48
PENGAMATAN MIKROSKOPIS DAN SKRINING FITOKIMIA KULIT BATANG PULE (Alstonia scholaris (L.) R. Br.) MAKALAH PRAKTIKUM Disusun oleh : Novi Kiswanto (098114001) Kusniar Sri Rahmini (098114002) Wanda Indriani Wibowo (098114003) Hayu Ajeng Raras (098114004) Amelia Felicia C. P. (098114005) Kenny Ryan Limanto (098114006) Rachelia Octavia (098114007) Bernadetta Arum Wijayanti (098114008) LABORATORIUM FARMAKOGNOSI FITOKIMIA FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2010 UPLOADED : Kenny

Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

Embed Size (px)

DESCRIPTION

Makalah Praktikum Farmakognosi Fitokimia, Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)... Any comment, contact me on facebook..!!!

Citation preview

Page 1: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

PENGAMATAN MIKROSKOPIS DAN SKRINING FITOKIMIAKULIT BATANG PULE (Alstonia scholaris (L.) R. Br.)

MAKALAH PRAKTIKUM

Disusun oleh :

Novi Kiswanto (098114001)Kusniar Sri Rahmini (098114002)Wanda Indriani Wibowo (098114003)Hayu Ajeng Raras (098114004)Amelia Felicia C. P. (098114005)Kenny Ryan Limanto (098114006)Rachelia Octavia (098114007)Bernadetta Arum Wijayanti (098114008)

LABORATORIUM FARMAKOGNOSI FITOKIMIAFAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMAYOGYAKARTA

2010

UPLOADED : Kenny

Page 2: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

ii

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis ucapkan kepada Tuhan yang Maha Kuasa atas kasih dan

anugerahNya sehingga penulis dapat menyelesaikan percobaan dan penulisan makalah ini

yang dibuat untuk memenuhi salah satu prasyarat telah menempuh matakuliah Praktikum

Farmakognosi Fitokimia I di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Dengan segenap ketulusan hati, penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-

besarnya kepada bapak Yohanes Dwiatmaka S.Si., M.Si. sebagai Dosen Pengampu

Praktikum Farmakognosi Fitokimia atas waktu dan bimbingan kepada penulis dengan penuh

kesabaran selama percobaan ini. Penulis tak lupa juga mengucapkan terima kasih yang

sebesar-besarnya kepada :

1. Bapak Laboran Laboratorium Farmakognosi Fitokimia atas segala fasilitas yang

diberikan hingga percobaan ini dapat terselesaikan.

2. Asisten praktikum Farmakognosi Fitokimia I yang telah memberikan bimbingan kepada

penulis sehingga percobaan ini dapat selesai dengan baik dan lancar.

3. Kepada teman-teman tercinta Farmasi 2009-A dan semua pihak yang selalu setia

memberikan bantuan, dukungan dan semangat yang luar biasa kepada penulis.

Semoga makalah ini dapat menjadi sumbangan yang berarti bagi ilmu pengetahuan.

Akhir kata penulis memohon maaf atas segala keterbatasan dan kekurangan penulis dalam

penulisan makalah ini.

Yogyakarta, 10 Desember 2010

Penulis,

(Kelompok A-1)

Page 3: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

iii

ABSTRAK

Telah dilakukan pengamatan mikroskopis dan skrining fitokimia terhadap simplisia

kulit batang pule (Alstonia scholaris (L.) R. Br.). Skrining fitokimia dilakukan dengan cara

uji kimiawi, secara Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan dilakukan pengamatan dari sampel

uji di bawah mikroskop. Pengujian sampel secara uji kimiawi dilakukan dengan mengekstrak

kandungan sampel dengan pelarut yang sesuai, yang kemudian direaksikan dengan reagen

sehingga memberikan hasil yang menyatakan isi kandungan dari sampel uji. Pengujian

sampel secara Kromatografi Lapis Tipis (KLT) yang dimaksudkan untuk mendeteksi adanya

antrakinon, saponin, tanin, dan alkaloid. Dari pengujian yang telah dilakukan, terlihat sampel

pada masing-masing perlakuan memberikan harga Rf yang khas atau karakteristik. Dari hasil

skrining fitokimia yang telah dilakukan, simplisia kulit batang pule (Alstonia scholaris (L.)

R. Br.) hanya mengandung alkaloid saja. Sedangkan pada pengujian mikroskopis, fragmen

yang didapat dari sampel, kemudian dibandingkan dengan literatur/ MMI. Dari hasil

pengamatan, sampel yang diuji memang merupakan serbuk simplisia kulit batang pule yang

ditandai dengan adanya fragmen berupa sel gelas yang membatu, serabut, sel gabus

tangensial, jaringan gabus dengan sel gabus yang membatu, sel batu, dan hablur kalsium

oksalat.

Page 4: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

iv

DAFTAR ISI

JUDUL ...................................................................................................................... i

KATA PENGANTAR............................................................................................... ii

ABSTRAK ................................................................................................................ iii

DAFTAR ISI ............................................................................................................. iv

BAB I PENDAHULUAN .................................................................................. 1

1.1. Latar Belakang................................................................................... 1

1.2. Perumusan Masalah........................................................................... 1

1.3. Tujuan................................................................................................ 2

1.4. Manfaat.............................................................................................. 2

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................ 3

2.1. Uraian Tumbuhan.............................................................................. 3

2.1.1.Sinonim .................................................................................... 3

2.1.2.Nama Daerah ............................................................................ 3

2.1.3.Sistematika Tumbuhan ............................................................. 3

2.1.4.Kandungan................................................................................ 4

2.2. Metode Ekstraksi ............................................................................... 4

2.3. Skrining Fitokimia............................................................................. 6

2.4. Kromatografi ..................................................................................... 6

BAB III METODOLOGI PENELITIAN........................................................... 8

3.1. Alat-Alat yang Digunakan................................................................. 8

3.2. Bahan-Bahan yang Digunakan .......................................................... 8

3.3. Pengambilan Sampel dan Pengolahan Sampel.................................. 9

3.3.1.Pengambilan Sampel ................................................................ 9

3.3.2.Pengolahan Sampel .................................................................. 9

3.4. Skrining Fitokimia............................................................................. 9

3.4.1.Pengamatan Mikroskopis ......................................................... 9

Page 5: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

v

3.4.2.Secara Kimiawi ........................................................................ 10

3.4.3.Secara Kromatografi Lapis Tipis (KLT) .................................. 13

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN........................................................ 17

4.1. Hasil Pengamatan .............................................................................. 17

4.1.1.Pengamatan Mikroskopis ......................................................... 17

4.1.2.Uji Secara Kimiawi .................................................................. 18

4.1.3.Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT)........................................ 21

4.2. Pembahasan ....................................................................................... 25

4.2.1. Identifikasi Secara Mikroskopis ............................................... 25

4.2.2.Uji Kualitatif Secara Kimiawi .................................................. 26

4.2.3.Uji Kualitatif Secara KLT ........................................................ 34

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.............................................................. 42

5.1. Kesimpulan........................................................................................ 42

5.2. Saran .................................................................................................. 42

DARTAR PUSTAKA ............................................................................................... 43

LAMPIRAN/ BLANKO ........................................................................................... 44

Page 6: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Tumbuhan merupakan sumber berbagai jenis senyawa-senyawa kimia yang memiliki

khasiat sebagai obat. Pemanfaatan tumbuhan sebagai obat merupakan warisan nenek moyang

sejak dahulu kala dan telah banyak digunakan dalam kurun waktu yang cukup lama hampir

seluruh negara di dunia (Djauhariya dan Hernani, 2004).

Pengembangan produksi tanaman obat semakin pesat, dipengaruhi oleh kesadaran

masyarakat yang meningkat tentang manfaat tanaman obat. Masyarakat semakin sadar akan

pentingnya kembali ke alam (back to nature) dengan memanfaatkan obat–obat alami. Hal ini

terbukti dari penggunaan tumbuhan obat untuk memelihara kesehatan dan pengobatan

penyakit kronis yang tidak dapat disembuhkan dengan obat kimiawi atau memerlukan

kombinasi pengobatan antara obat kimiawi dengan obat dari tumbuhan berkhasiat. Hal lain

yang mendorong masyarakat memilih tanaman obat adalah resiko efek sampingnya jauh lebih

aman dibandingkan obat-obat kimia (Dalimartha, 1999; Djauhariya dan Hernani, 2004).

Salah satu tumbuhan yang dimanfaatkan sebagai obat oleh masyarakat Indonesia

adalah tumbuhan pule (Alstonia scholaris (L.) R. Br.). Kulit batang pule bermanfaat sebagai

obat demam, menguatkan lambung, memperlancar kencing, dan obat kencing manis (Sutomo

dan Putri, 2005).

Berdasarkan uraian di atas, maka praktikan melakukan pemeriksaan skrining fitokimia

terhadap serbuk simplisia kulit batang pule untuk mengetahui kandungan kimia yang terdapat

dalam simplisia tersebut.

1.2. Perumusan Masalah

Adapun yang menjadi permasalahan dalam praktikum ini adalah :

a. Dari pengamatan mikroskopis, apakah simplisia yang diujikan merupakan kulit

batang pule ?

Page 7: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

2

b. Dari skrining fitokimia yang dilakukan, golongan senyawa kimia apa saja yang

terdapat dalam kulit batang pule ?

1.3. Tujuan

Tujuan dari praktikum ini adalah :

a. Dari pengamatan mikroskopis, dapat diketahui kebenaran dari simplisia yang diuji

(kulit batang pule).

b. Untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terdapat dalam kulit batang pule.

1.4. Manfaat

Manfaat dari praktikum ini adalah :

a. Sebagai bahan informasi tentang fragmen mikroskopis khas yang terdapat dalam

kulit batang pule.

b. Sebagai bahan informasi tentang golongan senyawa kimia yang terdapat dalam kulit

batang pule.

