130
اﻟﻌﻨﺐ ﻣﻦ أﺻﻨﺎف ﺛﻼﺛﺔ ﺗﺤﻤﻞ ﺗﻘﯿﯿﻢVitis vinifera L . ﻟﻤﻠﺢ اﻟﺼﻮدﯾﻮم ﻛﻠﻮرﯾﺪ اﻟﺤ اﻟﺠﺴﻢ ﺧﺎرج رﺳﺎﻟﺔ ﺑﮭﺎ ﺗﻘﺪم اﻟﻰ اﻟﺰراﻋﺔ ﻛﻠﯿﺔ ﻣﺠﻠﺲ- ﺟﺎﻣﻌﺔ اﻟﻜﻮﻓﺔ درﺟﺔ ﻧﯿﻞ ﻣﺘﻄﻠﺒﺎت ﻣﻦ ﺟﺰء وھﻲ اﻟﻤﺎﺟﺴﺘﯿﺮ اﻟﻌﻠﻮم اﻟﺰ راﻋﯿﺔ اﻟﺤﺪا وھﻨﺪﺳﺔ اﻟﺒﺴﺘﻨﺔ ﺋﻖ) ﺍﻟﻨﺒﺎﺘﻴﺔ ﺍﻷﻨﺴﺠﺔ ﺯﺭﺍﻋﺔ( ﺇﺸﺭﺍﻑ ﺘﺤﺕ ﺍﻟﻤﺴﺎﻋﺩ ﺍﻷﺴﺘﺎﺫ ﺍﻟﺤﺴﻴﻥ ﻋﺒﺩ ﻋﻠﻲ ﻋﺒﺩ ﻤﺴﻠﻡ ﺍﻟﺩﻜﺘﻭﺭ ﺍﻷﻭﻟﻰ ﺠﻤﺎﺩﻯ1430 ﻫـ ﻨﻴﺴﺎﻥ2009 PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl tolerance

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

تقییم تحمل ثالثة أصناف من العنبVitis vinifera L.

يخارج الجسم الح كلورید الصودیوم لملح

تقدم بھا رسالة

الكوفة جامعة -مجلس كلیة الزراعة الى

راعیةالز العلوم يالماجستیر فوھي جزء من متطلبات نیل درجة ئقالبستنة وھندسة الحدا

)زراعة األنسجة النباتية (

تحت إشراف

األستاذ المساعد الدكتور مسلم عبد علي عبد الحسين

م 2009 نيسان هـ 1430جمادى األولى

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 2: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl

tolerance

A thesis Submitted to the Council of the College of Agriculture

at University of Kufa in Partial Fulfillment of the Requirement for the Degree of Master in Horticulture

Science (Tissue Culture)

By

Abdul-Kadhim Jawad Musa AL-Deheimawi

Supervised by

Asst.Prof. Dr. Muslim Abid-Ali Abdel-Hussein

2009 A.D. 1430 A.H

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 3: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

…% ــد بــا الز فأم فـعنا يا مأمفاء وج بذهفي الناس فيمكث في الـأرض

كذلك يضرب اهللا األمثـال %

العظیم العليصدق اهللا

17/الرعد

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 4: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

اقرار المشرف

تقيـيم تحمـل ثالثـة أصـناف مـن العنـب (اشهد ان إعداد الرسالة الموسـومة

Vitis vinifera L. والمقدمة من قبل الطالـب )الجسم الحي خارجكلوريد الصوديوم لملح

جامعة الكوفـة / الزراعة قد انجزت تحت اشرافي في كلية الدهيماوي عبدالكاظم جواد موسى

البستنة وهندسة الحدائق –هي جزء من متطلبات نيل درجة الماجستير في العلوم الزراعية و

) .تقنيات زراعة األنسجة(

:التوقيع

دعلي عبدالحسينمسلم عب. د: األسم استاذ مساعد: المرتبة العلمية 2009: / / التأريخ

توصية رئيس القسم

المقدمة من األستاذ المشرف، ارشح هذه الرسالة للمناقشةبناء على التوصية

:التوقيع سعدون عبدالهادي سعدون .د: االسم

استاذ: المرتبة العلمية 2009: / / التاريخ

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 5: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

اقرار المقوم اللغوي

Vitis تقييم تحمل ثالثة أصناف من العنـب (اشهد أني قد قومت الرسالة الموسومة

vinifera L. طالب عبـدالكاظم لل ناحية اللغويةمن ال) الصوديوم خارج الجسم الحي لملح كلوريد

.كلية الزراعة ـ جامعة الكوفة /قسم البستنة / جواد موسى الدهيماوي

: التوقيع

كشكول هناء عباس. د: اسم المقوم اللغوي

جامعة الكوفة-كلية اآلداب: العنوان

إقرار المقوم العلمي

Vitis تقييم تحمل ثالثة أصناف من العنـب (اشهد أني قد قومت الرسالة الموسومة

vinifera L. ظمطالب عبـدالكا لل من الناحية العلمية) الصوديوم خارج الجسم الحي لملح كلوريد

.كلية الزراعة ـ جامعة الكوفة /قسم البستنة / جواد موسى الدهيماوي

:التوقيع

يحيى علي نقي البياتي. د: اسم المقوم العلمي

الكوفة - المعهد الفني:انالعنو

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 6: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

إقرار لجنة المناقشة

عبـدالكاظم جـواد (نشهد بأننا أعضاء لجنة المناقشة ، اطلعنا علـى رسـالة الطالـب

لملـح .Vitis vinifera L تقييم تحمل ثالثة أصناف من العنـب (الموسومة ) موسى الدهيماوي

بهـا وقد ناقشنا الطالب في محتوياتها وفيما لـه عالقـة ) كلوريد الصوديوم خارج الجسم الحي

).البستنة(م الزراعية فوجدنا أنها جديرة بالقبول لنيل درجة الماجستير في العلو

حلمي حامد خضر. د الجبوري عبد الجاسم محسن . د أستاذ مساعد أستاذ مساعد

جامعة الكوفة -كلية الزراعة جامعة النهرين -كلية العلوم عضوا رئيس اللجنة

مسلم عبدعلي عبدالحسين. د محسن جالب عباس .د أستاذ مساعد مدرس جامعةالكوفة-كلية الزراعة وفة جامعة الك-كلية العلوم

)مشرفا( عضوا عضوا

. جامعة الكوفة-صدقت هذه الرسالة من مجلس كلية الزراعة

سعدون عبد الهادي سعدون . د. أ

عميد الكلية

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 7: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

اإلھداء

من أرسله اهللا رحمة للعالمين خاتم األنبياء والمرسلين

.له الطيبين الطاهرينآمحمد صلى اهللا عليه وعلى

من رحل عنا ولم يزل حاضرا فينا ال يغيب

دخله فسيح جنانهأأبي رحمه اهللا و .............

والدتي العزيزة............. نينبوع الحنا

أخوتي وأخواتي.............. سندي في الحياة

زوجتي............................. شريكة نجاحي

... منار...نور ....هدى .....سارة.........فلذات كبدي

فاطمة

رتنيكل القلوب الطيبة التي غم.......

والدعاء............والمساعدة..........بالحب

أهدي مثرة جهدي املتواضع عبدالكاظم

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 8: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

شكر وتقدير

ــصالة ــة وال ــذي هــدانا إىل درب املعرف ــاملني ال ــبني و احلمــد رب الع ــه الطي ــى ســيد املرســلني حممــد وآل ــسالم عل ال ...الطاهرين

بـشكري وتقـديري وامتنـاني للـذين أتقـدم أنبعد إن وفقين ا سبحانه وتعـاىل علـى إمتـام رسـاليت هـذه يطيـب يل اعانونين يف اجناز هذه الرسالة كافة، واهنم لكثريون،وإلن كانـت الوريقـات ال تتـسع لـذكرهم مجيعـا فـأني ال

. حظا وثوابا اقر عيناأوفىى فضلهم ،بل اذكره متوسال هلم زيادة من جزاء انسالشكر والتقدير ألستاذي الفاضل الدكتور مسلم عبدعلي عبداحلـسني إلشـرافه علـى هـذا اجلهـد العلمـي

ه إىل املـستوى املطلـوب وتوجيهاته العلمية القيمة طوال مدة الدراسة واليت كان هلا األثر البـالغ يف أجنـاز هـذا البحـث وإيـصال . داعيا ا له باملوفقية والنجاح الدائم

ــوري ــيس وأعـــضاء جلنـــة املناقـــشة الـــدكتور عبـــد اجلاســـم حمـــسن اجلبـ ــاتذة رئـ الـــشكر والتقـــدير لألســـن ــشة رســاليت واألســتفادة م ــول مناق ــاس لتفــضلهم بقب ــدكتور حمــسن جــالب عب والــدكتور حلمــي حامــد خــضر وال

رائهـم القيمـة للوقـوف علـى الرسـالة وتقوميهـا وتبيـان مكـامن اخلطـأ والقـصور لعالجهـا، ومـواطن خرباهتم وتوجيهـاهتم وأ .الصالح والنجاح لألرتقاء هبا

اللغوي والعلمي ملا بذاله من جهود لألرتقاء بالرسالة يف جماليهمـا :كما أقدم خالص شكري وتقديري للخبريين .املهمني

لسيد العميد األستاذ الدكتور سـعدون عبـداهلادي سـعدون العجيـل ويسعدني أن أقدم شكري وامتناني إىل ا ــة الزراعــة ــوظفي كلي ــع أســاتذة وم ــة ومجي ــشؤن العلمي ــد لل ــاون العمي ــدكتور عــدنان املظفــر مع ــة -وال ــة الكوف جامع

.لدورهم الفعال يف متابعة طلبة الدراسات العليا وتذليل املصاعب هلم تور مجــال أمحـد عبـاس والــدكتور عبـاس حمـسن والــدكتور وأتقـدم بـشكري الــوافر إىل األسـتاذ الـدك

كمـال حمـسن القـزاز والـدكتور اخلفـاجي والدكتورحـسني البكـاء والـدكتور عالء عيـدان والـدكتور ايـاد . ومجيع األساتذة األفاضل الذين مدوا يل يد العون عبدالرزاق العتابي والدكتور جميد متعب

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 9: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

كتور صاحل حمسن بدر مدير عام اهليئة العامة للبحوث الزراعية ويسعدني أن أقدم شكري وامتناني للد وكافـة منتـسيب قـسم سيد شاهر فدعوس مدير قسم تطوير الرز والسيد فليح عبد جابر مدير حمطة أحبـاث الـرز وال

.املستمرة يل م ملساندهت وحمطة أحباث الرز يف املشخاب كــريم فــاخر والــسيد صــاحل كــريم فــاخر للــدكتور علـي كمـا أتقــدم جبزيــل الــشكر واألمتنــان

.والسيد حسني كريم الغاليب ملا قدموه من مساعدة ودعم متواصل إلجناز هذا البحث الشكر والتقدير إىل السيد خالد طالل وكافة منتسيب قسم البستنة وهندسة احلدائق لتعاوهنم الـدائم معـي

.وفقهم ا مجيعا هشام ، زاهـد ، أحـسان ، حيـدر ، (فة زمالئي طلبة الدراسات العليا ومن الواجب أن أتقدم بالشكر إىل كا

)سناء ،هيفاء ، زينب ــديري ــع كــل تق ــدي ومجيــع منتــسيب األرشــاد الزراعــي م ــل إىل األســتاذ جــواد حــسن محي وشــكري اجلزي

.واحرتامي هلم مجيعا .ئي لبيانات الدراسة الشكر والتقدير للسيد حيدر حسني جلهوده القيمةيف أجناز التحليل األحصا

الشكر والتقدير إىل منتسيب الشؤن العلمية ال سيما السيد باسل حسن والست شيماء يوسـف و األخـوات إقبـال . وملياء املشرفات على مكتبة كلية الزراعة ملا قدموه يل من تسهيالت طيلة فرتة البحث

الـسيد ســعد الـسبع ، الـسيد حممـد حــسن ن ،دكتور سـلمان بــاني ، الـسيد هاشـم زويـ للـ الـشكر والتقـدير الـسيد حـسني ابـراهيم ، الـسيد مهـدي عبدزيـد ، السيدرحيم علوان ،السيد محيد جميد رضيوي ، اجلواهري ، السيد

، الـسيد زمـان عبـد الـرمحن ، الـسيدة هنـاد حـاكم تكليـف الـسيد سـليمان عبداحلـسني ، الـسيد عقيـل كـريم ، .يل من عون ومساعدةملا قدموه حمسن

.واعطر باقات الشكر واألمتنان إىل األخوة حممد شهيد ومسري جاسب لتعاوهنم األخوي وعرفانا مين باجلميل ال يسعين إال إن اتقدم بوافر تقديري وأمتناني جلميع افراد عائليت جلهودهم الطيبة اليت سامهت

.يف إخراج الرسالة بالشكل املطلوب ن خالص شكري وتقديري ملن مل حيضره قلمـي ناسـيا ال متناسـيا علـى كـل مـا قدمـه يل مـن عـون وختاما أعرب ع

. مهما كان بسيطا راجيا عفوه ، وا ويل التوفيق

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 10: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

المستخلص ة وهندسـة الحـدائق التابع لقسم البستن ة النباتي األنسجة ة في مختبر زراع الدراسة اجريت

ثالثة أصناف مـن العنـب تقييم بهدف م 2008- 2007 من مدة لل وفةالكجامعة /كلية الزراعة /

خـارج NaCl لتحملها ملح كلوريـد الـصوديوم )شدة بيضاء وشدة سوداء وكمالي ( األوربي

النـسيجية الجسم الحي اعتمادا على تأثيراته في صفات النمو والتغيرات الكيمياحياتية لزروعاتها

.ض زراعته في المناطق المتأثرة بالملوحة النتخاب الصنف األكثر تحمال لغر

شملت األولى تأسيس المزارع النسيجية لألصناف المدروسة : مرحلتين في ت الدراسة نفذ

في مرحلة التضاعف خارج الجسم الحي وقد نفـذت األخيـرة NaClلملح والثانية تقييم تحملها

بيضاء وشدة سـوداء شدة(فألصناا[ نامليكتجربة عاملية باستخدام التصميم العشوائي الكامل بع

.] )مول ملي 200,175,150,125,100,75,0 ( التراكيزx) وكمالي

) single nodeالعقـدة المفـردة (االبطيـة البـراعم بزراعـة ت المرحلة األولـى نفذ

ومـن ون الخالي من الهرم MS التنشئة وسط علىتمام تعقيمها إ بعد ألصناف العنب المدروسة

ملغـم 0.1لتـر و /BAملغـم 2 المجهز بــ MSثم نقلت الزروعات الى وسط التضاعف

NAA/الثانويـه وأعيـدت زراعتهـا أسابيع 4 لمدة الزروعاتلتر وحضنت Subculture

) العقـل الدقيقـة ذات العقـدتين ( الفروع من الكافية بهدف الحصول على األعداد لمرات عديدة

.تجربة التقييم لتحمل الملوحة الالزمة إلجراء

ع ونفذت المرحلة الثانية بزراعة العقل الدقيقة ذات العقدتين لألصناف الثالثـة مـن الفـر

تراكيـز مـن ملـح 7ـ في وسط التضاعف المجهز ب المتضاعفة الناتجة عن المرحلة األولى

NaCl نسبة حسبت . ملي مول 200 و 175 و 150 و 125 و 100 و 75 و 0 وهي

I

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 11: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

وأوزانهـا الطريـة وأطوالهـا المتكونة الفروع ومعدل عدد على قيد الحياة الباقية الزروعات

والجافة ودرجة تضررها وعدد األوراق ومحتواهـا مـن الكلوروفيـل و الـسكريات الذائبـة

ديوم والبروتينات الذائبة والبرولين و الكاليسين بيتايين وفعالية إنزيم البيروكسيديز وايونات الصو

ذات المستويات المختلفة من لتضاعف ا في وسط الزراعة أسابيع من 4بعد والكلور والبوتاسيوم

