PERTUMBUHAN DAN PERKEMBANGAN KALUS

BEBERAPA KULTIVAR APEL (Malus Sylvestris Mill) PADA

MEDIA MS DENGAN KOMBINASI NAA DAN BAP

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Sebagian Persyaratan

Mencapai Derajat Sarjana S1

Jurusan Agronomi

Diajukan Oleh :

ISTIQOMAH NISAK

Nim. 201310200311076

JURUSAN AGRONOMI

PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN PETERNAKAN

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG

MALANG

2017

i

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan pada tanggal 1 Mei 1995, sebagai

putra ketiga dari lima bersaudara. Ayahanda bernama Busri

dan Ibunda Yatimah Khomsah. Penulis menyelesaikan

pendidikan Sekolah Dasar di SDN Bayeman II Kota

Probolinggo pada tahun 2007, kemudian melanjutkan ke

jenjang Sekolah Menengah Pertama di SMP Negeri 1 Tongas Kota Probolinggo

lulus tahun 2010, dan masuk Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 1 Tongas

Kota Probolinggo tahun 2013.

Penulis melanjutkan pendidikan di Program Studi Agroteknologi, Jurusan

Agronomi, Fakultas Pertanian Peternakan, Universitas Muhammadiyah Malang

pada tahun 2013. Semasa perkuliahan penulis aktif sebagai asisten Laboratorium

Agronomi sejak tahun 2015/2016.

ii

PERSEMBAHAN

Alhamdulillah saya panjatkan kepada Allah SWT atas segala rahmat dan

kesempatan untuk menyelesaikan tugas akhir dengan segala kekurangan ini.

Sholawat dan salam semoga selalu terlimpahkan pada junjungan nabi besar kita

nabi Muhammad SAW.

Saya persembahkan karya sederhana ini kepada orang-orang yang sangat saya

sayangi.

Bapak dan Ibuku tercinta

Bapak Busri dan Ibu Yatimah Khomsah

orang tua hebat yang telah membesarkan dan mendidik saya dengan penuh kasih

sayang

Terima kasih atas pengorbanan, nasehat dan do’a

yang tiada hentinya beliau berdua berikan kepada saya selama

ini.

Nenek saya tercinta Emak Suhati

Mas, mbak dan adik tersayang

Mas Fitroh Jamaludin Al-Afgani & istri Mudfi Agustin beserta anak Firah

Mbak Indah Ratna Sari & suami Habibi Firman Kholik beserta anak nizar

Adekku tersayang Maulana Rizal Bisri

Adekku tersayang Qusai Ridwan Riski

Terima kasih atas dukungan serta do’a kalian, semoga Allah SWT membalas

kebaikan kalian dengan kebaikan yang berlipat-lipat.

Sebagai rasa hormat dan ucapan terima kasih kepada Pak Untung Santoso, Pak

Misbah Ruhiyat, Bu Fatimah Nursandi, Pak Syarih Husen, Pak Harun Rasyid, Pak

Sufianto, dan segenap dosen-dosen Agronomi yang telah membimbing serta

memberikan ilmu pengetahuan yang bermanfaat dengan keikhlasan dan

kesabaran.

Teruntuk Sahabat-sahabat saya Mbak Alvi, Eva, Uda, Riza,Waras, fitri yang telah

setia menemani, memotivasi, dan menghibur saya saat suka maupun duka.

Teman-teman tim Malus Dinar, Rizka, Reka, Ela, Ila, Mondi, Rubi, Imul, Alik

yang setia membantu penelitian hingga selesai. Terimakasih, hanya Allah yang

bisa mengganti kebaikan kalian dengan kebaikan yang berlipat-lipat.

Teman-teman Agronomi angkatan 2013, rekan-rekan laboratorium terimakasih

atas ilmu, semangat dan kekompakannya.

iii

KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum Warahmatullohi Wabarakatuh

Syukur Alhamdulillah penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas

limpahan rahmat dan hidayahNya, sehingga penulis mampu menyelesaikan

laporan penelitian dengan judul “Pertumbuhan dan Perkembangan Beberapa

Kultivar Apel (Malus sylvestris Mill) Pada Media MS dengan Kombinasi NAA

dan BAP.