Page 8: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

3

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Uraian Tumbuhan

Pohon pule (Alstonia scholaris (L.) R. Br.) merupakan pohon yang dapat

tumbuh hingga pada ketinggian 1000 m di atas permukaan laut dan dapat

mencapai tinggi 25 m. Daun berbentuk bulat telur, tipis dan licin. Bunga berupa

malai rata yang muncul pada ujung cabang atau ketiak daun. Buah pule panjang

20 cm dengan biji yang berjambul. Kulit batang pule bermanfaat sebagai obat

demam, menguatkan lambung, memperlancar kencing, dan obat kencing manis

(Sutomo dan Putri, 2005).

2.1.1.Sinonim

Alstonia scholaris (L.) R. Br. memiliki sinonim Echites scholaris L., Echites

pala Ham. Dan Tabernaemontana alternifolia Burm. (Sutomo dan Putri, 2005).

2.1.2.Nama Daerah

Pule (Alstonia scholaris) dikenal dengan banyak sebutan, seperti pule di

Jawa, lame di Sunda, rite di Ambon. Sedangkan secara umum, Alstonia scholaris

(L.) R. Br. di Indonesia dikenal dengan nama pulai (Sutomo dan Putri, 2005).

2.1.3.Sistematika Tumbuhan

Kingdom : PlantaeDivisi : Spermatophyta

Sub divisi : AngiospermaeKelas : Dicotyledoneae

Bangsa : GentianalesSuku : Apocynaceae

Marga : AlstoniaSpesies : Alstonia scholaris (Anonim, 2010).

Page 9: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

4

2.1.4.Kandungan

Kulit batang pule mengandung alkaloida, ekitamina, ekitenina, alsonina,

akiserina, ekitina, ekiretina, ditamina, ekitamidina, ekiteina (Anonim, 1989).

2.2. Metode Ekstraksi

Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut

sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Simplisia

yang diekstrak mengandung senyawa aktif yang dapat larut dan senyawa yang

tidak dapat larut seperti serat, karbohidrat, protein dll. Senyawa aktif yang

terdapat dalam berbagai simplisia dapat digolongkan ke dalam minyak atsiri,

alkaloida, flavonoida dll (Anonim, 2000).

A. Cara Dingin

1. Maserasi

Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan

pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada

temperatur ruangan (kamar). Maserasi kinetik berarti dilakukan

pengadukan yang kontinu (terus-menerus). Remaserasi berarti dilakukan

pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat

pertama dan seterusnya (Anonim, 2000).

2. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai

sempurna yang umum dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri

dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap

perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak), terus-menerus

sampai diperoleh perkolat yang jumlahnya 1-5 kali bahan (Anonim,

2000).

Page 10: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

5

B. Cara Panas

1. Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,

selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan

dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan

proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk

proses ekstraksi sempurna (Anonim, 2000).

2. Sokletasi

Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang

umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi

kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin

balik (Anonim, 2000).

3. Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan adanya pengadukan kontinu

pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu

secara umum dilakukan pada temperatur 40-50oC (Anonim, 2000).

4. Infus

Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air

(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur

96-98oC) selama waktu tertentu (15-20 menit) (Anonim, 2000).

5. Dekok

Dekok adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90oC selama

30 menit (Anonim, 2000).

Page 11: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

6

2.3. Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia meliputi analisis kualitatif kandungan dalam tumbuhan

atau bagian tumbuhan (akar, batang, daun, bunga, buah, biji), terutama kandungan

metabolit sekunder yaitu alkaloida, antrakinon, flavonoid, glikosida jantung,

kumarin, saponin (steroid dan triterpenoid), tanin (polifenolat), minyak atsiri

(terpenoid), dsb. Tujuan utama skrining fitokimia ialah untuk mensurvei

tumbuhan untuk mendapatkan kandungan kimia yang berguna untuk pengobatan.

Metode yang dipakai untuk melakukan skrining fitokimia harus memenuhi

beberapa persyaratan : sederhana, cepat, dapat dilakukan dengan peralatan

minimal, selektif terhadap golongan senyawa yang diteliti, bersifat semikuantitatif

(Harborne, 1987).

Pada identifikasi suatu kandungan tumbuhan, setelah kandungan itu

diisolasi dan dimurnikan, pertama-tama harus kita tentukan dahulu kandungannya,

kemudian barulah ditentukan jenis senyawa dalam golongan tersebut. Identifikasi

lengkap dalam golongan senyawa dan pada pengukuran sifat/ ciri lain yang

kemudian dibandingkan dengan data dalam pustaka (Harborne, 1987).

2.4. Kromatografi

Pemisahan dan pemurnian kandungan tumbuhan terutama dilakukan dengan

menggunakan salah satu dari 4 teknik kromatografi atau gabungan teknik tersebut.

Keempat teknik tersebut adalah Kromatografi Kertas (KKt), Kromatografi Lapis

Tipis (KLT), Kromatografi Gas Cair (KGC), dan Kromatografi Cair Kinerja

Tinggi (KCKT). Pemilihan teknik kromatografi sebagian besar tergantung pada

sifat kelarutan dan keatsirian senyawa yang akan dipisah (Harborne, 1987).

Kromatografi Lapis Tipis digunakan pada pemisahan zat secara cepat

dengan menggunakan zat penyerap berupa serbuk halus yang dilapiskan serba rata

pada lempeng kaca. Lempeng yang dilapisi dapat dianggap sebagai "kolom

kromatografi terbuka" dan pemisahan berdasarkan pada penyerapan, pembagian,

atau gabungannya, tergantung dari jenis zat penyerap dan cara pembuatan lapisan

Page 12: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

7

zat penyerap dan jenis pelarut. Perkiraan identifikasi diperoleh dengan

pengamatan 2 bercak dengan harga Rf dan ukuran yang lebih kurang sama.

Ukuran dan intensitas bercak dapat digunakan untuk memperkirakan kadar

(Anonim, 1995).

Kromatografi lapis tipis adalah cara pemisahan dengan absorbsi pada

lapisan tipis adsorben. Metode ini digunakan untuk memisahkan senyawa organik,

anorganik dan sintetik. Metode ini dibedakan menjadi 2 fase, fase diam dan fase

gerak.

Faktor-faktor yang mempengaruhi gerakan dalam KLT yang

memperngaruhi harga Rf antara lain :

1. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan

2. Sifat dari penyerap dan derivat aktivitasnya

3. Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap

4. Pelarut dan derajat kemurnian fase gerak

5. Derajat kejenuhan dari uap dalam bejana penguapan yang digunakan

6. Teknik percobaan

7. Jumlah cuplikan yang digunakan

8. Suhu

9. Kesetimbangan (Robinson, 1995).

Page 13: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

8

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta yang meliputi skrining fitokimia secara

kimiawi, secara mikroskopis, dan menggunakan metode kromatografi lapis tipis

pada kulit batang pule. Metodologi penelitian yang digunakan adalah metode

naturalistik. Parameter yang dilihat adalah warna dari hasil reaksi sampel dengan

reagen tertentu, bentuk fragmen yang didapat kemudian dibandingkan dengan

literatur yang diacu (MMI), dan tinggi bercak yang dihasilkan pada metode

kromatografi lapis tipis.

3.1. Alat-Alat yang Digunakan

Alat – alat yang digunakan dalam percobaan ini adalah tabung reaksi,

waterbath, pipet Pasteur, pipet tetes, corong, corong pisah, kertas saring, pipa

kapiler, gelas ukur, tabung reaksi.

3.2. Bahan-Bahan yang Digunakan

Bahan – bahan yang digunakan dalam percobaan ini adalah serbuk simplisia

kulit pule (Alstonia scholaris (L.) R. Br.), aquadest, asam klorida 1%, pereaksi

Dragendorff, pereaksi Mayer, serbuk natrium karbonat, kloroform, asam cuka 5%,

larutan hidrogen peroksida, asam asetat glasial, toluena, kalium hidroksida 0,5 N,

pereaksi besi (III) klorida, larutan natrium klorida 2%, larutan gelatin 1%, asam

3,5-dinitro benzoat, kalium hidroksida 1 N dalam methanol, eter, petroleum eter,

methanol, silika gel GF 254, etanol 75%, larutan kloroform-asam asetat (99:1),

CHCl3-HAc, larutan methanol-kloroform-asam asetat (49,5:49,5:1), CHCl3-

MeOH-HAc, larutan methanol-air (1:1), NaHCO3 1M.

Page 14: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

9

3.3. Pengambilan Sampel dan Pengolahan Sampel

3.3.1.Pengambilan Sampel

Pengambilan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu tanpa

membandingkan tumbuhan yang sama dengan daerah lain. Bahan tumbuhan yang

digunakan adalah kulit batang pule yang telah dikeringkan, dibeli di Pasar

Beringharjo, Jl. Malioboro, Kota Yogyakarta, Provinsi Daerah Istimewa

Yogyakarta.

3.3.2.Pengolahan Sampel

Kulit batang pule yang telah dikumpulkan, kemudian dibersihkan dari bahan

pengotor asingnya. Selanjutnya dikeringkan dengan cara dimasukkan ke dalam

oven selama 3 hari. Kulit batang pule dianggap kering apabila sudah rapuh

(diremas menjadi hancur), kemudian simplisia kulit batang kering diserbuk

menggunakan blender, serbuk simplisia disimpan dalam wadah plastik.

3.4. Skrining Fitokimia

Skrining Fitokimia dari serbuk simplisia meliputi pengamatan mikroskopis

dari serbuk serta pemeriksaan golongan senyawa alkaloida, flavonoida,

antrakinon, polifenol, tanin, kardenolida, saponin, minyak atsiri.

3.4.1.Pengamatan Mikroskopis

Mengambil sejumlah serbuk kulit pule dan meletakkannya di atas objek

gelas. Menambahkan beberapa tetes larutan kloralhidrat. Kemudian difiksasi di

atas nyala lampu spiritus. Tambahkan larutan kloralhidrat kembali bila perlu agar

tidak kering. Biarkan dingin, lalu tutup dengan gelas penutup. Setelah itu amati

dengan mikroskop pada perbesaran lemah (40x - 100x) dan kuat (400x).