.ملوحةستجابتها وتحملها للمؤشرات البوصفها NaClملح

للمزارع النسيجية لجميـع بعض صفات النمو في NaCl لملحا معنويا تأثيرجأظهرت النتائ

اختزاال معنويا في ل فقد حص ، يادة تركيز الملح في وسط التضاعف أصناف العنب المدروسة بز

وأوزانها الطرية والجافـة وعدد وأطوال الفروع الزروعات على قيد الحياةءالنسبة المئوية لبقا

وايـون والبروتينات الذائبـة من الكلوروفيل فضالعن دراسة محتوى الزروعات وعدد األوراق

السكريات الذائبة والبرولين و الكاليسين بيتـايين فع محتوى األفرع من البوتاسيوم ، في حين ارت

ملـي 75 عند زيادة تركيز الملح عـن وايونات الصوديوم والكلور وفعالية إنزيم البيروكسيديز

النـاتج عـن لإلجهاد أصناف العنب استجابة اختالفأظهرت النتائج و. مول في الوسط الغذائي

شدة صنفينعلى ال معنويا شدة بيضاء صنف تفوق الإذ ، ضاعفالت في وسط NaCl وجود ملح

النسبة المئوية لبقاء الزروعات على انخفضت فقد ،جميع الصفات المدروسة في سوداء وكمالي

مع فشل زروعـات NaCl زيادة تراكيز ملح عندلجميع األصناف ومعدل التضاعف قيد الحياة

أصـناف العنـب وأعطت . ملي مول175 ة عند التركيز الصنف كمالي في البقاء على قيد الحيا

فقـد في الدراسة ، المستعملة NaCl في التراكيز المنخفضة من ملح ةالمدروسة نسبة بقاء جيد

175استمرت زروعات الصنف شدة بيضاء بالنمو والتضاعف عند مستويات الملح االقـل مـن

و75 صنف النامية في المستويات الملحيـة الهذا لزروعات ا معنوي تظهر اختالفاملي مول فلم

II

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 12: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

في حين انخفضت نسبة البقاء ) ملي مول0( ملي مول عن معاملة المقارنة 150و 125 و 100

ان زروعات الصنف شدة سوداء لم تختلف بنـسبة بقائهـا و. ملي مول 175معنويا عند التركيز

175ملي مول الذي سبب مع التركيز 150 على قيد الحياة معنويا في التراكيز الملحية األقل من

بـدأت النـسبة بينمـا . ) NaCl ملي مـول 0(ملي مول انخفاضا معنويا عن معاملة المقارنة

ملي مول 125 الصنف كمالي باالنخفاض المعنوي عند المستوى الملحي تالمئوية لبقاء زروعا

وأظهـرت زروعـات . ملي مـول 175والتراكيز األعلى منه ، فضال عن موتها عند تركيز

الصنف شدة بيضاء اقل درجة تضرر بفعل الملوحة ومن ثم يأتي صنفي شدة سـوداء وكمـالي

على الترتيب من جهة أخرى أظهرت زروعات الصنف شدة بيضاء تفوقا ملحوظا في التغيـرات

ن الكيمياحياتية ألفرعها النامية في اوساط ملحية بارتفـاع المـواد الـسكرية الذائبـة والبـرولي

والكاليسين بيتايين وزيادة نشاط انزيم البيروكسيديز مع قلة تأثر الكلوروفيـل والبـروتين فيهـا

. مقارنة بالصنفين شدة سوداء وكمالي على الترتيب

Abstract This study was conducted at Plant Tissue Culture Laboratory /

Horticulture Department / Agriculture College / Kufa University during

2007-2008 to evaluate in vitro three grape (Vitis vinifera L.) cultivars

(Shadah Sawdaa , Shadah Baidaa and Kamali) for their tolerance to NaCl

according to effects of NaCl on their growth characters and biochemical

compositions to select tolerant cultivar for growing in salt affected regions.

This study was carried out in two stages, first was shoot culture

initiation followed by the second stage, which included study responses of

grapes cultivar to NaCl to evaluate their tolerance to NaCl at multiplication

stage in vitro .

III

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 13: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Shoot cultures of all cultivars were initiated in vitro by culturing

sterilized axillary buds (node culture) on MS medium . Once cultures were

established they were transferred to MS medium containing 2 mg / L (BA)

and 0.1 mg / L (NAA) for shoot proliferation and then proliferated shoots

were subcultured several times (each 4 weeks) to produce sufficient

number of explants (double node microcuttings) for the following

experiments .

Double-node microcuttings were excised from proliferating cultures

and subjected to seven different NaCl concentrations (0, 75, 100, 125, 150,

175 and 200 mM) in MS medium , supplemented with 2 mg BA , 0.1 mg /

L (NAA ) , 3% Sucrose and 0.7% agar, for 4 weeks .

Experiments were set up as a factorial experiment in Complete

Randomized Design and repeated twice . There were 25 explants as

replicates for each treatment for each cultivar. Subsequent to the 4 week

salinity treatments , shoot cultures were removed from their media and

evaluated for their response to salinity . The parameters used to determine

the effects of NaCl treatments on grape cultivars were ; survival percentage

(viability of explants) , degrees of salt injuries , proliferation ratio (number

of shoots / explant ) , shoot length , number of three-node shoots , number

of leaves per shoot , fresh and dry weight , total chlorophyll content , shoot

contents of total soluble sugars , total soluble protein , proline , glycine

betaine , Na+ , Cl- and K+ ions and peroxidase activity .

It was clear from the data that the proliferation ratio , fresh weight,

shoot length , number of three-node shoots , number of leaves per shoot ,

total chlorophyll content and viability of explants in all cultivars decreased

due to the increase in NaCl concentrations up to 75 mM in multiplication

medium and a different trend between cultivars were observed , while

Kamali cultures were died at 175mM level , their cultures could survive on

IV

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 14: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

the medium with 100 mM NaCl , Shadah Sawdaa and Shadah Baidaa

cultures showed a good survival on the medium with 125 and 150 mM

NaCl respectively , with the salt injuries generally less for Shadah Baidaa

than the other cultivars . On the other hand, Shadah Baidaa shoots showed

highest level of total soluble suger , protein , proline , glycine betaine and

peroxidase activity under salt stress compared with Shadah Sawdaa and

Kamali .

Based on the responses to NaCl the tolerance to the NaCl levels followed the order Shadah Baidaa > Shadah Sawdaa > Kamali for the cultivars studied .

V

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 15: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

المحتویـاتقائمة

1 المقدمـة 1 20 ...4 مراجعة المصادر 2

4 تأسيس المزارع النسيجية للعنب 1-2 5 تمرحلة تنشئة الزروعا 1-1-21-1-1-

2 5 اختيار الجزء النباتي

2-1-1-2

6 األجزاء النباتيةتعقيم

3-1-1-2

6 اسمرار الوسط الغذائي والمزارع النسيجية

6 مرحلة التضاعف 2-1-2 7 حساسية األعناب للملوحة 2-2 10 مزارع العنب النسيجية للملوحةتحمل 3-2

11 ية تاثير الملوحة في نموالمزارع النسيج 1-3-2 13 تأثير الملوحة في محتوى االفرع من الكلوروفيل 2-3-2بعـض المركبـات مـن فرع في محتوى اال الملحي تأثير االجهاد 3-3-2

العضوية14

1-3-3-2

14 سكريات الذائبة من الفرع في محتوى االالملوحةتأثير 2-3-3-

2 14 البروتينات الذائبة من فرع في محتوى االالملوحةتأثير

3-3-3-2

15 من البرولينفرع في محتوى االالملوحةتأثير 4-3-3-

2 16 من كاليسين بيتايين فرع في محتوى االالملوحةتأثير

17 إنزيم البيروكسيديز فعالية في الملوحةتأثير 4-3-2 K+, Cl- , Na+ 19من أيونات فرع في محتوى االالملوحةتأثير 5-3-2

40...21 المواد وطرائق العمل 3

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 16: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

21 مصدر الزروعات 1-3 21 سوداءةشد 1-1-3 21 بيضاءة شد 2-1-3 22 كمالي 3-1-3 24 للعنب تأسيس المزارع النسيجية 2-3

Initiation stage 24 مرحلة النشوء 1-2-31-1-2-

3 24 ومصدره اختيار الجزء النباتي

2-1-2-3

26 الغذائي تحضير الوسط

3-1-2-3

29 تعقيم األجزاء النباتية

4-1-2-3

single node( 29العقدة المفردة ( زراعة األجزاء النباتية

29 )انتاج االفرع الخضرية(مرحلة التضاعف 2-2-3 NaCl لملـح لألصناف المدروسة تقيم تحمل المزارع النسيجية 3-3

مرحلةالتضاعف في 30

31 للمزارع النسيجية نمو صفات ال 1-3-31-1-3-

3 31 النسبة المئوية لبقاء الزروعات على قيد الحياة

2-1-3-3

31 درجة تضرر الزروعات

3-1-3-3

33 معدل التضاعف

4-1-3-3

33 عقد فاكثر3 التي تحمل معدل عدد االفرع

5-1-3-3

33 النباتي المزروعالجزء / معدل طول االفرع

6-1-3-3

33 الفرع/ معدل عدد األوراق

7-1-3-3

33 الوزن الطري لألفرع المتضاعفة

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 17: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

8-1-3-3

33 الوزن الجاف لألفرع المتضاعفة

33 الصفات البايوكيميائية للمزارع النسيجية 2-3-31-2-3-

3 33 تقدير الكلوروفيل الكلي

2-2-3-3

34 كمية السكريات الذائبة

3-2-3-3

34 الكلية الذائبةكمية البروتينات 35 تحضير المنحنى القياسي للبروتين 1-3-2-3-3 36 استخالص البروتين الكلي وتقديره 2-3-2-3-34-2-3-

3 proline 36 الحامض االميني برولين تقدير

5-2-3-3

Glycine betaine 37الكاليسين بيتايين تقدير

6-2-3-3

peroxidase 38فعالية انزيم البيروكسيديز تقدير

39 محتوى االفرع المتضاعفة من بعض االيونات تقدير 3-3-31-3-3-

3 39 تركيزالصوديوم والبوتاسيوم

2-3-3-3

39 تركيز ايونات الكلوريد

40 يبيالتحليل االحصائي والتصميم التجر 4-3 87...41 النتائج والمناقشة 4

41 للمزارع النسيجيةنموصفات ال 1-4 41 ئوية لبقاء الزروعات على قيد الحياةم النسبة ال 1-1-4 45 درجة تضرر الزروعات 2-1-4 51 ) عدد األفرع الخضرية(معدل التضاعف 3-1-4 54 عقد فأكثر3معدل عدد األفرع التي تحوي على 4-1-4 56 معدل طول األفرع 5-1-4 59 معدل عدد االوراق 6-1-4

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 18: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

61 الوزن الطري لألفرعمعدل 7-1-4 64 معدل الوزن الجاف لألفرع 8-1-4 66 الصفات البايوكيميائية للمزارع النسيجية 2-4

66 محتوى األفرع من الكلوروفيل الكلي 1-2-4 69 ئبة السكريات الذا 2-2-4 71 البروتينات الذائبة الكلية 3-2-4 73 محتوى الفروع من البرولين 4-2-4 76 محتوى الفروع من الكاليسين بيتايين 5-2-4 Peroxidase 78 فعالية انزيم البيروكسيديز 6-2-4 80 محتوى الفروع من أيونات الصوديوم والكلوريد والبوتاسيوم 3-4

80 الفروع من أيونات الصوديوم محتوى 1-3-4 83 محتوى الفروع من أيونات الكلوريد 2-3-4 85 البوتاسيوم محتوى الفروع من أيونات 3-3-4

88 والتوصياتاالستنتاجـات 5

90 المصادر 6

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 19: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

الجـــداول

9 ةقابلية تحمل اشجار الفاكهة للملوح 1

المكونات الكيميائية الداخلة في تحضير محاليل األسـاس لوسـط 2MS

27

3

فـي MS المضاف الى الوسط الغـذائي NaClتأثير تركيز ملح النسبة المئوية لبقاء أفرع أصناف العنب على قيد الحياة بعد أربعة

أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي42

4

فـي MS لى الوسط الغـذائي المضاف اNaCl تأثير تركيز ملح أصناف العنب بعد أربعة أسابيع من الزراعـة أفرع درجة تضرر

خارج الجسم الحي 46

5

فـي MS المضاف الى الوسط الغـذائي NaCl تأثير تركيز ملح الجزء النباتي ألصناف العنب بعد أربعة أسـابيع /معدل عدداألفرع

من الزراعة خارج الجسم الحي

52

6

فـي MS المضاف إلى الوسط الغـذائي NaClير تركيز ملح تأث الجـزء النبـاتي / عقـد فـأكثر 3 الحاوية على عدد األفرع معدل

خارج الجسم الحي الزراعة ألصناف العنب بعد أربعة أسابيع من55

7

فـي MS المضاف إلى الوسـط الغـذائي NaClتأثير تركيز ملح أربع ة صناف العنب بعد الجزء النباتي أل )/ ملم(معدل طول األفرع

أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي57

8

فـي MS المضاف إلى الوسط الغـذائي NaClتأثير تركيز ملح ألفرع أصـناف العنـب بعـد الجزء النباتي / معدل عدد األوراق

أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي59

9

ـ المضافNaClتأثير تركيز ملح فـي MSذائي إلى الوسـط الغألفرع أصناف العنب بعد أربعة أسابيع )ملغم(معدل الوزن الطري

من الزراعة خارج الجسم الحي62

10 فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضافNaClتأثير تركيز ملح

ألفرع أصناف العنب بعد أربعة أسابيع )ملغم(معدل الوزن الجاف 65

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 20: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

من الزراعة خارج الجسم الحي

11

فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضافNaClركيز ملح تأثير ت غـم 100/ملغم(محتوى أفرع أصناف العنب من الكلوروفيل الكلي

بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي) وزن طري67

12

فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضافNaClتأثير تركيز ملح غـم وزن /ملغم(محتوى أفرع أصناف العنب من السكريات الذائبة

بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي) جاف69

13

فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضافNaClتأثير تركيز ملح غم /ملغم(محتوى أفرع أصناف العنب من البروتينات الذائبة الكلية

بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي) وزن جاف72

14

فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضافNaClتأثير تركيز ملح ) غـم وزن جـاف /ملغم(محتوى أفرع أصناف العنب من البرولين

بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي74

15

فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضافNaClتأثير تركيز ملح غم /مايكروغرام(محتوى أفرع أصناف العنب من الكاليسين بيتايين

أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحيبعد ) وزن جاف77

16

فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضافNaClتأثير تركيز ملح فـي )غم وزن طـري /وحدة أمتصاص (فعالية أنزيم البيروكسيديز

بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجـسم أفرع أصناف العنب الحي

79

17

فـي MSالغـذائي إلى الوسـط المضاف NaClتاثير تركيز ملح غم وزن /ملغم (محتوى أفرع أصناف العنب من أيونات الصوديوم

بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي) جاف82

18

فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضاف NaClتاثير تركيز ملح غـم وزن /ملغم (محتوى أفرع أصناف العنب من أيونات الكلوريد

لزراعة خارج الجسم الحيبعد أربعة أسابيع من ا) جاف84

86 فـي MS إلى الوسـط الغـذائي المضاف NaClتاثير تركيز ملح 19

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 21: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

غم وزن /ملغم (محتوى أفرع أصناف العنب من أيونات البوتاسيوم

بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي) جاف

األشـكـال

1 في مرحلة النمو ) كمالي و شدة بيضاء وء شدة سودا ( العنب أصناف 23 .الثمري

2

للعنـب ) الخـضرية األفرع إنتاج( المزارع النسيجية تأسيسخطوات

ابتداء من اختيار الجزء النباتي وتعقيمـه مـرورا بمرحلـة تنـشئة وصوال الى مرحلة تضاعف األفرع الخضرية الزروعات