Laporan penelitian ini merupakan salah satu persyaratan untuk

menyelesaikan pendidikan tingkat Sarjana pada Jurusan Agronomi, Fakultas

Pertanian Peternakan Universitas Muhammadiyah Malang.

Pada kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan terima kasih atas segala

bantuan baik berupa tenaga dan pikiran, kepada yang terhormat :

1. Dr. Ir. Untung Santoso, MSi. sebagai pembimbing utama yang telah bersedia

membimbing dengan sabar dan mengarahkan selama penyusunan skripsi ini

hingga selesai.

2. Ir. Misbah Ruhiyat, MSi. sebagai pembimbing pendamping yang telah

banyak membantu penulis dan dengan sabar membimbing dan mendampingi

pada proses penyusunan skripsi ini hingga selesai.

3. Dr. Ir. Syarif Husen, M.P. yang telah memberikan bimbingan skripsi

4. Dr.. Harun Rasyid, M.P. yang telah memberikan bimbingan skripsi

5. Ir. Sufianto, MM. yang telah memberikan bimbingan data skripsi penelitian.

6. Teman-teman Agronomi angkatan 2013 yang selama ini membantu dalam

pelaksanaan penelitian ini hingga selesai.

Akhir kata, penulis menyadari bahwa laporan penelitian ini masih jauh dari

kesempurnaan. Penulis mengharapkan adanya kritik dan saran yang bersifat

membangun demi sempurnanya penulisan skripsi ini. Semoga bermanfaat.

Wasalamu’alaikum Warahmatullohi Wabarakatuh

Malang, 29 Juli 2017

Penulis

iv

DAFTAR ISI

Isi Hal

KATA PENGANTAR ......................................................................................... iiii

DAFTAR ISI ........................................................................................................ iiii

DAFTAR TABEL………………………………………………………..……...vi

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN………………………………………………….…........ix

RINGKASAN…………………………………………………………………….x

ABSTRACT……………………………………………………………………...xi

I. PENDAHULUAN .......................................................................................... 1

1.1. Latar Belakang ............................................................................................. 1

1.2. Rumusan Masalah……………………………………………………….....3

1.3. Tujuan Penelitian .......................................................................................... 4

1.3. Hipotesis ....................................................................................................... 4

I. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................. 5

2.1. Agronomi Tanaman Apel ............................................................................. 5

2.2. Perbanyakan Tanaman Apel ......................................................................... 8

2.3. Kultur Jaringan ............................................................................................. 9

2.4. Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) ...................................................................... 11

2.4.1. NAA (Naphatelene Acetid Acid)……………………………………11

2.4.2. BAP (Benzilaminopurin)………………………………………….. 13

2.5. Pertumbuhan dan Perkembangan…………………………………………14

2.6. Induksi Embrio Somatik………………………………………………….15

III. BAHAN DAN METODE ............................................................................. 18

3.1. Tempat dan Waktu Pelaksanaan ................................................................. 18

3.2. Alat dan Bahan ........................................................................................... 18

3.2.1. Alat .................................................................................................. 18

3.2.2. Bahan............................................................................................... 18

3.3. Rancangan Penelitian ................................................................................. 18

3.4. Pelaksanaan Penelitian ............................................................................... 20

v

3.4.1. Sterilisasi Alat ......................................................................................... 20

3.4.2. Pembuatan larutan stok ........................................................................ 20

3.4.3. Pembuatan Media Murashige & Skoog (MS)...................................... 21

3.4.4. Subkultur eksplan ................................................................................ 21

3.5. Variabel Pengamatan .................................................................................. 22

3.6. Analisis dan Penyajian Data………………………………………………22

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................................... 24

4.1. Hasil .......................................................................................................... 24

4.1.1. Pertumbuhan Kalus………………..………….…………………...…25

4.1.2. Perkembangan Kalus………………………………………….......…39

4.1.3. Induksi Embrio Somatik………………………………………..…...41

4.2. Pembahasan………………………………………………………….……43

4.2.1. Pertumbuhan Kalus………………..………….…………………..…43

4.2.2. Perkembangan Kalus………………………………………….......…51

4.2.3. Induksi Embrio Somatik………………………………………..…...52

V. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................................... 53