Page 15: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

10

3.4.2.Secara Kimiawi

a. Uji Pendahuluan

Serbuk tumbuhan (berupa kulit batang pule) sebanyak 2 gram ditambah air

sebanyak 10 ml dan dipanaskan selama 30 menit di atas air mendidih. Larutan

kemudian disaring melalui kapas. Suatu larutan yang berwarna kuning sampai

merah menunjukkan adanya senyawa yang mengandung kromofor

(flavonoida, antrakinon, dsb), dengan gugus hidrofilik (gula, asam, fenolat,

dsb). Pada penambahan larutan kalium hidroksida (beberapa tetes), warna

larutan menjadi lebih sensitif.

b. Uji Alkaloida

Serbuk tumbuhan (berupa kulit batang pule) sebanyak 2 gram dipanaskan

dalam tabung reaksi besar dengan asam klorida 1% sebanyak 10 ml selama 30

menit dalam penangas air mendidih. Suspensi disaring dengan kapas ke dalam

tabung reaksi A dan tabung reaksi B sama banyak. Larutan A dibagi dua sama

banyak, lalu kedalam larutan A-1 ditambah pereaksi Dragendorff sebanyak 3

tetes dan larutan A-2 ditambah pereaksi Mayer sebanyak 3 tetes.

Terbentuknya endapan dengan kedua pereaksi tersebut menunjukkan adanya

alkaloida. Keberadaan alkaloida dari basa tertier atau kuarterner dapat

ditunjukkan dengan penambahan serbuk natrium karbonat sampai pH 8-9,

kemudian dicampur dengan kloroform sebanyak 4 ml, aduk pelan-pelan.

Setelah kloroform memisah, diambil dengan pipet Pasteur dan tambahkan

asam cuka 5% sampai pH 5, diaduk lalu dipisahkan lapisan atas.

Terbentuknya endapan menunjukkan adanya alkaloida dari basa kuarterner.

Kemudian lapisan bawah ditambah dengan asam klorida 1% sebanyak 10 tetes

diaduk, akan terbentuk 2 lapisan. Ambil lapisan atas serta tambahkan pereaksi

Dragendorff sebanyak 2 tetes, terbentuknya endapan menunjukkan alkaloida

dari basa tersier.

Page 16: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

11

c. Uji Antrakinon

Serbuk tumbuhan sejumlah 300 mg dididihkan selama 2 menit dengan

kalium hidroksida 0,5 N sebanyak 10 ml dan larutan hidrogen peroksida

sebanyak 1 ml. Setelah dingin, suspensi disaring melalui kapas. Filtrat

sebanyak 5 ml ditambah asam asetat glasial sebanyak 10 tetes sampai pH 5,

lalu ditambahkan toluena sebanyak 10 ml. Lapisan atas sebanyak 5 ml

dipisahkan dengan dipipet dan dimasukkan kedalam tabung reaksi, Kemudian

ditambah kalium hidroksida 0,5 N. Warna merah yang terjadi pada lapisan air

(basa) menunjukkan adanya senyawa antrakinon.

d. Uji Polifenol

Serbuk tumbuhan sebanyak 2 gram dipanaskan dengan air sebanyak 10

ml selama 10 menit dalam penangas air mendidih. Kemudian saring panas-

panas, setelah dingin ditambah 3 tetes pereaksi besi (III) klorida. Apabila

terjadi warna hijau-biru, maka menunjukkan adanya polifenolat. Uji diulang

dengan filtrat hasil pendidihan serbuk tumbuhan sebanyak 2 g dengan etanol

80% 9-10 ml selama 10 menit dalam penangas air.

e. Uji Tanin

Serbuk tumbuhan sebanyak 2 gram dipanaskan dengan 10 ml air selama

30 menit diatas penangas air dan disaring. Kemudian filtrat sebanyak 5 ml

hasil penyaringan tadi, ditambah larutan natrium klorida 2% sebanyak 1 ml.

Apabila terjadi suspensi atau endapan, disaring melalui kertas saring,

kemudian filtrat ditambah larutan gelatin 1% sebanyak 5 ml. Terbentuknya

endapan menunjukkan adanya tanin.

f. Uji Kardenolida

Filtrat 2 ml dari hasil pemanasan serbuk tumbuhan sebanyak 2 g dengan

air sejumlah 10 ml selama 30 menit diatas tangas air tadi, ditambah dengan

Page 17: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

12

asam 3,5-dinitro benzoate sebanyak 0,4 ml dan kalium hidroksida 1 N

sebanyak 0,6 ml dalam methanol. Terbentuknya warna biru-ungu

menunjukkan adanya kardenolida (glikosida jantung). Jika menginginkan

penegasan lebih lanjut, filtrat yang lain sebanyak 2 ml dicampur dengan

kloroform sebanyak 2 ml. Kemudian lapisan atas diambil dengan pipet dan

lapisan bawah ditambah asam 3,5-dinitro benzoat sebanyak 0,5 ml. Terjadinya

warna biru ungu menunjukkan adanya kardenolida.

g. Uji Saponin

Tambahkan air sebanyak 10 ml ke dalam tabung reaksi yang berisi serbuk

tumbuhan sebanyak 100 mg, tutup dan kocok kuat-kuat selama 30 detik.

Biarkan tabung dalam posisi tegak selama 30 menit. Apabila terbentuk buih

setinggi 3 cm dari permukaan cairan, maka menunjukkan adanya saponin. Uji

lain dilakukan dengan menggunakan pipa kapiler (diameter 1 mm, panjang

12,5 cm). Larutan hasil pemanasan serbuk tumbuhan sebanyak 2 gram dengan

air 10 ml selama 30 menit diatas tangas air, disaring, kemudian filtrat

dimasukkan ke dalam pipa kapiler penuh-penuh. Kapiler diletakkan dalam

posisi tegak/ vertikal, kemudian cairan dibiarkan mengalir bebas. Sebagai

pembanding, dikerjakan hal serupa untuk air suling. Tinggi cairan tertinggal

dibandingkan dengan tinggi air suling sebagai pembanding. Apabila tinggi

cairan yang diuji setengah atau kurang dari tinggi air suling, maka adanya

saponin akan diperhitungkan.

h. Uji Minyak Atsiri

Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambah 20 ml eter, kocok, dan disaring.

Kemudian filtrat dikeringuapkan. Bila sedikit berbau aromatik, larutkan dalam

residu dengan sedikit etanol, uapkan lagi sampai kering. Apabila terjadi bau

aromatik spesifik, maka menunjukkan adanya minyak atsiri.

Page 18: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

13

3.4.3.Secara Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Serbuk simpleks 2-3 gram

Disari dengan petroleum eter 10 ml,50 °C selama 5 menit

Sisa fraksi petroleum eter (disingkirkan)

Disari dengan kloroform-asamasetat(99:1),10 ml, 50 °C selama 5 menit

Fraksi CHCl3-HAc (larutan I)Sisa

Disari dengan metanol-kloroform-asam asetat(49,5:49,5:1), 10 ml, 50 °C selama 5 menit

Sisa fraksi CHCl3-MeOH-HAc (larutan II)

Disari dengan methanol-air (1:1),10 ml, 50 °C selama 5 menit

Sisa fraksi methanol-air (larutan III)(dibuang)

Larutan I : antrakinon, fenolat, flavonoida, kumarin, steroida

Larutan II : glikosida antrakinon, glikosida kumarin, saponin, tannin

Larutan III : kardenolida, saponin, glikosida antrakinon, glikosida flavonoida

Sistem KLT yang digunakan adalah sebagai berikut :

1. Larutan I

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : Etil asetat-benzena (9:1) atau etil asetat-toluena (9:1)

Destilat : FeCl3, garam fast blue B atau vanilin asam sulfat

Page 19: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

14

2. Larutan II

Fase diam : a. Silika gel GF 254

b. Silika gel GF 254

c. Silika gel GF 254

Fase gerak : a. n butanon-asam asetat-air (5:1:4) v/v fase atas

b. etil asetat-asam formiat-asam asetat-air (100:11:11:27) v/v

c. etil asetat-metanol-air (100:13,5:10) v/v

Reaksi : a. besi (III) klorida, alumunium klorida

b. sitroborat

c. KOH etanolis

3. Larutan III

Fase diam : a. Silika gel GF 254

c. Silika gel GF 254

d. Selulosa

Fase gerak : a. butanon-asam asetat-air (5:1:4) v/v fase atas

b. etil asetat-asam formiat-asam asetat-air (100:11:11:27) v/v

c. etil asetat-metanol-air (100:13,5:10) v/v

Reaksi : a. besi (III) klorida, alumunium klorida

b. sitroborat

c. KOH etanolis

Larutan pembanding yang digunakan :

a. Flavonoida : larutan rutin 0,05 % dalam metanol

b. Antrakinon : larutan Rhei Radix sebanyak 0,5 g dipanaskan 5 menit dalam

methanol sebanyak 5 ml, disaring, filtat diuapkan sampai 0,5

ml. Ditotolkan sebanyak 20 µL pada KLT.

c. Saponin : larutan daging buah Sapindus rarak sebanyak 2 g, direfluks

dengan etanol 75 % sebanyak 10 ml selama 10 menit.

d. Kumarin : larutan Rutae Herba sebanyak 0,5 g dipanaskan dalam

metanol sebanyak 5 ml sambil diaduk selama 30 menit,

saring, filtrat diuapkan sampai 0,5 ml. Ditotolkan 20 µL

Page 20: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

15

pada KLT. Rutae Herba berasal dari tanaman Ruta

graveolens.

e. Tanin : larutan asam tanat 0,05 % dalam etanol 70 % (10 (1)

f. Kardenolida: larutan digoksin lanatosida C 5 mg dalam 2 ml methanol

pada 60°C

g. Alkaloida : larutan alkaloida 1% dalam etanol. Ditotolkan 10 µL.

Alkaloida digunakan tergantung dari suku tumbuhan

tersebut.

