PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

PENGARUH MUTAGEN ETHYL METHANE SULFONATE (EMS) DAN

SELEKSI IN VITRO TERHADAP RESPON PERTUMBUHAN KALUS

GANDUM

BIDANG KEGIATAN :

PKM Artikel Ilmiah

Diusulkan oleh :

Suprianto Wila (512008016)

UNVERSITAS KRISTEN SATYA WACANA

SALATIGA

2012

HALAMAN PENGESAHAN PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

Salatiga, 14 September 2012

Menyetujui,

Ir. Djoko Murdono, M.S

Suprianto Wila

Pembimbing

Penyusun

Dr. Ir. Bhistok Hasiholan S, M.S

Ketua Progdi Agroekoteknologi

1. Judul Kegiatan : Pengaruh Mutagen Ethyl Methane Sulfonate (EMS) dan

Seleksi In Vitro Terhadap Respon Pertumbuhan Kalus

Gandum.

2. Bidang Ilmu : (X) PKM-AI ( ) PKM-GT

3. Ketua Pelaksana Kegiatan/Penulis Utama

a. Nama Lengkap : Suprianto Wila

b. NIM : 512008016

c. Jurusan : Agroekoteknologi

d. Universitas : Universitas Kristen Satya Wacana

e. Alamat Rumah dan No.Telp/HP : Jalan Kemiri Barat Gg. Salak no. 43,

Salatiga Jawa Tengah/085226534570

f. Alamat email : wilasuprianto@yahoo.com

4. Anggota Pelaksana Kegiatan/Penulis : 2 Orang

5. Dosen Pembimbing

a. Nama Lengkap : Ir. Djoko Murdono, M.S

b. NIP :

c. Alamat Rumah dan No.Telp/HP :

PENGARUH MUTAGEN ETHYL METHANE SULFONATE (EMS) DAN

SELEKSI IN VITRO TERHADAP RESPON PERTUMBUHAN KALUS

GANDUM

Suprianto Wila, Yosi Setyadi, Riris Eunike

Fakultas Pertanian dan Bisnis

Universitas Kristen Satya Wacana

ABSTRAK

Tanaman gandum (Tritticum aestivum L.) adalah salah satu jenis tanaman

pangan di dunia. Satu produk olahan gandum adalah terigu. Konsumsi terigu

masyarakat Indonesia meningkat 4-6% per tahun sedangkan seluruh kebutuhan

terigu masih dipenuhi dari impor. Oleh karena itu, pemerintah mencanangkan

program pengembangan gandum di Indonesia. Salah satu kendala pengembangan

tanaman gandum di Indonesia adalah terbatasnya varietas yang beradaptasi

terhadap lingkungan tropis. Oleh karena itu, perakitan kultivar gandum yang

adaptif untuk daerah tropis menjadi sangat penting untuk menunjang program

pengembangan gandum di Indonesia. Penyediaan keragaman genetik dapat

dilakukan dengan memanfaatkan teknik kultur jaringan yaitu salah satunya

dengan induksi mutasi. Salah satu mutagen yang paling potensial, paling efektif

dan banyak digunakan serta digunakan pada berbagai jenis organisme adalah

mutagen kimia yaitu Ethyl Methane Sulfonate (EMS). Untuk mengarahkan

perubahan sifat akibat mutasi, dapat digunakan seleksi in vitro. Kegiatan magang

ini bertujuan untuk memperoleh informasi lanjut mengenai pengaruh mutagen

EMS terhadap respon pertumbuhan kalus gandum, khususnya informasi

mengenai pengaruh perbedaan waktu perendaman kalus dalam konsentrasi EMS

0,3%. Informasi dari kegiatan ini diharapkan akan berguna bagi penelitian

selanjutnya untuk mendapatkan keragaman genetik yang lebih luas dan untuk

seleksi tanaman gandum yang lebih unggul pada generasi berikutnya. Hasil

pengujian menunjukkan bahwa perbedaan waktu perendaman berpengaruh

terhadap persentase hidup kalus pada proses seleksi in vitro. Perlakuan waktu

perendaman yang optimal untuk induksi mutasi yaitu pada EMS 0,3% selama 1

jam.