25

3 خالل Double node microcuttingالعقلة الدقيقة ذات البرعمين

تحضيرها وبعد زراعتها في وسط التضاعف30

32 3 و2 و1 و0 حاالت تضرر الزروعات حسب درجة التضرر 4

5 زروعات صنف العنب شدة بيضاء النامية فـي وسـط التـضاعف

NaClمن ملح ) ملي مول200-0(المزود بتراكيز48

6 سـط التـضاعف زروعات صنف العنب شدة سوداء النامية فـي و

NaCl 49ملح ) ملي مول200- 0(المزود بتراكيز

7 زروعات صنف العنب كمالي النامية في وسط التـضاعف المـزود

NaClملح ) ملي مول200- 0(بتراكيز50

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 22: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

المقدمة

احد أشجار فاكهة المناطق المعتدلة التي تعـود .Vitis vinifera L يعد العنب األوربي

Moore وJules( نـوع 1000 جنسا وأكثر من 14 التي تضم Vitaceaeلى العائلة العنبية ا

األصلي المنطقة الواقعة بين جنوب البحر األسود وبحر قزوين العنب ن موطن أ يعتقد .) 1996

( الذي نشأت منه أصناف العنب المعروفة جميعها ثم انتشرت زراعته في بـاقي أنحـاء العـالم

Perl و Eshdat ، 1998( . في العراق قديمة قدم استيطان اإلنـسان فـي وادي بوزراعة العن

الرافدين وقد تشرفت هذه الشجرة اذ ورد ذكرها في عشرة سور وإحدى عشرة آية فـي القـرآن

. الكريم

بحيـاة إن الحاجة المتزايدة لثمار العنب ومنتجاته من الزبيب والعصير جعلته مرتبطـا

شكل مباشر وال سيما انه يحتل مركز الصدارة بـين أشـجار الفاكهـة فـي اإلنتـاج اإلنسان ب

هكتار، يبلـغ 7379000المساحة المزروعة إذ تقدر المساحة المزروعة بالعنب في العالم بـ و

طن في حين تبلغ المساحة المزروعة بالعنب في العـراق حـوالي 61892000 إنتاجها حوالي

. ) FAO ، 2003 ( طــن 265000لغ إنتاجها حوالي هكتار، ويب48000

تعزى األهمية االقتصادية للعنب؛ لمردوده االقتصادي الكبير واستمراره فـي اإلثمـار

لعشرات السنين والقيمة الغذائية العالية للعنب إذ تحتوي الثمار علـى الـسكريات والفيتامينـات

والبروتينات والدهون وغيرها ، فضال عن أهميتـه فـي واألحماض العضوية واألمالح المعدنية

االستعماالت الطبية في عالج الكثير من األمراض إذ إن األعناب الطازجة تحتوي على مركـب

Resveratrolالمثبط لنمو خاليا سرطان البروستات ) Hudson ، 2007 وآخرون(.

1

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 23: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

ـ بذرية وعـدد قليـل صنفا من العنب اغلبها 75يوجد في العراق حاليا ما يقارب نم

في المناطق الشمالية والوسطى من العـراق ااألصناف عديمة البذور التي تتركز زراعته

. فقد حظي بعناية خاصة في زراعته وأنتاجه ونظرا ألهمية محصول العنب )2001المالك ، (

الدراسات العلمية ، أجمعت مشكلة الملوحة عامال محددا فى التوسع بالمساحات المزروعة اذ تعد

المشكلة سنويا مما يقلل مـن إن ملوحة التربة تؤثر فى نمو وحاصل العنب فضال عن تفاقم هذه

العنب فيما بينهـا فـى مـدى وتتباين أصناف) Munns ،2002 (المساحات الصالحة للزراعة

) . 2002 وآخرون ، Walker( عند اختبارها في الحقل NaClتحملها لملح كلوريد الصوديوم

الملوحـة التـي تنتـشر بارتفاع نسبة من العراق وتتميز أراضي المنطقتين الوسطى والجنوبية

زراعة األعناب فيها وال سيما األصناف المحلية مثل شدة بيضاء و شدة سوداء وكمالي وحلواني

ـ وخليلي وبيض الحمام وديس العنز وغيرها ب ، لذلك كله فان اختيار األصناف المالئمة من العن

والمتحملة للملوحة للزراعة فى هذه المناطق بات من األهمية نظرا للتزايـد المـستمر للملوحـة

.سنويا

وفسلجة تحمل الملوحة ةاستعملت تقنيات الزراعة خارج الجسم الحي في دراسة ميكانيكي

ـ في المحاصيل الزراعية ومنها العنب ألنها مشابهة لما تم الحصول عليه عند إجـراء ار االختب

النتائج نسبيا تحت الظروف الحقلية وبما تتميز به الزراعة خارج الجسم الحي من سرعة إعطاء

نتائج اختبـارات التي قد تتداخل تأثيراتها مع ( السيطرة الكاملة على الظروف البيئية فضال عن

الجـسم خـارج النباتاتأكثار معظم وما توفره زراعة األنسجة من إمكانية ) الملوحة في الحقل

. ) 2008و اخرون ، George ( الحي بمساحه صغيرة وبوقت قليل نسبيا وبأعداد كبيرة

2

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 24: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

للـشد الملحـي ومـن هـذه استعملت أنظمة عديدة في تقييم تحمل المحاصيل الزراعية

زراعـة األجنـة من خـالل خارج الجسم الحي األنظمة استعمال تقنية زراعة األنسجة النباتية

المتضاعفة في أوساط زراعية ذات مستويات ملحيـة اعة البراعم واألفرع وزراعة الكالس وزر

كالزيتون والتفاح والعنب و تعد زراعة البراعم أحـد NaCl ديوم الصو مختلفة من ملح كلوريد

األنظمة الجيدة المستخدمة في اختبارات تحمل أصناف النوع الواحد من المحاصـيل الزراعيـة

بالثبات الوراثي للفروع والنباتات ) بالمقارنة مع استعمال الكالس ( قة للملوحة اذ تمتاز هذه الطري

ومن المتوقع ظهور استجابة لإلجهاد الملحي مـشابهة ) Wang ، 1983 و Hu( الناتجة عنها

الستجابة النبات الكامل ألن الفروع الناتجة من البراعم المزروعة فى األوساط الغذائية المجهـزة

كلوريد الصوديوم هى نسخة مصغرة ألفرع النبـات الكامـل مـن حيـث المجهزة بملح وغير

.التركيب الوراثي والتشريحي

بعـض تقيـيم لذا تهدف هذه الدراسة إلى استعمال تقنية الزراعة خارج الجسم الحي في

المنتشرة زراعتها فـي المنطقتـين ) شدة بيضاء و شدة سوداء و كمالي ( أصناف العنب المحلية

األفرع خـارج ملح كلوريد الصوديوم فى مرحلة تضاعف لتحمل جنوبية من العراق الوسطى وال

المـزارع الجسم الحي فضال عن دراسة التأثيرات الفسيولوجية لملح كلوريـد الـصوديوم فـي

. مؤشرات لمدى تحملها للملوحة بأعتبارهاالنسيجية لهذه األصناف

3

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 25: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

مراجعة المصادر – 2

يس المزارع النسيجية للعنب تأس1 - 2

التقنيـات جميعهـا يعنـي Plant Tissue Culture إن مفهوم زراعة األنسجة النباتية

عزل خلية ، نسيج أو عضو من أعضاء النبات األم تحت ظروف معقمة ، وزراعتهـا المتضمنة

، ومن ثم تحضين الجزء المزروع فـي ظـروف مـسيطر في أوساط غذائية اصطناعية معقمة

( لكـي يتطـور باتجـاه الهـدف المطلـوب ؛ يها من درجة الحرارة والضوء والرطوبة عل

George، 2008 وآخرون. (

كانت إحدى نتائجه التوصل الى تقنيات القد شهد القرن الماضي تطورا تقنيا وعلميا كبير

in( في اإلكثار الخضري الواسع لمعظم النباتات خارج الجـسم الحـي استعمالهايمكن

vitro ( والحصول الى الحد الذي يمكن فيه زراعة مختلف األجزاء النباتية على أوساط غذائية ،

، منها التربية وتحـسين عن استعمالها في مجاالت بحثية وتطبيقية" منها على نباتات كاملة فضال

كثـار ألمرضية وا ، وإنتاج شتالت خالية من اإلصابات ال النبات وإنتاج األدوية والعقاقير الطبية

الساللي السريع إذ يعد األخير من التطبيقات ذات األهمية الكبيرة والرئيسة لتقنية زراعة األنسجة

التي تتم بأتباع طرائق مختلفـة ا، إذ عدها بعض العلماء الطريقة الملكية إلكثار النباتات خضري

و البراعم األبطية وتحفيز نشوء للتمايز والتكوين الشكلي مثل تكوين البراعم العرضية وتحفيز نم

. ) Kleyn،1996 و Kyte(األجنة الجسمية وغيرها

4

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 26: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

لقد أثبتت نتائج الدراسات السابقة في هذا المضمار إمكانية إكثار أصناف العنب بوساطة

مسارات تكوين األجنة الجـسمية استعملتتقنيات زراعة األنسجة النباتية المختلفة بنجاح سواء

Embryogenesis)Hui ، 2008 وآخرون :Vidal ، تكوين األعـضاء أو ) 2009 و آخرون

shoot تشجيع تضاعف األفـرع وأ ) Kim ،2002 و Organogenesis) Kimعبر الكالس

multiplication ) Shim ، 2003 وآخرون( .

األفـرع ن أكثر التقنيات استخداما في إنتاج األفرع الخضرية للعنب هي تحفيز تكـوين ا

الجانبية بزراعة البراعم الطرفية و االبطية بشكل امن دون حصول اختالفات وراثيـة محتملـة

.لألفرع الناتجة عند زراعتها عن النبات األم إذا ما طبقت التقنيات األخرى

:تمر مضاعفة األفرع الخضرية عن طريق زراعة البراعم بمرحلتين هما

عاتمرحلة تنشئة الزرو1-1-2

وفيها يتم اختيار الجزء النباتي وتعقيمه بهدف الحصول على مزرعة نسيجية خالية مـن

. الملوثات

: اختيار الجزء النباتي1-1-1-2

في نجاح زراعة األنسجة في النباتات المختلفة ومنهـا العنـب إذ للجزء النباتي أثر مهم

Singleح عليـه العقـدة المفـردة أو ما يصطلAxillary bud بنجاح البرعم االبطياستعمل

node مـن غـذائي في تأسيس المزارع النسيجية وإكثار العنب نسيجيا عند زراعته في وسط

أو مـا يطلـق عليـه Apical bud العديد من الباحثين مقارنة مع استخدام البرعم القمـي قبل

و ) 2002( وآخرونDzazioو ) 1997( وآخرون Heloir ومنهم Shoot tipأطراف األفرع

Akbaş2004( وآخرون (.

5

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 27: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

األجزاء النباتية تعقيم2-1-1-2

بهدف الحصول على مزارع عنب خالية من الملوثات فقد اختبرت العديد من المركبـات

فقـد حـصل .الكيميائية لتعقيم األجزاء النباتية منها هايبوكلورات الصوديوم وكلوريد الزئبق

Chee جة عند تعقيم البراعم الطرفية واالبطية بهـايبوكلورات على افضل نتي) 1984(واخرون

فقـد حـصال )Nabulsi )1999و Charbaji أما. دقيقة15لمدة % 1.2الصوديوم تركيز

دقيقة 15لمدة % 1.5على تعقيم جيد للبراعم االبطية بغمرها بمحلول هايبوكلورات الصوديوم

علـى )2005( وآخـرون Poudel و )Kim )2002 و Kimفي حين حصل كل من .

هـايبوكلورات مزارع معقمة خالية من الملوثات عند تعقيم البراعم الطرفية واالبطيـة بمـادة

. دقيقة15لمدة % 1الصوديوم

اسمرار الوسط الغذائي والمزارع النسيجية3-1-1-2

ب التي اقترح إحدى المشاكل التي تظهر عادة في مزارع النباتات الخشبية ومنها العن تعد

و آخرون ، Hartmann() حامض االسكوربيك و الستريك ( االكسدة لحلها استخدام مضادات

1997(

مرحلة التضاعف2 2- 1-

إخفـاق اذ يتقرر فيها نجـاح او ، ة والحرج ة من مراحل االكثار المهم ة هذه المرحل دتع

ـ كما يعتمد عليها عدد . اإلكثار للنباتات بشكل عام ةعملي ـ ةالنباتـات الكلي ونوعيتهـا ة المتكون

)Hartmann ، ـ ناتجة ال األفرع نقل هاويجري في ) 1997 وآخ رون الـى ة الـسابق ةمن المرحل

تكـشف تحوي على السايتوكاينين او مداخلته مع االوكسين لغرض تحفيـز ة جديد ة غذائي أوساط

للبراعم الطرفيةة ونموها عن طريق التغلب على السيادة القمية البراعم االبطياتبادئ

6

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 28: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

) Trigiano و Gray ، 1996( . فـي يمكن أن ينطبق علـى إكثـار العنـب نفسهوان المبدأ

الحصول علـى ومن ثم وجوب تضمين الوسط الغذائي بالسايتوكاينينات بهدف مضاعفة األفرع

ف المكثـرة من الفروع الجانبية وان نوع وتركيز السايتوكاينين يتباين مع تباين األصنا داكبر عد

) .Bouquet ، 1995: Mhatre ،2000 و Torregrosa( نسيجيا

عند زراعتهما البراعم االبطية للعنـب فـي وسـط )Sivritepe) 1995 و Erisحصل

على اكبر عدد من األفرع بمرحلة التضاعف خالل إكثار العنب عند تـضمين MSالتضاعف

Ibanez واستطاع BA من بنزل أدنين)تر ل/ ملغم 131. ~( مايكرومول 5هذا الوسط بـ

الحصول على نسبة تكـشف عاليـة للبـراعم االبطيـة لـصنف العنـب )2003( وآخرون

Napoleon لمـايكرو مـو 98.عند زراعتها في وسط غذائي مجهز بـ % 100 بلغت

BA )~ 2 اشـار و. نبات/ فرع 52. مع حصول نسبة تضاعف بلغت )لت ر / ملغم Poudel الى حصولهم على اكبر عدد وطول لألفرع المتضاعفة لنوعين من العنـب )2005( آخرونو

. )لتر / ملغم 252. و 131. ~( مایكرومول 10 و 5 بنزل ادنين بالتركيزاستعمال عند

للملوحةاألعنابحساسية 2-2

النبـاتي فـي اإلنتـاج مشاكل التربة الرئيسة التي يواجهها إحدى Salinityتعد الملوحة

انخفاضـا فتـسبب العديد من المناطق االروائية في العالم والسيما المناطق الجافة وشبه الجافة

معنويا في نمو وحاصل النبات النامي في تلك الترب من خالل االختالل في التـوازن الغـذائي

لناجمة عن الملوحة فـي والتأثير السمي لاليونات ، فضال عن التغيرات ا واإلنزيميوالهرموني

7

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 29: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

، Ashraf و Tester ، 2008 : Athar و Arzani ،2008 : Munns(صـفات التربـة

2009 ( .

ومن أهم االمالح الذائبة الشائعة في التربة العراقية هي كلوريدات الصوديوم والمغنيسيوم

كلوريـد الـصوديوم ويعد ملح ) 1989الزبيدي ، (والكالسيوم وكبريتات الصوديوم والمغنيسيوم

تـؤثر والملوحـة . )1984الحسيني، ( في معظم الترب الملحية العراقية اأكثرها شيوعا وانتشار

اإلجهـاد يكون أما عن طريـق فقد ، ومنها العنب ، في النباتات بصورة عامة عديدةفي جوانب

ي إلى عجز النبـات االزموزي الناتج عن زيادة نسبة األمالح الذائبة في محلول التربة الذي يؤد

عن امتصاص الماء الالزم لفعالياته الحيوية أو من خالل السمية التي تسببها الزيـادة الحاصـلة

و ( Shani بالتوازن الغـذائي والهرمـوني اإلخالللأليونات المتراكمة في الخاليا أو من خالل

Ben-Gal، 2005 ( فضال عن تسببها فـي اإلجهـاد التاكـســدي Xiong ) Oxidative

stress ، 2002 وآخرون( .

