Pewarnaan Negatif dan Pewarnaan Burry Gins

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI FARMASI

PEWARNAAN NEGATIF dan PEWARNAAN BURRY GINS

Rabu, 18 Maret 2015

Kelompok I

Rabu , Pukul 13.30 16.30 WIB

Nama NPM

MEGA TRINOVA DURIKA 260110130098

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS PADJADJARAN

2015

Nilai TTD

(Shintya) (Benedictus)

PEWARNAAN NEGATIF DAN PEWARNAAN BURRY GINS

I. Tujuan

1. Mengamati morfologi bakteri yang sukar diwarnai oleh pewarna-pewarna

sederhana dengan menggunakan prosedur pewarnaan negatif.

2. Mengamati kapsul bakteri dengan menggunakan prosedur pewarnaan

kapsul (pewarnaan Burri-Gins).

3. Memahami setiap langkah dan reaksi-reaksi kimia yang terjadi dalam

prosedur tersebut.

II. Prinsip

1. Pewarnaan Negatif

Pewarnaan negatif yaitu pewarnaan yang ditujukan terhadap bakteri yang

sulit diwarnai, dimana bakterinya tidak diwarnai melainkan latar

belakangnya, metode pewarnaan negatif merupakan suatu metode

perwarnaan umum, dimana digunakan larutan zat warna yang tidak

meresap ke dalam sel-sel bakteri melainkan melatar belakangi sehingga

kelihatan atau nampak sebagai bentuk-bentuk kosong tak berwarna

(negatif).

2. Tolak Menolak Muatan

Pewarnaan negatif atau pewarnaan asam dapat terjadi karena senyawa

pewarna bermuatan negatif. Dalam kondisi pH mendekati netral, dinding

sel bakteri cenderung bermuatan negatif sehingga pewarna asam yang

bermuatan negatif akan ditolak oleh dinding sel. Oleh karena itu sel

menjadi tidak berwarna.

3. Kapsul Bakteri

Kapsula merupakan lapisan polimer yang terletak diluar dinding sel, jika

lapisan polimer ini terletak berlekatan dengan dinding sel maka lapisan ini

disebut kapsula. Tetapi jika polimer atau pilisakarida ini tidak berlekatan

dengan dinding sel maka lapisan ini disebut lendir.

III. Teori Dasar

Klebsiella pneumoniae termasuk genus Klebsiella dalam famili

Enterobacteriaceae yang merupakan penghuni normal traktus digestivus.

Kuman ini dan dapat diisolasi dari tinja manusia atau hewan. Pada manusia,

genus Klebsiella dapat merupakan kuman penyebab pneumonia, disamping

infeksi lain diluar sistim pernapasan misalnya: infeksi saluran kemih, infeksi

nosocomial (Joko, 2013).

Klebsiella pneumonia pertama kali diteliti dan diidentifikasi oleh

bakteriologis Jerman bernama Edwin Klebs (1834-1913). Klebsiella

pneumonia terdapat dalam feses dan saluran napas sebanyak 5% pada orang

normal. Klebsiella pneumonia merupakan salah satu bakteri gram negative,

bakteri yang non motil (tidak melakukan pergerakan secara sel), merupakan

bakteri fakultatif an aerob, bakteri ini dapat memfermentasikan laktosa.

Klebsiella pneumonia dapat menyebabkan pneumonia (Dewi, 2013).

Klebsiella pneumoniae (K.pneumoniae) termasuk dalam genus

Klebsiella, merupakan penghuni normal traktus digestivus. Pada manusia K.

pneumoniae dapat menyebabkan infeksi saluran napas di samping infeksi lain

di luar sistem pernapasan misalnya infeksi saluran kemih, infeksi nosokomial

dll. Selama ini, untuk mengidentifikasi kuman ini digunakan metode

pengecatan dan kultur, yang memerlukan waktu lama (Pertiwi W, Sartono TR,

Sumarno, Adi S. J Respir Indones. 2009 ).

