Producción de Interferón

7/24/2019 Produccin de Interfern

1/23

Produccin de interfern-Beta

Objetivo

El presente trabajo se refiere a un procedimiento para preparacin de interfern-Beta. Msconcretamente se refiere a un mtodo de obtencin para extraer una forma de secuencia de interfernrecombinante humano a partir de un preparado que E. Coli modificada enticamente.

Introduccin

!os interferones son unasprote"nasproducidas naturalmente por el sistema inmunitariode la ma#or"ade los animales como respuesta a aentes patenos$ tales como %irus# clulas cancer"enas. !osinterferones son licoprote"nasde la clase de lascitocinas. &eciben su nombre debido a su capacidadpara interferir en la replicacin de los %irus en las clulas hospedadoras. 'e unen a receptores en lasuperficie de las clulas infectadas$ acti%ando diferentes %"as de se(ali)acinen las que participandi%ersas prote"nasanti%irales *como la P+&,$ para impedir la replicacin de una amplia %ariedad de%irus de & # /. Cumplen$ adems$ otras funciones0 acti%an clulas inmunes$ como losmacrfaos# las clulas +1*del inls natural killer,2 incrementan el reconocimiento de clulascancer"enas o infecciones al dinami)ar la presentacin de ant"enosa los linfocitos 3#$ finalmente$incrementan la capacidad de las clulas sanas para resistir a nue%as infecciones %"ricas. Ciertoss"ntomas como eldolor muscular# la fiebreestn relacionados con la produccin de interferonesdurante la infeccin.

El descubrimiento de estas molculas$ en 1456$ pro%iene de la obser%acin de que los indi%iduosinfectados por un %irus son resistentes a la infeccin por un seundo tipo de %irus.

En los seres humanos ha# tres tipos principales de interfern0

1. El primer tipo est compuesto por 17 diferentes isoformas del interfern alfa$ e isoformasindi%iduales beta$ omea$ psilon # 8appa.

9. El seundo tipo consiste en el interfern amma.

:. &ecientemente se ha descubierto una tercera clase de interfern$ el lambda$ con : isoformasdiferentes.

Existen honos en la naturale)a como ;anodermalucidumque fa%orecen en forma natural laproduccin de interfern amma en el cuerpo humano. !os interferones se pueden producir de maneranatural pero tambin de manera artificial$ es decir en laboratorios en forma de in#eccin o de pastillaspara las personas que padecen de aluna enfermedad autoinmune como la esclerosis m # C'>$ que son sinteti)adas en respuesta a la aparicin de %irus en el cuerpo. 'umetabolismo # excrecin se produce principalmente en el h"ado # ri(ones. /if"cilmente atra%iesan la

placenta # la barrera hematoenceflica

9

. El interfern alfa # beta es producido por %arios tiposcelulares0 las clulas 3 # las clulas B$ macrfaos$ fibroblastos$ clulas endoteliales # osteoblastosentre otras$ # son importantes componentes de la respuesta anti%iral. Estimulan a los macrfaos # lasclulas + # son acti%as contra los tumores.

El interfern amma participa en la reulacin de las respuestas inmune e inflamatoria. En loshumanos$ slo ha# un tipo de interfern amma. 'e produce en clulas 3 acti%adas. El interfernamma tiene efectos anti%irales # antitumorales$ pero eneralmente dbiles. 'in embaro$ potencia losefectos del interfern alfa # beta. /esafortunadamente$ el interfern amma necesita ser liberado en eltumor en dosis mu# peque(as # no es$ actualmente$ mu#


2/23

El interfern amma es sereado por las clulas 3h1 # en%"a leucocitosal punto de infeccin$ dandocomo resultado una inflamacin. 3ambin estimula a los macrfaos para eliminar bacterias que hansido faocitadas. Este interfern es tambin importante en la reulacin de la respuesta de las clulas3h9. l estar "ntimamente relacionado con la respuesta inmunitaria$ su produccin puede deri%ar endesrdenes inmunitarios.

El interfern omea es sereado por los leucocitos en las infecciones %irales # en los tumores.