5.1 Kesimpulan ............................................................................................. 53

5.2 Saran ....................................................................................................... 54

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 55

LAMPIRAN……………………………………………………………………..59

vi

DAFTAR TABEL

No Teks Hal

1. Denah Percobaan Penelitian ............................................................... 20

2. Scoring warna kalus…………………................................................ 23

3. Rerata Warna Kalus ............................................................................ 28

4. Panjang kalus apel…………………………………………………… 29

5. Lebar kalus apel……………………………………………………… 31

6. Berat akhir kalus……………………………………………………... 34

vii

DAFTAR GAMBAR

No Teks Hal

1. Volume Impor Beberapa Jenis Buah-buahan Utama Indonesia,

2008- 2013 (BPS, 2013).. .................................................................. 2

2. Apel (Malus sylvestris Mill) Sumber: murnisehat.com ...................... 6

3. Struktur Molekul Naphatelene Acetid Acid (www.wuzhouchem.com

diakses 27 Januari 2016) ..................................................................... 11

4. Struktur molekul BAP (www.wuzhouchem.com diakses 28

Februari 2008)……………………………………………………… 13

5. Persentase Tekstur kalus apel (Malus sylvestris Mill) umur 0 MST

dan 12 MST dengan perlakuan kombinasi kultivar apel

dengan menggunakan komposisi NAA-BAP. (A) Kompak dan

(B) Remah. .......................................................................................... 31

6. Berat akhir kalus apel (Malus sylvestris Mill) umur 12 MST.

(A) Komposisi ZPT dan (B) Kultivar……………………………… 33

7. Pertambahan berat kalus apel (Malus sylvestris Mill) umur 12 MST

dengan perlakuan kombinasi kultivar apel dengan menggunakan

komposisi NAA-BAP………………………………………………. 36

8. Prosentase Hidup kalus apel (Malus sylvestris Mill) umur 12 MST

dengan perlakuan kombinasi kultivar apel dengan menggunakan

komposisi NAA-BAP………………………………………………. 38

9. Proses perkembangan kalus mulai umur 0 MST, 7 MST dan12 MST

pada media MS dengan beberapa kombinasi perlakuan………. 40

10. Analisis embrio endospermik sekunder histologi kalus non

Embriogenik dan kalus embriogenik…………………………. 41

11. Hasil pengamatan mikroskopis……………………………….. 42

12. (A) warna kalus hijau tua, (B) warna kalus hijau muda, (C) warna

kalus hijau keputihan, (D) warna kalus putih kehijauan, (E) warna

kalus coklat keputihan, (F) warna……………………………. 43

13. A. Pemotongaan kalus putih yang menyelimuti kalus berwarna hijau

B. Kalus browning menunjukkan media mulai menguning….. 44

viii

14. Proses perubahan warna kalus mulai umur 0 MST, 7 MST dan12 MST

pada media MS dengan penambahan 2.4D 0.5 ppm + BAP 1 ppm

Kultivar (V2) Red Del Whasinton, dan NAA 3 ppm + BAP 1 ppm

kultivar (V1) Manalagi……………………………………….. 45

15. (A) kalus berterkstur kompak, (B) kalus bertekstur remah……. 46

64

16. Eksplan kontaminasi jamur, (B) Eksplan browning 47

(berwarna coklat)………………………………………………..

ix

DAFTAR LAMPIRAN

No Teks Hal

1. Analisis Ragam Panjang Kalus Umur 2-12 MST ................................ 59

2. Analisis Ragam Lebar Kalus Umur 2-12 MST .................................... 60

3. Berat Awal Kalus ................................................................................. 61

4. Berat Akhir Kalus Umur 12 MST ........................................................ 62

5. Pertambahan Berat Kalus Umur 12 MST…………………………………... 63

6. Cara Pengamatan Histologi .................................................................. 64

7. Cara Pengamatan SEM (Scanning Electron Microscope) ................... 65

8. Komposisi Dasar Media MS (Hendaryono, 1994) ............................... 66

9. Cara Membuat Larutan Stok (disimpan di botol ukuran 100 ml) ........ 67

10. Kultivar Apel ........................................................................................ 68

11. Dokumentasi ........................................................................................ 69

DAFTAR PUSTAKA

Abidin, Z. 1993. Dasar-dasar pengetahuan tentang zat pengatur tumbuh. Angkasa.