Pada dasarnya pewarnaan negatif bukan digunakan untuk mewarnai

bakteri, tetapi mewarnai latar belakangnya menjadi gelap, zat warna tidak akan

mewarnai sel melainkan mewarnai lingkungan sekitarnya, sehingga bakteri

tampak transparan dengan latar belakang hitam. Teknik ini berguna untuk

menentukan morfologi dan ukuran sel. Pada pewarnaan ini olesan tidak

mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras dengan bahan-bahan kimia,

maka tidak terjadi penyusutan sehingga penentuan sel dapat diperoleh dengan

lebih tepat. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina. Pewarnaan

negatif atau pewarnaan asam dapat terjadi karena senyawa pewarnaan

berwarna negatif. Dalam kondisi pH mendekati netral, dinding sel bakteri

cenderung bermuatan negatif sehingga pewarna asam yang bermuatan negatif

akan ditolak oleh dinding sel bakteri. Oleh karena itu dinding sel menjadi tidak

berwarna. Contoh pewarna yang biasa digunakan yaitu tinta cina, larutan

nigrosin, asam pikrat dan eosin (Hadiotomo,1990).

Kapsul pada bakteri dapat diamati dengan mikroskop dengan teknik

pewarnaan, baik secara langsung maupu tidak langsung.

1. Pewarnaan kapsula bakteri secara langsung (pewarnaan positif).

Pewarnaan secara langsung dilakukan dengan menggunakan kristal violet

dan CuSO4.5H2O. Pewarnaan secara langsung ini dimaksudkan untuk

mewarnai sel-sel bakteri yang diamati. Apabila bakteri mempunyai kapsul,

maka dalam pengamatan sel bakteri akan tampak berwarna ungu dan

diselubungi oleh kapsul yang berwarna biru muda. Kristal violet

merupakan larutan yang yang mempunyai kromophore atau butir

pembawa warna yang bermuatan positif (memiliki kation) sedangkan

muatan yang berada di sekeliling bakteri bermuatan negatif (memiliki

anion), sehingga terjadi adanya tarik menarik antara kedua ion tersebut.

Hal inilah yang menyebabkan bakteri berwarna ungu. Dan terbentuknya

warna biru muda pada kapsula disebabkan karena kapsula dapat menyerap

CuSO4.5H2O.

2. Pewarnaan kapsula bakteri secara tidak langsung (pewarnaan negatif).

Pewarnaan secara tidak langsung dilakukan dengan menggunakan tinta

cina. Pewarnaan secara tidak langsung ini dimaksudkan untuk mewarnai

latar belakangnya. Apabila bakteri mempunyai kapsul, maka dalam

pengamatan sel bakteri akan tampak transparan dan diselubungi oleh kapsul

yang berwarna kecoklatan. Tinta cina merupakan larutan yang mempunyai

kromophore atau butir pembawa warna yang bermuatan negatif (memiliki

anion) sedangkan muatan yang berada di sekeliling bakteri juga bermuatan

negatif (memiliki anion), sehingga terjadi adanya tolak menolak antara

kedua ion tersebut. Hal inilah yang menyebabkan bakteri berwarna

transparan dan yang nampak hanya warna latar belakangnya yaitu hitam.

Terbentuknya warna transparan ini dikarenakan sel bakteri tidak mampu

menyerap warna. ( Darkuni,2001).

Pnemonia adalah proses infeksi akut yang mengenai jaringan paru-paru

(alveoli). Pnemoniae yang disebabkan oleh Klebsiella pnemonia dapat berupa

pnemoia komuniti (community acquired pnemonia). Klabsiella pnemoniae

merupakan organisme opurtunis yang ditemukan pada lapisan mukosa

mamalia, terutama paru-paru. Bakteri ini menimbulkan gejala berupa

pendarahan dan penebalan lapisan mukosa organ (Dewi,2013).

Kapsula bukan organ yang penting untuk kehidupan sel bakteri. Hal ini

terbukti bahwa sel bakteri yang tidak dapat membentuk kapsula mampu

tumbuh dengan normal dalam medium. Kapsula berfungsi dalam penyesuaian

diri dengan lingkungannya. Misalnya berperan dalam mencegah terhadap

kekeringan, mencegah atau menghambat terjadinya pencantelan bakteriofag,

bersifat antifagosit sehingga kapsul memberikan sifat virulen bagi bakteri.

Kapsula juga berfungsi untuk alat mencantelkan diri pada permukaan seperti

yang dilakukan oleh Streptococcus muans (Darkuni, 2008).

