre
atic
carc
inom
a(2
0–32
)su
bjec
ts(s
eete
xtfo
rde
tails
)
-�������
-������������������
,���������������
��
#�
/1
29
I�
����
�#��
�/�1
�2�9
�I�
����
�#��
�/�1
�2�9
�I#
#�#�
� 2/
���
33
33
33
3333
3333
�� I
���
33
33��#9
���
33
333
333
33
333
333
33333
3333
333
333
33333
333
3333
333
��/9
���
333
33
333
��21
���
333
333
333
�#�
���
333
3333
3333
333
3�#�/
���
33
33
333
333
333
33
�#�2
���
333
333
���9
���
33
333
3�/��
���
333
333
33
�1��
���
333
33
3�19/
���
33
33
3�22�
���
33
33
333
3333
3333
333
333
3333
333
33
3� ��
���
333
33
333
33
33
333
333
33
33
333
3333
333
33333
3333
333
33� �9
���
333
33
33
333
333
3333
��#/
���
333
33
333
33
3333
33
333
333
3��I2
���
33
33
3�# 2
���
333
33
3�#I/
���
33
333
33
3333
333
333
33333
3333
3333
3333
3333
333
333
333
3333
333
3����
���
33
33
33
3333
333
333
33
33�/�1
���
33
3333
333
333
33�//#
���
333
33
33
33
333
3333
333
333
33
3333
333
3333
333
33�/9/
���
3333
3333
3333
3333
�1 �
���
33
3333
33
33
333
3333
�1�2
���
33
�2�1
���
33
33
33
33
33
33
333
333
333
33�211
���
33
3333
333
333
33
�I#�
���
333
33
33
333
�I9�
���
33
33
33
33
# �#
���
333
33
# #�
���
333
# 9�
���
3#���
���
33
33
33
33
333
33
33
333
333
33#�/I
���
33
33
333
33#�2/
���
33
33
33
3333
333
333
#�I
���
33
33
33
333
333
3333
33
3##9�
���
33
33
33
#/I�
���
33
33
333
33
33
333
33
333
33#192
���
3333
#2I#
���
33
33
#9�/
���
33
33
33
33
33
33
33
3333
333
333
#I2#
���
33
33
33
333
333
� 19
���
33
333
33
33
33
333
333
3���
���
33
33
333
33
33
33
333
333
333
33
33��9#
���
33
33
333
333
333
��II
���
333
33
33
333
33
333
33/ #
���
33
33
33
333
333
333
33
33
3333
333
333
333
333
-����� �� � � � ��� 4���� F @���( 7��! �� �� ������ ���� � ������ � �� �6% ��� "���/
���� �! B������ �� �
������� ���� ���� �����5�� ��� � � ��� � 6�������� ������
+���� ��5� !�/ ��. +8�����( �������.! @����� ������� +/ �7.��� ��3�� ���� / �7 �� �����3 ������� ��� � �7 �� ���
������� ��3���( ��������� �� ��� ��������� ����� ������
������( ��� ������� �� ��� ������ ����������� ���� ��� ����
������������! =3������ ���� ����������� ��� ���� ��� ���
J6�KL� ��� J6� �KL�� ���� �� ������ ������ �� ��� /2#�
��� �912( ������������! $���� ����������� 6�78� ����
����������� ���� ���� ��� ���� ������ �� ����� �� ������
��� �3���������� ���������( ����� ��� ������ �� ��� ��� �
!�" !/D!I"��
���� ���� ���� $�� ����������� �������� �� ���� ��� ���� ��� ��� ��0�*���� ���� ��������� �� G����!�� $�� G���� ���������� ��
�������� ��� ���� � �� � ������ ���� ����� �� ����5�� ��
���� ���� ������ �������� ������������ �� ��� ���� ��
������� �� ���� ������ ����! � ����������� ���� ���� /D ���
���������� �� ��������!
32�7&*� %4' '��-7���,4
� 6�78� ���� ������� �� ���� ���� �� ������� ��)���
+�°�.( ��� ��� ������� �������� ���� �������� ��� �� �����
���� � 8�( �� �������� �� :� ! �+�.! :� ��� �+�. ��� �+�.