Kata kunci :

Tritticum aestivum L., induksi kalus, induksi mutasi, EMS, seleksi in vitro

ABSTRACT

Wheat plants (Tritticum aestivum L.) is one of the world's crops. The

processed products are wheat flour. Indonesia to increase the consumption of

wheat flour 4-6% per year, while the entire requirement is met from imported

wheat. Therefore, the government announced the development of wheat in

Indonesia. One obstacle wheat cultivation in Indonesia is limited varieties

adapted to tropical environments. Therefore, adaptive assembly of wheat cultivars

for the tropics is very important to support wheat development program in

Indonesia. Provision of genetic diversity can be done by using tissue culture

techniques, namely one with induced mutations. One of the most potent mutagen,

most effective and widely used, and is used in many kinds of organisms is the

chemical mutagen Ethyl Methane Sulfonate (EMS). To direct result of the

changing nature of the mutation, it can be used in vitro selection. Apprenticeship

aims to obtain more information on the mutagenic effect of EMS on the response

of wheat callus growth, particularly information on the effect of immersion time

difference callus in 0.3% EMS concentration. Information from these activities

are expected to be useful for further research to gain a wider genetic diversity and

for the selection of wheat is superior to the next generation. The test results

showed that the difference in effect on the percentage of time soaking living callus

on the selection process in vitro. Soaking time optimal treatment for the induction

of mutations in EMS 0.3% for 1 hour.

Keywords: Tritticum Aestivum L., callus induction, induction of mutations, EMS, in vitro

selection.

PENDAHULUAN

Tanaman Gandum (Triticum aestivum L.) adalah salah satu jenis tanaman

pangan penting di dunia. Menurut Wittenberg (2004) gandum memiliki peranan

sebagai pendukung ketahanan pangan dunia karena secara global tanaman ini

merupakan komoditas serealia yang paling banyak diusahakan di dunia dan

dikonsumsi sekitar 36% dari total penduduk dunia. Satu produk olahan gandum

adalah terigu. Konsumsi terigu masyarakat Indonesia meningkat 4-6% per tahun,

padahal kebutuhan gandum dalam negeri hampir seluruhnya diperoleh dari impor,

sehingga Indonesia merupakan negara pengimpor gandum terbesar ke 5 dunia

dengan total impor 4,86 juta ton/tahun dan akan terus meningkat dengan laju 2%

per tahun (Reynolds, 2002). Tahun 2020 impor gandum diprediksi akan mencapai

8,5 juta ton yang tentu saja memerlukan devisa yang sangat tinggi dan

ketergantungan terhadap negara Amerika Serikat sebagai negara pengekspor

(Apitindo, 2010). Oleh karena itu, pemerintah mencanangkan program

pengembangan gandum di Indonesia. Salah satu kendala pengembangan tanaman

gandum di Indonesia adalah terbatasnya varietas yang beradaptasi terhadap

lingkungan tropis (Danakusuma, 1985).

Gandum merupakan tanaman subtropis. Di negara asalnya, gandum

dibudidayakan di daerah dengan suhu di bawah 10oC dengan produktivitas 9 t/ha.

Di Indonesia, gandum lebih sesuai dibudidayakan di dataran tinggi (>900 m dpl),

produktivitas rendah (Dahlan et al, 2003). Oleh karena itu, perakitan kultivar

gandum yang adaptif untuk daerah tropis menjadi sangat penting untuk

menunjang program pengembangan gandum di Indonesia.