Jika bakteri tersebut kehilangan kapsulnya sama sekali maka ia akan

dapat kehilangan virulensinya dan dengan demikian akan kehilangan

kemampuannya untuk menyebabkan infeksi. Bakteri-bakteri berkapsula juga

menyebabkan adanya gangguan seperti lendir dalam beberapa proses industri

(Pelczar,2007).

Pewarnaan kapsul dilakukan dengan pewarnaan asam dan pewarnaan

basa.Kapsul dibentuk oleh organisme seperti Klebsiella pneumoniae.

Kebanyakan kapsul terdiri dari polisakarida, namun ada juga yang terdiri dari

polipeptida. Beberapa kapsul memiliki batas yang jelas dan ada yang tidak.

Kapsul melindungi bakteri dari aksi fagositosis leukosit dan memungkinkan

patogen untuk menyerang tubuh. Jika patogen kehilangan kemampuan untuk

membentuk kapsul, dapat menjadi avirulen. Kapsul bakteri bersifat non-ionik,

sehingga baik pewarnaan asam maupun basa tidak akan menempel pada

permukaan mereka. Oleh karena itu, cara terbaik untuk memvisualisasikan

mereka adalah dengan mewarnai latar belakang menggunakan zat asam dan

pewarnaan selnya dengan menggunakan zat warna basa. Untuk melakukan hal

tersebut,digunakan tinta India dan Gram kristal violet. Ini meninggalkan kapsul

(Smith,2010)

Permukaan bakteri mengandung berbagai struktur yang mampu

mengaktifkan pertahanan sendiri dan akibatnya merangsang respon imun

inang. Kapsul bakteri adalah salah satu struktur eksternal yang ada pada

permukaan bakteri yang tersusun atas gula dan atau protein., kapsul terlibat

dalam berbagai proses biologis, seperti pencegahan pengeringan, ketahanan

terhadap kekebalan inang spesifik dan spesifik (JM Toms and S

Merino,2010).

Nigrosin dan tinta cina adalah campuran dari pewarna sintesis hitam

yang dibuat dengan memanaskan campuran nirobenzena, anilin, dan

hidroklorida. Industri utamanya adalah sebagai pewarna untuk lak, pernis, dan

tinta penanda pena. Didalam biologi, nigrosin dan tinta cina digunakan untuk

pewarnaan negatif bakteri. Bentuk dan organisme yang terlihat sebagai warna

bebas menguraikan terhadap latar belakang gelap. Keuntungan dari

menggunakan metode ini daripada noda positif biasa seperti fuchsin, metilen

blue, atau carbol, ialah bahwa fiksasi sebelumnya oleh panas atau alcohol tidak

diperlukan sehingga organisme terlihat. Selain itu pewarnaan negatif dengan

zat warna ini dapat mengungkapkan beberapa mikroorganisme yang tidak

dapat diwarnai dengan metode biasa (Dwidjoseputro.1998).

Kapsul cukup tebal sehingga sulit diwarnai, oleh karena itu diperlukan

suatu pewarnaan khusus. Salah satu cara pewarnaan kapsula menurut Raebiger

yaitu dengan menggunakan pewarna larutan formol-gentian violet Raebiger

atau kristal violet. Satu lagi cara untuk perwarnaan kapsula bakteri adalah

dengan pewarnaan negatif (pewarnaan tidak langsung ). Pada pewarnaan

negatif latarbelakangnya diwarnai zat warna negatif sedangkan bakterinya

diwarnai dengan zat warna basa. Kapsula tidak menyerap warna sehingga

terlihat lapisan terang yang tembus dengan latar belakang yang

berwarna (Waluyo, 2007).