Page 21: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

16

UJI KUALITATIF ALKALOIDA SECARA KLT

Serbuk simplisia 2-3 g

Disari dengan petroleum eter10 ml selama 5 menit

Sisa Fraksi petroleum eter(dibuang)

Disari dengan HCl 1 % 10 ml,50°C, selama 5 menit

SisaFraksi asam klorida (dibuang)

Diuji dengan Dragendorff, bila positifhasil +, tambahkan NaHCO3 1M sampaipH 8-9, kemudian disari dengan kloroform10 ml.

Lapisan atas Lapisan bawah

Dinetralkan dengan disari dengan HCl 1%asam asetat

Larutan I Lapisan bawah Lapisan atas (larutan II)(dibuang)

Larutan I : untuk uji alkaloida tertier

Larutan II : untuk uji alkaloida kuartener

Sistem KLT yang digunakan :

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : sikloheksana-dietilamina (9:1) v/v atau

tertier butanol-kloroform-dietil amina (2:7:1) v/v

Deteksi : pereaksi Dragendorff KLT LP

Page 22: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

17

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Pengamatan

4.1.1.Pengamatan Mikroskopis

Hasil Pengamatan Fragmen mikroskopis berdasarkan literatur

(Sumber : MMI, 1989)

Page 23: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

18

4.1.2.Uji Reaksi Kimiawi

Keterangan Uji Pengamatan Hasil

Uji Pendahuluan

Larutan kuning kemerah-merahan

Kuning kemerah-merahan (+) :terdapat senyawa yangmengandung kromofor

(flavonoida, antrakinon, dsb),dengan gugus hidrofilik (gula,

asam, fenolat, dsb).

Uji Alkaloid

Kiri : A-1 (Dragendorff),endapan, larutan merah.Kanan : A-2 (Mayer),endapan, larutan putih

keruh.

Terbentuk endapan pada keduapereaksi (+) : sampelmengandung alkaloid.

Kuartener : ada endapan

Terdapat endapan (+) : sampelmengandung alkaloid basa

kuartener.

Tersier : tidak ada endapan

Tidak terdapat endapan (-) :sampel tidak mengandung

alkaloid basa tersier.

Page 24: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

19

Uji Antrakinon

Larutan bening

Bening (-) : sampel tidakmengandung antrakinon.

Hasil (+) jika larutan berwarnamerah.

Uji Polifenol

Larutan hijau keruh

Hijau keruh (+) : sampelmengandung polifenol.

Uji Tanin

Tidak terbentuk endapan

Tidak terbentuk endapan (-) :sampel tidak mengandung

tanin.Hasil (+) jika terbentuk

endapan.

Uji Kardenolida

Larutan merah-kecoklatan

Merah-kecoklatan (-) : tidakmengandung kardenolida.

Hasil (+) jika larutan berwarnabiru-ungu.

Uji Saponin

Tidak terbentuk buih

Tidak terbentuk buih (-) :sampel tidak mengandung

saponin.Hasil (+) jika terbentuk buih.

Page 25: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

20

Tinggi larutan uji samadengan tinggi aquadest.

Tinggi uji sama dengan tinggiaquadest (-) : sampel tidak

mengandung saponin.Hasil (+) jika tinggi cairansetengah atau kurang dari

tinggi air suling

Uji Minyak Atsiri

Dalam dietil eter : berbauaromatik Bau aromatik (+) : sampel

mengandung minyak atsiri.Dalam etanol : berbauaromatik

Page 26: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

21

4.1.3.Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Standar : AntrakinonFase diam : Silika gel GF 254Fase Gerak : Etil asetat : toluena (9 : 1)Deteksi : UV 254 nm ungu

: UV 365 nm atas orange, bawah ungu

Standar Uji 1 Uji 2 Uji 3Rf = 8,2 cm10 cm = 0,82HRf = 0,82 x 100 = 82 Rf = 7,8 cm10 cm = 0,78HRf = 0,78 x 100 = 78 Rf = 8,2 cm10 cm = 0,82HRf = 0,82 x 100 = 82 Rf = 8,3 cm10 cm = 0,83HRf = 0,83 x 100 = 83Standar : SaponinFase diam : Silika gel GF 254Fase Gerak : n-butanol : asam asetat : air (5:1:4)Deteksi : UV 365 nm putih

Standar Uji 1 Uji 2 Uji 3Rf = 7 cm10 cm = 0,7HRf = 0,7 x 100 = 70 Rf = 5,3 cm10 cm = 0,53HRf = 0,53 x 100 = 53 Rf = 5 cm10 cm = 0,5HRf = 0,5 x 100 = 50 Rf = 5,1 cm10 cm = 0,51HRf = 0,51 x 100 = 51

Page 27: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

22

Standar : TaninFase diam : Silika gel GF 254Fase Gerak : etil asetat : asam formiat : asam asetat : air (100 : 11: 11: 27)Deteksi : UV 365 nm putih

Standar Uji 1 Uji 2 Uji 3Rf = 8,6 cm10 cm = 0,86HRf = 0,86 x 100 = 86 Rf = 8,5 cm10 cm = 0,85HRf = 0,85 x 100 = 85 Rf = 8,4 cm10 cm = 0,84HRf = 0,84 x 100 = 84 Rf = 8,2 cm10 cm = 0,82HRf = 0,82 x 100 = 82Standar : TaninFase diam : Silika gel GF 254Fase Gerak : etil asetat : methanol : air (100 : 13,5 :10)Deteksi : UV 254 nm ungu

Standar Uji 1 Uji 2 Uji 3Rf = 8 cm10 cm = 0,8HRf = 0,8 x 100 = 80 Rf = 8 cm10 cm = 0,8HRf = 0,8 x 100 = 80 Rf = 8 cm10 cm = 0,8HRf = 0,8 x 100 = 80 Rf = 8 cm10 cm = 0,8HRf = 0,82 x 100 = 82

Page 28: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

23

Standar : SaponinFase diam : Silika gel GF 254Fase Gerak : butanol : asam asetat : air (5 : 1: 4)Deteksi : UV 254 nm putih

Standar Uji 1 Uji 2 Uji 3Rf = 7,8 cm10 cm = 0,78HRf = 0,78 x 100 = 78 Rf = 9,1 cm10 cm = 0,91HRf = 0,91 x 100 = 91 Rf = 8,8 cm10 cm = 0,88HRf = 0,88 x 100 = 88 Rf = 8,8 cm10 cm = 0,88HRf = 0,88 x 100 = 88Standar : SaponinFase diam : Silika gel GF 254Fase Gerak : kloroform : metanol : air (64 : 50: 10)Deteksi : UV 365 nm ungu

Standar Uji 1 Uji 2 Uji 3Rf = 7,6 cm10 cm = 0,76HRf = 0,76 x 100 = 76 Rf = 6,7 cm10 cm = 0,67HRf = 0,67 x 100 = 91 Rf = 6,9 cm10 cm = 0,69HRf = 0,69 x 100 = 69 Rf = 6,7 cm10 cm = 0,67HRf = 0,67 x 100 = 67

Page 29: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

24

Standar : SaponinFase diam : SelulosaFase Gerak : t-butanol : asam asetat : air ( 4: 1 : 5)Deteksi : UV 254 nm putih

Standar Uji 1 Uji 2 Uji 3Rf = 7,8 cm10 cm = 0,78HRf = 0,78 x 100 = 78 Rf = 5,8 cm10 cm = 0,58HRf = 0,58 x 100 = 58 Rf = 5,7 cm10 cm = 0,57HRf = 0,57 x 100 = 57 Rf = 5,6 cm10 cm = 0,56HRf = 0,56 x 100 = 56Uji Alkaloid dengan KLTStandar : SkopolaminaFase Gerak : sikloheksana-dietilamina (9:1) v/vFase diam : Silika gel GF 254Deteksi : Disemprot dengan Pereaksi Dragendorff

: UV 254 nm ungu

Standar Larutan 1 Larutan 2Rf = 1,3 cm10 cm = 0,13HRf = 0,13 x 100 = 13 Rf = 0,2 cm10 cm = 0,02HRf = 0,02 x 100 = 2 Rf = 0,15 cm10 cm = 0,015HRf = 0,015 x 100 = 15

Page 30: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

25

4.2. Pembahasan

Pada percobaan kali, praktikan melakukan “Penapisan (Skrinning)

Fitokimia” yang bertujuan agar setelah melakukan praktikum, para mahasiswa

diharapkan mampu mengidentifikasi Senyawa golongan flavonoida, antrakinon,

saponin (steroid dan triterpenoid), alkaloida, serta golongan fenolik dan

polifenolik. Pada percobaan ini, digunakan simplisia berupa Alstoniae Cortex

(kulit pule) di mana simplisia ini diidentifikasi secara mikroskopis dan secara

kualitatif secara kimia dan KLT .

4.2.1.Identifikasi Secara Mikroskopis

Pada percobaan ini, juga dilakukan uji secara mikroskopik yang bertujuan

agar mahasiswa mampu mengidentifikasi simplisia Alstoniae Cortex, khususnya

yaitu menggunakan mikroskop (secara mikroskopik). Identifikasi awal yaitu

dapat dilakukan secara makroskopik dengan uji organoleptis meliputi warna, bau,

bentuk. Simplisia digunakan sudah dalam bentuk serbuk halus (dengan proses

penumbukan dan menggunakan blender), warna cokelat muda, dan tidak berbau.

Sebelum diserbukkan, bentuknya seperti potongan-potongan kayu yang mudah

dipatahkan, permukaannya kasar/ tidak rata, berwarna cokelat muda.

