Obtencin de -amilasa

-amilasaEs una enzima que rompe enlaces 1-4 glucosidicos en los polisacridos eliminando repetidas unidades de maltosa, en las terminaciones no reductoras de los mismos.

Accin: Ataca a la molcula de la amilasa en su extremidad no reductora, separando molculas de maltosa en las posiciones 1-4. y continuando en esta forma hasta que llega al punto de ramificacin del enlace 1-6Degradacin del almidn

CaractersticasActividad estable a 80 C y la optima es a 75 CpH optimo 5.5-6. de estabilidad a 3.5-6.5Un monmero con 495 residuos, usada en investigaciones sobre la estructura del almidn y el glicgeno. La -amilasa en su forma nativa tiene un peso molecular de 180 y 210 kDa obtenido por filtracin en gel Se encuentra generalmente en plantas y algunas bacterias - Bacilus pseudnimas - Clostridium - Streptomyces y algunos fungs

Amilasa en el organismoEnzima pancretica.

Digestin de CHO (transformando el glucgeno y el almidn en latosa.

La maltosa se convierte en glucosa

El organismo carece de -amilasa el ser humano es incapaz de aprovechar la celulosa

Una enzima derivada de un microorganismo sera mucho ms barata y sencilla de obtener siempre y cuando fuera producida extracelularmente.

ObtencinClostridium thermo sulfurogenes

Bacteria termfila anaerobia.(-amilasa) metabolito secundario.Solo requiere de purificacin.Microorganismo aislado de una capa de algas en el Octopus Spring

Procedimiento general.Los procesos mas comunes para la obtencin de la -amilasa, son por medio de purificacin ( ya que esta amilasa es un metabolito secundario), esto hablando de la obtencin por medio de la clostridium thermo sulfurogenes.

Salting out (sulfato de amonio)Tcnica de tipo inorgnicaUtiliza reactivos bajos en toxicidadPermite visualizar la malla del ADNPurificacin de protenas Requiere una mayor cantidad de muestra.Casos especficos de purificacin

Cromatografa en columna DEAE-CELULOSAEs un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).

Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeas.

La cromatografa en columna la fase estacionaria se sita dentro de una columna.

FILTRACION EN GEL (Sephadex g-200)Se basa en la diferencia de tamao que tienen las biomoleculas de una mezcla, a medida que pasan a travs de una columna con un medio cromatografico (gel)

Proceso nivel laboratorioLa actividad especfica del sobrenadante de la solucin de amilasa tiene 60 unidades por mg de protena

Proceso industrial