IV. Alat dan Bahan

4.1. Alat

1. Botol semprot

2. Bak pewarna

3. Kaca preparat

4. Kapas

5. Kertas saring

6. Korek

7. Mikroskop

8. Ose

9. Spirtus

4.2. Bahan

1. Alkohol 70%

2. Air suling

3. Emerge oil

4. Suspensi bakteri Klebsiela sp.

5. Tinta cina

6. Zat warna air fuksin

V. Prosedur

5.1. Pewarnaan Negatif

Pertama-tama, menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

Sediakan 2 kaca preparat dan direndam didalam larutan alcohol 70%,

kaca preparat dikeringkan dengan menggunakan kapas. Lalu nyalakan

spirtus dengan korek api dan ose di fiksasi diatas api hingga kawat ose

berubah menjadi merah. Kemudian ose didinginkan di dekat api. Setelah

itu, tabung reaksi yang berisi campuran suspensi bakteri (Klebsiela sp.)

dibuka didekat api dan suspensi bakteri diambil dengan menggunakan

ose. Kemudian penutup tabung dan mulut tabung difiksasi dan tabung

ditutup kembali. Lalu olesan bakteri di oleskan secara merata diujung

salah satu kaca preparat dan satu tetes tinta cina (1:1) didekat ujung kanan

kaca objek. Kemudian campurkan keduanya dengan menggunakan kaca

preparat kedua sampai homogen. Setelah itu, letakkan kaca preparat

kedua pada kaca preparat pertama dengan membentuk sudut 450, lalu

tarik kaca preparat kedua sepanjang kaca preparat pertama dengan

menyeretnya ke arah kiri. Kemudian biarkan kaca preparat tersebut

mongering dengan sendirinya. Lalu ditetesi dengan sedikit minyak imersi

pada kaca preparat. Kemudian preparat olesan bakteri diamati dibawah

mikroskop.

5.2. Pewarnaan Burri-Gins


Sediakan 2 kaca preparat dan direndam didalam larutan alcohol 70%,

kaca preparat dikeringkan dengan menggunakan kapas. Lalu nyalakan

spirtus dengan korek api dan ose di fiksasi diatas api hingga kawat ose

berubah menjadi merah. Kemudian ose didinginkan di dekat api. Setelah

itu, tabung reaksi yang berisi campuran suspensi bakteri (Klebsiela sp.)

dibuka didekat api dan suspensi bakteri diambil dengan menggunakan

ose. Kemudian penutup tabung dan mulut tabung difiksasi dan tabung

ditutup kembali. Lalu olesan bakteri di oleskan secara merata diujung

salah satu kaca preparat dan satu tetes tinta cina (1:1) didekat ujung kanan

kaca objek. Kemudian campurkan keduanya dengan menggunakan kaca

preparat kedua sampai homogen. Setelah itu, letakkan kaca preparat

kedua pada kaca preparat pertama dengan membentuk sudut 450, lalu

tarik kaca preparat kedua sepanjang kaca preparat pertama dengan

menyeretnya ke arah kiri. Kemudian fiksasi kaca preparat tersebut

dengan melakukannya sebanyak 3 kali di atas api. Setelah itu, digenangi

dengan pewarna air fuksin selama 5 menit, zat warna yang berlebih

dibuang dan dibilas dengan air suling, lalu dikeringkan dengan

menggunakan kertas saring. Setelah itu ditetesi dengan sedikit minyak

imersi pada kaca preparat. Kemudian preparat olesan bakteri diamati

dibawah mikroskop.

VI. Data Pengamatan

Pewarnaan Negatif Pewarnaan Burri-Gins

VII. Pembahasan

Pada praktikum kali ini praktikan melakukan praktikum pewarnaan

negatif dan pewarnaan kapsul bakteri yaitu pewarnaan Burry-Gins. Tujuan dari

praktikum ini adalah dapat mengamati morfologi bakteri yang sukar diwarnai

oleh pewarna-pewarna sederhana dengan menggunakan prosedur pewarnaan

negative, dapat mengamati kapsul bakteri dengan menggunakan prosedur

pewarnaan kapsul (pewarnaan Burri-Gins) dan dapat memahami setiap

langkah dan reaksi-reaksi kimia yang terjadi dalam prosedur tersebut. Adapun

prinsip yang mendasari praktikum ini yaitu pewarnaan negatif, tolak menolak

muatan, dan kapsul bakteri.

Bakteri yang diamati pada pewarnaan negatif dan kapsul adalah bakteri

Klebsiella pneumoniae, bakteri ini merupakan bakteri berbentuk batang.