Sebelum diamati di bawah mikroskop, di preparat diteteskan kloralhidrat,

tujuannya untuk melisiskan klorofil pada sel dan memperjelas sehingga

memudahkan pengamatan pada mikroskop. Selain itu, juga dilakukan fiksasi

dengan melewatkan preparat yang sudah jadi di atas nyala api Bunsen. Tujuan

dari fiksasi ialah untuk melisiskan sel. Proses fiksasi ini jangan terlalu lama atau

jangan sampai gosong karena jika terlalu gosong, maka sel-sel yang akan kita

amati malah tidak akan terlihat dan sel-sel pada kulit pule malah akan rusak. Pada

percobaan yang dilakukan, digunakan simplisia Alstoniae Cortex (kulit pule)

dalam bentuk serbuk, dan didapatkan fragmen-fragmen pengenal, antara lain sel-

sel gabus yang membatu, serabut, sel gabus tangensial, jaringan gabus dengan sel

gabus membatu, sel batu, dan hablur kalsium oksalat. Sebagai pembanding,

Page 31: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

26

digunakan MMI Edisi V, pada bagian mikroskopis serbuk, tertera bahwa

Alstoniae Cortex memiliki warna kelabu kecoklatan. Fragmen pengenal adalah sel

batu tunggal dan berkelompok, jaringan gabus yang sebagian membatu, fragmen

gabus tampak tangensial, serabut, hablur kalsium oksalat, butir pati. Sehingga

dapat dikatakan bahwa hasil percobaan yang didapat sesuai dengan yang tertera

pada MMI. Tetapi, pada hasil yang didapat praktikan tidak selengkap yang ada

pada MMI karena praktikan kurang menguasai dalam penggunaan mikroskop dan

serbuk simplisia yang digunakan praktikan terlalu tebal sehingga sel-sel terlihat

menumpuk pada mikroskop.

Masing-masing simplisia memiliki ciri khas berupa fragmen pengenal yang

membedakannya dengan simplisia lain. Oleh karena itu, identifikasi secara

mikroskopik maupun makroskopik perlu dilakukan. Tujuan identifikasi simplisia

selain untuk mengenali suatu simplisia, juga mencegah agar tidak terjadi

kesalahan dalam penggunaan simplisia, khususnya dalam hal ini simplisia sebagai

bahan obat. Hal tersebut dikarenakan secara visual banyak simplisia yang mirip

namun berbeda fungsinya, sehingga kita harus berhati-hati dan sangat perlu untuk

melakukan identifikasi sebagai langkah awal.

4.2.2.Uji Kualitatif Secara Kimiawi

Pada percobaan ini, dilakukan Uji kualitatif secara kimiawi yang bertujuan

untuk mengidentifikasi adanya kandungan metabolit sekunder bioaktif yaitu

flavonoida, antrakinon, saponin (steroid dan triterpenoid), alkaloida, serta

golongan fenolik dan polifenolik pada simplisia Alstonia Cortex berdasarkan

reaksi warna yang terjadi.

1. Pembuatan serbuk simpleks

Dalam pembuatan serbuk simpleks, digunakan simplisia kulit pule

(Alstonia Cortex). Sebelum dibuat dalam bentuk serbuk, simplisia harus

dipatahkan menjadi kecil-kecil agar mudah untuk diserbukkan di dalam

blender. Kemudian, dicuci terlebih dahulu, untuk menghilangkan pengotor

Page 32: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

27

seperti pasir, tanah, dan serangga-serangga yang menempel. Apabila

secara teori, kulit pule dikeringkan di bawah cahaya matahari dengan

diberi tutup kain hitam, dengan tujuan agar sisa-sisa air yang terdapat

dalam simplisia menguap dan nantinya dapat digiling dengan baik dan

didapat serbuk yang kering. Setelah di keringkan di bawah sinar matahari

selama 1 minggu, dilakukan pengeringan di dalam oven selama 1 minggu

juga, dengan tujuan agar simplisia benar-benar kering, karena jika hanya

menggunakan sinar/cahaya matahari dianggap kurang begitu sempurna,

dan didukung dengan cuaca yang tidak memungkinkan untuk melakukan

pengeringan di bawah sinar matahari, karena akan dibutuhkan waktu yang

sangat lama. Tetapi, pengeringan yang dilakukan oleh praktikan hanya

dengan menggunakan oven saja karena keterbatasan waktu yang dimiliki

dan sedikitnya sinar matahari yang muncul. Setelah kering, serbuk

dipotong lebih kecil lagi sehingga mudah digiling. Setelah kecil, serbuk

digiling/ ditumbuk dengan menggunakan penumbuk yang terbuat dari

besi, sehingga lebih cepat dalam penghancuran. Setelah ditumbuk, maka

serbuk diblender dengan menggunakan blender, sehingga diperoleh serbuk

yang ukurannya kecil dan halus. Diperlukan serbuk yang ukurannya kecil

dan halus dikarenakan agar saat dilarutkan akan lebih mudah bercampur,

dan saat diekstrakan diperoleh ekstrak yang banyak.

2. Uji pendahuluan

Pada uji pendahuluan ini dilakukan dengan tujuan untuk

mengetahui apakah simplisia yang diidentifikasi memiliki kromofor

(flavonoida, antrakinon, dll) dan gugus hidrofilik (gula, asam, fenolat, dll).

Dengan melakukan uji pendahuluan maka kita dapat mengetahui reaksi

mana yang akan dilakukan, sehingga bahan yang dibutuhkan tidak

terbuang percuma.

Dalam pembuatan ekstrak dari serbuk simplisia yang digunakan di

larutkan dalam aquadest 10 mL selama 30 menit. Dilakukan pemanasan

Page 33: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

28

untuk mempercepat reaksi. Setelah 30 menit, disaring menggunakan

kapas, karena hasil dari pemanasannya bentuknya adalah serbuk dan

aquadest menjadi seperti gumpalan yang tidak bisa disaring dengan

menggunakan kertas saring, karena kandungan airnya terlalu sedikit.

Setelah disaring menggunakan kapas, diperoleh warna coklat

kemerahan. Warna yang dimaksud seharusnya warna kuning sampai

merah, tetapi yang diperoleh merahnya kurang begitu terlihat, sehingga

perlu dilakukan penambahan larutan kalium hidroksida. Setelah ditambah

dengan KOH, dapat terlihat warna merah yang jelas, sehingga dapat

disimpulkan bahwa Alstonia Cortex mengandung kromofor dan gugus

hidrofilik.

3. Uji alkaloida

Pada uji alkaloida tujuannya adalah untuk mengetahui apakah

dalam simplisia yang diteliti mengandung adanya alkaloid atau tidak. Uji

ini dapat dilakukan dengan menggunakan reaksi pengendapan, reaksi

warna, dan KLT. Tetapi pada percobaan ini dilakukan dengan reaksi

pengendapan dan reaksi warna.

Pada saat pemanasan, digunakan aquadest 10 mL dan dididihkan

dengan ditambah HCl 1%, tujuan penambahan HCl 1% adalah untuk

mengubah/ membentuk garam dari alkaloid yang bersifat basa yang

dipercepat dengan pemanasan. Kemudian dipanaskan sampai diperoleh

ekstrak yang kental dan berbentuk seperti suspensi, kemudian disaring

menggunakan kapas, karena jika menggunakan kertas saring, tidak dapat

disaring, karena terlalu kental. Setelah disaring, kemudian didapat ekstrak,

dan ekstraknya dibagi dalam 2 tabung reaksi, karena akan diberi 2

perlakuan yang berbeda.

Pada tabung yang pertama (tabung A), ekstrak yang diperoleh

dipisah menjadi ekstrak A-1 dan ekstrak A-2. Pada tabung A-1 ditambah

Page 34: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

29

pereaksi Dragendorff dan diperoleh warna orange tua dan ada endapan,

dan pada tabung A-2 ditambah dengan pereaksi Mayer dan diperoleh hasil

kuning keruh dan ada endapan. Berdasarkan hasil yang diperoleh didalam

percobaan dapat kita simpulkan bahwa ekstrak simplisia mengandung

alkaloida golongan III.

Pada tabung yang kedua (tabung B), ekstrak yang diperoleh

ditambah dengan natrium karbonat sampai pH yang diperoleh 8-9,

kemudian setelah dibasakan maka dicampur dengan kloroform kemudian

diaduk pelan-pelan. Setelah diaduk, maka kloroform dapat memisah

kembali, kemudian kloroform diambil dengan menggunakan pipet Pasteur.

Pemisahan larutan tidak menggunakan corong pisah karena zat yang

memisah dapat terlihat jelas dan cairan yang diperoleh sangat sedikit,

sehingga tidak efektif. Larutan ditambah dengan kloroform yang berfungsi

untuk menghilangkan senyawa-senyawa yang mungkin bisa

mempengaruhi hasil yang akan diperoleh, seperti pengotor. Setelah

dipisahkan dari kloroformnya maka ekstrak yang diperoleh ditambahkan

dengan asam cuka sampai pH 5, kemudian terjadi pemisahan pada tabung

B. Dari pemisahan itu kemudian antara lapisan atas dan bawah dipisahkan

dan dipindahkan ke tabung reaksi lainnya. Pada lapisan atas ternyata

menimbulkan endapan jika ditambah dengan Dragendorff, endapan

berwarna orange agak coklat. Hal ini membuktikan bahwa alkaloid yang

dikandung merupakan alkaloid basa kuartener. Pada lapisan bawah,

ditambah HCl 1% dan diaduk, kemudian akan terbentuk 2 lapisan dan

lapisan atasnya ditambah dengan pereaksi Dragendorff. Dari hasil

percobaan tidak diperoleh endapan, sehingga dapat disimpulkan bahwa

ekstrak simplisia ini tidak mengandung alkaloida basa tersier. Tidak

adanya alkaloida basa tersier ini mungkin karena pada sampel uji memang

tidak terkandung alkaloid tersier ataupun kesalahan yang dilakukan oleh

praktikan karena proses pemisahan yang kurang sempurna sehingga masih

Page 35: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

30

tertinggal zat-zat yang tidak diperlukan atau karena pencucian alat yang

kurang bersih.

Dari hasil yang didapat pada percobaan ini, sudah sesuai dengan

data yang ada pada MMI karena kulit pule memang mengandung alkaloid.