El interfern tiene 9 acciones bsicas0

1. =mpide la replicacin en clulas infectadas que a


3/23

causa de sus efectos sobre el sistema ner%ioso central$ puede tener como consecuencia unamo%ilidad reducida e in%alide) en los casos ms ra%es. 'i no se trata tras la aparicin de los primeross"ntomas$ al menos el 56 de los pacientes conser%an un ele%ado rado de mo%ilidad a los quincea(os de haber sido dianosticada la enfermedad.

!a esclerosis m


4/23

>amilia en 9F rado 1

>amilia en :F rado 6.4

;emelos uni%itelinos :5

Germanos 7

!os or"enes de la enfermedad son desconocidos.

'e ha lan)ado la hiptesis de que puede ser producida por una combinacin de %arios factoresenticos # medioambientales. Esto inclu#e posibles infecciones %iralesu otros factores en la ni(e) odurante el embara)o que puedan preparar el sistema inmunitariopara una reaccin anormal mstarde.

ni%elmolecular$puede que exista una similitud estructural entre una aente infeccioso desconocido #componentes del sistema ner%ioso central$ lo que causar"a confusin ms tarde en el sistemainmunitario *un proceso llamadomimetismo molecular,. Con todo$ a


5/23

Patrn IV0 !a lesin presenta bordes abruptos # oliodendrocitos deenerados$ con un anillo demielina. usencia de oliodendrocitos en el centro de la lesin. o est acti%ado el complemento niha# perdida de M;.

!os dos primeros patrones se consideran ataques autoinmunes contra la mielina # los dos inalmente lle%ar a la destruccin de la mielina$ proceso llamadodesmielini)acin.

a"o a los axones

tra%s de la resonancia mantica # otros sistemas$ se ha demostrado que el da(o a los axones esuna de las principales causas del desarrollo de discapacidades permanentes. 'e ha demostrado queesta lesin inter%iene no solo en formas crnicas o en estadios tard"os de la enfermedad$ sino que estpresente desde el inicio.

!os mecanismos que lle%an a este tipo de da(os no estn explicados en su totalidad. ctualmenteparece que una reulacin anmala del lutamatoas" como la liberacin demonxido denitreno*H, tienen una funcin importante.

Karios experimentos en animales con EE$ encefalitis inducida$ enfermedad supuestamente similar ala Esclerosis m


6/23

que se forma una placa alrededor de los axones da(ados. !as clulas madre se diferencian #remielini)an axones in %itrosin nin


7/23

de ma(ana2 de modo que si no se pre%ienen ho#$ ma(ana ser demasiado tarde para conseuir larecuperacin. &esulta cla%e detectar la esclerosis m


8/23

Estre(imientosecundario a inmo%ilidad.

&urso ' formas de la enfermedad

En la ma#or"a de los casos la esclerosis comien)a con la aparicin auda de s"ntomas en un espacioque %ar"a de horas a d"as$ habitualmente llamado exacerbacin$ ataque o episodio. Ms adelante sehabla de reca"da. El primer s"ntoma es a menudo la neuritis ptica$ una inflamacin del ner%io pticoque causa deterioro de la %isin # dolor al mo%er el ojo. 'in embaro$ no todos los pacientes con unaneuritis ptica desarrollan esclerosis m


9/23

>i.1. &esonancia Mantica uclear reali)ada con contraste. 'e utili) ;adolinio.'e obser%an los tumores de mielina en la mdula espinal # cerebro.

>i. 9. Cortes de cerebro de resonancia mantica de la >i.1. 'e obser%an tumores deMielina.

Ina muestra de l"quido cefalorraqu"deoobtenida con unapuncin lumbarsir%e para obtener pruebasde la inflamacin crnica en el sistema ner%ioso$ a menudo indicada por la deteccin de bandasolioclonales *molculas de anticuerpos, en el l"quido.

!os estudios de conducti%idad ner%iosa de los ner%iosptico$ sensoriales # motorestambinproporcionan pruebas de la existencia de la enfermedad$ #a que el proceso de desmielini)acin implicauna reduccin de la %elocidad de conduccin de las se(ales ner%iosas. El estudio se reali)acomparando los tiempos de reaccin con mediciones preestablecidas.