Menurut literatur bakteri Klebsiella pneumoniae merupakan salah satu bakteri

gram negatif, bakteri yang non-motil (tidak melakukan pergerakan secara sel),

merupakan bakteri fakultatif anaerob dan bakteri ini dapat memfermentasikan

laktosa. Klebsiella pneumoniae dapat menyebabkan pnemonia (Elfidasari,

dewi, 2013).

Pada dasarnya pewarnaan negatif bukan digunakan untuk mewarnai

bakteri, tetapi mewarnai latar belakangnya menjadi gelap, zat warna tidak akan

mewarnai sel melainkan mewarnai lingkungan sekitarnya, sehingga bakteri

tampak transparan dengan latar belakang hitam. Teknik ini berguna untuk

menentukan morfologi dan ukuran sel. Pada pewarnaan ini olesan tidak

mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras dengan bahan-bahan kimia,

maka tidak terjadi penyusutan sehingga penentuan sel dapat diperoleh dengan

lebih tepat. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina. Pewarnaan

negatif atau pewarnaan asam dapat terjadi karena senyawa pewarnaan

berwarna negatif. Dalam kondisi pH mendekati netral, dinding sel bakteri

cenderung bermuatan negatif sehingga pewarna asam yang bermuatan negatif

akan ditolak oleh dinding sel bakteri. Oleh karena itu dinding sel menjadi tidak

berwarna. Contoh pewarna yang biasa digunakan yaitu tinta cina, larutan

nigrosin, asam pikrat dan eosin (Hadiotomo,1990).


Sediakan 2 kaca preparat dan direndam didalam larutan alcohol 70%, kaca

preparat dikeringkan dengan menggunakan kapas. Alkohol adalah antiseptik

yang kuat. Alkohol dapat membunuh kuman dari jenis bakteri, jamur, protozoa

dan virus. Alkohol membunuh kuman dengan cara menggumpalan protein

dalam selnya (salma, 2011).

Lalu nyalakan spirtus dengan korek api dan ose di fiksasi diatas api

hingga kawat ose berubah menjadi merah. Kemudian ose didinginkan di dekat

api. Ini bertujuan untuk membunuh bakteri yang menempel pada ose yang

dapat mengganggu hasil pengamatan. Ose yang digunakan harus dingin sebab

jika masih panas dapat menyebabkan pecahnya dinding sel bakteri sehingga

bakteri sulit untuk diamati. Ose didinginkan tetap dekat dengan api untuk

mencegah ose terkontaminasi dari udara (Pelczar, 2007).

Setelah itu, tabung reaksi yang berisi campuran suspensi bakteri

(Klebsiela sp.) dibuka didekat api dan suspensi bakteri diambil dengan

menggunakan ose. Kemudian penutup tabung dan mulut tabung difiksasi dan

tabung ditutup kembali. Lalu olesan bakteri di oleskan secara merata diujung

salah satu kaca preparat dan satu tetes tinta cina (1:1) didekat ujung kanan kaca

objek. Kemudian campurkan keduanya dengan menggunakan kaca preparat

kedua sampai homogen. Ose yang digunakan haruslah steril, untuk

mensterilkan ose digunakan fiksasi. Tinta cina berfungsi untuk mewarnai

permukaan sel yang bermuatan negatif. Sehingga jika dilihat dari mikroskop

akan terlihat bentuk bakteri dengan latar belakang berwarna gelap.

Penambahan tinta cina tidak boleh terlalu banyak karena kaca preparat akan

menjadi hitam dan akan menutupi bakteri tetapi tidak boleh juga terlalu sedikit

karena pewarnaan yang tidak merata menyulitkan dalam pengamatan bakteri

(Waluyo, 2008).

Setelah itu, letakkan kaca preparat kedua pada kaca preparat pertama

dengan membentuk sudut 450, lalu tarik kaca preparat kedua sepanjang kaca

preparat pertama dengan menyeretnya ke arah kiri. Kemudian biarkan kaca

preparat tersebut mengering dengan sendirinya tanpa melakukan fiksasi. Hal

ini dilakukan karena pada saat pengamatan bakteri yang diinginkan tetap utuh

dan tidak berubah, jika melakukan fiksasi makan panas pada saat fiksasi akan

menyebabkan bentuk sel dan ukurannya berubah dan tidak tetap (Hadiotomo,

1990).

Lalu ditetesi dengan sedikit minyak imersi pada kaca preparat.