) Maas) 1990 إذ الحـظ ، ة للملوحـة ي الحـساس المتوسطة من النباتات األعناب تعد

م وأن زيادة الملوحـة /سيمنز ديسي1,5 عند تجاوز الملوحة يها التأثير السمي عل أعراضظهور

% 9.6 بنسبة نبع أدت إلى خفض انتاج ال ة في العجينة المشبعة للترب م/ سيمنز ديسي 1بمقدار

عنـد % 9.3 ان نسبة االختزال في الحاصل كانت (2002)واخرون Walker ، في حين وجد

ـ م/سيمنز ديسي 2.6 عن م/ سيمنز ديسي 1زيادة الملوحة بمقدار ة في العجينة المـشبعة للترب

للملوحة عنب لتحمل ال دليالالعالقة بين نسبة االنتاج ) 1(جدول ويبين ال . المحيطة بجذور العنب

وبعض اشجار الفاكهة عنبيبين الفرق بين ال و) ECدرجة التوصيل الكهربائي (ملوحة الودرجة

. األخرى في درجة تحملها للملوحة

8

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 30: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

قابلية تحمل اشجار الفاكهة للملوحة ) 1( جدول

1997 و اخرون ، Bischoff ، 1999 : Kotuby-Amacher: المصدر

ديسي( EC قيمة التوصيل الكهربائي الفاكهةاالنتاج ي الى خفضالتي تؤد ) م / سمنز

االنجليزي االسم العربي االسم بنسبة

للملوحة قابلية التحمل

0% 10% 25% %50

17.9 10.9 6.8 4.0 متحمل Date palm نخيل التمر

8.4 5.5 3.8 2.7 متوسط التحمل Fig التين

8.4 5.5 3.8 2.7 متوسط التحمل olive الزيتون

6.7 4.1 2.5 1.5 متوسط الحسلسية grape العنب

حساس grapefruit ريب فروتك1.8

2.4

3.4

4.9

4.9 3.5 2.5 1.9 حساس pecan البيكان

4.8 3.2 2.3 1.7 حساس orange البرتقال

4.8 3.3 2.3 1.7 حساس Lemon الليمون

4.8 3.3 2.3 1.7 حساس Apple التفاح

4.8 3.3 2.3 1.7 حساس pear الكمثرى

4.8 3.3 2.3 1.7 حساس walnut الجوز

4.3 2.9 2.1 1.5 حساس plum االجاص

الخوخ الصوفي

peach 4.1 2.9 2.2 1.7 حساس

4.1 2.8 2.0 1.5 حساس almond اللوز

الخوخ االملس

nectarine 3.7 2.6 2.0 1.6 حساس

3.7 2.6 2.0 1.6 حساس apricot المشمش

الكرز الحلو والحامض

Sweet and tart cherry

3.1 2.2 1.9 0.9 حساس

9

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 31: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

تباينا ملحوظا فيما بينها فـي التحمـل للمـستويات ه صول التابعة ل ألاو العنب صنافأقد أظهرت ل

، 2002 ،1997 وآخـرون Walker :2002وآخـرون ، Zhang (العالية لملح كلوريد الـصوديـوم

2004 ، 2007 : Stevens ، ختالفات الى التباين فيما بينها فـي إلوقد أعزيت هذه ا ) 2008 وآخرون

ـ يونـات الكلوري أدخـول وال سيما Salt exclusionمالح ألتنظيم دخول ا وآخـرون Walker( دــ

حـسب ف ليس عن طريق حجزها في الجذور الفروعيونات الكلوريد من أذ تتخلص الشتالت من إ )1984

.يق منعها من الدخول أو الحركة داخل الجذور بل عن طر

للملوحة تحمل مزارع العنب النسيجية 3 - 2

جة التحمـل لاستعملت تقنيات الزراعة خارج الجسم الحي في دراسـة ميكانيكيـة وفـس

لمـا تـوفره ) 1987خرون ، أ و Hasegawa( للنباتات المختلفة للملوحة عند المستوى الخلوي

هذه الدراسـات أن . وسط نمو متجانس من المحتوى الملحي والظروف البيئية هذه التقنيات من

تتعلـق بالتربـة أخرىقد تكون صعبة تحت الظروف الحقلية بسبب تداخلها مع اجهادات مختلفة

عملية االختبار والتقيـيم إجراءتداخل مثل هذه العوامل مع الملوحة يؤدي الى صعوبة ووالمناخ

التقنيـات المختلفـة اسـتعملت وقـد . 1977)خرون ، أو ( Flowers ملوفهم ميكانيكية التح

1995خـضر ، ( لزراعة األنسجة النباتية في اختبارات التحمل للملوحة منها زراعة الكـالس

:Caboni 2003خرون ، أ و: Hossain شـلش ( و زراعة البراعم ) 2007خرون ، وأ

،1999 : Mohamed ، 2002: Shibli ( ومزارع المعلقات الخلوية ) 2007خرون ، وأ

He (والبادرات ) 2009خرون ، أ وDemir وقد اتضح مـن خـالل . )2002خرون ، أ و

في عمليـات ملح كلوريد الصوديوم هو األكثر استعماال إنتتبع الدراسات منذ أواسط السبعينات

ت العديـد مـن لحيث استعم .م الحي اختبار تحمل النباتات المدروسة للملوحة في خارج الجس

10

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 32: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

في المـزارع والمتمثلة بمؤشرات النمو االختبارالمؤشرات المرتبطة بتحمل الملوحة في عملية

وأيونـات الـصوديوم والكلوريـد المواد المنظمة لالزموزيـة ومحتويات األنسجة من النسيجية

راسات الى امكانية استخدام الزراعة وقد اشارت نتائج العديد من الد .والبوتاسيوم والعالقة بينها

خارج الجسم الحي في اختبارات تقييم تحمل اصناف العنب للملوحة لـسرعة الحـصول علـى

النتائج والسيطرة الكاملة على ظروف الزراعة فضال عـن الحـصول علـى نتـائج مـشابهة

: 1999 وEris ،1997 وSivritepe : 1993، واخـرون (Bavaresco لالختبارات الحقليـة

Troncoso 1999، وآخرون : Singh 2000 ، آخـرون وb : Cavagnaro آخـرون و ،

2006( .

تأثير الملوحة في نمو المزارع النسيجية 1-3-2

حول تأثير الملوحة في معدل ونسبة التضاعف ان اسـتعمال التي أجريت بينت الدراسات

ـ ل ع خارج الجسم الحي بشك قد خفضهما NaClملح األوسـاط يام بزيادة التراكيز الملحيـة ف

0 -100 بتراكی ز NaClت أثیر مل ح )Skene)1981 و Barlassفقد درس . المستعملة الغذائية

العنـب عديـدة مـن النامية في أصنافملي مول في تحفیز الفروع العرضیة من زروعات القم م

ملي 5إضافة عندتأثر التضاعف خارج الجسم الحي فوجدا عدم فياألوربي واألصناف الهجينة

ملي مول من الملح الى تثبيط نمو الزروعـات وأن 50مول الى الوسط الغذائي بينما أدى إضافة

إن ) Mowbray) 1984و Krulوذكـر . نمو األصناف أكثر قوة مما هو عليه في الهجن

Vitisاألوربـي تضاعف الفروع الناتج عن زراعة أطراف األفرع خارج الجسم الحي للعنـب

vinifera إضافة ملح واألصناف الهجينة قد ثبط عندNaCl ملي مول 50 ~( %30. بنسبة (

. المزروعـة فيه MS الى الوسط الغذائي

11

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 33: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

صنف مـن أصـناف 11دراستهم لتقييم تحمل عند ) 1999( وآخرون Troncosoوجد

85 ، 50 ، 0سيجية بـالتراكيز خارج الجسم الحي عند تعريض زروعاته الن NaClالعنب لملح

للزروعات المتمثلة في نسبة بقاء الزروعات علـى نمو، تأثر صفات ال مول ملي 155 و 120،

فـي NaClقيد الحياة وطول األفرع المتكونة وعدد البراعم التي تحملها األفرع مع زيادة تركيز

تقييم تحمل ثالثة اصناف من في دراستهما ل )Eris) 1999 و Sivritepe وأفاد. الوسط الغذائي

للملوحـة خـارج الجـسم الحـي ) Sultani Cekirdeksiz و Muskule و Cavus(العنب

و NaCl )~ 0 % 1و 750, و500, و250, و 0بتراكيـز MS بتضمين وسط التـضاعف

النـسبة إن التراكيز العالية من الملح أدت الى خفـض و ) ملي مول 172 و 129 و 86 و 43

لبقاء الزروعات على قيد الحياة وعدد األفرع المتكونة وأطوالها وعدد األوراق وأوزانها المئوية

عـد الطرية والجافة وقد تباينت األصناف فيما بينها في درجة تضررها وتحملها للملوحـة ، إذ

. للملح من الصنفين اآلخرين األكثر تحمالCavusالصنف

أصـناف مـن 6 زراعة القمم النامية لـ موااستخد فقد)2000a( وآخرون Singh أما

الذي جهـز فـي وسـط التـضاعف عنـد NaClخارج الجسم الحي لتقييم تحملها لملح العنب

مول ملي175 قد تحمل Perletteلصنفامول اذ وجدوا ان ملي200 الى 0المستويات من

مـول ملي150ى حد اللذان تحمال الBeauty Seedless و Pusa Seedlessلصنفان ايليه

أصـناف مـن 8 عند زراعتهم العقد ذات البرعمين لــ )2000b(وآخرون Singh وجدو .

ان NaClمـن ملـح ) ملـي مـول 200 – 50(العنب في وسط التضاعف المجهز بتراكيز

هو أكثر األصناف المدروسة تحمال للملوحة عنـد التركيـز Thompson Seedlessالصنف

. ملي مول 125

12

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 34: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

من ملـح تراكيز إضافة دراستهما تأثير عند)Ayyoubi) 2004 وCharbaji وجد و

NaCl ) 0 ، 10 ، 20 ، 30 ، 40 ، 80 ،120 ، 150 الـى الوسـط الغـذائي ) مـول ملي

أن Choudeiry و Kassofee و Helwani و Ashlameshألربعة أصـناف مـن العنـب

وقـد ، مع زيادة تركيز الملح األفرع البقاء ونمو نسبة في سلبا بشكل واضح الملوحة قد أثرت

و 10(زيـادة أطـوال األفـرع وعـدد األوراق معنويـا فـي التراكيـز المنخفـضة االحظ

لألصـناف فـي طـول األفـرع ملي مول خفـضا 150في حين سبب التركيز ) ملي مول 30

وآخـرون Cavagnaroحـين توصـل في . Kassofee باستثناء الصنف جميعهاالمدروسة

Torrontes وCereza و Criolla Chicaعنـد مقارنتـه األصـناف األرجنتينيـة ) 2006(

Riiojanoو Pedro Gimene وأصــناف العنــب األوربــيMalbec و Cabernet

Sauvignon و Chardonnayفي مدى تحملها لملح NaCl الى تفوق االصـناف االرجنتينيـة

النمو ونسبة البقاء وطول االفرع المتكونـة وأعـدادها وعـدد األوراق عنـد يفعلى االوربية

. التراكيز العالية

فرع من الكلوروفيل في محتوى االالملوحةتأثير 2-3-2

محتـوى األفـرع الملحـي فـي اإلجهادتأثير ) 1999( وآخرون Troncoso درس

0مـن ( NaCl ملـح بتراكيز من النامية في وسط تضاعف مجهز من الكلوروفيلالمتضاعفة

فـي كمية الكلوروفيل الكلي في انخفاضاوجد ان هناك و ، من العنب الصناف عديدة % )1الى

.األصناف المدروسـة لملح كلوريد الصوديوم التي اختلفت تبعا الختالف استجابته عند تعرضه

مل ثالثة أصناف من العنب عند اختبارهما تح )Eris) 1999 و Sivritepe أكدهانفسها والنتيجة

انخفاضا فـي )Ayyoubi) 2004 و Charbaji أظهرت نتائج دراســة و خارج الجسم الحي

13

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 35: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

120 و80كيـز امحتوى أفرع أربعة أصناف من العنب نامية في الوسط الغـذائي المجهـز بتر

علـى )2007( واخـرون Erturkكما حصل كـل . من الكلوروفيل NaCl ملي مول 150و

خارج الجسم الحي في وسـط Gisela 5 عند زراعة براعم اصل الكرز الحلو نفسهااالستجابة

. NaCl مجهز بتراكيز عالية من ملح

بعض المركبات العضوية من فرع في محتوى اال الملحيتأثير االجهاد 3-3-2

سكريات الذائبة من الفرع في محتوى االالملوحةتأثير 1-3-3-2

ذي يحتاجه النبات للتكيـف والـدفاع لرئيسي للطاقة والكاربون ال المصدر ا ي ه ياتالسكر

ونوعيتهـا ربوهيـدرات ا إذ يحدث الشد تغيرا كبيرا في كمية الك ، االجهاداتعن نفسه من تأثير

إنتـاج في األساسيقلل من عملية البناء الضوئي وهذه العملية هي فاإلجهاد الموجودة في النبات

ـ لإلجهادظ تحول النشا الى سكريات بسيطة عند تعرض النبات وقد لوح .ربوهيدرات االك دواع

السكريات الذائبة تزيد من الجهد االزموزي للنبات اذ إن ، ههذا التغير احد الوسائل الدفاعية ضد

م العمليات االزموزية عنـدما تكـون انتظاوقد لوحظ ) Levitt ، 1980( سالبية أكثر تجعله أي

) .Bray ، 1993( والجزيئات الصغيرة األغشيةيد النشاط وتحمي السكريات ذائبة مما يز

البروتينات الذائبة من فرع في محتوى االالملوحةتأثير 2-3-3-2 عند تعريض الزروعات النسيجية لنبـات ) Chellapan) 1998 و Venkatesanالحظ

لبروتينات الذائبـة زيادة في اNaCl لتراكيز مختلفة من ملح Ipomoea pe-capraeاأليبوميا

عنـد ) 2002( وآخـرون Demirووجد . ملي مول 200في األنسجة بزيادة تركيز الملح عن

NaCl ملي مول 150تنميتهم بادرات الفاصوليا خارج الجسم الحي في وسط غذائي مزود بـ

. الى زيادة محتوى أفرعها من البروتين

14

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 36: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

ن الطماطة النامية خارج الجسم الحـي فـي فقد وجدوا إ ) 2007( وآخرون Amini أما

يوم من التعرض للملـح 24 بعد NaCl ملي مول 160 و 120 و 80 و 40وسط مجهز بتراكيز

75 و 62 و 46 و 38 و 30 بروتينـات ذات أوزان جزيئيـة 5قد أظهرت تحفيز ماال يقل عن

ارع النـسيجية في المـز ) Debnath ) 2008في حين الحظ . كيلو دالتن في أوراقها وجذورها

المعرضة للملوحة انخفاض البروتين مع زيادة إنتاج البرولين فـي Bacopa monnieriلنبات

.هذه المزارع

من البرولينفرع في محتوى االالملوحةتأثير 3-3-3-2 امينية من ضـمنها حـامض البـرولين أحماضاينتج لإلجهاد الملحي تعرض النبات عند

Proline ة بشكل اكبـر مـن األحمـاض البيئيجهاداتركيزه عند تعرض النبات لال الذي يزداد ت

ومـدة التعـرض لـه اإلجهـاد النباتية مع مقـدار األنسجةوتتناسب كميته في االمينية األخرى

)Ashraf و Foolad ، 2007( هـو األخـرى االمينيـة األحماضوان أهم ما يميزه عن بقية

هذه المجموعة تكون حرة وغير مرتبطة فـي إن، إذ طة ثانوية مرتب أميناحتواؤه على مجموعة