Penyediaan keragaman genetik dapat dilakukan dengan memanfaatkan

teknik kultur jaringan (kultur in vitro), yaitu dengan menginduksi keragaman yang

berasal dari sel-sel somatik (keragaman somakloal). Metode kultur jaringan yang

dapat digunakan untuk menghasilkan keragaman somaklonal adalah dengan

menggunakan zat pengatur tumbuh dengan aktivitas yang tinggi, atau dengan

menginduksi terjadinya mutasi. Induksi mutasi merupakan metode yang terbukti

dapat menghasilkan varietas-varietas baru pada berbagai tanaman. Induksi mutasi

dapat dilakukan pada tanaman dengan perlakuan bahan mutagen tertentu terhadap

organ reproduksi tanaman seperti biji, setek batang, serbuk sari, akar rizoma, dan

kalus (Soejono, 2003). Salah satu mutagen yang paling potensial, paling efektif

dan banyak digunakan serta digunakan pada berbagai jenis organisme mulai dari

virus sampai mamalia (Sega, 1984) adalah mutagen kimia yaitu Ethyl Methane

Sulfonate (EMS) karena mudah diperoleh, murah dan tidak bersifat mutagenik

setelah terhidrolisis (Natarajan, 2005). Mutagen kimia dapat diintroduksi ke

dalam jaringan tanaman dan bahkan sel sehingga dapat menyebabkan jumlah

mutasi yang tinggi dibandingkan dengan cara lain tetapi tergantung dari

konsentrasi bahan kimia, waktu perlakuan, suhu, pH larutan mutagenik dan kadar

air bahan eksplan (Nasir, 2002).

Secara umum, proses mutasi dapat menimbulkan perubahan sifat genetik

tanaman baik ke arah positif maupun negatif, dan memungkinkan mutasi yang

terjadi dapat kembali normal (recovery). Mutasi yang mengarah ke sifat positif

dan diwariskan ke generasi berikutnya adalah yang dikehendaki oleh pemulia

tanaman pada umumnya (Soejono, 2003). Untuk mengarahkan perubahan sifat

yang terjadi karena induksi mutasi, dapat dikombinasikan dengan seleksi in vitro

menggunakan agen seleksi atau metode tertentu agar perubahan sifat mengarah

pada karakter yang diingankan.

Tujuan

Kegiatan magang ini bertujuan untuk memperoleh informasi lanjut

mengenai pengaruh mutagen EMS terhadap respon pertumbuhan kalus gandum

setelah perlakuan, khususnya informasi mengenai pengaruh perbedaan waktu

perendaman kalus dalam konsentrasi EMS 0,3%. Informasi dari kegiatan ini

diharapkan akan berguna untuk penelitian selanjutnya untuk mendapatkan

keragaman genetik yang lebih luas dan untuk seleksi tanaman gandum yang lebih

unggul pada generasi berikutnya.

BAHAN DAN METODE

Waktu dan Tempat

Kegiatan magang dilaksanakan pada tanggal 14 Mei 2012 sampai dengan

3 Agustus 2012 yang bertempat di Laboratorium Kultur Jaringan BB-Biogen,

Kampus Penelitian Pertanian Cimanggu, Kota Bogor.

Alat dan Bahan

Bahan yang digunakan adalah eksplan dari embrio muda gandum varietas

Dewata dan Selayar, Media dasar MS (Murashige and Skoog) dengan

penambahan 2,4D 3 mg/L, deterjen, benlate, alkohol, larutan clorox, serta larutan

HgCl2.

Sedangkan alat yang digunakan adalah botol kultur, cawan petri, Laminar

Air Flow Cabinet, pH meter, magnetic stirer, otoklaf, inkubator, pinset, skalpel,

kertas saring steril, dan kamera digital.

Metode Magang

Berikut merupakan proses perbaikan genetik gandum melalui induksi

mutasi dan seleksi in vitro :

Induksi Kalus Embriogenik

(MS + 2,4-D 3 mg/L) selama 4 minggu

Induksi Mutasi

(EMS 0,3 % 1 dan 2 jam tiap varietas)

Inkubasi

(MS + 2,4D 3 mg/L) selama 1 minggu

Seleksi In Vitro

(Inkubator 29o C) selama 4 minggu

Regenerasi

Aklimatisasi

Persiapan Media

Media induksi kalus yang digunakan adalah media dasar MS dengan

sukrosa 30 g/L dan diberi zat pengatur tumbuh 2,4-D 3 mg/L dalam media padat

(Phytagel 3 g/L), dengan pH medium sebelum ditambah Phytagel 5,7-5,8. Media

disterilkan dalam otoklaf selama 15 menit dengan tekanan 1 atm pada suhu

121oC.

