Ketrampilan Dasar Laboratorium molekul/unsur yang ... Puncak serapan pada ≈520 nm ... 15 menit sempat membaca soal-soal 15 menit kegiatan praktek laboratorium

  • View
    213

  • Download
    0

Embed Size (px)

Text of Ketrampilan Dasar Laboratorium molekul/unsur yang ... Puncak serapan pada ≈520 nm ... 15 menit...

  • Ketrampilan Dasar LaboratoriumKetrampilan Dasar Laboratorium

    Program Program StudiStudi IlmuIlmu Biomedik 20Biomedik 201111

    Kuliah 4: Oktober 5, 2010

    Pengenceran revisited

    OpenWetWarefile names

    Spektrofotometri

    Praktikum Metabolisme

  • PengenceranPengenceran::

    The ratio a:b is generally defined as the quotient (a/b) and is described as a in b.24 However, it may also be expressed as a to b.5,6 [meaning]the sum a+b.

    a:ba:b Fishel, L.A. 2010. Dilution Confusion: Conventions for Defining a Dilution Journal of Chemical Education 87:183-1185.

    2. Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry: Theory, Analysis, Correlation. 5th ed. St Louis, Mo.: Mosby Elsevier; 2010:32. 3. Troy DB, ed. RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy. 21st ed. Philadelphia, Pa.: Lippincott Williams & Wil-kins; 2006:119. 4. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, eds. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4th ed. St. Louis, Mo.: Elsevier Saunders; 2006:27.

    5. Darton M, Clark J. The Macmillan Dictionary of Measurement. New York, NY: Macmillan Publishing Co.; 1994:378. 6. The Random House Dictionary of the English Language. 2nd ed., unabridged. New York, NY: Random House; 1987: 1602.

  • PengenceranPengenceran::

    Untuk mata kuliah Ketrampilan Dasar Laboratorium, a:b selalu diartikan a/a+b

    a:ba:b

    1:1 pengenceran 50% atau 1/2 dari awalnya

    1:3 pengenceran 25% atau 1/4 dari awalnya

    2:3 pengenceran 40% atau 2/5 dari awalnya

    1:9 pengenceran 10% atau 1/10 dari awalnya

    1:10 pengenceran

  • Filenames in Filenames in OpenWetWareOpenWetWare

    Praktikum 4: Metabolisme I dan Spektrofotometri

    Bahan Praktikum Metabolisme I dan

    Spektrofotometri

    Artikel Dasar Kegiatan Praktikum Metabolisme di sini

    Tugas Mahasiswa (laporan) Praktikum 4

    Tolonglah nama file Anda termasuk nama Anda/kelompok

    Anda sendiri

    Contoh: "Abdi dan Mustafa laporan praktikum

    metabolisme dan spektrofotometri.pdf

    ??Apakah email sudah sampai??

  • SpectrophotometrySpectrophotometry Basic Ideas:

    i) If a molecule absorbs a

    photon of electromagnetic

    radiation, its energy level

    will riserise EXCITED

    STATE

    ii) a molecule may vibrate in

    many ways, so there are

    many vibrational vibrational levelslevels

    iii)Absorption (and emission)

    of energy is quantal (yaitu

    set values)

    Energy Level Diagram

  • Basic ideas.....Basic ideas.....

    iv) Electromagnetic Spectrum: relationship between

    energy and wavelength

    E = hc/ (h Plancks constant=4.135667331015 eVs)

    UV and visible spectrum (~200-800nm) berguna

    bagi penelitian molekul-molekul electronic

    transitions

    X-ray or -ray energy tinggi molekul

    dihancurkan/kanker

    IR energi agak rendah mendapat keterangan

    tentang struktur molekul (rotational or

    vibrational transitions)

  • UV and visible spectrum (~200-800nm)

    semakin kecil

    energi semakin besar

    ** skala logarithmik**

    Ada molekul/unsur yang dapat menyerap cahaya langsung pada

    200nm < > 800nm misalnya: DNA atau protein

  • Absorption Spectra of DNA and proteinAbsorption Spectra of DNA and protein

    DNA and protein absorb energy in the UV region

    (DNA pada =260nm; protein pada =280nm)

  • HasilHasil SpektrofotometriSpektrofotometri DNADNA

  • SpektraSpektra absorpsiabsorpsi glukosaglukosa dandan kolesterolkolesterol

    diambil dari: https://fscimage.fishersci.com/images/D10972~.pdf Enzymatic Colorimetric Methods for the Analysis of Human Serum by UV-Visible Spectroscopy, Keppy et.al., Thermo Fisher Scientific

    standar standar

    sempel

    sempel

    (nm) (nm)

    sera

    pan

    sera

    pan

    glukosa kolesterol dasarnya: H2O2 bereaksi dengan fenol, 4-amino-antipirin serta

    peroksidase derivatif kuinonimin yang berwarna merah.

  • Protein dapat diukur dgn reagensia Biuret

    0

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2

    0.25

    0.3

    0.35

    0.4

    480 500 520 540 560 580 600 620

    panjang gelombang (nm)

    se

    rapa

    n

    Puncak serapan pada

    520 nm

    Serapan cahaya dibanding dengan panjang gelombang cahaya

    pada reaski reagensia Biuret dengan protein

    data yg diperoleh pada praktikum BM506 2009

  • Alat Spektrofotometer :

    A = dc

    % transmission = 100 x (Io/I)

    hubungan antara transmisi cahaya (I/ Io) dgn konsentrasi sempel

    d

    Io I

    Io= intensitas cahaya yang masuk

    I = intensitas cahaya yang keluar

    d = jarak larutan yang dilalui cahaya (cm)

    c = konsentrasi larutan (mole/litre atau M)

    = molar absorption coefficient (M-1cm-1)

    log10(Io/I) = -dc

    tapi lebih praktis untuk mengunakan konsep serapan

    (absorbance) dimana , A = -log10(Io/I)

  • d

    Io I Io= intensitas cahaya yang masuk I = intensitas cahaya yang

    keluar

    A = -log10(Io/I)

    Kalau 0% cahaya diserap sempel??