. )1987 ، والحكيمداللي( عدا البرولين األخرى االمينية األحماضجميع

وآخـرون ، Rudulier( مهم في التنظيم االزموزي لخاليا تلـك النباتـات اثر الذي له

موزيـة بـين أشارت بعض البحوث والدراسات الى تأثير البرولين فـي تعـديل االز و )1984

الوكذلك وجد بأنـه يعمـل عـام . )Verma ، 1993 و Delauney(السايتوبالزم والفجوات

. )1994 وآخرون ، Solomen (لإلنزيمات Protective ئياوقا

الفـروع محتـوى الملحـي فـي اإلجهـاد حول تأثير ) 1996(وفي دراسة لـ حمد

على وسـط (Musa SP) الموز من اصناف لصنفين المتضاعفة الناتجة من زراعة القمم النامية

15

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 37: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

MS المجهز بمستويات مختلفة من ملح NaCl الحـظ وجـود من البرولين خارج الجسم الحي

فروق معنوية بين الصنف المتقزم والطويل إذ تفوق الصنف المتقزم على الطويـل فـي تحمـل

. اء المزروعـة في االنسجة ومعدل التضاعف لالجـز العالي الملوحة من خالل تركيز البرولين

في الوسط الغذائي أدت الى زيـادة كميـة NaClان زيادة تركيز ملح ) 2001(وجدت عثمان و

لـصنفين مـن القمم الناميـة أنصافالحامض االميني البرولين في الفروع الناتجة عن زراعة

.الموز

من كاليسين بيتايين فرع في محتوى االالملوحةتأثير 4-3-3-2

يتجمع بمـستويات عاليـة N,N,N-trimethylglycine )(كاليسين بيتايين عبارة عن

وقد لوحظ ) Hanson ، 1993 و Rhodes( في العديد من األنواع النباتية المتحملة للملوحة

يا واإلنزيمات الداخلة في تصنيعه ترتفع عنـد تعـرض ان مستوياته والمواد األساس لتخليقه حيو

في نقل الصوديوم من السايتوبالزم إلـى الفجـوة اثراالنبات لإلجهاد الملحي ، اذ اقترح بان له

Zhangفقـد أشـار . )2003 وآخـرون ، Kumar(والمحافظة على األغـشية الخلويـة

لملـح كلوريـد Populus euphraticaعند تعريضه لكالس القوغ الفراتي )2004(وآخرون

.المستعمل الصوديوم إلى تجمع الكاليسين بيتايين مع زيادة تركيز الملح

16

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 38: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

إنزيم البيروكسيديز فعالية في الملوحةتأثير 4-3-2

من الممكن ان salt stress أكدت العديد من الدراسات العلمية على إن اإلجهاد الملحي

سبب عند المستويات العالية من األمالح ضررا لنمو النبات وتطوره ، إذ تتمثل هذه اإلضـرار ي

بتأثير األمالح في الحالة الفسيولوجية والبايوكيميائية لنمو النبات عن طريق تـأثيره فـي زيـادة

، Karim(يونات داخل الخليـة أليوني والتأثير السمي ل األاإلجهاد االزموزي واختالل التوازن

ــة اإلجهــاد ) . 2007 ــأثيرات الرئيــسية للملوحــة تقــود إلــى اســتحثاث حال إن هــذه الت

خالل تعرض النبات او الخلية للتراكيز العاليـة للملوحـة مـسببة oxidative stressالتأكسدي

في لبيدات وبروتين األغشية الخلوية مؤدية إلـى المـوت المبـرمج للخليـة النباتيـة إضرارا

programmed cell death) Lin الناجم عن تكوين أشكال األوكـسجين ) 2006خرون ،آو

hydroxyl و ,hydrogen peroxideمثـل Reactive Oxygen Species (ROS) الفعالة

radicals و superoxide anions ) Xiong الـضارة لبقـاء الخليـة ) 2002خرون ، آو

للحـامض النـووي ن الملوحة إذ تسبب ضررا والنبات على قيد الحياة تحت المستويات العالية م

DNA والبروتينات والكلوروفيل ووظائف األغشية الـسايتوبالزمية )Zhu ، 2001 ( لـذلك

المتحملة للملوحة يجب إن تمتلك نظام دفاعي بجانب تنظيمها لدخول وحركة االيونـات فالنباتات

ل األوكسجين الفعالة أحداها أنظمة غير والماء متمثلة بنوعين من األنظمة الدفاعية للحد من أشكا

. اإلنزيمي يشترك بالتقليل من هذه األشكال في الخاليافالنظامانزيمية واألخرى إنزيمية

بان التغيـر ) 2003( وآخرون Meloniو ) Srivastava ) 2002 و Sairam الحظ

اد الملحي يختلف فـي لإلجه في استجابته عند تعرضه في فعالية مجاميع إنزيمات البيروكسيديز

) Bazziz )2006 و Khalesوجد و.األصناف المتحملة عنه في األصناف الحساسة للملوحة

17

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 39: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

قد أظهرت فعالية عاليـة Opuntia السالالت المتحملة للملوحة العائدة لنبات التين الشوكي أن

. في هذه اإلنزيمات بالمقارنة مع السالالت الحساسة

زيادة في فعالية إنزيمات البيروكسيديز فـي أوراق ) 2000( وآخرون Harinasut وجد

و Zhang ووجـد . NaClاألفرع المتضاعفة خارج الجسم الحي للتوت في وسط مجهز بملـح

ملي مول في الوسـط الغـذائي لزروعـات 20 بتركيز NaClإن وجود ملح ) 2005(آخرون

ى الـى حـصول زيـادة فـي نـشاط المتحمل للملوحـة قـد أد Zihuabaiصنف البطاطا

وجـد و. األقـل تحمـال للملوحـة Jingshi-2 بشكل أعلى من الـصنف Peroxidaseانزيم

Molassiotis زيادة فعالية انزيم) 2006( و آخرونPeroxidase في افرع التفاح MM106

ــط ــي وس ــضاعفة ف ــح MS المت ــز بمل ــي NaCl المجه ــسم الح ــارج الج . خ

و Peroxidaseزيادة اإلنزيمات المضادة لألكـسدة مثـل ) 2007( وآخرون Erturkوالحظ

catalase وAscorbate peroxidase في أفرع أصل الكرز الحلو Gisela 5 المعرضـة

الحي خارج الجسم NaCl ملي مول 150 و 100 و50لتراكيز

+K+, Cl- , Naمن أيونات فرع في محتوى االالملوحةتأثير 5-3-2

الزراعيـة تحمل أصناف العديـد مـن المحاصـيل ب المتعلقةأوضحت نتائج الدراسات

ة مجهـز غذائية في أوساط المزروعة ألنسجةا خارج الجسم الحي ان محتوى للملوحةوالبستنيه

في NaCl قد ازدادت بزيادة تركيز ملح -Cl والكلوريد+Na من أيونات الصوديوم NaClبملح

فـي -Cl و الكلوريد +Na في مستويات الصوديوم زيادة) 1996(حيث الحظ حمد . الوسط

المجهز بتراكيـز عاليـه مـن MS في وسط التضاعفالمزروعةأنصاف القمم الناميه للموز

18

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 40: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

NaClمع أحتفاظها بمستوى عالي من أيونات البوتاسيوم K+ انخفاضـه عـن على الرغم مـن

الناميـة عند زراعته القمـم )2002( وآخرون )Harb( النتيجةشاطره في هذه و معاملة المقارنة

Myrtus عند زراعته القمم الناميه لليـاس )2002( وآخرون)Hanafy - Ahmed( للموز و

communis الملوحة في أوساط عالية.

في وسط التضاعف NaClان زيادة تركيز ملح ) 1999(وآخرون Troncosoوجدو

أدى الى زيادة تركيز ايوني الصوديوم والكلوريد وانخفاض صنف من أصناف العنب قد 11لـ

في حين وجد. ايونات البوتاسيوم معنويا مع تباين تراكيزها باختالف األصناف المدروسة

Singh 2000( وآخرونa ( العنب في خارج الجسم أصناف من6 لـ الناميةعند زراعته القمم

مول ملي200 و 0 تراوحت بين NaCl عند مستويات من ملح MSالحي في وسط التضاعف

. بزيادة تركيز ملح جميعها قد ازداد في األصناف -Cl و+Na من أيونات الفروع محتوى أن

NaCl Actinidia عند زراعتهما براعم الكيوي )Dimassi )2004 و Sotiropoulos وجد

deliciosa ل ملي مو80 و40 و20 و 10 و0 في وسط غذائي مزود بـNaCl 12 لمدة

ملي مول قد أدى الى حصول زيادة في تجمع ايوني 80 الى 10ن زيادة التركيز من أ عاسبوإ

. ع المتكونةوالصوديوم والكلوريد مترافقة مع انخفاض في تركيز ايونات البوتاسيوم في الفر

ونة المتك.Rubus idaeus Lالى ان افرع الرازبري ) Minas) 2007 و Neocleousوأشار

هرت زيادة في تجمع ظ قد اNaCl ملي مول 20 و 10 و 5في وسط التضاعف المزود بـ

درس و . المستعملايونات الصوديوم والكلوريد داخل انسجتها بزيادة تركيز الملح

Sotiropoulos اح ــمحتوى أفرع أصل التف) 2007( وآخرونM 4 في وسط غذائي مزود

19

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 41: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

ملي مول خارج الجسم الحي من العناصر الغذائية 200 و100 و 35 بتراكيز NaClبملح

والحظوا ارتفاع مستويات الصوديوم والكلوريد وانخفاض ايونات البوتاسيوم مقارنة مع األفرع

غير المعرضة للملوحة

20

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 42: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

.

المواد وطرائق العمل- 3

ع لقــسم البــستنةنفــذت الدراســة فــي مختبــر زراعــة األنــسجة النباتيــة التــاب

في مرحلتين م 2008 و 2007 جامعة الكوفة خالل عامي – كلية الزراعة –وهندسة الحدائق

تضمنت األولى تأسيس المزارع النسيجية ألصناف العنب المحلية قيد الدراسة تبعتها مرحلة ثانية

. خارج الجسم الحي NaClحملها لملح كلوريد الصوديوم درس خاللها ت

صدر الزروعات م1-3

احـدى البـساتين في الدراسة ثالثة أصناف من عنب المائدة المزروعـة فـي استعمل

لتاسـيس الزروعـات االخاصة في قضاء الكوفة وهي شدة سوداء وشدة بيضاء وكمالي مصدر

-:واصفات اآلتية التي تمتاز بالم )1( الشكلالنسيجية

سوداءة شد1-1-3

ينضج في النصف األول من حزيـران فـي المنطقـة إذمن األصناف المبكرة النضج

ذات كتفـين، ، هرمية الـشكل ، يتصف بعناقيد متوسطة الحجم والوزن . الوسطى من العراق

السمك مغطاة حباته سوداء متوسطة الحجم مستديرة الشكل متراصة بالعنقود ذات قشره متوسطة

. )2000السعيدي ، (أوراقه خماسية التفصص وبصورة عميقة و كثيفة ة شمعيةبطبق

21

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 43: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

بيضاءة شد2-1-3

من األصناف المبكرة النضج اذ ينضج في النصف الثاني من حزيـران فـي المنطقـة

، تـشبه الـشده الـسوداء . الوسطى والنصف األول من تموز في المنطقة الشمالية من العراق

. ) 2000 ،السعيدي( الحجم بيضاء اللونيرة متوسطة الى كبعناقيدها ذات حبات كروية الشكل

كمالي 3-1-3

من األصناف المتأخرة النضج اذ ينضج في نهاية شهر آب وبداية أيلول فـي المنطقـة

يتصف بعناقيد كبيرة الحجـم مخروطيـة . حسب الظروف البيئية للمنطقة بالوسطى من العراق

الحبـات . لشكل تقريبا مجنحة وحامل العنقود طويل ، يتجاوز وزن العنقود كيلـوغرام أحيانـا ا

بنفسجي عنـد تمـام –وهي كبيرة بيضوية متطاولة ذات لون وردي نصف متخلخلة بالعنقود

األزهار خنثى مؤنثـة وظيفيـا ذات أسـديه . النضج ذات قشرة رقيقة ولب لحمي جيد التماسك

األوراق خماسـية التفـصص . يحتاج الى صنف ملقح عند زراعتـه لكارج لذ منحنية الى الخ

سطحها العلوي أملس واألسفل ذو زغب كثيف ، وقمة النموات ذات لون ارجواني ولون األفرع

قوي النمو يمكن ان تبقى عناقيده علـى و ، الخضرية بنفسجي وهو من األصناف المرغوبة جدا

. )2000 والسعيدي ، 1992 الدجيلي ، (ف الكرمات حتى كانون األول دون تل

22

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 44: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

و ب أصناف العنب في مرحلة النمو الثمري حيث يمثل أ الصنف شدة سوداء )1( شكل . و ج الصنف كمالي الصنف شدة بيضاء

أ

ب

ج

23

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 45: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

للعنبتأسیس المزارع النسیجیة 2.3

بهدف تنفيذ التجربة الخاصة بتحمل أصناف العنب قيد الدراسة لملح كلوريد الـصوديوم

NaCl من اختيـار الجـزء خارج الجسم الحي ، تم أوال تأسيس المزارع النسيجية للعنب ابتداء

بالحصول على األفـرع الخـضرية وانتهاء وتعقيمه مرورا بتنشئة الزروعات Explantالنباتي

: التي شملت )2( الشكلالكافية لتنفيذ هذه التجربة

Initiation stage مرحلة النشوء 1-2-3

اختیار الجزء النباتي ومصدره 1-1-2-3

من ( سنة نامية في الحقل 10ات بعمر سم من كرم 10 - 20جمعت فروع غضة بطول

، وفي غرفة التحضير بمختبـر لألصناف المذكورة آنفا ) احد البساتين الخاصة في مدينة الكوفة

بطول ( ثم قطعت الى قطع صغيرة زراعة األنسجة أزيل عنها أطرافها وجميع األوراق

غسلت هـذه بعد ذلك single node لتصبح كل قطعة حاوية على عقدة واحدة) سم2.5 - 2.0

ثم غسلت بمـاء إلزالة األتربة واألوساخ العالقة بها لمرات عديدة العقد بالماء والصابون السائل

وضعها في محلول مانع لألكـسدة مؤلـف مـن ومن ثم ، دقيقة 20 - 30 الحنفية الجاري لمدة

لتر حـامض الـستريك / ملغمAscorbic acid + 150لتر حامض االسكوربيك / ملغم 100

Citric acid نقلت إلـى ، بعدها في الزراعةالمستعمل للتخلص من االفرازات الفينولية للنسيج

. التعقيم السطحي إلجراء عملية) Laminar Air Flow Cabinet(كابينة الهواء الطبقي

24

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 46: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

يتحضير الوسط الغذائ 2-1-2-3

1

3 4

5 6

2

ابتداء من اختيـار للعنب ) انتاج االفرع الخضرية (خطوات تاسيس المزارع النسيجية : )2(شكل صـورة (وتعقيمه مرورا بمرحلة تنشئة الزروعـات ) 1 رقمدة مفردة صورة عق(الجزء النباتي

) 6 رقمالى 3 رقمالصور من( وصوال الى مرحلة تضاعف األفرع الخضرية ) 2 رقم

25

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 47: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

وقد اتبـع )MS) , 1962 medium Murashige & Skoogاستعمل الوسط الغذائي

هــل مضافا )2( جدولالفي تحضيره سحب الكميات المطلوبة من محاليل األساس المعدة مسبقا

والفتيامينات وأكمل الحجم إلى لتر بالماء المقطر مرتين ثم عدل رقـم الدالـة ) غم30 ( السكروز

او محلـول )HCl( بمحلول من حـامض الهيـدروكلوريك 0.1 ± 5.7إلى ) pH (الهيدروجينية

غـرام 7بمقدار (Agar-Agar) عياري ثم أضيف اآلجار NaOH( 0.1(هيدروكسيد الصوديوم

Hot plate magneticلتر وضع الوسط بعد ذلك على جهاز الخلط المغناطيـسي الحـراري /

stirrer في أنابيب الزراعة سـعة مباشرة ي ثم صب الوسط إلذابة اآلجار وتجانس الوسط الغذائ

