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7/30/2019 Reporte 4 Anatomia e Histologia Humanas
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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO-CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN-BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANAS
“MANEJO DE TÉCNICAS HISTOLÓGICAS III
TINCIONES HISTOLOGICAS”
Anatomía e Histología Humanas
Equipo: 4 Grupo: 1302
Integrantes:Fuentes Bautista Jesús UrielLuna Flores Oscar Medina Velázquez Laura QuetzallyRivero Alcalá Víctor Daniel
Profesores:Nopal Guerrero TaisVázquez Cianca Verónica Fecha: lunes 17 de septiembre de 2012
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OBJETIVOS
Objetivo general:
Aprender a realizar la tinción de la muestra previamente cortada por micrótomo, para
de esta forma comprender una vez más uno de los pasos de la técnica histológica y
poder lograr observar cada uno de los componentes presentes en la muestra.
Objetivos particulares:
a) Conocer la importancia y utilidad de la tinción de muestras histológicas.
b) Conocer el fundamento de diferentes tinciones.
c) Identificar estructuras mediante el uso de tinciones y observaciones al
microscopio óptico.d) Identificar si se realizo una correcta tinción de la muestra histológica.
e) Aprender a realizar el desparafinaje y saber si fue hecha correctamente la
inclusión.
INTRODUCCIÓN
Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar
el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias
que usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos
biológicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios.
Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y examinar
grandes cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo),
poblaciones celulares (por ejemplo clasificando diferentes células sanguíneas) oincluso para resaltar orgánulos dentro de células individuales.
En bioquímica, esto implica agregar un colorante específico (esto significa que se una
de manera selectiva ya sea a ADN, proteínas, lípidos, carbohidratos, etc.) a un
sustrato para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto. Tanto
la tinción como el marcado fluorescente pueden servir para los mismos propósitos.
La tinción hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina.
La tinción hematoxilina y eosina es uno de los métodos más populares de tinción
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utilizado en histología y medicina diagnóstica. El método supone la aplicación de la
tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas
(basófilas) en tonos azul y púrpura, como por ejemplo los núcleos celulares; y el uso
de eosina que tiñe componentes básicos (acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a
su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.
La tinción tricrómica de Masson, al igual que otras tinciones tricrómicas, es una
técnica de coloración especial que permite visualizar claramente las fibras de colágeno
tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseñados para dar resistencia; también
evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean tres
colorantes para diferenciar el núcleo celular, el citoplasma y las fibras de colágeno.
La Tinción de Van Gieson corresponde a la mezcla de ácido pícrico-fucsina ácida yhematoxilina férrica de Weigert. Es el método más simple mediante tinción para
diferenciar colágeno de otros tejidos conectivos. Esta técnica fue desarrollada por el
neuropsiquiatra y patólogo Ira Van Gieson.
La técnica de Schiff , es una reacción colorimétrica que se usa comúnmente en
citoquímica. Utiliza PAS, ácido peryódico de Schiff , o leucofucsina, un colorante
incoloro pero que se torna rojo estable al contacto con los grupos aldehídos. La
técnica de PAS se utiliza en los preparados para microscopia óptica, permite la tinciónde componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo algunas
membranas celulares, células caliciformes en la mucosa del intestino, fibras reticulares
que están rodeados por hidratos de carbono, etc. Entonces en esta técnica, el ácido
peryódico oxida a los grupos oxidrilos (OH) de dos carbonos cercanos, formando de
esta manera grupos aldehídos compuestos por carbono, oxigeno e hidrogeno. Así la
leucofucsina puede reaccionar con estos y dejar una tinción rojiza.
Una Tinción argéntica es el uso de plata para modificar selectivamente el color o laapariencia de un objeto. Es una técnica frecuente de tinción en histología donde se
utiliza para revelar detalles extremadamente finos.
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DIAGRAMA DE FLUJO
Desparafinaje
Colocar los portaobjetos en la
incubadora o parrilla eléctrica a
60ºC por 3 minutos
2 baños rápidos en Xilol en 3
recipientes distintos con
disolvente
El último baño debe ser más
prolongado, de 3 a 5 minutos
Agitar suavemente
Hidratación
Alcohol absoluto 2 minutos
Colocar en alcohol 95% 2
minutos
Transferir a un recipiente con
agua corriente 2 minutos
Lavar rápidamente con agua
destilada
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Tinción de PAS McManus
Oxidar en ácido peryódico
al 0.5% 10 minutos
Enjuagar en agua corriente
Colocar en agua destilada
10 minutos
Colocar en el reactivo deSchiff 10 minutos
El tejido debe adquirir untono rozado
Colocar en agua corrientepara adquirir un tono
magenta si no se coloro con
el reactivo de Schiff
Lavado rápido en agua
destilada
Teñir con Hematoxilina de
Harris 3 minutos
Colocar en agua corriente 3
minutos
Lavar en alcohol ácido Lavar con cuidado en agua
corriente 30 segundos
Deshidratar en un cambio
de alcohol al 95% 2 minutos
Deshidratar en un cambio
de alcohol absoluto 2Aclarar en Xilol 1 minuto
Secar el exceso de líquido y
montar en resina
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OBSERVACIONES Y RESULTADOS
En una laminilla de Intestino delgado (Placa de Pleyer) de una tinción de hematoxilina-
eosina en un aumento total de 100X, se encuentra la presencia de tejido epitelial
simple con gran cantidad de células endocrinas de forma y tamaño constantecoloreadas de color rosa fuerte cuyos núcleos fueron visibles en color morado (figura
No.1 a). El tejido muscular circular apoyado sobre tejido conectivo donde se observó la
presencia de fibras de colágena teñidas de un color morado y rosa.