4. Uji antrakinon

Tujuan dilakukannya percobaan ini adalah untuk mengetahui

adanya senyawa antrakinon. Uji ini dilakukan dengan mendidihkan

ekstrak serbuk simplisia dalam KOH 0,5N dan hidrogen peroksida selama

2 menit sehingga diperoleh hasil ekstraksi yang maksimal. Kemudian hasil

dari ekstraksi tersebut disaring menggunakan kapas juga, karena hasil

pemanasan hanya diperoleh sedikit sekali, sehingga jika disaring

menggunakan kertas saring, hasil ekstraksi yang diperoleh akan lebih

sedikit. Setelah itu, ekstrak ditambahkan dengan asam asetat glasial

sampai pH 5 lalu ditambahkan toluena. Penambahan toluena ini berfungsi

untuk menghilangkan senyawa-senyawa pengotor yang mungkin bisa

mempengaruhi hasil dari reaksi yang akan dilakukan.

Setelah itu akan tebentuk 2 lapisan, lapisan yang atas dipisahkan

dengan menggunakan pipet, kemudian dimasukan dalam tabung reaksi,

dan ditambahkan dengan KOH 0,5N. Dari percobaan, hasil yang diperoleh

adalah tidak terbentuk warna merah pada lapisan airnya, yang menunjukan

tidak adanya senyawa antrakinon. Hasil yang didapatkan ini sesuai dengan

data pada MMI karena kulit pule memang tidak memiliki kandungan

antrakinon.

5. Uji polifenol

Percobaan ini bertujuan untuk mengetahui adanya senyawa

polifenolat yang terdapat dalam simplisia yang diteliti. Uji dimulai dengan

memanaskan serbuk simplisia dalam air selama 10 menit untuk

Page 36: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

31

memperoleh ekstrak yang maksimal. Hasil dari ekstraksi kemudian

disaring menggunakan kertas saring sehingga diperoleh ekstrak dari

serbuk simplisia. Kemudian ditunggu dingin dan baru ditambahkan

dengan besi (III) klorida. Penambahan besi (III) klorida dilakukan setelah

ekstrak dingin dikarenakan besi (III) klorida dapat teroksidasi dan menjadi

zat yang bersifat toksik. Dari hasil yang didapat bahwa cairan berwarna

hijau tua keruh. Sehingga dapat disimpulkan bahwa serbuk simplisia

mengandung senyawa polifenolat.

Kemudian dilakukan pengulangan untuk ekstraksi dengan

menggunakan etanol. Dari hasil yang diperolah yaitu didapat hasil yang

sama dengan pengekstraksian dengan menggunakan air, yaitu diperoleh

warna hijau tua keruh, sehingga dapat disimpulkan bahwa senyawa yang

dikandung merupakan senyawa polifenolat. Hasil yang didapatkan ini

tidak sesuai dengan data pada MMI karena kulit pule tidak memiliki

kandungan polifenol. Perbedaan hasil yang didapat ini dikarenakan proses

pemanasan pada suhu yang tidak seharusnya karena waterbath yang

digunakan untuk bersama-sama dan suhunya tidak diatur. Selain itu, juga

karena pencucian alat yang kurang bersih di mana masih tertinggal bekas-

bekas zat lain yang menempel pada tabung reaksi.

6. Uji tanin

Percobaan ini digunakan untuk membuktikan adanya senyawa

tanin dalam serbuk simplisia yang diteliti. Dalam percobaan dilakukan

pemanasan simplisia untuk diperoleh hasil ekstraksi yang maksimal.

Setelah dilakukan pemanasan, maka filtrat disaring dengan menggunakan

kertas saring, karena dihasilkan filtrat yang banyak sehingga tidak susah

disaring menggunakan kertas saring.

Setelah disaring kemudian ditambah dengan natrium klorida 2%

sebanyak 1 mL. penambahan dari NaCl ini bertujuan untuk membentuk

Page 37: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

32

endapan apabila bereaksi dengan zat yang terkandung di dalam simplisia.

Dari hasil percobaan, diperoleh hasil kuning teh dan ditemukan endapan,

kemudian endapan disaring, dan filtrat yang didapat ditambahkan dengan

larutan gelatin 1% untuk memperjelas endapan yang ada. Ternyata dari

hasil yang didapat, tidak menunjukan adanya endapan setelah ditambah

dengan larutan gelatin 1%, maka dapat disimpulkan bahwa simplisia yang

dimaksud tidak mengandung senyawa tanin. Hasil yang didapatkan oleh

praktikan sesuai dengan data pada MMI karena pada kenyataannya, kulit

pule memang tidak mengandung tanin.

7. Uji kardenolida

Pada percobaan kali ini, ditujukan untuk mengetahui apakah serbuk

simplisia yang diteliti mengandung senyawa kardenolida. Pada percobaan

ini diambil filtrat yang sudah terbentuk sebanyak 2 mL, karena untuk

filtrat yang lainnya digunakan untuk uji penegasan. Pada filtrat yang

pertama, ditambahkan asam 3,4-dinitrobenzoat dan KOH 1N dalam

methanol. Dan dari hasil yang diperoleh ternyata diperoleh warna merah

kecoklatan yang menunjukan tidak adanya senyawa kardenolida. Jika

terdapat senyawa kardenolida maka akan timbul warna biru-ungu.

Uji penegasan tidak dilakukan. Hal ini dikarenakan pada percobaan

yang pertama tidak ditemukan adanya senyawa kardenolida, maka dari itu

tidak perlu dilakukan uji penegasan, karena buang-buang waktu dan bahan

sebab hasil yang diperoleh adalah sama saja. Prinsip dari uji penegasan

adalah untuk menegaskan bahwa reaksi yang terjadi atau terbentuk adalah

benar adanya. Hasil yang didapatkan oleh praktikan sesuai dengan data

pada MMI karena pada kenyataannya, kulit pule memang tidak

mengandung kardenolida.

Page 38: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

33

8. Uji saponin

Pada percobaan kali ini bertujuan untuk mengetahui apakah

terdapat senyawa saponin pada simplisia yang sedang diteliti. Pada

percobaan dilakukan 2 perlakuan yang berbeda pada setiap serbuk.

Pada tabung yang pertama, dilakukan dengan cara menambahkan

serbuk dengan air sebanyak 10 mL, kemudian dikocok kuat-kuat dan

didiamkan selama 30 detik. Tujuan pendiaman ini adalah agar terbentuk

reaksi yang maksimal sehingga hasil yang diperoleh valid. Dari hasil

percobaan ternyata tidak diperoleh buih setinggi 3 cm, sehingga dapat

disimpulkan bahwa simplisia yang diteliti tidak mengandung senyawa

saponin. Jika mengandung saponin, maka akan terbentuk buih setinggi 3

cm.

Pada percobaan kedua, sebelumnya dilakukan pemanasan pada

serbuk yang telah dicampur dengan air dan dibiarkan selama 30 menit.

Setelah disaring kemudian filtrat yang didapat dimasukan kedalam pipa

kapiler hingga penuh dan kemudian dibiarkan mengalir bebas dan

dibandingkan dengan air. Dari hasil yang diperoleh ternyata tinggi minyak

atsiri sama dengan tinggi air sebagai larutan pembanding. Hal ini

membuktikan bahwa senyawa yang terkandung di dalam simplisia tidak

terdapat senyawa saponin. Jika tinggi filtrat setengah atau kurang dari

tinggi air suling maka filtrat yang diuji mengandung saponin. Fungsi air

sebagai larutan pembanding karena air sudah diketahui komposisi yang

terdapat didalamnya, sehingga sudah merupakan senyawa pembanding

yang pasti. Hasil yang didapatkan ini sesuai dengan data pada MMI karena

kulit pule memang tidak memiliki kandungan saponin.

9. Uji minyak atsiri

Pada percobaan ini dilakukan dengan maksud agar mengetahui

apakah simplisia yang diteliti mengandung minyak atsiri atau tidak. Dalam

Page 39: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

34

percobaan dilakukan dengan cara mengocok 10 gram serbuk simplisia

dengan 20 mL eter dan kemudian disaring. Dari hasil pengujian, didapat

bau aromatik yang menunjukkan bahwa simplisia yang diuji mengandung

minyak atsiri.

Setelah didapat filtrat, kemudian residu yang didapat dilarutkan

dengan sedikit etanol dan kemudian diuapkan hingga kering. Ternyata

dapat tercium bau aromatik, sehingga dapat disimpulkan bahwa simplisia

yang diteliti mengandung minyak atsiri. Hasil yang didapatkan oleh

praktikan tidak sesuai dengan data pada MMI karena pada kenyataannya,

kulit pule tidak mengandung minyak atsiri. Perbedaan hasil yang didapat

antara data MMI dengan percobaan mungkin dikarenakan pencucian alat

yang kurang bersih di mana masih ada zat-zat berbau aromatik yang

tertinggal di dalam alat atau masih ada zat lain yang ada di dalam alat

sehingga bereaksi dengan campuran tadi dan menimbulkan bau aromatik.