Kemudian preparat olesan bakteri diamati dibawah mikroskop. Minyak emersi

adalah minyak yang dipakai untuk olesan pada mikroskop yang fungsinya

untuk memperjelas objek dan melindungi mikroskop itu sendiri atau

Imersi minyak merupakan teknik yang digunakan pada saat kita akan

mengamati preparat mikroskopik dengan perbesaran yang besar (10x100

misalnya). Minyak imersi memiliki indeks refraksi yang tinggi dibandingkan

dengan air atau udara sehingga objek yang kita amati dapat terlihat lebih jelas

menggunakan minyak imersi dibandingkan menggunakan air (Icuk, Sugianto,

2014).

Hasil Pengamatan adalah bentuk bakteri Klebsiella pneumonia yaitu

Basil transparan dengan latar belakang gelap. Hasil pengamatan yang diperoleh

sesuai dengan literature yang ada bahwa bakteri Klebsiella pneumonia bersifat

gram negatif, berbentuk batang pendek, fakultatif aerob, tidak mampu

membuat spora, tidak bergerak dan mempunyai kapsul.

Pada pewarnaan kapsul, pengerjaannya tidak jauh berbeda dengan

pewarnaan negatif. Perbedaannya hanyalah pada pewarnaan ini dilakukan

fiksasi dan penambahan zat warna. Setelah olesan preparat diberikan tinta cina

dan diratakan, kaca preparat kemudian difiksasi. Fiksasi bertujuan untuk

mematikan bakteri dan meletakkan sel bakteri pada objek gelas tanpa merusak

struktur selnya. Selain itu,tujuan fiksasi juga untuk melekatkan suspense

bakteri,karena dalam pewarnaan kapsul akan diberikan pewarna tanding karbol

fuksin untuk mewarnai sel bakteri. Fiksasi yang dilakukan cukup 3 kali di atas

api, hal ini bertujuan agar kapsul bakteri yang diamati tidak pecah.

Setelah dilakukannya fiksasi, diberi zat warna yaitu air fuksin pada kaca

preparat. Zat warna diberi seperlunya saja karena bila berlebih justru dapat

merusak preparat bakteri. Hal ini umumnya digunakan dalam pewarnaan

mikrobakteria karena memiliki ketertarikan untuk asam mycolic yang

ditemukan di dinding sel mikroba. Pada umumnya bakteri bersifat tembus

cahaya, hal ini disebabkan karena banyak bakteri yang tidak mempunyai zat

warna. Tujuan dari pewarnaan adalah untuk mempermudah pengamatan

bentuk sel bakteri, memperluas ukuran jazad, mengamati struktur dalam dan

luar sel bakteri, dan melihat reaksi jazad terhadap pewarna yang diberikan

sehingga sifat fisik atau kimia jazad dapat diketahui (Hadiotomo, 1990). Lalu

zat warna dibiarkan selama 5 menit yang bertujuan agar zat warna dapat

berpenetrasi secara optimal ke dalam dinding sel bakteri (Prescott, 2002).

Setelah itu, zat warna yang berlebih dibuang dan dibilas dengan air

suling, lalu dikeringkan dengan menggunakan kertas saring. Pembilasan harus

dilakukan secara hati-hati karena pada saat pembilasan bakteri bias terbawa

oleh air.

Setelah itu ditetesi dengan sedikit minyak imersi pada kaca preparat.

Kemudian preparat olesan bakteri diamati dibawah mikroskop. Minyak emersi

adalah minyak yang dipakai untuk olesan pada mikroskop yang fungsinya

untuk memperjelas objek dan melindungi mikroskop itu sendiri atau

Imersi minyak merupakan teknik yang digunakan pada saat kita akan

mengamati preparat mikroskopik dengan perbesaran yang besar (10x100

misalnya). Minyak imersi memiliki indeks refraksi yang tinggi dibandingkan

dengan air atau udara sehingga objek yang kita amati dapat terlihat lebih jelas

menggunakan minyak imersi dibandingkan menggunakan air (Icuk, Sugianto,

2014).