)24 X 150 قطنية من الداخل وغلفـت أنبوب وأغلقت فوهة األنابيب بسدادة / مل 10بواقع ) مل م

على درجة حـرارة )Autoclave(فوهة األنبوبة من الخارج برقائق ألمنيوم وعقمت في المعقام

بعدها أخرجت األنابيب وتركت لتبرد . دقيقة 20 لمدة 2سم/ كغم 1.04 وضغط مقداره م121°

. ويتصلب الوسط في درجة حرارة الغرفة

26

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 48: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

MS المكونات الكيميائية الداخلة في تحضير محاليل األساس لوسط )2(جدول

تحضیر

لتر

یسحب

لترملي

لصیغة الكیمائیة لتر/ م مكونات المحالیل

األمالح المعدنیة: أوال

1ساس رقم محلول األ

16.5 NH4NO3 نترات األمونیوم

100

19.0 KNO3 نترات البوتاسیوم

37.0

MgSO4.7H2O

2محلول األساس رقم

كبریتات المغنیسیوم المائیة

2.23 MnSO4.4H2O كبریتات المنغنیز المائیة

0.86 ZnSO4.7H2O كبریتات الزنك المائیة

10

0.0025 CuSO4.5H2O

حاس المائیةكبریتات الن 3محلول األساس رقم

44.0 aCl2.2H2O

كلورید الكالسیوم المائي

0.083 KI یودید البوتاسیوم

10

0.0025 CoCl2.6H2O كلورید الكوبلت المائي

27

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 49: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

7.0

KH2PO4

4محلول األساس رقم

فـوسفات الـبوتاسیوم ثنائیة

الھـیدروجـین

0.62 H3BO3 0 حامض البوریك

0.025 Na2MoO4.2H2O مولبیدات الصودیوم المائیة

2.785

FeSO4.7H2O

5محلول األساس رقم

كبریتات الحدیدوز المائیة

10

3.725 Na2,EDTA

على ھیئة(المادة المخلبیة

)لح ثنائي الصودیوم

مل100/غم

المكونات العضویة:ثانیا

0 1.0 6H12O6 اینوسیتول- میو

.0 0.01

12H17ClN4OS.HCl الثیامین

.0 0.05

8H11NO3.HCl بیریدوكسین

.0 0.05 C6H5NO2 حامض النیكوتینیك

.0 .2 C2H5NO2 جالیسین

28

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 50: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

تعقيم األجزاء النباتية 3 -2-1 -3

خل كابينة أنـسياب الهـواء الطبقـي دا) العقدة المفردة (تم تعقيم األجزاء النباتية للعنب

القاصـر التجـاري نـوع %(1بتركيـز ) NaOCl(ول هايبوكلورات الصوديوم بتغطيسها بمحل

Clorox دقيقة ، ثم غسلت ثالث مرات بالماء المقطر المعقم مدة 15لمدة %) 5.25 تركيزالكلور

) . 2005( وآخرون Poudel دقائق في كل مرة للتخلص من أثار المادة المعقمة 5

) Single node قد المفردةالع(زراعة األجزاء النباتية 4-1-2-3

) 3-2-1-3 ( وفق الفقرة على في كابينة انسياب الهواء الطبقي وبعد تعقيم األجزاء النباتية

والسفلية للـتخلص في طبق بتري معقم وأزيلت نهاياتها العلوية المعقمة وضعت األجزاء النباتية

وأصبح طول العقـدة ( ء النباتيمن آثار المادة المعقمة التي ربما تكون قد تسربت إلى داخل الجز

حـضنت الزروعـات فـي زرعت كل عقدة مفردة في أنبوبة اختبار ، ) سم تقريبا 1المفردة

ساعة 16 لوكس لمدة 1000 إضاءة وشدة مº2±25 يوما عند درجة حرارة 21غرفة النمو لمدة

. ساعات ظالم يوميا8تعقبها

)ريةانتاج االفرع الخض( مرحلة التضاعف2-2-3

على أعـداد كبيـرة مـن للحصول مرحلة النشوء منبهدف مضاعفة الزروعات الناتجة

لتـر / BA ملغـم 2 مزود بــ MSالفروع جرى تقطيع النموات الناتجة وزراعتها في وسط

زجاجيـة سـعة قنـاني أذ زرعت في ) 2000b ( وآخرون Singh لتر / NAA ملغم 0.1+

حضنت الزروعـات و أجزاء نباتية 3ع في كل قنينة زر MS وسط 3 سم 30 تحوي 3 سم 250

)4-1-2-3( يوم تحت نفس الظروف البيئية المشار إليهـا فـي الفقـرة 45في غرفة النمو لمدة

. عديدةالى افرع خضرية النموات المزروعة بالنمو والتطور والتضاعف فبدأت

29

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 51: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

في مرحلة NaCl لملح لألصناف المدروسة م تحمل المزارع النسيجية يتقي 3 -3

التضاعف

وآخـرون Singh اورده وفق مـا على double nodeأخذت عقل دقيقة ذات برعمين

(2000b) ملغم 2 بـ المزود فـ لكل صنف وزرعت في وسط التضاع المزرعة النسيجية من

BA / ملغم 0.1+ لتر NAA /3( الشكل لتر(.

خــالل Double node microcuttingدقيقــة ذات البــرعمين العقلــة ال : )3( شــكل

)ب ( MSو بعد زراعتها في وسط التضاعف ) أ ( تحضيرها

0 , 75 , 100 , 125 , 150 ,175,(بعد إضافة ملح كلوريد الصوديوم للوسط الغذائي بمستويات

ي كل تركيز ملحي حيث زرعتلكل صنف ف) راكرت(ةــ عقل25وبواقع ) لتر / مول ملي200

مل من الوسط وحضنت 10تحتوي على ) ملم x 24 150 (عقلة واحدة في أنبوبة اختبار قياس

بعـد انتهـاء مـدة . )4-1-2-3(أربعة أسابيع عند الظروف البيئية المشار اليها في الفقـرة لمدة

ملي مـول الـذي أسـتبعد 200لكافة التراكيز باستثناء تركيز اآلتيةالتحضين تم قياس الصفات

. بسبب موت أفرع جميع أصناف العنب قيد الدراسة

ب أ

30

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 52: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

للمزارع النسيجية ومن صفات ال1-3-3

النسبة المئوية لبقاء الزروعات على قيد الحياة 1-1-3-3

التعريض مدة النسبة المئوية للزروعات المستمرة في الحياة في نهاية أساسحسبت على

: وفق المعادلة االتيةعلى NaClللتراكيز المختلفة من ملح

x 100ـــــــــــــــــــــــ = النسبة المئوية لبقاء الزروعات

درجة تضرر الزروعات2-1-3-3

الذي تنحصر )Eris ) 1999 و Sivritepe المقترح من قبل على وفق المقياس حسبت

فـي NaClلحالة الزروعات المعرضة للتراكيز المختلفة من ملـح ) درجة 3 و 0(رجاته بين د

التـي نهاية مدة التحضين وعلى أساس إعطاء الدرجة المقابلة لكل حالة مـن الحـاالت االتيـة

) .4(توضحها الصور المدرجة في الشكل

العدد الكلي لألجزاء النباتية المزروعة اةعدد األجزاء النباتية المستمرة في الحي

ى قيد الحياةعل

31

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 53: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

يبين حاالت تضرر الزروعات ) 4 (شكل

الزروعات سليمة= أ على هيئة تلون برونزي مسمر وجود ضررعلى الزروعات في قمة افرعها او حافة اوراقها=ب

او اجزاء اخرى من االفرع المتضاعفةفي الورقةاثار احتراق وجود = جالموت الكامل للزروعات = د

درجة التضرر حالة الزروعات

0 يهاالزروعات سليمة التوجد أضرار عل

وجود ضررعلى الزروعات في قمة افرعها او حافة اوراقها

على هيئة تلون برونزي مسمر1

او اجزاء اخرى مـن االفـرع في الورقةاثار احتراق وجود

المتضاعفة2

3 الموت الكامل للزروعات

د ج ب أ

32

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 54: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

3-3-1 -3 )الجزء النباتي المزروع/ األفرععدد (معدل التضاعف

فأكثر عقد 3 التي تحمل األفرعمعدل عدد 4-1-3-3

)ملم( الجزء النباتي المزروع/ األفرعمعدل طول 1-3-3 -5

الفرع/معدل عدد األوراق 1-3-3 -6

)ملغم (الوزن الطري لألفرع المتضاعفة 1-3-3 -7

)ملغم( الوزن الجاف لألفرع المتضاعفة 1-3-3 -8

ات البايوكيميائية للمزارع النسيجية الصف 3-3 -2

تقدير الكلوروفيل الكلي1-2-3-3

لألفـرع غم من النمـوذج الطـري 1 وذلك بأخذ األفرعتم تقدير الكلوروفيل الكلي في

ثـم عـزل مرتين وسحق النسيج بهاون خزفي 85% مل من االسيتون تركيز 20وأضيف لها

وتـرك الراسـب اخـذ الراشـح . نباتي باستعمال ورق ترشيح محلول الصبغات عن النسيج ال

) Goodwin ،1976( . استعمل جهـاز UV-visible Spectrophotometer فـي مختبـر

جامعة الكوفـة ، لقيـاس االمتـصاص الـضوئي لـصبغة -الدراسات العليا في كلية الزراعة

تر ثـم حـسبت كميـة الـصبغة نانومي 663 و 645الكلوروفيل الكلي على طولين موجيين هما

:بتطبيق المعادلة اآلتية) ريغم نسيج نباتي ط100/ملغم صبغة(

Total chlorophyll=20.2 x D(645) +8.02 x D(663)(V/W x1000) x 100

:حيث ان

D(663) =نانوميتر663قراءة االمتصاص الضوئي بطول موجي

D(645)= نوميتر نا645قراءة االمتصاص الضوئي بطول موجي

33

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 55: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

V=مل20( الحجم النهائي للمستخلص (

W= غم1(وزن النسيج النباتي(

كمية السكريات الذائبة2-2-3-3

من األفرع المعرضة جافغرام وزن مل 250تم استخالص السكريات الذائبة وذلك بأخذ

ي مل ماء مقطر خال 10 وهرست جيدا في جفنة خزفية باضافة NaClللمستويات المختلفة لملح

1500من األيونات وبعد تجانس الخليط تم نبذه مركزيـا بجهـاز النبـذ المركـزي بـسرعة

مل بالماء المقطر الخالي مـن 10 دقائق ثم أخذ الراشح واكمل حجمه الى 10دقيقة ولمدة /دورة

مـل 5و ) حجـم /وزن(%5 مل من كاشف الفينـول 1 مل منه واضيف له 1أخذ . األيونات

لمدة م° 35-25ركز ومزجت جيدا وحضنت في حمام مائي بدرجة حرارة حامض الكبريتيك الم

دقيقة ثم تم تقدير السكريات الذائبة بقياس شدة اللون الناتج بواسطة جهاز المطياف الـضوئي 30

نانوميتر وتم مقارنتها مع تراكيز المنحنى القياسي للكلوكوز الـذي تـم 488عند الطول الموجي

ثافة الضوئية لتراكيز مختلفة من الكلوكـوز النقـي بواسـطة جهـاز رسمه من خالل قياس الك

. )1971ن ، وآخروHerbert(الطول الموجي أعاله وباف الضوئي ـالمطي

3-2-3-3

1951) ، واخ رون Lowry( طريقـة باسـتعمال قدرت كمية البروتينات الذائبة الكلية

: حيث حضرت أوال المحاليل اآلتية ) 2001،عثمان (قبل منالمستعمله

34

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 56: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

:ينتتحضير المنحنى القياسي للبرو 1-3-2-3-3

ـ 10ين اذيب تى القياسي للبرو نحضير المنح تل دم البقـري ملغم من مـصل البـومين ال

)BSA ( Bovine Serum Albumin مل ماء مقطر لتحـضير المحلـول األسـاس 100 في

: للبروتين ومنه تم تحضير تراكيز المنحنى القياسي للبروتين الموضحة كاالتي

)مل/ ميكروغرام (التركيز )مل(الماء المقطر )مل(المحلول االساس

1 4 20

2 3 40

3 2 60

4 1 80

1 - 100

الكمية المكونات المحلول

Na2CO3 كربونات صوديوم )أ(محلول NaOH( هيدروكسيد صوديوم(0.1m

غم 2.0 غم 0.4

مل ماء مقطر 100 تذابان في

CuS04. 5H2O كبريتات نحاس )ب(محلول

يومرطرات صود

.مل ماء مقطر 100/غم 0.5

.مل ماء مقطر 100/غم 0.1 منهما حجمان متساويانيمزج

)ب(للحصول على محلول

)أ(محلول )ج(محلول )ب(محلول

مل 50 مل 1

35

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 57: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

5 مل من هذه التراكيز كل على حدة وأضيف إليهـا 1وقد رسم المنحنى القياسي للبروتين بأخذ

0.5 دقائق ثم أضـيف 10ومزجا جيدا ثم ترك المزيج في مكان مظلم لمدة ) ج(مل من محلول

دقيقة بدرجة حرارة الغرفة بعد ذلـك حـددت شـدة 30 وترك لمدة Folinمل من كاشف فولن

جهاز المطياف الضوئي عند طول موجي استعمالاتج بقياس الكثافة الضوئية من خالل اللون الن

. نانوميتر 600

استخالص البروتين الكلي وتقديره2-3-2-3-3

مـل 15 وسحقت في الجفنة الخزفية بإضـافة المجففةاخذ واحد غرام من العينة النباتية

Trichloro Acetic Acid) %5 (TCA دقيقة لمدة / دورة 1000 عند سرعة ثم نبذت مركزيا

ثـم ، في كل مرةفنبذ TCA 5% مرات في محلول 3 دقيقة وسكب الراشح وغسل الراسب 15

24ومزج وترك ليـستقر لمـدة ) عياري NaOH ) 1أضيف للراسب هيدروكسيد الصوديوم

مـل 15الى دقيقة واخذ الراشح وأكمل 15ساعة وفي درجة حرارة الغرفة ثم نبذ مركزيا لمدة

مل مـن 5 مل منه وأضيف اليه 1اخذ ) . عياري 1( باستعمال محلول هيدروكسيد الصوديوم

مل مـن 0 .5المزيج في مكان مظلم لمدة عشر دقائق ثم أضيف ومزجا جيدا وترك ) ج(محلول

الغرفة ثم حددت شـدة اللـون بقيـاس دقيقة بدرجة حرارة 30 وترك لمدة Folinكاشف فولن

. نانوميتر 600 جهاز المطياف الضوئي عند طول استعمال الضوئية من خالل الكثافة

دير الحامض االميني برولينتق 4-2-3-3

برولين في األفرع المزروعـة فـي األوسـاط المجهـزة حامض االميني قدرت كمية ال

ملغـم مـن الـوزن 250إذ أخذ وزن (1973) وآخرون Bates بحسب طريقة NaClبالـ

المحـضر [ 3 %ألفرع وسحق بالجفنة الخزفية بعد إضافة حامض سلفوسالسليك تركيز الجاف ل

36

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 58: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

فتحول لون المحلـول الـى األصـفر الفـاتح ]مل ماء مقطر 100في من الحامض غم3 بإذابة

ثم نبذ المـزيج بجهـاز ) إلعطاء فرصه للحامض إلذابة النموذج النباتي ( وترك مدة من الزمن

مل من الراشح الذي تـم 2سحب . دقيقة لمدة عشرة دقائق /دورة 2000 الطرد المركزي على

مـل مـن محلـول 2مل من حامض الخليـك الثلجـي و 2 وأضيف إليه ،فصله بالنبذ المركزي

مل من حـامض 30 غرام من ننهايدرين مع 1.25الذي حضر بمزج ( ninhydrinننهايدرين

وترك المزيج على الحـرارة لمـدة ) ي موالر6( مل من حامض الفسفوريك 20الخليك الثلجي و