Persiapan dan Sterilisasi Eksplan Gandum

Bahan tanaman yang digunakan adalah embrio belum masak yang diisolasi

dari biji gandum berumur 3 minggu setelah anthesis. Sebelum disterilkan biji

gandum dikupas terlebih dahulu sampai bersih (tidak ada kulit ari). Biji gandum

yang telah dipisahkan dari malainya dicuci bersih menggunakan deterjen

kemudian direndam dalam larutan Benlate 3g/l dan diletakkan pada alat shaker

selama 1 jam.

Setelah itu proses sterilisasi harus dilakukan di dalam laminar. Yang

pertama dilakukan adalah membuang larutan fungisida, kemudian rendam eksplan

dengan menggunakan alkohol 70% selama 10 menit sambil terus dikocok.

Kemudian buang alkohol dan bilas sekali dengan menggunakan aquadest steril.

Setelah itu eksplan direndam dalam larutan HgCl 0,2% Eksplan direndam

kembali dengan menggunakan larutan clorox 30% selama 10 menit sambil

dikocok dan setelah itu langsung dibilas sekali dengan menggunakan aquadest

steril. Setelah itu eksplan direndam dengan menggunakan larutan clorox 20%

selama 10 menit lalu dilakukan pembilasan akhir dengan menggunakan aquadest

antara tiga sampai lima kali agar eksplan benar-benar bersih. Kemudian eksplan

diberi betadine 5 10 tetes selama 5 menit lalu larutan betadine dibuang dan gandum siap dikultur.

Induksi Kalus Embriogenik

Setelah melakukan tahapan-tahapan sterilisasi eksplan, kemudian segera

dilakukan pengkulturan eksplan. Eksplan untuk induksi kalus berupa embrio

gandum yang steril. Setiap botol kultur diisi sekitar 25 ml media dengan 10 buah

embrio per botol per varietas. Botol yang telah diisi embrio selanjutnya diletakkan

di atas rak kultur dalam ruang kultur dalam kondisi gelap agar pembentukan kalus

lebih optimal selama 1 bulan. Pengamatan dilakukan terhadap persentase kalus

dan persentase kontaminasi yang dihasilkan. Persentase pembentukan kalus,

dihitung dengan rumus : jumlah eksplan yang membentuk kalus/total jumlah

eksplan x 100% sedangkan persentase kontaminasi dihitung dengan rumus jumlah

eksplan yang terkontaminasi/total jumlah eksplan x 100%.

Induksi Mutasi

Kalus steril hasil induksi selanjutnya dimutasi untuk peningkatan

keragaman. Mutagen yang digunakan adalah mutagen kimia yaitu Ethyl Methane

Sulfonate (EMS) dengan dosis 0,3% dan waktu perendaman masing masing 1 dan 2 jam untuk tiap varietas. Setelah itu kalus yang telah dimutasi diinkubasi

kembali pada media MS dengan penambahan 2,4-D 3mg/L selama 1 minggu.

Pengamatan dilakukan terhadap persentase kalus yang bertahan hidup (toleran)

dan mati (peka) setelah dimutasi dengan indikator perubahan warna kalus yang

terjadi (coklat, coklat kehitaman). Persentase kalus toleran dihitung dengan rumus

jumlah kalus yang bertahan hidup/total jumlah kalus x 100% sedangkan

persentase kalus yang peka dihitung dengan rumus : jumlah kalus yang mati/total

jumlah eksplan x 100%.