Setelah diamati dibawah mikroskop. Hasil Pengamatan yaitu bakteri

berbentuk batang,dengan warna badan sel bakteri adalah merah dan kapsul

tampak bening disekitar badan bakteri. Tetapi, dalam praktikum kali ini

praktikan tidak bisa menemukan bakteri sesuai literature. Hal ini disebabkan

karena pada saat pencucian yang terlalu keras sehingga bakteri terbawa oleh

air atau pada saat penotolan dengan kertas saring yang tidak hati-hati, pada saat

fiksasi terlalu lama sehingga bakteri susah untuk diamati.

VIII. Simpulan

1. Dapat mengamati morfologi bakteri yang sukar diwarnai oleh pewarna-

pewarna sederhana,dengan menggunakan prosedur pewarnaan negative.

Suspensi Bakterinya : Klebsiella pneumonia

Zat Warna : Tinta Cina

Bentuk morfologi : bacil

Warna sel : Bening dengan latar hitam

2. Dapat mengamati kapsul bakteri dengan menggunakan prosedur

pewarnaan kapsul ( Pewarnaan Burri-Gins).

Suspensi Bakterinya : Klebsiella pneumonia

Zat Warna : Tinta Cina dan Karbol fuksin

Bentuk morfologi : bacil

Warna sel : Sel bakteri berwarna merah,kapsulnya

berwarana bening dengan latar hitam

3. Dapat memahami setiap langkah dan reaksi reaksi kimia yang terjadi

dalam prosedur tersebut

DAFTAR PUSTAKA

Darkuni, Noviar. 2001. Mikrobiologi (Bakteriologi, Virologi dan Mikologi).

Malang: UM Press.

Dwidjoseputro. 1998. Dasar Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.

Elfidasari, Dewi. 2013. Deteksi Bakteri Klebsiella pneumonia pada Beberapa

Jenis Rokok Konsumsi Masyarakat. Available online at

http://jurnal.uai.ac.id/index.php/SST/article/download/97/pdf_12 [diakses

23 Maret 2015 )

Hadiotomo, Sri Ratna. 1990. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta :

Gramedia.

Icuk, Sugianto. 2014. Available online at http://brainly.co.id/tugas/56829 [diakses

23 Maret 2015]

Prescott, H. K., 2002. Microbiology. New York : Mc Graw Hill.

Pelczar ,M.J . 2007 . Dasar-Dasar Mikrobiologi . Jakarta : UI Press.

Salma. 2011. Mengenal antiseptik. http://majalahkesehatan.com/mengenal-

antiseptik/ [diakses 23 Maret 2015]

Smith, 2010. Capsule Stain. Available online at

http://www.austincc.edu/microbugz/capsule_stain.php (diakses 23 Maret

2015).

Susilo, Joko . 2013 . DETEKSI BAKTERI Klebsiella pneumoniae PADA

SPUTUM DENGAN METODE IMUNOSITOKIMIA MENGGUNAKAN

ANTI OUTER MEMBRANE PROTEIN BERAT MOLEKUL 40 KDA

Klebsiella pneumoniae SEBAGAI ANTIBODI. Available online at

jkb.ub.ac.id/index.php/jkb/article/download/233/225 [diakses 23 Maret

2015]

Toms, JM and S Merino . 2010 . Bacterial Capsules and Evasion of Immune

Responses . Available online at

http://www.els.net/WileyCDA/ElsArticle/refId-a0000957.html [diakses 23

Maret 2015]

Waluyo, Lud. 2008. Teknik Metode Dasar Mikrobiologi. Malang : Universitas

Muhamadiah Malang.

W, Pertiwi, Sartono TR, Sumarno, Adi S. J Respir Indones. 2009 . Sensitivitas

dan Spesifisitas metode Dot Blot menggunakan Antigen Outer Membrane

Protein Klebsiella pneumoniae yang Direspon Secretory-Immunoglobulin

A Sputum Penderita Terinfeksi Klebsiella pneumoniae . Available online

at http://jurnalrespirologi.org/sensitivitas-dan-spesifisitas-metode-dot-

blot- menggunakan-antigen-outer-membrane-protein-klebsiella-

pneumoniae-yang- direspon-secretory-immunoglobulin-a-sputum-

penderita-terinfeksi-klebsiella-pneumonia/ [diakses 23 Maret 2015]

Documents

Pewarnaan Negatif dan Pewarnaan Burry Gins