El proceso de dianstico se completa con la reali)acin de pruebas para excluir otras enfermedades

que pueden imitar a la esclerosis como la Enfermedad de /e%ic5$ lasarcoidosis$ la %asculitisN#laenfermedad de !#me?.

Tratamiento de la esclerosis mltiple

ctualmente laesclerosis m


10/23

=nterfern

'e ha demostrado que el interfernbeta-1a o beta-1b *marcas comerciales0 Betaferon$ %onex$ &ebif,reduce la frecuencia de reca"das en un :6$ disminu#e el n


11/23

atali)umab

Medicamento comerciali)ado con los nombresAntegren# Tysabri$ compuesto por anticuerposmonoclonales. Es el que mejores resultados ha dado *disminucin del ? de las reca"das$ 49 delesiones con adolinio # 57 en la proresin del E/'', pero fue temporariamente retirado delmercado #a que raramente *1L1666, puede inducir una enfermedad llamada leucoencefalopat"amultifocal proresi%ao PM!$ que normalmente es mortal.

'in embaro$ este compuesto nunca ha producido este efecto solo *usado como monoterapia, sino encombinacin con otras medicaciones inmunosupresoras$ por lo que la>/americana # la EME*aencia europea de medicamentos, han reconsiderando su prohibicin # han aprobado sucomerciali)acin en 966.

>inolimod

'e administra por %"a oral. En la Inin Europea se aprob en mar)o de 9611 para los pacientes conesclerosis m


12/23

pueden obtenerse prote"nas complejas$ conmodificaciones postraduccionales propias de clulaseucariotas$ como es el caso de las que portan el en de la tirosina 8inasa para producir prote"nasfosforiladas por la tirosina. Para apro%echar las %entajas que ofrece el periplasma$ en comparacin conel citosol$ para la expresin de prote"nas recombinantes se han desarrollado %ectores plasm"dicos enlos cuales es posible clonar los enes recombinantes fusionados a se(ales de secrecin queposibilitan el transporte de la prote"na de inters a este compartimento.

)xpresin de prote%nas recombinantes en )+ &oliEntre los parmetros ms importantes en la produccin exitosa de prote"nas recombinantes en E.colise encuentran0 la eficiencia transcripcional # traduccional$ la estabilidad del %ector de expresin #de los cidos ribonucleicos *&, transcriptos$ la estabilidad de las molculas ante elambienteproteol"tico del hospedero # la locali)acin # pleamiento de la prote"na. 3ambin esnecesario hacer un estudio con diferentes cepas del oranismo hospedero$ con %istas a seleccionar lams adecuada para la expresin de la prote"na recombinante deseada$ #a que estudios muestran queestapuede %ariar al usar una cepa determinada u otra.

Con el objeti%o de alcan)ar altos ni%eles de expresin de la prote"na de inters es necesario estudiar lainfluencia de diferentes factores en el proceso de produccin$ los cuales pueden aruparse enenticos # fisiolicos.

>actores enticos0

Entre los factores enticos a considerar se encuentran0 n


13/23

Estabilidad del & mensajero *&m,0

Ina %e) sinteti)ado el &m correspondiente al en deinters$ la estabilidad del transcripto permite uncontrolflexible # mu# eficiente de los ni%eles de s"ntesis proteica.Por lo eneral los &m bacterianostienen una %ida mediacorta. En clulas bacterianas que crecen # se di%iden cada96 o :6 min$ alunos

&m deben reno%arse de 5 a 16 %ecesen cada eneracin. !a %ida media del &m estreuladapor el control del inicio de la transcripcin # la %elocidad dederadacin del mismo. !a%elocidad de deradacin de los&m pro%enientes de alunos enes heterloos es mu#alta$ siendo

mu# bajos o nulos los ni%eles de s"ntesis de lasprote"nas recombinantes.