Seleksi In Vitro

Setelah penyimpanan selama 1 minggu dalam ruang kultur, kalus yang

masih bertahan hidup setelah dimutasi selajutnya dipindahakan ke dalam

inkubator dengan suhu 29oC untuk proses seleksi in vitro. Peubah yang diamati

adalah persentase kalus yang bertahan hidup (toleran) selama periode seleksi

melalui visual kalus (perubahan warna kalus).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Induksi Kalus Embriogenik

Proses perbaikan keragaman genetik gandum melalui induksi mutasi dan

seleksi in vitro diawali dengan melakukan induksi kalus embriogenik

menggunakan embrio biji gandum yang belum masak 3 minggu setelah anthesis

dengan tujuan agar proses penginduksian kalus jadi lebih mudah dan cepat.

Varietas gandum yang digunakan adalah Dewata dan Selayar yang didatangkan

dari kebun percobaan Pacet (1000 m dpl) dengan umur tanaman (umur biji)

berkisar antara 74 96 HST. Setelah disterilisasi biji gandum diletakkan pada kertas saring lalu diisolasi embrionya dengan cara mengeluarkan embrio dari biji

dengan ujung pinset.

Gambar 1. Ilustrasi Pemotongan Daun dan Internode Planlet

Hingga minggu ke-12 telah dilakukan induksi kalus gandum sebanyak 4

kali pada media MS dengan penambahan zat pengatur tumbuh 2,4-D 3 mg/L. Rata

rata persentase kalus yang berhasil diinduksi dari gandum varietas Dewata yakni sebesar 47,91% dan pada gandum varietas Selayar sebesar 47,07%. Hasil

pengamatan menunjukkan bahwa perbedaan umur biji gandum yang digunakan

untuk induksi kalus embriogenik mempengaruhi kemampuan embrio untuk

membentuk kalus. Semakin muda umur biji gandum maka kemampuan untuk

membentuk kalus semakin rendah. Seperti yang ditunjukkan pada tabel 1,

persentase kalus terendah didapati pada induksi kalus embriogenik I (umur 74

HST) dengan nilai 16,72% untuk varietas dewata dan 19,35% untuk varietas

Selayar, sedangkan umur gandum yang baik untuk digunakan sebagai eksplan

ditunjukkan pada induksi kalus III (umur 96 HST) dimana persentase kalus

mencapai 79,81% untuk gandum varietas Dewata dan 73,81% untuk varietas

Selayar.

Tabel 1. Persentase kalus yang berhasil diinduksi dan tingkat kontaminasi

Induksi

Kalus

Embriogenik

Persentase Kalus (%) Persentase Kontaminasi (%)

Dewata Selayar Dewata Selayar

I 16.72

(50/317) 19.35

(84/434) 83.28

(264/317) 80.64

(350/434)

II 21.09

(101/479) 18.23

(72/395) 78.91

(378/479) 81.77

(323/395)

III 79.51

(772/971) 73.81

(417/565) 20.49

(199/971) 26.19

(148/565)

IV 74.33

(391/526) 76.89

(326/424) 25.67

(135/526) 23.11

(98/424)

Rata - rata 47.91 47.07 52.09 52.93

Keterangan : I (umur gandum 74 HST), II (umur gandum 79 HST), III (umur

gandum 96 HST), IV (umur gandum 79 HST).

Jumlah persentase kalus yang berhasil diinduksi tidak hanya dipengaruhi

oleh adanya perbedaan umur gandum yang digunakan tetapi juga karena

disebabkan oleh tingkat kontaminasi yang cukup tinggi oleh bakteri dan jamur.

Rata rata persentase kontaminasi pada kalus gandum varietas Dewata sebesar 52,09% dan pada gandum varietas Selayar sebesar 52,93%. Kontaminasi

disebabkan oleh jamur dan bakteri. Kontaminasi oleh jamur terlihat jelas pada

media, media dan eksplan diselimuti oleh hifa berbentuk kapas berwarna putih

serta pada bagian tertentu sporangium dan sporangiofora tampak berupa titik

seperti jarum pentul. Sedangkan kontaminasi oleh bakteri, pada eksplan terlihat

lendir berwarna kuning sebagian lagi melekat pada media membentuk

gumpalan yang basah.