ثم وضعت األنابيب في ، ) دقيقه مع التحريك المستمر حتى الذوبان وظهور اللون األصفر 2-1

ظهور اللون األحمر وبدرجات متباينـة فبدأم لمدة نصف ساعة ° 100حمام مائي بدرجة حرارة

وبعد ذلك تـم فـصل الطبقـة ، حسب تركيز البرولين في العينة ثم تركت لتبرد بمن هذا اللون

التولـوين بعـد اللون بالصعود الى طبقة فبدأ Tolueneتولوين مادة مل من 5الحمراء بإضافة

ثم قيـست شـدة ، )الحاوية على البرولين ( مل من هذه الطبقة الملونة 3 ثم سحب ، مدة مناسبة

لمـوجي اند الطول ع Spectrophotometerبجهاز المطياف الضوئي ) الكثافة الضوئية (اللون

وتمت مقارنة هذه القراءات مـع المنحنـى . ة نانوميتر وبواقع خمسة مكرارات لكل معامل 520

.القياسي للبرولين النقي

Glycine betaineدير الكاليسين بيتايينتق 5-2-3-3

الموصـوفة مـن قبـل على وفق الطريقـة Glycine betaine بيتايينالكاليسين قيس

Grieve و Gratten ) 1983( من األفرع المتضاعفة بعـد جافغرام وزن مل 250 ، إذ اخذ

مل مـن المـاء المقطـر 20 ووضع في دورق يحوي ، أسابيع من تعرضها لإلجهاد الملحي 4

رشح النمـوذج . م° 25 ساعة عند درجة حرارة 48الخالي من االيونات على جهاز هزاز لمدة

37

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 59: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

مل الـى أنابيـب 0.5نقل . عياري 2 بحامض الكبريتيك )1:1(ه ثم خفف الراشح بنسبة حجمي

مـل مـن كاشـف 2 تبـع ذلـك إضـافة .اختبار وضعت في ثلـج مـدة سـاعة واحـدة

Potassium iodide-iodine ـ ساعة16ومزجت جيدا ثم حفظت األنابيب لمدة ة عنـد درج

عند دقيقة 15دقيقة لمدة / دورة 10000ثم نبذ بجهاز الطرد المركزي المبرد على . م°4 حرارة

تمت قراءة كمية االمتصاص مباشرة في جهاز المطيـاف الـضوئي وقد . الصفر المئوي درجة

رسم المنحنى القياسـي للكاليـسين . عينات لكل معاملة 3 نانوميتر وبواقع 365وبطول موجي

. مل/ مايكروغرام 200 و50بيتايين بتحضير تراكيز تراوحت بين

تقدير فعالية انزيم البيروكسيديز 6-2-3-3

ثم أضـيف ، ثم غسل بالماء المقطر الخالي من االيونات ، ملغم وزن طري 150اخذ

موالر 0.05 مل من محلول التحضين المتكون من المحلول الداريء الفوسفاتي بتركيز 2.5إليه

دقيقـة / دورة12000 ثم نبذ بجهاز الطرد المركزي المبـرد علـى 6ره وبأس هيدروجيني مقدا

Gauiacolميكروليتر لكل من صبغة الكوايكـول 250وأضيف إليه ) م° 4عند درجة حرارة (

مـل مـن 2.5و) حجـم /حجم (0.3% وبتركيز H2O2 وبيروكسيد الهيدروجين 0.5%بتركيز

تمت قراءة كمية االمتصاص مباشرة في جهاز المطياف الضوئي و . المحلول الداريء الفوسفاتي

. عينات لكل معاملة3 وبواقع ) 1988، وآخرونKim( نانوميتر470وبطول موجي

: المعادلة اآلتيةباستعمال حسبت الفعالية اإلنزيمية

ـــــــــــــــــــــــــــ) = غم نموذج/وحدة امتصاص(الفعالية االنزيمية

الحجم المأخوذ للقراءة× ـــــــــ وزن النموذج

حجم االستخالص

الجهازقراءة

38

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 60: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

المتضاعفة من بعض االيوناتاألفرع محتوى تقدير 3-3-3

البوتاسيوم الصوديوم و تركيز 1.3.3.3

وآخـرون Croughan(يقة تم تقدير تركيز ايوني الصوديوم والبوتاسيوم استنادا الى طر

مـل مـن محلـول الهـضم 5 وأضيف لها ، ملغم من األفرع المجففة50 أخذ فقد) 1978 ،

لحين اكتمـال عمليـة م° 180 وهضمت العينات على درجة حرارة ، )حامض النتريك المركز (

وأضيف لها ، لمدة خمس ساعات وبردت العينات م° 370ثم جفف على درجة حرارة ، الهضم

قدر تركيز البوتاسيوم والـصوديوم . نموذج/ مل 22.5ء المقطر الخالي من االيونات بمقدار الما

. عينة لكل مكرر3 استعملFlame photometer . جهاز باستعمال

تركيز ايونات الكلوريد2-3-3-3

تقدير الكلوريد فـي األفـرع التـي فيPratt (1961) و Chapman استخدمت طريقة

، وأضـيف م من العينات المجففة وهضمت جيدا ووضعت في جفنة خزفيةملغ25 تتلخص بأخذ

مل من الماء المقطر الخالي من االيونات 15 ملغم و 6.25 بمقدار )CaO(لها أوكسيد الكالسيوم

ومزجت جيدا ووضع النموذج في حمام رملي الى أن جف ثم نقل الى فرن االحتراق على درجة

مل من المـاء المقطـر الـساخن 15رد النموذج وأضيف له ب . ساعة 2 لمدة م° 550حرارة

الخالي من االيونات ورشح بواسطة ورق ترشيح وغسل الراسب خمس مرات بالمـاء المقطـر

بإضـافة 7-6 مل وعدل رقم الدالة الهيدروجينية للمحلول الـى 100الساخن وأكمل الحجم الى

قطـرات 5أضيفت بعد ذلك .راشح قطرات من حامض الخليك أو هيدروكسيد الصوديوم الى ال

مل من المحلول ووضع في دورق وسحح مـع 10 ثم أخذ 1%من محلول كرومات البوتاسيوم

39

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 61: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

كمية فحسبتحتى تغير لون المحلول الى اللون الوردي )عياريAgNO3) 0.05نترات الفضة

: في التسحيح وقدر الكلوريد من خالل المعادلة التاليةالمستعملةنترات الفضة

عدد مرات التخفيف× = غرام /Clمايكروغرام

تصميم التجربة والتحليل االحصائي للنتائج4-3

تجربة عاملية باستعمال التصميم العـشوائي الكامـل وبعـاملين بوصفها نفذت الدراسة

وتم استعمال نظام التحليـل . )1990ب ، الساهوكي ووهي )( NaClتراكيز ملح xالصنف (

الجـراء Windowsتحت نظام تشغيل الحاسـوب االلـي )SAS 2001(االحصائي الجاهز

وتمت مقارنة المتوسـطات باسـتعمال اختبـار اقـل فـرق معنـوي . التحليالت االحصائية

Least Significant Different ( L.S.D ) ـ 0.05 عند مستوى احتمـال ار الفـروق الختب

. المعنوية بين المتوسطات

عيارية نترات الفضة× ) مل(كمية نترات الفضة حجـم النمـوذج المستعمـل

40

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 62: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

النتائج والمناقشة-4

للمزارع النسيجيةومن صفات ال1-4

لبقاء الزروعات على قيد الحياةةالنسبة المئوي 1-1-4

اظهر الصنف شدة بيضاء تفوقا معنويا على الصنف شدة سوداء وكمـالي فـي النـسبة

(3)الجدولالمئوية لبقاء زروعاتها المعرضة لإلجهاد الملحي خارج الجسم الحي على قيد الحياة

شـدة صنفي العنـب ل % 62.50 و %72.78مقابل % 83.33إذ أعطى أعلى نسبة بقاء بلغت

تتفق هذه النتـائج و ، بتفوق شدة سوداء ب المختلفين فيما بينهما معنويا الترتيسوداء وكمالي على

) 1999(وآخ رون Troncosoو) 1999 و Eris) 1997 و Sivritepe البـاحثون مع مـا وجـده

الذين أجمعوا على اخـتالف )2006( وآخ رون Cavagnaroو ) 2000b( وآخ رون Singhو

لبقاء زروعاتها النسيجية على قيد الحياة عند زراعتها أصناف العنب فيما بينها في النسبة المئوية

تنسجم هذه النتـائج و . في األوساط الغذائية المجهزة بتراكيز مختلفة من ملح كلوريد الصوديوم

فـي ) 1998( وآخ رون Canoو في البطاطـا )Zhang) 1998في إطارها العام مع ما جاء به

و 2003( وآخـرون Vijayanوشجيري في الورد ال )2001( وآخ رون Wahomeوالطماطة

فـي )2008( وآخـرون Mungalaو في التفـاح )2004( الحسين في التوت وعبد )2008

الفستق من حيث اختالف األصناف التابعة لهذه النباتات في النـسبة المئويـة لبقـاء زروعاتهـا

ساط غذائية غنية بملـح على قيد الحياة في نهاية مدة زراعتها في أو) األفرع الخضرية(النسيجية

. كلوريد الصوديوم

41

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 63: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

في النسبة المئوية لبقاءMS المضاف الى الوسط الغذائيNaCl تأثير تركيز ملح )3(جدول .أفرع أصناف العنب على قيد الحياة بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف

الوسط الغذائي)mM(

شـــدة بيضاء

شـــدة سوداء

كمالي تراكيز الملحمعدل

0 100.00 100.00 100.00 100.00 75 100.00 100.00 95.00 98.33

100 100.00 93.33 80.00 91.11 125 93.33 86.67 70.00 83.33 150 86.67 50.00 30.00 55.56 175 20.00 6.67 0.00 8.89

62.50 72.78 83.33 معدل األصناف 16.521 =للتداخل 9.538=للتراكيز 6.745 = لألصناف*)0.05 (م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

إن االختالفات بين أصناف العنب في النسبة المئوية لبقاء زروعاتها على قيد الحياة فـي

ن ا فـالمعروف ثية بين األصناف المدروسة األوساط الملحية يمكن أعزائها الى االختالفات الورا

وقد انعكس ذلـك بـشكل Multiple genes عديدةصفة التحمل للملوحة تتحكم بها موروثات

المختلفة تتباين في قابليتها على إعـادة فاالصناف، واضح في تفاوت هذه النسبة بين األصناف

الجهد االزموزي يلغذائي الجديد ذ للتكيف والتعايش مع الوسط ا تنظيم جهدها االزموزي وسيلة

استمرار الخاليا واألنسجة واألعضاء في النمـو بوتـائر ومن ثم المرتفع بسبب إضافة الملح له

. )Shannon ، 1997: Flowers ،2004 (المستعملحسب الصنف بمختلفة

تإن تجهيز وسط التضاعف بملح كلوريد الصوديوم بالمـستويا 3) ( الج دول ويتبين من

ملي مول قد سبب انخفاضا معنويا في النسبة المئوية لبقاء زروعات العنـب 175 و 150و 125

أسابيع مـن زراعـة 4 وذلك بعد ، ملي مول 100 و75 و 0على قيد الحياة مقارنة بالتراكيز

42

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 64: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

ـ ز مختلفـة مـن ملـح كلوريـد العقل الدقيقة ذات العقدتين في وسط التضاعف المجهز بتراكي

الذي اختلف معنويا عن جميـع التراكيـز ( ملي مول 175وقد أعطى تركيز الملح . مالصوديو

في الوسط الخالي مـن الملـح 100 % مقاب ل 8.89 % اقل نسبة بقاء بلغت ) الملحية األخرى

. )المقارنة(

وتتفق النتائج في إطارها العام واالتجاه السائد لتأثير الملوحة في خفض نسبة البقاء مـع

في المزارع النـسيجية )2006( وآخ رون Cavagnaroو) Eris) 1997 و Sivritepe ما وجده

فــي مـزارع التفــاح النــسيجية )1999(وش لش ) Zimmerman) 1990 وLankesوللعنـب

في مزارع الكمثـرى )2007(وآخرون Ansary-AL و 2006)( وآخرون Sotiropoulos و

انخفاضا في النسبة المئوية للتضاعف والبقاء على قيد الحياة قد لـوحظ مـع فوجدواالنسيجية ،

. المجهز به ح في الوسط الغذائيزيادة تركيز المل

إن انخفاض نسبة الزروعات الباقية على قيد الحياة النـاتج عـن زراعـة األفـرع ذات

العقدتين لألصناف الثالثة مع زيادة تركيز الملح في وسط التضاعف فضال عن موت زروعـات

أثيرات قد يعود الى الت )NaCl ملح ملي مول 200(هذه األصناف عند التراكيز العالية من الملح

عند المستوى الجزيئي لخاليا األنسجة المزروعـة مؤديـا NaClالمباشرة وغير المباشرة لملح

على تركيز الملح المجهز للوسط الغـذائي وعنـد الى انخفاض معدل انقسامها وتوسعها اعتمادا

Munns و1998 وآخـرون ، Volkmar( استمراره قد يؤدي الى موت النـسيج المـزروع

في أنـسجة األفـرع وبتراكيـز -Clوالكلوريد +Naالصوديوم ان تجمع ايونات و . ) 2002،

معظم األضرار التي تحصل للعنب بفعل الملوحة يعود الـى فعالية قد تكون مؤذية وسامة للنبات

1998) ، وآخرون Volkmar: 1983 وآخرون ، Antcliff( يونين في أنسجته ألتجمع هذين ا

43

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 65: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

لوحة من تأثيرات أخرى تتمثل في اضطراب عمـل األغـشية الخلويـة فضال عن ما تسببه الم

الى اضطراب في العمليات االيـضية المختلفـة فيؤدي ذلك وتأثيرها في فعالية بعض اإلنزيمات

عن تأثيرها السلبي فـي بنـاء الكثيـر مـن التراكيـب الخلويـة كالكلوروفيـل للخلية فضال

.)Parveen ، 2002 و Ross ، 1992: Ashraf و Salisbury( والمايتوكوندريا والبالسـتيدات

تأثير األمالح في التوازن األيوني للعناصر المعدنية الـضرورية لنمـو النبـات وأن فضال عن

نتيجـة بوصفه استمرار جميع هذه التأثيرات يمكن أن يحد من نمو النبات وقد يقوده إلى الهالك

. )Tyagi ،2004 وSairam(لتحديد نموه وتضرر تراكيبه الخلوية

في الوسط الغذائي وأصناف العنـب تبـين ان النـسبة NaClأما تداخالت تراكيز ملح

لجميع األصـناف NaClالمئوية لبقاء الزروعات على قيد الحياة انخفضت مع زيادة تراكيز ملح

الج دول ملي مـول 175 مع فشل زروعات الصنف كمالي في البقاء على قيد الحياة عند التركيز

ة إن جميع أصناف العنب المدروسة قد أعطت نسبة بقاء جيد الجدول نفسه كما ويتضح من .(3)

ـ لـم تظهـر اختالفـا ف في الدراسة ، المستعملة NaClفي التراكيز المنخفضة من ملح ا معنوي

ملـي 150و 125 و 100 و75 لزروعات الصنف شدة بيضاء النامية في المستويات الملحيـة

ملي مول في حين انخفضت نسبة البقاء معنويا عند التركيـز 0ا عن معاملة المقارنة مول معنوي

ان زروعات الصنف شدة سوداء لم تختلف بنسبة بقائها علـى قيـد الحيـاة و. ملي مول 175

ملـي مـول 175ملي مول الذي سبب مع التركيـز 150 معنويا في التراكيز الملحية األقل من

من جهة أخرى فقد بدأت النـسبة . NaCl ملي مول ملح 0املة المقارنة انخفاضا معنويا عن مع

ملي مول 125 الصنف كمالي باالنخفاض المعنوي عند المستوى الملحي تالمئوية لبقاء زروعا

. ملي مول 175والتراكيز األعلى منه ، فضال عن موتها عند تركيز

44

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 66: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