4.2.3.Uji Kualitatif Secara KLT

Pada percobaan ini bertujuan untuk mengidentifikasi kandungan kimia

dalam simplisia Alstoniae cortex (kulit pule) secara Kromatografi Lapis Tipis

(KLT). Kromatografi terbentuk apabila terdapat satu fase diam dan satu fase

bergerak. Fase diam dapat berupa padatan atau kombinasi cairan-padatan,

sedangkan fase gerak berupa cairan/gas. Fase diam merupakan fase yang

menyerap senyawa yang akan diidentifikasi di mana fase ini digunakan untuk

menahan senyawa sekaligus digunakan untuk tempat jalannya senyawa. Fase

diam yang digunakan di sini kebanyakan berupa silika GF 254 yang artinya

adalah gel silika yang dapat berfluorosensi pada λ 254 nm dengan sinar UV. Saat

disinari dengan sinar UV, silika ini akan berwarna hijau. Fase diam yang

digunakan di sini tidak hanya silika GF 254 melainkan juga digunakan selullosa

karena terdapat senyawa-senyawa yang bersifat basa di mana jika digunakan

silika GF 254 nm yang bersifat asam, ditakutkan keduanya malah akan bereaksi

dan elusinya malah tidak akan terlihat sehingga digunakan sellulosa di mana

Page 40: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

35

sellulosa tidak akan berikatan dengan senyawa di dalam simplisia tersebut.. Fase

gerak merupakan fase yang digunakan untuk melarutkan zat uji. Fase bergerak

mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen yang terdapat

dalam campuran. Komponen-komponen yang berbeda bergerak pada laju yang

berbeda. Prinsip kerja KLT yaitu memisahkan sampel berdasarkan perbedaan

kepolaran antara sampel dengan pelarut yang digunakan. Fase gerak merupakan

pelarut atau campuran pelarut yang sesuai, disesuaikan dengan jenis sampel yang

ingin dipisahkan. Semakin dekat kepolaran antara sampel dengan eluen larutan/

campuran larutan, maka sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak. Campuran

senyawa pada fase gerak harus memiliki perbandingan yang benar. Hal ini

bertujuan agar senyawa tidak terelusi naik terus ke atas bersama fase gerak tapi

dapat berhenti di tengah sehingga diperoleh nilai Rf antara 0,2-0,8. Jumlah fase

gerak yang digunakan sangat bergantung pada besarnya chamber/ wadah di mana

banyaknya fase gerak yang digunakan ± 20 mL.

Di dalam KLT, digunakan standar yang berfungsi sebagai pembanding.

Apabila simplisia kita gunakan memiliki kandungan metabolit sekunder bioaktif,

maka antara sampel dengan standar akan memiliki warna yang sama jika dilihat

dari sinar UV dan memiliki nilai Rf yang sama. Pada saat penotolan, paling tidak

dilakukan 3 kali agar ketika dilihat di bawah sinar UV, pergerakan/ jarak elusi

lebih terlihat jelas. Akan tetapi, antara penotolan 1 dengan penotolan lain harus

ditunggu kering terlebih dahulu baru ditotolkan agar warna cairan pada silika gel

lebih terlihat tebal sehingga mempermudah dalam melihat elusi dan jika tidak

ditunggu hingga kering, cairannya malah dapat terserap lagi di dalam pipa kapiler

atau kuantitas cairan pada silika tidak bertambah (tetap) karena silika gel belum

sempurna dalam menyerap cairan yang sebelumnya. Pada saat penotolan,

penotolan yang satu dengan penotolan lain harus memiliki jarak yang agak jauh

karena jika jarak penotolan terlalau dekat, ditakutkan pergerakan ke atas satu

sama lain bisa saling bertabrakan sehingga kita tidak bisa melihat bagaimana jarak

eluasi yang terbentuk. Pada saat penotolan, juga jangan terlalu banyak karena jika

Page 41: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

36

cairan yang ditotolkan terlalu banyak dan menjadi melebar, akan mempersempit

ruang gerak senyawa untuk berelusi sehingga akan bertabrakan satu sama lain.

Alasan perlunya dilakukan identifikasi secara KLT karena pada proses KLT

ini, terjadi pemisahan dari ekstrak yang memiliki banyak kandungan yang

bermacam-macam dan kandungan ini dapat terpisah-pisah sehingga kita dapat

menggunakan kandungan tertentu yang kita inginkan. Proses pemisahan ini dapat

terjadi karena adanya perbedaan afinitas antara senyawa dengan fase gerak dan

fase diamnya.

Dalam percobaan dilakukan uji kualitatif secara KLT dan uji kualitatif

secara KLT untuk alkaloid. Pada uji kualitatif secara KLT dibuat tiga larutan

percobaan, sebagai berikut:

1. Larutan I

Larutan ini didapat dari serbuk kulit pule yang telah halus yang

disari dengan petroleum eter pada suhu 50ºC selama 5 menit. Kemudian,

menggunakan sisa serbuk tadi untuk disari kembali dengan kloroform-

asam asetat (99:1) pada suhu 50ºC selama 5 menit sehingga terbentuk sisa

dan fraksi CHCl3-HAc, di mana fraksi CHCl3-HAc diambil sebagai

Larutan 1. Proses penyarian berfungsi untuk memisahkan kandungan yang

akan kita identifikasi dari ekstrak di mana kandungan yang akan kita

identifikasi yaitu glikosida antrakinon dari kandungan lainnya di dalam

ekstrak. Di sini, digunakan standar berupa antrakinon, sebagai fase gerak

adalah etil asetat-toluena (9:1) dan fase diam yaitu silika gel GF 254.

Kejenuhan fase gerak dapat dijaga dengan menutup bejana dan cepat

memasukkan lempeng KLT sehingga kejenuhannya tetap. Penjenuhan ini

berfungsi untuk mempercepat dalam proses perambatan sehingga

perambatan dapat berjalan secara optimal. Kejenuhan fase gerak dapat

dilihat dari kertas saring yang telah basah dalam chamber dan proses

pembasahan itu akan mengalir ke atas secara otomatis. Larutan

Page 42: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

37

pembanding antrakinon dibuat dari larutan Rhei Radix sebanyak 0,5 gram

dipanaskan dalam methanol 5 ml selama 5 menit, disaring dan filtratnya

diuapkan sampai volume 0,5 ml kemudian ditotolkan. Untuk deteksi

digunakan FeCl3. Sampel tidak menunjukkan warna bercak nyata secara

visual. Oleh karena itu, dilakukan pengamatan di bawah sinar UV 254 nm

yang menunjukkan warna ungu. Sedangkan pada UV 365 nm, pada

pengamatannya akan tampak warna oranye pada bercak bagian atas dan

ungu pada bagian bawah. Apabila sampel tidak berfluoresensi pada UV

(baik pada 254 nm dan 365 nm), maka dapat dilakukan penyemprotan

dengan pereaksi khusus untuk memperjelas bercak, misalnya dengan

pereaksi Dragendorff. Pada percobaan yang dilakukan, didapatkan nilai Rf

sampel replikasi 1 = 0,78; replikasi 2 = 0,82; replikasi 3 = 0,83, sehingga

diperoleh rata-rata Rf sampel sebesar 0,81. Sedangkan Rf standar

diperoleh = 0.82. Digunakan standar antrakinon sebagai pembanding

dengan Rf sampel, di mana Rf merupakan jarak yang ditempuh substansi/

pelarut yang digunakan. Selain itu dapat berarti juga faktor retensi suatu

komponen dalam fase diam. Semakin besar nilai Rf maka semakin besar

pula jarak bergeraknya senyawa pada plat KLT. Nilai Rf yang besar

menunjukkan senyawa kurang polar dan berinteraksi dengan bagian polar

dari plat. Apabila nilai Rf sama/ hampir mendekati standar, maka dapat

disimpulkan mengandung senyawa yang diidentifikasi. Rf didapat dengan

membagi jarak rambat sampel dengan jarak rambat fase gerak dari titik

penotolan awal. Dihitung juga hRf, yaitu mengalikan harga Rf dengan

100. Dari data percobaan dapat disimpulkan sampel mengandung glikosida

antrakinon. Hal tersebut tidak sesuai dengan data yang ada pada MMI

karena apabila sesuai dengan data MMI, kulit pule tidak mengandung

glikosida antrakinon.

2. Larutan II

Larutan ini dibentuk dari sisa yang didapat dari Larutan 1 yang

kemudian disari dengan metanol-kloroform-asam asetat (49,5:49,5:1) pada

Page 43: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

38

suhu 50ºC selama 5 menit. Proses penyarian tersebut dipisahkan antara

sisa dan fraksi CHCl3-MeOH-HAc yang terbentuk dimana fraksi CHCl3-

MeOH-HAc digunakan sebagai Larutan 2 yang akan diidentifikasi apakah

terdapat kandungan tanin atau tidak. Larutan 2 ini dilakukan tiga kali

percobaan, yang pertama digunakan standar saponin dengan fase gerak n-

butanol-asam asetat-air (5:1:4) v/v dan fase diamnya silika gel GF 254.

Larutan standar saponin dibuat dengan larutan daging buah Sapindi rarak

2 gram direfluks dengan etanol 75% sebanyak 10 ml selama 10 menit.

Untuk deteksi digunakan FeCl3. Sampel dapat dilihat bercaknya dengan

UV 365 nm dan berfluoresensi putih. Standar menunjukkan nilai Rf = 0,7;

Rf sampel replikasi 1 = 0,53; replikasi 2 = 0,50 dan replikasi 3 = 0,51.

Harga Rf rata-rata sampel sebesar 0,51. Harga Rf sampel tidak mendekati

standar. Yang kedua digunakan standar saponin dengan fase gerak etil

asetat-asam formiat-asam asetat-air (100:11:11:27) dan fase diamnya silika

gel GF 254, dengan deteksi menggunakan sitroborat. Diperoleh data

percobaan Rf standar yaitu sebesar 0,86; Rf sampel replikasi 1 = 0,85,

replikasi 2 = 0,84 dan replikasi 3 = 0,82 sehingga didapat Rf rata-rata =

0,84. Dari percobaan, didapatkan nilai Rf sampel mendekati Rf standar,

sampel mengandung glikosida saponin. Pada percobaan I, didapatkan nilai

Rf sampel jauh dari standar mungkin dapat dikarenakan proses penyarian

dengan suhu yang tidak sesuai karena waterbath yang digunakan untuk

percobaan yang lain juga di mana antara percobaan satu dengan yang lain

suhu yang digunakan berbeda-beda sehingga proses penyarian tidak

berjalan sempurna dan pencucian alat yang kurang bersih sehingga masih

ada bekas-bekas kandungan lain yang menempel pada alat sehingga Rf

yang didapat jauh dari standar. Pada percobaan 2 dengan fase diam silika

gel GF 254 didapatkan nilai Rf yang cukup baik (mendekati standar yang

ada). Pada percobaan ke-3, digunakan standar tanin, fase geraknya etil

asetat-metanol-air (100:13,5:10) v/v dan fase diam silika gel GF 254.