Gambar 2. Kontaminasi : (a) bakteri dan (b) jamur.

Induksi Mutasi dan Seleksi In Vitro

Pemberian perlakuan induksi mutasi dengan ethyl methane sulfonate

(EMS) yang telah dilakukan adalah dengan merendam kalus kalus gandum pada larutan EMS konsentrasi 0,3 % selama 1 dan 2 jam untuk tiap varietas dan

kemudian diinkubasi kembali pada media awal (MS+2,4D 3 mg/L) selama 1

minggu. Gambar 3 menunjukkan bahwa pada periode waktu 1 minggu setelah

induksi mutasi, tidak nampak adanya perubahan pada warna kalus (menjadi coklat

kehitaman) yang merupakan indikasi dari kalus yang mati karena efek toksin dari

EMS. Rata rata persentase kalus yang bertahan hidup dalam periode 1 minggu

(a) (b)

setelah mutasi yakni 100% baik pada perlakuan perendaman selama 1 jam

maupun 2 jam untuk masing - masing varietas.

Tabel 2. Pengaruh EMS terhadap kalus gandum (umur 1 minggu)

EMS 0,3 % Persenatase kalus hidup (%)

Dewata Selayar

1 jam 100 (44/44) 100 (40/40)

2 jam 100 (44/44) 100 (40/40)

Gambar 3. Pengaruh EMS terhadap kalus gandum (umur 1 minggu)

**Keterangan :

(a) Dewata, EMS 0,3% 1 jam

(b) Dewata, EMS 0,3% 2 jam

(c) Selayar, EMS 0,3% 1 jam

(d) Dewata, EMS 0,3% 2 jam

(a) (b)

(c) (d)

Untuk mengarahkan perubahan sifat yang terjadi karena induksi mutasi,

selanjutnya dilakukan seleksi in vitro terhadap kalus agar perubahan sifat

mengarah pada karakter yang diingankan yaitu mendapatkan kultivar gandum

yang adaptif untuk daerah tropis. Metode yang digunakan yakni peningkatan suhu

ruang inkubasi dengan menempatkan kalus yang telah dimutasi dalam inkubator

dengan suhu 29o C selama 4 minggu. Kalus yang bertahan hidup selama periode

seleksi diasumsikan sebagai kalus adaptif suhu tinggi.

Hasil pengamatan menunjukkan bahwa waktu perendaman kalus

menggunakan larutan EMS berpengaruh terhadap daya tumbuh kalus pada

periode seleksi in vitro. Semakin lama waktu perendaman yang diberikan,

semakin meningkat persentasi kalus yang mati pada periode seleksi. Eksplan yang

mati memperlihatkan perubahan warna beberapa minggu setelah perlakuan.

Perubahan awal terjadi pada permukaan luar kalus yang awalnya berwarna putih

namun kemudian berubah secara bertahap menjadi cioklat kemudian cokelat

kehitaman. Kalus yang hidup adalah kalus yang tetap berwarna putih kekuningan

setelah perlakuan EMS (Gambar 4).

Gambar 4. Hasil pengamatan seleksi In Vitro pada kalus gandum Dewata

(umur 3 minggu)

**Keterangan :

(a) Dewata, EMS 0,3% 1 jam

(a) (b)

(c) (d)

(b) Dewata, EMS 0,3% 2 jam

(c) Selayar, EMS 0,3% 1 jam

(d) Selayar, EMS 0,3% 2 jam

Tabel 3. Hasil pengamatan seleksi In Vitro pada kalus gandum Dewata

(umur 3 MSP)

EMS 0,3%

Warna Kalus

Putih Kekuningan

(%)

Putih Kecoklatan

(%)

Hitam

(%)