3ipo de promotor bajo el cual se encuentra situado el en de inters

El sistema de expresin es la unidad transcripcional que se inserta en un %ector de cidodesoxirribonucleico */, extracromosomal. 'i el mismo es inducible$ las clulas pueden crecer hastaaltas densidades # obtener cantidades del producto hasta de un :6 de la prote"na total de las clulas.

lunos de los promotores ms empleados son0

Promotor triptfano0 Es el responsable de la transcripcin de los enes trpE$ /$ C$ B$ $ los cualescodifican para las en)imas que inter%ienen en la s"ntesis del triptfano. 'e reprime por la presencia deeste aminocido en el medio de culti%o # se induce por su ausencia o al a(adir cido :-indolacr"lico.Constitu#e un promotor fuerte # ampliamente utili)ado.

Promotor p! *Bra)o i)quierdo del fao lambda,0 Es inducible por cambios de temperatura$ #a queexiste un represor termolbil que a temperaturas entre 9?-:6 OC se une al promotor impidiendo latranscripcin del en. 'u utili)acin ha confrontado problemas en alunos hospederos$ #a que ante uncambio s


14/23

Estrateias de clonaje

lo laro de ms de dos dcadas se han ido mejorando las estrateias enticas$ con el objeti%o deaumentar los ni%eles de expresin de prote"nas$ as" como simplificar los procesos de recobrado. Estasabarcan desde el dise(o de %ectores$ multimeri)acin de enes$ mejoramiento de cepas basadas endiferentes principios como la de seleccin de enes que codifican para proteasas$ sobreexpresin decodones raros para E. coli.

3ambin es posible adaptar la estructura de la molcula recombinante para potenciar una propiedadespec"fica que facilite su purificacin$ #a sea modificando su punto isoelctrico o sus constantes deafinidad.

Composicin del medio de culti%o0 &equerimientos nutricionales del crecimiento

Fuente de carbono y energa

proximadamente el 56 del peso seco del material celular es carbono$ por lo que en todo medio deculti%o debe existir un sustrato que proporcione el esqueleto carbonado bsico para la s"ntesis de lasunidades estructurales que dan orien a las macromolculas # estructuras de la clula. En la ma#or"ade los casos este compuesto es de orien ornico # entre los ms usados se encuentran losa)6 para la esterili)acin de medios de culti%os0

Para el clculo del >6 se utili)ar un equipo autocla%e por %apor. 'e simular la temperatura del mediode culti%o utili)ando un sensor tipo P3-166 inmerso en aua.

El clculo procede as"0

Pgina | 14


15/23

dN

N=kdt

logN=kt+cte.

donde

k=

K

2.303

a

t62

logN =cte

logN=kt+logN

logN

N=kt

N

N=10kt

/onde0

n


16/23

uestros datos entonces muestran que comen)ando con un %alor inicial de 1666 unidades demicrooranismos por botella$ se lora una contaminacin residual de 1 lueo de : minutos a 191FC$con /1.

!ueo de otro minuto *7 minutos en total, este ra)onamiento conduce a la conclusin de que la carase ha reducido a 1L16.

'in embaro$ esto no debe entenderse en el sentido de que cada unidad contiene una dcima parte deun microoranismo *en cu#o caso las unidades ser"an estriles, sino sinifica que ha# una probabilidadde que un dcimo de las unidades toda%"a estn contaminados.

/espus de 4 minutos de tratamiento a 191 F C en las condiciones de operacin$ la cara bacterianadel lote en cuestin se reduce$ en promedio$ a 1 L 1.666.666 . Por lo tanto$ la probabilidad de tener unaunidad toda%"a contaminada en ese lote es de 1 en 1.666.666.

Esta es la arant"a m"nima de esterili)acin que debe ser alcan)ada en el campo farmacutico.

Por lo tanto trataremos los medios de culti%os$ duplicando el tiempo de exposicin$ es decir 1?minutos$ en estas condiciones.