Bandung. 85 hal.

Alcantara, G.B., R. Dibax., R.D. Oliveira., J.C.B. Filho., and E. Daros. 2014. Plant

Regeneration and Histological Study of the Somatic Embryogenesis of

Sugarcane (Saccharum spp). Cultivar RB855156 and RB72454. Acta. Sci.

Agron. 36(1):63-72.

Arditi, J. 1992. Fundamental Of Orchid Biology. John Wiley & Sons. New York.

Chichester. Brisbane. Toronto. Singapura. 691P.

Armini, N. M., G. A. Wattimena dan L. Gunawan. 1991. Bioteknologi Tanaman. Tim

Laboratorium Kultur Jaringan. Pusat Antar Universitas Bioteknologi. IPB.

Bogor. 455 hal.

Ashari, S. 1995. Hortikultura Aspek Budidaya. Universitas Indonesia Press. Jakarta.

Aslamyah, S. 2002. Peranan hormon tumbuh dalam memacu pertumbuhan algae. 9

hal. http://rudyct.tripod.com/sem1_023/siti_aslamyah.htm. 08 Februari 2005

Astutik. S. 2007. Pengaruh Kultivar Kedelai (Glycine max) terhadap

Pertumbuhan Kalus Dan Kandungan Senyawa Isoflavon (Daidzein dan

Genistein). Malang. Jurusan Biologi Lingkungan Fakultas dan Ilmu

Pengetahuan Alam Universitas Islam Malang.

Ayabe M. and Sumi S. 1998. Establishment of a Novel tissue Culture Method, Stem-

disc Culture and Its Practical Application to Micropropagation of Garlic

(Allium sativum L). Plant cell. Rep. 17:773-779. BPS, 2013. Data Ekspor-

Impor. http://bps.go.id/exim-frame.php?kat=2. Diakses tanggal 5 Oktober

2013.

Bouman H, De Klerk GJ. 2001. Measurement of the extent of somaclonal variation in

Begonia plants regenerated under various conditions comparison of three

assays. Theor Appl Genet. 102(1): 111-117.

Davies, P.J. 1995. The plant hormone their nature, occurence and function. In Davies

(ed.) Plant Hormone and Their Role in Plant Growth Development. Dordrecht

Martinus Nijhoff Publisher.

Dinas Pertanian .2008. Kondisi Apel di Kota Batu. Diakses dari

http://www.pertanian.go.id pada tanggal 20 September 2016. Dodd, B., 1993.

Plant tissue culture for horticulture. School of life Science. Queensland

University Of Technology.

Dwimahyani,I. 2007. Metode Suspensi Sel untuk Membentuk Spot Hijau pada Kultur

In-Vitro Galur Mutan Tanaman Jarak Pagar (Jatropha curcas L). A Scientific

Journal for The Applications of Isotopes and Radiation. Vol. 3 No. 2

Gaba, V.P. 2005. Plant Growth Regulator. In R.N. Trigiano and D.J. Gray (eds.)

Plant Tissue Culture and Development. CRC Press. London. p. 87-100.

Gamborg, O.L., T. Murashige, T.A. Thorpe, and I.K. Vasil. 1976. Plant tissue culture

media. In vitro 12(7): 473-378.

Gardner, F. P., R. B. Pearce, R. L. Mitchell. 1991. Fisiologi Tanaman Budidaya. UI-

Press. Jakarta. 426 hal

Gaspar, T., C. Kevers, P. DeBergh, L. Maene, M. Paques dan P. Boxus.1987.

Vitrification ; morphological, phisiological and ecological aspects. ln. J. M.

Bonga and D.J. Durjan (Eds.) ; Cell and Tissue Culture in Forestry Vol. l.:

General Priciples and Bioteknology. Martinus Nijhofi Pub. Netherlands. P.

152 - 166.

Gunasekara, D.S., E.S. Scott dan A.N. Rao. 1988. Suspension culture of the

dipterocarp Shorea roxburghii G. Don. Somatic Cell Genetic of Woody Plant.

p 137 – 141.