    Io= I A = -log10(1) A = 0

    Kalau 50% cahaya diserap sempel??

    Io> I A = -log10(2) A = 0,3

    Kalau 99,9% cahaya diserap sempel??

    Io>> I A = -log10(1000) A = 3

  • Kalau nilai A yang diperoleh > 1,5 Kalau nilai A yang diperoleh > 1,5

    sebaiknyasebaiknya sseempel diencerkanmpel diencerkan dulu agar dulu agar

    hasilnya lebih akurat/ dapat dipercayahasilnya lebih akurat/ dapat dipercaya

    2

    Hukum Beer-Lambert

    A = dc

    Hukum Beer-Lambert benar pada konsentrasi yang berbanding lurus

    dengan A

  • Basic operation:

    i) pakai sempel blanko dan sempel yg lain

    ii) sempel blanko dimasukkan dulu untuk dinulkan sinyal pada

    yg sedang digunakan

    iii) sempel yg lain diperiksa pada yg sama.

    iv)serapannya dibaca

    spektrofotometerspektrofotometer

    Mode

    (transmittance or absorption)

    Wavelength adjustment Cuvette holder

    100%T (0 absorbance)

    adjustment On/Off

    kuvet

  • PraktikumPraktikum 44

    MetabolismeMetabolisme I (I (glukosaglukosa, ,

    trigliseridatrigliserida, urea) , urea) dandan

    TeknikTeknik SpektrofotometriSpektrofotometri

    Kelompok praktikum

    Bagian praktikum

    Pengenceran

    Grafik-grafik

    Laporan/Proposal Metabolisme II

  • KelompokKelompok PraktikumPraktikum

    18

    KelompokKelompok 1 (1 (masukmasuk pkpk 08:00):08:00):

    Dedy Ernawati

    Mara Imam Fera Roy Taufik

    Martina Lily Dorra Anwar

    KelompokKelompok 2 (2 (masukmasuk pkpk 12:00):12:00):

    Taya Elsa Leo Yeni Dita

    Musthari Ningrum Donny Siti

    Sukaisi

    Grup praktikum ditentukan setiap hari praktikum

  • Cara Cara kerjakerja........

    1. Pengenceran - doubling dilution dan decimal dilution dari larutan stok glukosa dan urea (meja 1,3,5 mengerjakan pengenceran larutan stok urea dan meja 2,4 mengerjakan pengenceran larutan stok glukosa)

    2. Sempel darah diambil (boleh semua mhs, paling sedikit seorang dari grup meja Anda). 1ml darah cukup.

    3. Darah disentrifugasi biar serum dapat diambil

    4. Kerjakan pemeriksaan glukosa, trigliserida serta urea pada sempel serum sesuai dengan prosedurnya

  • Cara Cara kerjakerja........

    GLUKOSA TRIGLISERIDA UREA

    volume

    reagensia kit

    1000l

    reagensia

    glukosa

    1000l

    reagensia R2

    1000l

    reagensia A,

    kemudian

    1000l

    reagensia B

    volume

    sampel 10l 10l 10l

    konsentrasi

    standard kit 100mg/dl 200mg/dl 40mg/dl

    periode dan

    temperatur

    inkubasi

    10 min @

    37C 5 min @ 37C

    5 min @ 25C

    ** 2X**

    periksa pada 500nm 530nm 600nm

  • HasilnyaHasilnya........ Tabel 1a s/d 2b

    faktor konsentrasi grup meja__ grup meja__

    1

    2

    4

    8

    16

    32

    64

    128

    blanko

    konsentrasi

    se

    rap

    an

    Hitung garis regresi (linear regression) pada data yg diperoleh. Rumus yang dihasilkan berbentuk

    y= mx + b dimana y = serapan; x = konsentrasi dan m merupakan slope

  • HasilnyaHasilnya........ Tabel 3

    GLUKOSA UREA

    mhs: ______

    mhs: ______

    mhs: ______

    mhs: ______

    Serapan sempel

    dari grafik 1a/2a

    dari grafik 1b/2b

    dari rumus kit

    maksudnya dari rumus garis regresi y= mx + b

    } contoh urea:

    Asempel/Astandar x 40mg/dl

  • HasilnyaHasilnya........ Tabel 4 Hasil pemeriksaan glukosa, trigliserida dan urea plasma mahasiswa

    data kelas

    se

    rap

    an

    detil2 mhs (berapa lama sejak makan; rata-rata apa yg dimakan; jenis kelaminan; umur)

    GLUKOSA TRIGLISERIDA UREA

    A kadar A kadar A kadar 1.

    2.

    3.

  • LaporanLaporan dandan proposal proposal MetabolismeMetabolisme IIII

    Laporan * satu laporan per grup meja 1-2 halaman selain Tabel 3 dan 5 grafik

    kata-kata sendiri

    perubahan yang ada dicatat

    3 kesimpulan dari setiap grafik (5 grafik yang berdasar Tabel 1a, 1b, 2a, 2b serta Table 4)

    komentar atas kebuktian (atau tidak) Hukum Beer-Lambert

    komentar atas hasil pada Tabel 3.

    saran

  • LaporanLaporan dandan proposal proposal MetabolismeMe

Recommended

View more >