Ejemplo de clculo0

!ueo de 1 minuto0N=100010

(1 )

N=100

!ueo de 9 minutos0 N=10010(1 )

16

!ueo de : minutos0 N=1010(1 )

1

&eali)ando el clculo utili)ando clostridiumbotulinum0

En el caso de considerarse solamente este microoranismo por ser termoresistente$ el tiempo deesterili)acin se podr"a calcular de la siuiente forma0

Considerando0N

N=10kt

/espejando t0

logN

N

(1)k =t

'iendo0 k=AeE

RT

Pgina | 16


17/23

con %alores de E 5.666 calLmol$ # 11036

min-1$ &1$4?N1N calLmol.+ # tomando como

temperatura de esterili)acin 191FC *:47 +, se obtiene un %alor de 8 6.?? min-1.

Considerando que 6 1666 # 1L1.666.666 *mismos %alores que se consideraron en el clculo deltiempo de esterili)acin utili)ando el parmetro /,$ se obtiene0

t , -./01 minutos

/uplicando el tiempo de exposicin para aseurar la muerte de microoranismo necesaria$ se obtienet96$7 minutos.

'e obser%a que por ambos mtodos de clculo$ se obtienen resultados similares en cuanto al tiemponecesario para reali)ar la esterili)acin. Con 1? minutos o 96$5 minutos *dependiendo el clculoreali)ado, de esterili)acin se supera la arant"a m"nima de esterili)acin que debe ser alcan)ada enel campo farmacutico.

>i. : utocla%e por %apor

Kelocidad espec"fica de crecimiento0

!a %elocidad espec"fica de crecimiento *Q, es funcin de0 tipo de microoranismo$ composicin delmedio de culti%o$ temperatura$ pG$ concentracin de sustrato$ %elocidad de aitacin # aireacin. Eneneral se puede plantear que0

R f *3$ pG$ '$ %ariables de operacin,

Con el objeti%o de mejorar la producti%idad de la prote"na de inters$ obtenida al usar una cepa de E.coli$ se puede correlacionar la %elocidad espec"fica de crecimiento con la %elocidad de produccin delproducto de inters. /e esta manera se conoce que manteniendo la %elocidad espec"fica decrecimiento cerca del %alor ptimo para la formacin del producto despus de la induccin$ se obtienen

altos ni%eles de expresin de prote"na. Itili)ando la alimentacin escalonada o constante$ despus dela induccin del culti%opor ele%acin de la temperatura$ se obtiene una extensin del per"odo deproduccin de la prote"na de manera sinificati%a.

Efecto de la temperatura # el pG0

!a temperatura de crecimiento ptima para diferentes microoranismos %ar"a en un amplio inter%alo.Por ejemplo0 microoranismos psicrfilos0 6-95 FC2 microoranismos mesfilos0 95-75 FC$ #microoranismos termfilos0 S 75 FC.

Pgina | 17


18/23

!a dependencia de la temperatura de crecimiento microbiano se podr"a comprender como el efecto dela temperatura sobre las distintas reacciones en)imticas que ocurren en las clulas. Este efecto sedescribe por la ecuacin de rrhenius0

R Te-EL&T3

donde0

0 Constante de rrhenius *h-1,.

E 0 ener"a de acti%acin *8U 8mol-1,

3 0 temperatura absoluta *+,

& 0 constante de los ases *8U 8mol-1+-1,.

El efecto del pG es similar al efecto de la temperatura. !a %elocidad de las reacciones en)imticasdepende del %alor del pG # %ar"a de un microoranismo a otro. !a ma#or"a de las bacterias crecen auna temperatura alrededor de :N FC # un pG neutro. Manteniendo el culti%o a estas condiciones selora que la %elocidad espec"fica de crecimiento dependa solamente de la concentracin de sustrato #de las %ariables de operacin.

Efecto de la concentracin de sustrato0

!a dependencia de la %elocidad espec"fica de crecimiento *R, sobre la concentracin de sustratolimitante la obtu%o por primera %e) por U. Monod.

R RmxT'L*+sV',

donde0

Rmx0 Kelocidad espec"fica mxima de crecimiento que se alcan)a en la fase exponencial # dependedel tipo de sustrato limitante empleado # de las %ariables de operacin *h -1,.

'0 Concentracin de sustrato limitante *.!-1,.

+s0 Constante de saturacin *.!-1,. Esta constante da unamedida de la afinidad del microoranismohacia el sustrato.

