CLASE N2

MICROSCOPIO

El microscopio es un instrumento ptico de precisin que proporciona la amplificacin de las imgenes de los objetos, lo que hace posible, ver con detalles y claridad sus estructuras pequeas o invisibles a la vista humana, facilitando de esta manera su estudio. Esta integrado por tres sistemas; ptico, mecnico y de iluminacin, a su vez cada sistema esta constituido por varios componentes y cada uno tiene funciones especificas, las que son necesarias conocer para su buen funcionamiento.

Los especimenes o muestras que se examinan con un microscopio ptico, son transparentes y se observan con una luz que los atraviesa

El microscopio ptico (fotnico) compuesto, que puede ser monocular o binocular, permite obtener aumentos de 100 a 1500 veces.

Trichomonas vaginalis a 100 aumentosAmiba a 250 aumentosClulas sanguneasPenicillium a 1500 aumentosClosterium (alga) a 600 aumentosAlga dulceacucola a 400 aumentosBacteriasa 1500 aumentosQu puede verse a travs del Microscopio ptico ?

Partes del microscopioParte ptica: objetivos, ocularesParte mecnica: base, brazo, platina, tubo, botn micromtrico, botn macromtrico, revlver.Parte de iluminacin: diafragma, condensador, lmpara o fuente de luz

Es una placa metlica, suele ser cuadrada y se halla en un plano normal al eje del tubo. El portaobjetos con la preparacin que se desea observar se coloca encima de la platina, junto a unos encajes que tiene para esto, quedando sujeta mediante una pieza curva (carro) o por las pinzas En el centro lleva una perforacin por cual pasa la luz. La preparacin se desplaza sobre la platina mediante dos tornillos. A veces posee 2 reglillas con escalas que permiten orientar a otros en la observacin de algn elemento en especialLa platina

La cremallera

Los tornillos, asociados al carro de la platina y al condensador, permiten el movimiento de estos.

La accin del tornillo del condensadores de subir o bajar. Los tornillos asociados al carro mueven la preparacin, hacia los lados o hacia delante y atrs. Estos tornillos auxilian en el enfoque de la imagen o a localizar la muestra o especimen.

Tornillo Macromtrico: Mueve, tambin la platina, se usa para localizar el enfoque grueso de la preparacin Tornillo micromtrico. Permite movimientos muy cortos en un ajuste fino del enfoque para lograr una observacin precisa

Comprende a los lentes oculares, a los lentes objetivosCOMPONENTES PTICOS

Las lentes de los microscopios se encuentran dispuestas de forma tal, que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular

Generalmente se presenta, en los oculares de Microscopios compuestos,el ocular izquierdo con correccin de dioptras (para enfocar se le puede subir o bajar)El ocular examina y amplifica la imagen producida por el objetivo.OCULARES

El ocular se compone de dos lentes. La lente inferior recoge la imagen del objetivo, la reduce y la reforma dentro del ocular a nivel del limitador del campo visual. La lente superior forma una imagen virtual aumentada para ser vista. El aumento de los oculares puede ser de X4, X10,X12 y X15. Lentes

El ObjetivoEs importante para producir una imagen clara de alta resolucin, utilizar la lente adecuada

Estos, con diferentes aumentos estn colocados en el revlver y pueden ser de 4X 10X 40X o lentes secos y el de 100X o lente de inmersin.El objetivo est compuesto de varios tipos de lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado, controla el aumento posible y la claridad de la imagen.

La amplificacin de un objeto se logra multiplicando el aumento del lente objetivo por el aumento de la lente ocular. Por ejemplo: Aumento = 40 X 10 = 400 aumentos

Lente objetivo de 40X Lente ocular de 10 aumentos

FORMACIN DE LA IMGEN

POR QU SE INVIERTE LA IMAGEN AL PASAR POR LA LENTE CONVERGENTE?

Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sita cerca del objeto que se quiere estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida.

Se dice que la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que acta sencillamente como una lupa. El ocular est situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hacen diverger los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una gran imagen invertida situada ms all del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual.

cuando mueves la platina hacia la derecha "parece" que la imagen se desplazara hacia la izquierda porque es el efecto que causan los lentes convergentes sobre la retina del ojo humano( es por eso que tambin se les puede decir lentes que "no acompaan) pero en realidad no es lo que sucede. El "efecto de no acompaar" se debe a que son lentes que se obtienen de la unin de 2 prismas de cristal que se unen por su vrtice que tienden a hacer diverger (disipar) los rayos luminosos hacia la base de la lente de manera que tu percibes la desviacin luminosa siempre en la misma direccin lo que hace que se invierta el sentido del desplazamiento de la platina...