Standar tanin dibuat dari larutan asam tanat 0,05% dalam etanol 70%.

Deteksi menggunakan KOH etanolis. Diperoleh Rf standar 0.80; Rf

Page 44: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

39

sampel replikasi 1, 2 dan 3 = 0.80, sehingga didapat rata-rata Rf sampel =

0,80. Nilai Rf sampel yang sama dengan Rf standar, dapat disimpulkan

bahwa sampel mengandung tanin. Hal tersebut tidak sesuai dengan data

yang ada pada MMI karena apabila sesuai dengan data, kulit pule tidak

mengandung saponin maupun tanin.

3. Larutan III

Larutan ini diperoleh dari sisa pada Larutan 2 yang kemudian disari

dengan metanol-air (1:1) pada suhu 50ºC selama 5 menit sehingga

diperoleh sisa dan fraksi metanol-air di mana sisanya dibuang dan fraksi

metanol-air digunakan sebagai larutan 3. Pada larutan 3 ini, juga dilakukan

3 kali percobaan. Percobaan I dengan fase diam silika gel GF 254

menggunakan fase gerak butanol–asam asetat-air (5:1:4) v/v dan standar

saponin. Deteksi dengan pereaksi Liebermann-Burchard. Didapatkan harga

Rf standar = 0,78; Rf sampel replikasi 1 = 0,91, replikasi 2 = 0,88 dan

replikasi 3= 0,88. Rata-rata Rf sampel yaitu 0,89. Harga Rf kurang

mendekati standar. Percobaan II dengan fase diam yang sama, namun fase

geraknya diganti menjadi kloroform-metanol-air (64:50:10) v/v dengan

standar berupa saponin. Deteksi apabila bercak belum telalu terlihat

dengan vanillin asam sulfat dan dilihat di bawah UV 365 nm

berfluoresensi ungu. Sehingga didapatkan harga Rf standar = 0,76; Rf

sampel replikasi 1 = 0,67; replikasi 2 = 0,69; replikasi 3 = 0,67. Harga Rf

kurang mendekati standar. Pada percobaan III dengan fase diam selulosa,

fase gerak t-butanol-asam asetat-air (4:1:5) v/v dan standar saponin. Di

bawah UV 254 nm berfluoresensi putih, didapatkan nilai Rf standar 0,78;

Rf sampel replikasi 1 = 0,58; replikasi 2 = 0,57; replikasi 3 = 0,56,

sehingga didapat rata-rata Rf sampel sebesar 0,57. Pada percobaan I, II, III

ketiganya didapatkan nilai Rf sampel yang tidak mendekati standar. Hal

ini mungkin dikarenakan proses penyarian dengan suhu yang tidak sesuai

karena waterbath yang digunakan untuk percobaan yang lain juga di mana

antara percobaan satu dengan yang lain suhu yang digunakan berbeda-

Page 45: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

40

beda sehingga proses penyarian tidak berjalan sempurna dan pencucian

alat yang kurang bersih sehingga masih ada bekas-bekas kandungan lain

yang menempel pada alat sehingga Rf yang didapat jauh dari standar.

Apabila dibandingkan dengan data pada MMI, hasil yang didapatkan

praktikan sama karena kulit pule memang tidak mengandung saponin dan

hal tersebut dapat dilihat dari perbedaan Rf larutan dengan Rf standar yang

jauh.

4. Uji Alkaloida secara KLT

Dilakukan juga uji untuk keberadaan alkaloid. Serbuk kulit pule

disari dengan petroleum eter pada suhu 50ºC selama 5 menit sehingga

didapat campuran di mana campuran tersebut dipisahkan dengan cara

disaring sehingga didapatkan sisa dan fraksi petroleum eter di mana fraksi

tadi dibuang dan sisanya yang digunakan untuk mengidentifikasi adanya

alkaloid. Sisa tadi disari dengan HCl 1% pada suhu 50ºC selama 5 menit.

Campuran yang didapat dipisahkan dengan cara disaring, sehingga

didapatkan sisa dengan fraksi asam klorida di mana sisanya dibuang dan

fraksi ini yang digunakan untuk mengidentifikasi adanya alkaloida pada

ekstrak. Fraksi tadi diteteskan 2-3 tetes Pereaksi Dragendorf sehingga

terbentuk warna merah dan ditambahkan NaHCO3 1M hingga mencapai

pH 8-9. Ketika ditambahkan NaHCO3 terbentuk buih-buih karena

NaHCO3 ini merupakan basa. Kemudian disari dengan kloroform sehingga

terbentuk 2 lapisan yaitu lapisan atas dan lapisan bawah. Proses penyarian

ini dilakukan di dalam corong pisah untuk menghilangkan gas yang

terbentuk yaitu CO2 ketika ditambahkan NaHCO3. Lapisan atas

dinetralkan dengan asam asetat di mana larutan ini menjadi larutan I dan

lapisan bawah yang disari dengan HCl 1% akan membentuk 2 lapisan juga

di mana lapisan bawah dibuang dan lapisan atas digunakan sebagai larutan

II untuk mengidentifikasi adanya alkaloida pada ekstrak. Larutan I untuk

menguji alkaloid tersier sedangkan larutan II untuk alkaloid kuarterner.

Standar yang digunakan pada percobaan ini adalah skopolamina dengan

Page 46: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

41

fase diam berupa silika gel GF 254, dan fase gerak berupa sikloheksana-

dietilamina (9:1) v/v. Untuk memperjelas bercak yang terbentuk,

dilakukan deteksi dengan menyemprotkan pereaksi Dragendorff KLT LP.

Bercak berfluoresensi ungu di bawah sinar UV 254 nm. Diperoleh harga

Rf standar pada larutan I = 0,13; sedangkan sampel replikasi 1 = 0,02 dan

replikasi 2 = 0,015. Pada larutan II diperoleh Rf standar = 0.11; sampel

replikasi I = 0,004 dan replikasi 2 = 0,005. Harga Rf yang didapatkan pada

percobaan jauh dari Rf standar mungkin dikarenakan proses penyarian

dengan suhu yang tidak sesuai karena waterbath yang digunakan untuk

percobaan yang lain juga di mana antara percobaan satu dengan yang lain

suhu yang digunakan berbeda-beda sehingga proses penyarian tidak

berjalan sempurna dan pencucian alat yang kurang bersih sehingga masih

ada bekas-bekas kandungan lain yang menempel pada alat sehingga Rf

yang didapat jauh dari standar. Atau karena proses pemisahan antara

lapisan atas dengan lapisan bawah kurang cermat sehingga pada masing-

masing lapisan yang diambil masih bercampur dengan lapisan lain (tidak

benar-benar murni lapisan atas saja atau lapisan bawah saja). Dari hasil

yang didapatkan praktikan, tidak didapatkan alkaloid sesuai yang

diinginkan (alkaloid tersier maupun alkaloid kuarterner) atau alkaloid yang

didapatkan tidak benar-benar murni alkaloid melainkan masih tercampur

dengan kandungan lainnya. Jadi, dapat disimpulkan bahwa kulit pule

mengandung alkaloida dan ini sesuai dengan data pada MMI dan hasil

pada pengujian (pengujian sampel dengan reagen Dragendorff) yang

menyatakan bahwa kulit pule memang mengandung alkaloida.

Kelebihan metode KLT ini adalah relatif mudah dilakukan, murah, dan

spesifik untuk senyawa yang ingin dipisahkan. Kelemahannya yaitu pemilihan

fase diam yang harus sesuai dengan kepolaran fase gerak, dan juga jarak dan

warna yang sama antara satu dengan yang lain belum tentu mengandung senyawa

yang sama, serta waktu yang diperlukan cukup lama. Manfaat dari KLT adalah

dapat memisahkan senyawa yang diinginkan dari suatu campuran.

Page 47: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

42

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

a. Dari hasil pengamatan mikroskopis terhadap serbuk simplisia, simplisia

yang diuji merupakan serbuk simplisia kulit batang pule (Alstoniae

Cortex), yang ditandai dengan adanya fragmen khas berupa jaringan

gabus dengan sel gabus yang membatu, sel gabus yang membatu,

serabut, sel batu, sel gabus tangensial, dan hablur kalsium oksalat.

b. Dari hasil skrining fitokimia, serbuk simplisia kulit batang pule

(Alstoniae Cortex) hanya mengandung kandungan metabolit sekunder

bioaktif berupa alkaloida saja.

5.2. Saran

Disarankan untuk percobaan selanjutnya, agar dilakukan isolasi kandungan

kimia yang terdapat pada kulit batang pule (Alstoniae Cortex), sehingga dapat

dilakukan uji farmakologis dari kandungan kimia tersebut.

Page 48: Pengamatan Mikroskopis dan Skrining Fitokimia Kulit Batang Pule (Alstonia scholaris)

43

DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 1989, Materia Medika Indonesia, Jilid V, 2-6, Departemen KesehatanRepublik Indonesia, Jakarta

Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, 1002, Departemen KesehatanRepublik Indonesia, Jakarta

Anonim, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, 82-84,Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta

Anonim, 2010, Classification of Species: Alstonia scholaris (L.) R. Br.,http://data.gbif.org/species/browse/taxon/23763724, diakeses padatanggal 8 Desember 2010

Dalimartha, S., 1999, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, Jilid I, 1, TrubusAgriwidya, Ungaran

Djauhariya. E dan Hernani, 2004, Gulma Berkhasiat Obat, Cetakan I, 1, 4,Penebar Swadaya, Jakarta

Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia, 110, 234, 235, 237, 245, ITB Press,Bandung

Robinson, T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi, 95-101, ITB,Press, Bandung

Sutomo dan Putri, 2005, Alstonia scholaris (L.) R. Br. KOLEKSI KEBUN RAYA“EKA KARYA” BALI, http://elib.pdii.lipi.go.id/katalog/index.php/searchkatalog/byId/7090, diakses pada tanggal 9 Desember 2010