Gunawan, L.W.,1988. Teknik Kultur Jaringan. Laboratorium Kultur Jaringan

Tanaman. Pusat Antar Universitas (PAU). Institut Pertanian Bogor, Bogor.

Hanafruits. 2013. Apel Manalagi. www.hanafruits.com/manalagi Diakses pada 3

Oktober 2016

Hendaryanto D.P.S. & A. Wijayani. 1994. Teknik kultur jaringan, pengenalan,

petunjuk perbanyakan tanaman secara vegetatif-modern. Kanisius.

Yogyakarta.

Hussey, G; Stacey, N.J. 1981. In Vitro Propagation of Potato (Solanum tuberosum L).

Annals of Botany. 48:787 -796. Yogyakarta.

Karjadi, A.K. dan A.Buchory. 2008. Pengaruh Komposisi Media Dasar, Penambahan

BAP, dan Pikloram terhadap Induksi Tunas Bawang Merah. J. Hort. Vol. 18.

Kim, J. W and W. Y. Soh. 1996. Plant Regeneration Through Somatic

Embryogenesis from Suspension Culture of Allium fistolosum L. Plant Sci.

11114:215-220.Kosmiatin M. 2013. Pembentukan Tanaman Triploid Jeruk

Siam Simadu (Citrus nobilis Lour) Melalui Kultur Endosperma. Disertasi.

Sekolah Pasca Sarjana Institut Pertanian Bogor.

Lakitan, B. 1996. Fisiologi pertumbuhan dan perkembangan tanaman. PT Raja

Grafindo Persada. Jakarta. 218 hal.Lestari, E.G. 2008. Kultur Jaringan.

AkaDemia. 60 hlm.

Lestari .G. .2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman

Melalui Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen 7(1):63-68.

Litz, R.E., R.C. Hendrix, P.A. Moon dan V.M. Chavez. 1998. Induction of

embryogenic mango cultures as affected by genotype, explanting, 2,4-D and

embryogenic nurse culture. Plant Cell Tissue and Organ Culture 53: 13 – 18.

Marlin, Y. Hermansyah. 2012. Inisiasi Kalus Embriogenik Pada Kultur

Jantung Pisang ‘Curup’ dengan Pemberian Sukrosa. BAP Dan 2,4-D. J.

Agrivigor 11(2): 276-284, Mei – Agustus 2012; ISSN 1412-2286.

Mawarni, R. I. 2016. Skripsi. Multiplikasi Kalus Beberapa Kultivar Apel pada Media

dengan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh yang Berbeda. Universitas

Muhammadiyah Malang. Malang

Medha, B. 2012. Pengembangan Konsep Agropolitan Sebagai Potensi Wisata

Agro. Rapat Koordinasi dan Sinkronisasi Optimalisasi Pengembangan Wisata

Agro di Jawa Timur, Hotel Selecta Kota Batu. Sekretariat Daerah Propinsi

Jawa Timur.

Molina, D.M., M.E. Aponte, H. Cortina dan G. Moreno. 2002. The effect of genotype

and explant age on somatic embryogenesis of Coffee. Plant Cell Tissue and

Organ Culture 71: 117 – 125.

Nasir, M. 2002. Bioteknologi: potensi dan kebrhasilannya. Raja Grafindo Persada.

Jakarta. Hal 286.

Noerhadi, E. 1974. Kultur jaringan tumbuhan sebagai bahan penyelidikan dan

potensinya dalam pembangunan Negara. September 2013, 73 - 84 82 Pidato

pengukuhan guru besar tetap ITB. Penerbit ITB. Bandung.

Nugent, G, S.F. Chandler, P. Whitemean dan T.W. Stevenson. 2001. Somatic

embryogenesis in Eucalyptus globules. Plant Cell Tissue and Organ Culture

67: 85 – 88.

Orangepippin Ltd. 2016. Apple Varieties. https://www. orangepippin.com/apples.

Diakses 3 Oktober 2016Paul, H. M, Belaizi. B, S, Sangwan-Norreell. 1994.

Somatic Embryogenesis in Apple. Plant Physiol. Vol 143. Pp. 78-86 (1994).