a. Observado durante la Prácticab. Reportado en la Literatura
(Boya 2010)
Figura 1 Comparación de la observación de laminilla de intestino delgado con tinción
H-E a 100x (a) con la una observación similar reportada en la literatura (b)
Para la observación de medula espinal, se utilizó una laminilla con tinción de
impregnación de cajal. Se observó dicha laminilla a simple vista para identificar una
forma parecía da la de una mariposa de color ocre ligeramente café (figura 2). Al
observar la laminilla en el microscopio óptico con el objetivo de 10x (para dar un
aumento total de 100x), pudo encontrarse un par de estructuras interesantes. La
primera de ellas, un cúmulo de cabezas neuronales dirigidas al centro de la medulaespinal en una compleja red de axones formando una parte del asta lateral. (Figura 3
a).
La otra característica importante en la observación de esta laminilla es la presencia de
ellos conductos ependimario en el cual se encuentra la sustancia gris que no
presentaba ningún color característico (figura 4 a).
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Figura 2 Observación a simple vista de la laminilla de
medula espinal de tinción de Impregnación de cajal.
a. Observado durante la Prácticab. Reportado en la Literatura
(Boya 2010)
Figura 3 Comparación de la observación de laminilla medula espinal a 100x (a) con la
una observación similar reportada en la literatura (b) que permite la observación de la
red de axones y las cabezas de las neuronas
a. Observado durante la Prácticab. Reportado en la Literatura
(Boya 2010)
Figura 4 Comparación de la observación de laminilla medula espinal a 100x (a) con la
una observación similar reportada en la literatura (b) que permite la observación del
conducto ependimario donde se aloja la sustancia gris.
o n d u c t o e p e n d i
a r i o
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Para finalizar la observación de distintos tipos de tinciones, se tomó una laminilla de
lengua de felino de tinción de Hematoxilina-Eosina para observarla con un aumento
400x. Esto permitió observar la presencia de células largas y estriadas con núcleos
visibles en color morado junto con un epitelio de color rosa intenso de celulares
epiteliales pequeñas con núcleos visibles también rodeados de tejido conjuntivo de
color rosa tenue con algunos cuerpos alejados de color magenta, posibles
agrupaciones de enzimas salivales excretadas por las células epiteliales de la lengua
(Figura 5).
a. Observado durante la Prácticab. Reportado en la Literatura
(Boya 2010)
Figura 5 Comparación de la observación de laminilla de lengua felina delgado con
tinción H-E a 400x (a) con la una observación humana reportada en la literatura (b)
Para la preparación de la muestra a utilizar en la Práctica No. 5 “Anatomía e Histología
del Sistema Nervioso”, se pidió un cerebro de res de color beige claro con aroma
característico con muy poca presencia de sangre de tamaño menor al del ser humano.
La preparación se colocó en un frasco de vidrio cerrado herméticamente con una
solución de formol al 10% en PBS cuyo volumen cubrió la muestra de tejido nervioso
mencionado con anterioridad (Figura 6).
Figura 6. Fijación de cerebro de res con formol al 10% en PBS
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Para la tinción PAS, se realizó la metodología propuesta en el manual (Figura 7).
Primero se realizó la desparasitación de la muestra, para lo cual se sometió a una
temperatura de 60ºC para después introducirse a un baño de xilol y entrar al ten de
hidratación. Tras estos pasos la muestra tomó un poco de color, perdido en el
procedimiento de inclusión (Figura 8). Después se dio el proceso de tinción de PAS-
McManus (Figura 9). Primero se oxido con ácido peryódico, esto permite la ruptura de
enlaces glucídicos entre las unidades los residuos de carbohidratos para formar
grupos aldehídos. Estos grupos aldehídos reaccionan con el reactivo de Schiff, lo que
permitió observar un color naranja rojizo en la disolución de dicho reactivo y en la
muestra (Figura 10). Tras este paso enjuago con alcohol al 95% y absoluto para
eliminar el exceso de colorante para finalizar con un aclarado con xilol.