Mientras ms peque(o sea +s$ ms af"n es el microoranismo al sustrato en cuestin.

ctualmente existen numerosos modelos que relacionan la %elocidad espec"fica de crecimiento con laconcentracin de sustrato$ pero el de Monod siue teniendo ran utilidad.

Estrateias de culti%o0 operacin continua

!a fermentacin continua siue siendo actualmente elmtodo ms usado en la industria farmacutica #biotecnolica. Esta operacin consiste en que se caran el medio de culti%o # el inculo en un tanque

con aitacin # aireacin$ donde ocurre una transformacin biolica. 3eniendo esto se est enpresencia de un biorreactor. !a operacin discontinua tiene entre sus %entajas0 el ser unaoperacinsimple$ presentar bajo rieso de contaminacin # facilidadpara ser utili)ada como patrn paraestudios pre%ios. Comodes%entaja se encuentra que con su uso$ se obtiene bajaproducti%idad.

!imitaciones de la operacin continua0

Existe una concentracin de sustrato limitante inhibitoria al crecimiento. Esto se conoce com


19/23

limita la obtencin de altas densidades celulares. En la fermentacin discontinua existe unacontradiccin$ alinicio habitan pocas clulas # existe alta concentracin desustrato$ mientras que alfinal ocurre lo contrario.

En numerosas ocasiones en la produccin de prote"nas recombinantes la %elocidad espec"fica mximade crecimiento no es la ptima para la formacin del producto. 'e conoce como R cr"ticaa la %elocidadespec"fica a la que se elimina casi totalmente la produccin de cido actico$ la cual perjudica tanto alcrecimiento como a la formacin del producto. Esto puede %ariar de una cepa a otra *si es auxotrfica

o prottrofa,$ como tambin influ#e el medio en que se culti%an *si es medio complejo o definido,.+leman reporta que en un mediodefinido o salino0 Rcrit 6$:5 h

-1mientras en un medio complejo0 Rcrit6$9 h-1.

Medio complejo se le llama a los medios ricos en extractos$ suplementados con fuentes ornicas$aminocidos$ %itaminas # tra)as. 'on medios mu# ricos por lo que los microoranismos tienden aproducir ms metabolitos que en un medio salino definido. Por otra parte$ se requiere conocer la%elocidad espec"fica de crecimiento para la formacin del producto *Rprod,. Existen tres formas dedeterminarla0

En un culti%o discontinuo manipulando la aireacin # la aitacin.

En un culti%o discontinuo con alimentacin %ariando el flujo de incremento.

En un culti%o continuo %ariando la %elocidad de dilucin$ siempre que no se pierda lainformacin entica.

Crecimiento celular0

Microoranismo

E. colise obtiene del instituto /'M situado en !eibni)$ lemania2 codificado como /M' 7564.

El traslado del microoranismo se reali)a %"a area. Contenido en una ampolla # dentro de unrecipiente especial para dicho tipo de transporte.

'e conser%a en ultrafree)er a una temperatura de -?FC.

Clculos para la cintica microbiana0

'e cuenta con los siuientes %alores in"ciales$ obtenidos experimentalmente en el =nstituto Malbrn0

6$7g

L de masa celular.

Cso :g

L

max 6$ :51

h

Producti%idad mxima de Biomasa *terica,0 P 6$9g

L

Pgina | 19


20/23

1$6576

/onde alfa representa 1+CA 0CM . Esto sinifica que arrastre$ tiempo ptimo de procesamiento$%elocidad mxima de produccin depende de Ca6 *composicin de alimentacin al inicio, # CM

*constante de Monod,

Con estos datos iniciales$ calculamos el tiempo ptimo de acuerdo a la siuiente frmula0

top=

(1 )max

top= 1,054

(1,05401)0,351

h

top=55,77h56h

Con los %alores in"ciales # el %alor del $ calculamos0

Cs=Cso+1

Cs=

3gL

1,0540+1

Cs=1,461g

L

=(

ks+Cso

ks

)/espejando +s

ks=Cso

21

Pgina | 20


21/23

ks=27,047g

L

Inks *+ de monod, alto indica que el %alor de la concentracin es despreciable respecto al

sustrato$ es decir$ que la %elocidad de reaccin es independiente de la concentracin de sustrato$ lareaccin es de orden cero # la %elocidad es mxima.