Peterson, G., R. Smith. 1991. Effect of abscicic acid and callus size on regeneration

of American and international rice varieties. Plant Cell Rep 10: 35-38.

Pierik, R.L.M. 1987. In Vitro Culture of higher Plants. Martinus Nijhoff Publisher.

London. 344 p.

Purnamaningsih, R. dan E.G. Lestari. 1998. Multiplikasi tunas temu giring melalui

kultur in vitro. Buletin Plasma Nutfah 1(5):24-27.

Purnamaningsih, R., 2002, Regenerasi Tanaman melalui Embriogenesis Somatik dan

Beberapa Gen yang Mengendalikannya, Balai Penelitian Bioteknologi dan

Sumberdaya Genetik Pertanian, Buletin AgroBio 5(2):51-58.

Purnamaningsih R. 2003. Regenerasi Tanaman Melalui Embriogenesis Somatik Dan

Beberapa Gen Yang Mengendalikannya. Buletin Agrobio 5(2):51-58

Riyadi, I. 2010. Pengaruh Kinetin dan BAP Terhadap Pertumbuhan Dan

Perkembangan Embrio Somatik Tanaman Sagu (Metroxilon Sagu Rottb).

Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia. Jurnal AgroBiogen

6(2):101-106

Sagare, AP, K.Suhasini dan KV. Krishnamurthy. 1993. Plant regeneration via

somatic embryogenesis in chick pea (Cicer arietinum L). Plant Cell Reports

12 : 652 – 655

Satyavathi, V.V., P.P. Jauhar, E.M. Elias, and M.B. Rao. 2004. Genomics, molecular

genetic and biotechnology efects of growth regulators on in vitro plant

regeneration. Crop Sci. 44:1839-1846.

Soelarso. R, B. 1996, Budidaya Apel. Kanisius. Yogyakarta.

Sukmadjaja, D. 2005. Embriogenesis Langsung Pada Tanaman Cendana.

Embriogenesis Somatik Langsung Pada Tanaman Cendana. Balai Besar

Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik

Pertanian Jurnal Bioteknologi Pertanian, Vol. 10, No. 1, pp. 1-6

Thomy, Z. 2012. Effect of Plant Growth Regulators 2,4 D and BAP on Callus Growth

of Plant Producing Gaharu (Aquilaria malaccensis Lamk). Prosiding Seminar

Nasional Biologi.

Toonen, M.A.J. and S.C. de Vries. 1996. Initiation of Somatic Embryos from Single

Cells. In: Wang, T.L, and A. Cuming (ed.). Embryogenesis the generation of

plant. Bios Scientific Publishers Limited. Oxford. 173-177

Umboh, M.I.J., S.A. Yani dan D.J. Lawalata. 1992. Proceeding of Tsukuba

Workshop. Tsukuba Science City. BIO-REFOR. p. 112

Utami. N. F. 2016. Induksi Embrio Somatik Dari Kalus Embriogenik Dan

Perkecambahan Planlet Jeruk Soe. Departemen Agronomi Dan Hortikultura,

Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor.

Wattimena, G. A. 1992. Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. Pusat Antar Universitas.

Institut Pertanian Bogor. 145 hal.

Winarto, B., N.A. Mattjik, A. Purwito, dan B. Marwoto. 2010. Pengaruh Komposisi

Media Terhadap Inisiasi Tanaman Apel (Malus sylvestris Mill). J. Agroland

16 (3) : 193 – 198

Yang, L, Y. Li dan H. Shen. 2012. Somatic embryogenesis and plant regeneration

from immature zygotic embryo cultures of mountain ash (Sorbus

pohuashanensis). Plant Cell Tissue and Organ Culture 109 : 547 – 556.

Yelnititis, E. Sapulete dan T. Herawan. 2002. Embriogenesis somatik pada S.

leprosula, S. selanica dan S. pinanga. Laporan Tahunan P3BPTH (tidak

dipublikasikan).

Young, A,, C. Miller, GA. de Mayolo, JD. Swanson, S. Phisak, S. Maximova dan M.

Guiltinan. 2003. Cacao Tissue Culture Protocol Book version 1.4. Pennstate

Collage of Agriculture Sciences. USDA. Pennsylvania State University. Jan

27th.