La IMAGEN sale INVERTIDA o al revs debido al aumento del OBJETIVO y vuelve a ser aumentada por el OCULAR, obteniendo una imagen definitiva, que es INVERTIDA respecto de la original, y resulta de MULTIPLICAR el aumento del Objetivo por el aumento del Ocular. Las imgenes se forman con los RAYOS DE LUZ que llegan a los sistemas de lentes luego de atravesar la preparacin.

Lmparas elctricas

EspejoSe les puede ajustar la intensidad de luzFUENTE DE LUZ

La potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. Fuente de Luz: Proporciona la luz que llega hasta el objeto a estudiar y el sistema ptico del microscopio: Puede ser por un espejo (plano por un lado y cncavo por el otro) o luz incorporada (un foco de luz elctrica ocupando el sitio del espejo.)

El condensador es la lente que concentra el haz luminoso hacia la preparacin. Ilumina la lente del objetivo, su abertura numrica debe ser suficientemente alta para suministrar el cono de luz requerido. Posee, en su parte inferior, un anillo para alojar filtros de colores o de luz natural.

El condensador

En la parte inferior del condensador hay una abertura regulable, o diafragma-iris controlado por una palanca lateral.

La apertura y el cierre del diafragma regula la cantidad de luz que ingresa hacia la preparacinDIAFRAGMA

Muchas de las estructuras y eventos biolgicos ms interesantes son ms pequeos de lo que podemos ver. El ojo humano tiene una resolucin de cerca de 100 m. En el cuadro de abajo se puede ver que de todas las estructuras listadas, solo la clula vegetal est escasamente dentro de nuestro poder resolutivo

En microscopa resolver se refiere a separar. As, el poder de resolucin implica la capacidad de separar o discernir entre dos objetos muy cercanos entre s.MAYOR O MENOR PODER DE RESOLUCIN?

Poder de resolucin (PR):E s l a c a p a c i d a d d e l a s l e n t e s d e d i s t i n g u i r o r e s o l v e r (mostrar separados) con nitidez dos puntos situados muy prximos entre s. Se expresa como la distancia mnima que permite dar una imagen bien definida de dos puntos, en vez de verlos como uno solo. Cuanto mayor es el poder de resolucin (PR), menor es la distancia que separa los puntos entre s sin que estos se confundan. En consecuencia, cuanto mayor sea el poder resolutivo del objetivo, ms finos sern losdetalles de la preparacin que puedan distinguirse. Puede determinarse en base a la longitud de onda de la luz utilizada () y directamente proporcional a la apertura numrica(AN) . El valor de AN varia con cada objetivo y esta inscripto con nmeros decimales pequeos en cada uno de ellos. El PR se puede estimar indirectamente calculando el limite de resolucin.

Menor poder de resolucin

Mayor poder de resolucinAS, DOS OBJETOS MUY CERCANOS SE PUEDEN VER COMO UNO SOLO SI LOS LENTES DEL MICROSCOPIO TIENEN UN BAJO PODER DE RESOLUCIN

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CARACTERISTICAS DE LOS OBJETIVOS:

PODER DEFINIDOR: es la capacidad del objetivo de formar imgenes de contornos ntidos.PODER DE RESOLUCIN: es la capacidad de mostrar la imagen en sus detalles ms finos. PODER DE PENETRACIN: es la propiedad de permitir la observacin simultnea de varios planos del preparado.DISTANCIA FRONTAL: es la distancia de la lente frontal al preparado colocado en la platina, cuando est enfocado. Disminuye cuando aumenta la escala de reproduccin del objetivo.AUMENTO TOTAL: Debemos notar que el ocular tambin tiene un aumento, por lo tanto el aumento total de la imagen que observamos es el producto entre el aumento del objetivo y el del ocular. Ejemplo: si tenemos colocado el objetivo cuya escala de reproduccin es 40 y nuestro ocular tiene un aumento de 10x, entonces el aumento total ser 40 x 10 = 400.

MANEJO DEL MICROSCOPIO PTICOColocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones.Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.

Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias. Para realizar el enfoque: Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos.Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.

Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin.

Empleo del objetivo de inmersin: Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40.Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin.Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio.

Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular.Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol.Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

ProcedimientosObservar al microscopio con lentes de 10 X y 40 X suspensiones de microorganismosObservar diferentes objetos con los diferentes objetivos segn la gua