���� ��� 6�78� ���� ������� �� ���� ���� � �������
������������ +-,. ������� +�°�/. ��� ���� � ������� ����
���������� ������ +,-. +�° # .! 6��� ����� +��� �22�( � ��(
�#I/( / #. ���� ������� �� ��� ������� �� ��� ���� �� ��� ���
��)����! $�� 6�78� ���� ������� �� ������� ��)����
������ ������� ����� +��� �����. �� � ����� ���� ��� � +���
�� I"�19/.( ��� �������� �� ������ -, �� ,- �������! �� ���
����� ����( ���� ����� +��� �#� ( ��#/( ����( �/9/( #/I�(
#I2#( ��II. ���� ������� ���� �� ��������' �� ��� �� �������
�������! $�� 6�78� ���� ������� ���� ���������� ������
��� ������� ������������ �������� ���� ������ �� ����� �������
���� ����� ���� ������� ��)����! $���� � ������� ��� ��������
��������� �� ��� ����� ������� �������� �� ��� ������� ����
��� �� ��)����! $���� �������� ��������� ���� ������� ����
����� ������� 3 M �"# D( 33 M #�"1 D( ��� 333 M 1�"� D! ��
����� �� $���� �( ���� �������� ���� ������� ���� �� �
�������� �� ��� ��� �������( ����� ������ ��� ������� ������
�� �������� ���� �� �� ��� ��� �������� ����! @��� �����
������� ��� �������� �� ���� � ��� ������� ��� ��� ����
����������� �� � ��������! $�� ����� �� ��� �� I( ��/9(
��21( ���9( �/��( �1��( ��� �19/ ���� ��� �3������� �� ���
��������( ���� �� ���������� ���������� ���� ��� ��������'
���� +$���� � ������� �� �*���� �����.! �� ��������( ��� ������� ��� �#� ( ��#/( ����( �/9/( #/I�( #I2#( ��� ��II ����
������� ���� �� �������� ��� ��� �� ��������!
:� �� � ������5�� ��� �������� � �� ��)���� �3�������
������� ����� �� ����� ����� ��� ��� ����� ��������� �������
��� ����� ���� ���� �� �������� ��� �� �������� +�3�������
�� �������� � �� ��)���� ������� ������ ���� ��� ����.�
������ ����� ����� ���� ���� �� ��������( ��� ��� ���� ���
������ ���� ��� ����� ���� ���� �� ��������' ����!
8������ ��� ��������� �� ������� ������ �������� ��
������� �������� ��� �� ��������( ����� �� �� �� ���
������� �� ������� ����������( ���� ���� ��� ��������
��� �� ����� +��� ��19/. ���� ���� ���� �� �������� ���
��� �� ��������( ����� �� ��� �� ��� �������� ��� �� ��� �
+� �� ��� �# �.( �������0������� �������� ���� ��������! ��
��� ������� ��������( �� ����0 �� ������������0��������
�������� ���� ���������� �� ���� ��� � �� �������� ��� ���!
K������( ��� ���������� �� ��� ����� ����� �� ��� ��� � ��
�����3!��� � # "# ������� �� ��� ��� ����� +:� ! �. ��� ���
�������� �������� �� ���� ��� ����� �� �������� �� ��� ��
,- ���� �� -, +$���� �.! $���� ����������� ���� ������
��������( �� ����� ��� ����� ����( �����������( ���
������� �� ��� �������� ��� ��� ���� ��� ��������� ��
�������! $���� ������ � ��� ������� ���� ����������
������ ��� ������� ������������ ����� ������� �����������
������ �� ��� ������� �� ��� ���� �� ������ ������� ��� 0
�����( �������� ����������� ������������ �������! $��
��)����� �� ����� ��� ����� ���� �������� ��������� �� ���
�� ���������� ������ ���� �� ������� ������������ ��������( ��
�������� �� ��� 6�78� ���� ������� �� ��� ������� ����
+$���� �.� ��������( ���� ���� ������� �� � �� ��� ���0
����� � �� �������� ���� ,- ���� ���� -, +:� ! �( ������ ���
������.!