1 Jam 68.18 (30/44) 31.81 (14/44) 0 (0/44)

2 Jam 47.72 (21/44) 52.27 (23/44) 0 (0/44)

Tabel 4. Hasil pengamatan seleksi In Vitro pada kalus gandum Selayar

(umur 3 MSP)

EMS 0,3%

Warna Kalus

Putih Kekuningan

(%)

Putih Kecoklatan

(%)

Hitam

(%)

1 Jam 57.5 (23/40) 42.5 (17/40)

0 (0/40)

2 Jam 37.5 (15/40) 62.5 (25/40)

0 (0/40)

Hasil pengamatan seleksi in vitro selama 3 minggu dapat dilihat pada tabel

3 dan 4. Perubahan warna kalus (putih kecoklatan) terjadi pada setiap varietas

gandum. Warna kecoklatan merupakan indikasi bahwa kalus menuju nekrosis

karena tidak dapat bertahan dari cekaman suhu diberikan. Persentase kalus dengan

perlakuan perendaman EMS 0,3% selama 2 jam menunjukkan perubahan warna

(putih kecoklatan) yang paling tinggi pada kedua varietas sedangkan persentase

kalus yang paling rendah mengalami perubahan warna (putih kecoklatan) setelah

inkubasi ditunjukkan pada perlakuan perendaman EMS 0,3% selama 1 jam. Hal

ini menunjukkan bahwa perbedaan waktu perendaman berpengaruh terhadap

ketahanan kalus pada proses seleksi in vitro. Semakin lama waktu perendaman

dilakukan maka akan semakin rendah persentase kalus yang dapat bertahan hidup

pada proses seleksi. Perlakuan waktu perendaman yang optimal untuk induksi

mutasi yaitu pada EMS 0,3% selama 1 jam.

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengujian pengaruh perlakuan Ethyl methane sulfonate

0,3% diketahui bahwa perbedaan waktu perendaman berpengaruh terhadap

ketahanan kalus pada proses seleksi in vitro. Semakin lama waktu perendaman

dilakukan maka akan semakin rendah persentase kalus yang dapat bertahan hidup

pada proses seleksi. Perlakuan waktu perendaman yang optimal untuk induksi

mutasi yaitu pada EMS 0,3% selama 1 jam.

DAFTAR PUSTAKA

Aptindo. 2010. http://bataviase.co.id/node/436332. [Juli 2012].

Dahlan M, Rudijanto, J. Murdianto dan M. Yusuf. 2003. Usulan Pelepasan

Varietas Gandum. Balai Penelitian Tanaman Serealitan dan pengembangan

Pertanian. Badan Penelitian dan pengembangan Pertanian.

Danakusuma T. 1985. Hasil penelitian Gandum dan prospek pengembangannya.

Di dalam: Subandi et al. (Eds). Risalah Rapat Teknis Hasil Penelitian

Jagung. Sorgum dan Gandum Puslitbangtan, Bogor. hlm 189-202

Nasir M. 2002. Bioteknologi Molekuler. Teknik rekayasa genetik tanaman. PT

Citra Aditya Bakti. Bandung. Hlm 59-78.

Natarajan AT. 2005. Chemical mutagenesis from plants to human. Curr. Sci.

89:312-317.

Reynolds MP. 2002. Physiological approaches to wheat breeding. Di dalam :

Curtis, B.C., Rajaram, S. dan Macpherson, H.G. (Eds): Bread Wheat

Improvement and Production. Roma: FAO. hlm 567.

Soedjono S. 2003. Aplikasi mutasi induksi dan variasi somaklonal dalam

pemuliaan tanaman. Jurnal Litbang Pertanian 22(2):70-78.

Sega GA. 1984. A review of the genetic effects of ethylmethanesolfonate. Mutat

Res 134(2-3):113-142.

Witternberg H. 2004. The Inheritance and Molecular Mapping of Genes for Post-

anthesis Drought Tolerance (PADT) in Wheat [Dissertation]. Martin

Luther Universitat.