Figura 7 Tren completo de desparafinaje,
hidratación y tinción de PAS McManus
Figura 8 Tren de desparafinaje e
hidratación
Figura 9 Tren de tinción PAS
McManus
Figura 10 Reactivo de Schiff teñido de
naranja-rojo
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ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
En la observación de la laminilla de intestino grueso fueron visibles la presencia de
tejido epitelial y una cierta cantidad de células endócrinas debido a que estaban
tornadas de un color rosado y morado, lo cual es posible mediante la tinción de
Hematoxilina- Eosina (H-E), el cual se basa en una reacción ácido-base, la parte
básica es por parte de la hematoxilina y que tiene afinidad por componentes ácidos,
entonces se puede deducir la presencia de compuestos ácidos en la muestra de
intestino grueso, dando a entender que fueron observadas células endócrinas.
Mientras que las partes torneadas de color rosado se debían a la acción de la tinción
de Eosina, la cual tiene una afinidad por los componentes básicos, es decir, que es un
colorante ácido, por lo tanto da la tonalidad rosada, la cual fue observable, y
permitiendo saber que hay presencia de tejido epitelial y citoplasma en la muestra.
En la observación de la laminilla de médula espinal a simple vista fueron identificados
el conducto ependimario y la sustancia gris, el primero porque era un hueco ubicadoen el centro de una especie de alas de mariposa, y el segundo mediante la
observación y la distinción entre sustancia gris y la sustancia blanca, que fue gracias a
la tinción I. Cajal el cual tiene como base la tinción mediante nitrato de plata, dando
una coloración café claro en el caso de la sustancia blanca, donde tiene mayor
presencia de células de glía, y en la sustancia gris, se torna de un color café un poco
dorado, debido a la tinción antes mencionada, debido a que interacciona con los
componentes de la neuronas dando dicha tonalidad. El corte observado en la muestra
es transversal debido a que es observable el conducto ependimario y la forma de alas
de mariposa, ya que si hubiera sido otro tipo de corte, este no hubiera sido observable.
En la laminilla con la muestra de lengua de felino, fueron visibles los núcleos y el
citoplasma de las células epiteliales, debido a que la tinción de Hematoxilina- Eosina
(H-E) actuó sobre la muestra, la hematoxilina permitió que fueran observados los
núcleo ya que es un componente básico que tienen afinidad por componentes ácidos,
en este caso fueron los núcleo de las células epiteliales, dando como resultado unos
pequeños puntos morados. La eosina permitió la tinción del citoplasma de las células
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epiteliales ya que es un componente básico, y el citoplasma es una especie básica,
dando una tonalidad rosada en la muestra.
Durante el experimento se realizo el desparafinaje, en el cual se logro quitar la
parafina de la muestra, ya que si esta se encontraba presente en la muestra la tinciónno podría penetrar en el interior de la muestra y esto impediría que se coloreara.
Aunque pudiesen quedar algunos restos al momento de calentar, debido al tiempo
prolongado al calor. Durante el proceso de la tinción de PAS se logro que la muestra
tomara un color rosado después de teñirla con hematoxilina de Harris, pero el color no
fue tan intenso ya que creemos que fue por la contaminación de los reactivos y por la
falta de tiempo que debía tener la muestra sometida en cada reactivo. Pero al finalizar
se logró obtener una buena coloración dando por entendido que la desparafinación
fue efectiva, y aunque no fue realizada de manera perfecta, pero fue suficiente paraque su posterior observación.
CONCLUSIONES
Se aprendió las diferencias que existen entre las tres diferentes técnicas te tinción
observadas en las laminillas, la tricrómica de Masson es especial para el tejido
conjuntivo; la I. Cajal, ayuda a la diferenciación entre substancia blanca y substancia
gris y HyE ayuda a destacar el núcleo y citoplasma celular.
Se entendió cada uno de las técnicas histológicas que se deben utilizar para poder
tener una muestra teñida, desde la toma de muestra, pasando por el proceso de
fijación, inclusión en parafina, corte en micrótomo, desparafinación y terminando en la
tinción final de la muestra. Se comprendieron los errores que pueden ocurrir en cada
uno de estos procesos y la importancia de realizar de forma correcta todos ellos.
Se extendieron estos conocimientos adquiridos para realizar la fijación de encéfalo de
res.
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BIBLIOGRAFÍA
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Edición, Editorial Medica Panamericana, Madrid, 2010, páginas 409, 430 y 579,
581
2. Hilario E. Prácticas de Histología Humanas. Facultad de Medicina y
Odontología de la Universidad del País Vasco,
http://www.ehu.es/servicios/se_az, 7 de septiembre del 2007 [Consultada el 28
de agosto del 2012]
3. Tortora G.J, Reynolds Gabrowki S. Principios de Anatomía y fisiología. 9ª
edición, Oxford University Press, 2002, paginas 387.390, 454,457
4. Welsch Urich. Sobotta Welsch. Histología. 2a edición, Editorial Medica
Panamericana, Madrid, 2008, páginas 339-341, 369-371, 6118-620