A��3��������( ���� ��� �������� ��� �� ������� ��� 0
�����( ����� ���� �� ��������( ���� ���*����� ��� ����0
����� �������� �� ������ ��)����! 4� ���� ���� ���������5�
���� ��� ����� ��� ����� ��������� ������� �� ��������
�������! $�� ��������� �������� ���� ������� ��������
��� ������ ��)���� �� �� �� ��� ����� �� � �������0����0
������ �� �������� �������( �� �� � ��������� �������� ��
����������������� ��������!�#(��
�� ���������( 6�78� �������� �� ��� ��� ��������
��� �� �������� +�� 8�. �� ���� ���� �������� ����
���������� �������� +���������� ������ ��� ������� �������0
�����. ������� � �� ��������% +�. ��� �������� �� ���� &�������0
������� ��� �����'� ��� +�. ��� �������� �� ���� �����
&������0��)���0������� ��� �����'! A�����������( �� 6�70
8�06@ ��������( ��� �3��� ����������� ����� ��� ��������
���� ����� �� ����� ��� ����� ���� ��� ����������! �� �����
�� ���� � � �������� �������� ��� ������ ����� �� ����� ���0
�����( �� ���� ������ ������� ������ �� ����� �������(
���������( �� ������ ��� ��������� ����!
Table 2. Yates corrected �2 for the presence of any associationbetween disease state and reported peptide fragments.Pancreatic cancer and chronic pancreatitis patients wereconsidered as a single group and compared with controls
:�� ���� ��� G���� ��������� �� � ��
�� I �!#I � ! #1�
��/9 �#! 2 � ! #
��21 I!I� � ! �1
�#� #!9� � ! �I9
�#�1 �!�# � ;!@!
���9 2! / � ! 2I
�/�� I!I� � ! �1
�1�� 2! / � ! 2I
�19/ I!I� � ! �1
��#/ � !�� � ! ��
���� � !�� � ! ��
�/9/ #!� � ! 29�
#/I� �#!/# � ! �
#I2# �!12 � ! # 9
��II 2!1/ � ! /2
-����� �� � � � ��� 4���� F @���( 7��! �� �� ������ ���� � ������ � �� �6% ��� "���/
@��� ������� ���H��� ��� ���������� ������ ��� ������� ������������ ���#
Figure 2. Histograms showing: (top panel) peptide species common both to healthy and diseasedsubjects; (second panel) peptide species found only in controls; (bottom two panels) peptidespecies found only in diseased patients. For each group of subjects the results are expressed aspercentage of patients with a positive finding for the observed fragment.
-����� �� � � � ��� 4���� F @���( 7��! �� �� ������ ���� � ������ � �� �6% ��� "���/
���� �! B������ �� �
3282324-2�
�! 7���� @:! ���� ���� �II#� �.9% ��#/!�! :����� N-K( >�����68( :������� @( 6�6����� 8-( ���� �(,������ $! ���� � ���� �III� .�% /9�!
#! �'�������� 6?( :������� @( 6��� �� ( :����� N-K( �����! ��� � ���� �III� �6% 9�#!
�! :������ 7( @��� ��� �( ����� -�( >����55� �( 7��� 6( ���� �� ?($����� ,! �� �� ������ ���� � ������ � � �:% ���I!
/! ,������ 6( >���� 8( ,���55� 6,( :� �� ,( 8�� :����� ?(;�������� �! ��� � ��� ������� �II/� ��% �9I!
1! >���� 8( B������ �( >�� ��� 7( ,���55� 6,( 6���� 6( 7���$( A)�� :( O�������� 6( ��� ��� �( ,������ 6! ������� �II2��6% �#�!
2! B������ �( >���� 8( >�� ��� 7( -������� ?( >���� ?( $��� � �(,������ 6! ������� ��� �!� ��� ������ �III� .6;% 1��!
9! -����� N�( K��� @-( @���� 86( 4��� 4( ������� 7=($��� K6( =������ 7>( >���� ��� �7! ��� "�� ���� ���#�� �II/� �.% / /�!
I! N���� 6( >��� A( ?������� A!���� � ������ ��� �II�� ��%##/!
� ! K��������� :( N���� 6( >����� �-( -���� >$! ��� �����II�� <�% ��I#�!
��! >����� �-( -���� >$! ��� "�� ���� ��� #�� �II � 9;% 192#!��! ������ >! �� $���������� �% �������������( ,4@ ,��������%
7�����( �I91� # �"#�/!�#! :����� -( >���� 8( ;�������� �! � ��� &����������� �II�� �:%
�9�!��! ?�� G7( < ?6( K�� 48( -��� 7>! � ���� ���� � �
;�% I/!
-����� �� � � � ��� 4���� F @���( 7��! �� �� ������ ���� � ������ � �� �6% ��� "���/
@��� ������� ���H��� ��� ���������� ������ ��� ������� ������������ ���/