Con el dato de la producti%idad0

P=CX

t

CX=0,2 g

Lh56h

CX 11$9g

L

CX=YXS

(CsoCs )

11,2g

L

=YXS

(3g

L

1,46g

L

)YXS

=7,27

YSX

=0,14

!ueo que el proceso se encuentra estril$ su mantenimiento en esa condicin se lora por medio dela aplicacin de sellos de %apor$ los cuales suministran una barrera efecti%a contra los

microoranismos. *claracin0 el suero contiene a E.coli,.

'abiendo que 1 de Biomasa equi%ale a 6.661 de =nterfern. Entonces0

y PX

=0,001g

1 g=CpCp0CxCx0

Pgina | 21


22/23

/espejando$ podemos obtener la concentracin final del producto dentro del reactor0

Cp=0,011g

L

Purificacin del =nterfern0

Este proceso consiste en hacer circular la corriente de producto de manera paralela a la superficie dela membrana permeable$ # debido a la diferencia de presin *controlada, se produce elfraccionamiento. !a concentracin obtenida en un proceso de ultrafiltracin %iene definida por el factorde concentracin %olumtrica *>CK,$ que indica cuantas %eces el %olumen oriinal de alimentacin hasido reducido # sus datos dependen de0

C!=!a"#me$tado

!%ete$#do=1+

!pe%meado

!%ete$#do

En todos los casos se debe arear solucin de Gidrxido de 'odio al 16 o solucin de cidoclorh"drico al 16 para ajustar el pG.

/imensionamiento del reactor0

Considerando los %alores de Cp # tiempo ptimo obtenidos$ # teniendo en cuenta que se estima laproduccin de interfern en 76 rLd"a$ se puede calcular el %olumen de la siuiente forma0

P%od&cc#'$=Cp

top(!

&eordenando$

!= (top

Cp

&eempla)ando con los datos de Cp$ tiempo ptimo # produccin$ obtenemos0

!=9333,3L

Por lo que ser"a necesario utili)ar un biorreactor de 16 m:.

Pgina | 22


23/23

&onclusiones2

Ino de los objeti%os fue alcan)ar altos rendimientos en la produccin de =nterfern expresados en E.coli, con %istas a hacer estos procesos ms factibles econmicamente # cumplir con las reulaciones%ientes en esta rama de la industria.o obstante$ existen retos que deben abordarse en un futuro$entre los que se encuentran0 superar los ni%eles de expresin de prote"nas alcan)ados2 reali)ar unadecuado estudio del espacio de dise(o durante la etapa de desarrollo de los procesos de obtencin #recobrado$ para establecer los parmetros que influ#en sinificati%amente en su eficiencia2 reali)ar una

adecuada seleccin del medio de culti%o quefacilite tanto la expresin como el crecimiento celular.unque en este trabajo se han dado consideraciones enerales$ el desarrollo del producto requerir unestudio de las caracter"sticas particulares de las molculas recombinantes # de las cepas productoras.

&eferencias0

Clulas +10 *por las silas de su denominacin en inls$ natural 8iller$ Jasesina naturalJ en espa(ol,son un tipo de linfocitopertenecientes al sistema inmunitario.

Barrera hematoenceflica90 es una formacin densa declulas endoteliales# l"alesentre los %asossanu"neos# el sistema ner%ioso central. !a barrera impide que muchas sustancias txicas la

atra%iesen$ al tiempo que permite el pasaje de nutrientes #ox"eno. /e no existir esta barrera muchassustancias noci%as llear"an al cerebroafectando su funcionamiento # tornando in%iable aloranismo.!as clulasde la barrera poseen prote"nasespec"ficas que transportan de forma acti%a sustanciascomo lalucosaa tra%s de la barrera.

Criterios de Mc/onald:0 son una serie de criterios destinados a decidir si se considera o no a unapersona como afectada por laesclerosis m

Documents

Producción de Interferón