درجة تضرر الزروعات2-1-4

روق معنوية بين أصناف العنب المدروسة في درجـة تـضرر د فجو و (4)الجدوليبين

أفرعها المتضاعفة النامية في أوساط غذائية مجهزة بمستويات مختلفة من ملح كلوريد الصوديوم

مع الصنفين شدة سوداء وكمـالي ، ةاظهر الصنف شدة بيضاء درجة تضرر منخفضة بالمقارن ف

و 1.12( الصنفين شدة سـوداء وكمـالي بعدهثم يأتي 0.86إذ أعطى اقل درجة تضرر بلغت

اللذين اختلفا فيما بينهما معنويا ، فقد اظهر صنف كمالي درجـة تـضرر ترتيبعلى ال ) 1.49

تتفق نتـائج هـذه و . مقارنة بالصنفين اآلخرين من خالل الضرر الواضح على زروعاته ةعالي

وآخـرون Singh ودراسـة )1999 و Eris) 1997 و Sivritepeالدراسة مع نتائج دراسـتي

)2000b( درجة تـضرر زروعاتهـا في في أصناف العنب التي أشارت الى اختالف األصناف

. النسيجية بفعل نموها في أوساط غذائية غنية بملح كلوريد الصوديوم

التي نفسها إن أسباب تفاوت األصناف في درجة التضرر باألمالح قد يعود الى األسباب

. عند الحديث عن نسبة بقاء الزروعات على قيد الحياة)1.1.4(ذكرت في الفقرة

45

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 67: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

أفرعفي درجة تضرر MS المضاف الى الوسط الغذائيNaCl تأثير تركيز ملح) 4(جدول . خارج الجسم الحي أصناف العنب بعد أربعة أسابيع من الزراعة

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

دل تراكيز الملحمع

0 0.00 0.00 0.00 0.00 75 0.13 0.30 0.50 0.31

100 0.27 0.53 1.13 0.64 125 1.00 1.33 1.47 1.27 150 1.33 2.07 2.83 2.08 175 2.43 2.50 3.00 2.64

1.49 1.12 0.86 معدل األصناف

0.547 =للتداخل 0.316=للتراكيز 0.223 =لألصناف*)0.05(م .ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

أن تجهيز وسط التـضاعف بملـح كلوريـد )7و6 و 5 ( واألشكال(4) الجدول ظهروي

لصوديوم أدى الى ظهورأعراض الضررعلى الزروعات للعيان وترافقت شدة الضرر مع زيادة ا

و 1.27 و 0.64 و 0.31المجهز في وسط التضاعف وقد بلغت درجة التـضرر NaCl تركيز

الترتيـب علـى ملي مـول 175 و 150و 125 و 100 و75 للتراكيز الملحية 2.64 و 2.08

وتتفق نتائج الدراسـة مـع . ملي مول الذي لم يحدث أي ضرر لألفرع فيها 0مقارنة بالمعاملة

ظهور أعراض سلبية في مظهر األفرع في )1999و Eris ) 1997 وSivritepeنتائج دراستي

تتفق مع مـا جـاء بـه و. في وسط التضاعف NaClالمتضاعفة للعنب بفعل زيادة تركيز ملح

Sotiropoulos) 2007( ن األفرع المتضاعفة ألصل التفاح أ منM4 المزروعة فـي أوسـاط

قد ظهرت عليها حـروق )ي مول مل200 و 100 و35 (غذائية مجهزه بملح كلوريد الصوديوم

46

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 68: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Dimassi و Sotiropoulosتتفق مع ما الحظـه و. في حافة األوراق في التراكيز العالية منه

ظهور أعراض االصفرار على الزروعات عنـد تجهيـز في kiwi في مزارع الكيوي )2004(

.مول ملي 80 ملي مول وموت الزروعات عند ارتفاع الملح الى 40وسط التضاعف بـ

إن سبب تضرر زروعات أصناف العنب قد يعود إلى زيادة تركيز أيونـات الـصوديوم

والكلوريد في الخاليا النباتية بزيادة التراكيز الملحية في الوسط الغذائي والتي سيتم الحديث عنها

ي عند تواجدها بالمستوى الحرج العالي الـذ العاليةيونات سميتها االوالمعروف عن هذه الحقا ،

يؤدي الى مـوت الخاليـا نتيجـة وعند أرتفاعها بشكل كبير قد الخليةقد يؤدي الى تثبيط نشاط

الملحيـة حوافها تحت المـستويات واحتراق االوراق اسمراريوني المتمثل بأصفرار و اال للتسمم

راق بـدأت األو فقد من الملح العالية عند المستويات وال سيما الدراسة الذي لوحظ في هذه العالية

نفصالها مع صـغر حجـم إ موتها و ومن ثم سمرارها إ وبمرور الوقت قد زاد باالسمرار السفلية

في أوساط خاليـه مـن الملـح الناميةمع أوراق الفروع ة على الفروع مقارن المتكونةاألوراق

. )مالحظات غير مجدوله(

47

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 69: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

سط التضاعف المزود بتراكيز زروعات صنف العنب شدة بيضاء النامية في و)5(شكل

. NaClمن ملح) ملي مول200 - 0(

200 175 150 125 100 75 0

48

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 70: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

بتراكيز زروعات صنف العنب شدة سوداء النامية في وسط التضاعف المزود)6(شكل

. NaClمن ملح) ملي مول200 - 0(

0 75 100 125 150 175 200

49

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 71: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

بتراكيز زروعات صنف كمالي النامية في وسط التضاعف المزود)7(شكل

. NaCl ملحمن) ملي مول200 - 0(

0 75 100 125 150 175 200

50

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 72: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

عدم وجـود تـضرر (4)الج دول وأصناف العنب NaClويظهر التأثير المشترك لتراكيز ملح

ملي مول فـي حـين ازداد معـدل 0 ألفرع العنب في معامالت التداخل بين األصناف وتركيز

سط التضاعف حيث أعطت معامالت التـداخل بـين في و NaClالضرر مع زيادة تراكيز ملح

و2.50 و2.43 ملي مول درجات تضرر واضحة على األفـرع بلغـت 175األصناف وتركيز

، اذ ماتت جميـع أفـرع الترتيب درجة لألصناف شدة بيضاء وشدة سوداء وكمالي على 3.00

وية بين األصـناف وجود فروق معن نفسهالجدولأظهرت نتائج و. صنف كمالي عند هذا التركيز

اذ أظهـرت قـيم ) ملي مول175 و150و 100 (ضمن المستوى الملحي الواحد عند التراكيز

مقابـل ذلـك أعطـت . تداخالت الملح مع الصنف كمالي أعلى قيم تضرر ضمن هذه التراكيز

إن . راكيـز تتداخالت الملح مع الصنف شدة بيضاء أوطأ القيم لتضرر الزروعات ضمن هـذه ال

التي ذكرت فـي نفسهاب المحتملة لتأثير الملح وتداخله مع األصناف قد يعود الى األسباب األسبا

. )1.1.4( الفقرة

)عدد األفرع الخضرية(معدل التضاعف 3-1-4

على وجود تأثير معنوي في معـدل عـدد الفـروع ) 5( في الجدول الواردة تدل النتائج

كيـز اع من زراعته في وسط التـضاعف المجهـز بتر أسابي 4 بعد النباتي المتكونة على الجزء

خارج الجسم الحي ، فقد تفوق صنف شدة بيضاء معنويا على الـصنفين NaClمختلفة من ملح

في حين كان معدل عدد األفرع الخضرية للصنفين فرعا 3.34شدة سوداء وكمالي ، اذ أعطى

تلفا فيما بينهما معنويـا فـي هـذا اخين اللذ الترتيبفرع على1.71 و2.16شدة سوداء وكمالي

حـول مـدى )2006( وآخـرون Cavagnaroلقد أشارت دراسة . المعدل بتفوق شدة سوداء

خارج الجسم الحي الى ان NaClتحمل أصناف العنب األرجنتينية واألوربية التي درسوها لملح

51

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 73: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

لجـسم الحـي في معدل التضاعف تحت ظروف اإلجهاد الملحي خـارج ا ملحوظا تاهنالك تفاو

Eris و Sivritepe مـا وجـده بتفوق األصناف األرجنتينية على األصناف األوربيـة مؤكـدا

من تباين أصناف العنب فـي معـدل عـدد األفـرع )1999( وآخرون Troncoso و )1999(

المتكونة على أجزائها النباتية المزروعة في أوساط التضاعف المجهزة بتراكيز مختلفة من ملـح

NaCl .بـين )2001( وعثمان )1996(سجم هذه النتائج في اتجاهها العام مع ما وجده حمد تنو

في مزارع البطاطا النسيجية Zhang (1998( و)Donnelly) 1997 وZhangوأصناف الموز

. بين أصناف التفاح)2004( وعبدالحسين )1999(وشلش

الجزء /في معدل عدداألفرع MS المضاف الى الوسط الغذائي NaCl تأثير تركيز ملح )5(جدول .النباتي ألصناف العنب بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 5.40 4.03 3.07 4.17 75 5.63 3.27 2.40 3.77

100 4.27 2.27 2.33 2.95 125 2.40 1.90 1.60 1.97 150 1.87 1.43 0.87 1.39 175 0.47 0.07 0.00 0.18

1.71 2.16 3.34 معدل األصناف 0.7004 =للتداخل 0.404=للتراكيز 0.286 = لألصناف*)0.05(م .ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف .أ *

أدى فقـد الى ان للملوحة تأثيرا سلبيا في معدل التضاعف ، نفسها لجدولتشير نتائج ا و

ملي مول الى انخفاضـه بـشــكل 0 - 175 في وسط التضاعف من NaClرفع تركيز ملح

52

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 74: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

فـرع مقارنـة 0.18اقل معدل تضاعف بلغ ولم ملي 175 معنوي فقد أعطى التركيز الملحي

اختلفا فيما بينهما اللذين فرع 4.17عدل تضاعف الذي أعطى م NaCl ملي مول ملح 0بالتركيز

ملي مـول 75 و 0 باستثناء التركيزين اختلفت باقي التراكيز الملحية فيما بينها معنويا و. معنويا

Sivritepeإن نتائج الدراسة تنسجم مع نتائج دراسـة . لم يختلفا فيما بينهما معنويا ايضا اللذين

فاض معدل تضاعف األجزاء النباتية لثالثـة أصـناف مـن التي تشير الى انخ Eris) (1999و

-Dimassiومـع NaClالعنب مزروعة في وسط التضاعف المجهز بتراكيز مختلفة من ملـح

Theriou) 1998 (خفي مزارع أصل الخو Mr.S 2/5 فـي معـدل النسيجية بحصول اختزال

كـل نفـسها ى النتيجة توصل ال و. في الوسط الغذائي NaCl تضاعف الزروعات بزيادة تركيز

فـي أصـل )2007 (Sotiropoulos في مزارع الموز النسيجية و )Mahmoud) 2000من

الذي أشار الى حصول اختزال ملحوظ في عدد األفرع المتكونة من زراعة البـراعم M4التفاح

.NaCl ملي مول 200 و 100في وسط مجهز بـ

ختزال فـي عـدد إل قد يعود الى ا الملوحة وأعدادها بفعل المتضاعفةان قلة نمو الفروع

النباتية والتأثير السلبي لها في بناء الصبغات الجانبيةوراق على المحور وتثبيط نشوء البراعم اال

عن قلة جاهزية المـاء الناجمة في التركيب الضوئي واالختالل في الفعاليات الفسلجيه المشتركة

التـي العديد مـن الدراسـات إنو . )2002ون ، وآخر Harb(ختالل في التوازن الغذائي إلوا

تقلـل نأ من الممكن الملوحة زيادة مستويات أنفترضت إقد )2009(واخرون Kayaأوردها

األوكسينات والسايتوكاينينات والجبرلينـات والبـولي (الداخلية النباتيةمن مستويات الهرمونات

ـ ستطالإلت التـضاعف وا لعمليا الضرورية للملوحة المعرضة األنسجة في) أمين ه والنمـو ــ

. جهاد الملحيإلوالبقاء على قيد الحياة تحت ا

53

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 75: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

واألصناف المدروسة في NaClأيضا التأثير المشترك لتراكيز ملح ) 5(ويظهر الجدول

اذ انخفض هذا المعدل في كل صنف مـع زيـادة تركيـز الملـح ليتوقـف معدل التضاعف ،

، فـي حـين اسـتمر ملي مول في صنف كمـالي 175التضاعف تماما عند المستوى الملحي

بلـغ ف) اللذين لم يختلفا فيما بينهما(التضاعف في هذا المستوى للصنفين شدة بيضاء وشدة سوداء

وقـد . NaCl ملي مول 175 في تركيز الترتيب فرع على 0.07 و 0.47معدل التضاعف لهما

التي لم تختلـف ( ي صنف شدة بيضاء ملي مول ف75أعطت معاملة التداخل بين التركيز الملحي

فرع التي اختلفـت 5.63أعلى معدل للتضاعف بلغ ) ملي مول 0عن معاملة تداخله مع التركيز

أوضحت نتائج تداخل الملوحـة مـع و. معنويا عن جميع تداخالته مع التراكيز الملحية األخرى

لي مول للصنفين شـدة م 75 و 0صنفي العنب شدة سوداء وكمالي الى تفوق تداخالت تركيزي

. سوداء وكمالي كال على انفراد

عقد فأكثر 3عدل عدد األفرع التي تحوي على م 4-1-4

وجود فروق معنوية في معدل عدد األفرع )6(جدول ال توضح نتائج الدراسة الواردة في

1.02معـدل عقد فأكثر ألصناف العنب قيد الدراسة بتفوق صنف شدة بيـضاء ب 3الحاوية على

اللذين اختلفا فيما بينهما الترتيب فرع على 0.47 و 0.75فرع على الصنفين شدة سوداء وكمالي

فـي ) 1999و Eris) 1997 وSivritepeمعنويا وتنسجم نتائج هذه الدراسة مع نتائج دراستي

عقـد وأكثـر فـي 3المزارع النسيجية للعنب من حيث تفاوت اختزال عدد األفرع التي تمتلك

. المستعملةالمزارع النسيجية للعنب باختالف األصناف

عقـد فـأكثر ، إذ 3تشير البيانات بان للملوحة تأثير سلبي في معدل عدد األفرع الحاوية على و

في الوسط الغذائي فقد أعطى NaClترافق االنخفاض المعنوي في المعدل مع زيادة تراكيز ملح

54

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 76: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

0.02 ملي مول اقل معدل بلـغ 150عنويا عن التركيز ملي مول الذي لم يختلف م175 التركيز

هذه و فرع 1.70 الذي بلغ معدل عدد األفرع فيهاNaClمول ملح ملي0 فرع مقارنة بالتركيز

في مزارع العنب النسيجية مـن )1999وEris) 1997 و Sivritepeالنتائج اتفقت مع ما وجده

كثر عند تضمين الوسط الغذائي الخاص بالتضاعف عقد فأ 3حيث قلة عدد األفرع الحاوية على

. NaCl ملي مول من ملح 50بتراكيز أعلى من

عـدد األفـرع معدل في MS المضاف إلى الوسط الغذائي NaCl تأثير تركيز ملح )6(جدول الزراعـة ألصناف العنب بعد أربعة أسابيع من الجزء النباتي / عقد فأكثر 3الحاوية على

.خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 2.17 1.77 1.17 1.70 75 1.60 1.17 0.83 1.20

100 1.20 0.83 0.47 0.83 125 0.90 0.53 0.27 0.57 150 0.20 0.20 0.07 0.16 175 0.07 0.00 0.00 0.02

0.47 0.75 1.02 معدل األصناف 0.485 =للتداخل 0.280=للتراكيز 0.198 = لألصناف*)0.05 (م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

الى وجـود تـداخل معنـوي بـين نفسه أظهرت نتائج التحليل اإلحصائي في الجدول و

تفوقت معاملة التداخل للصنف شـدة بيـضاء المستعملة فقد NaCl العنب وتراكيز ملح أصناف

2.17 عقد بلغت 3 اذ أعطت أعلى معدل لعدد األفرع الحاوية على NaCl ملي مول 0وتركيز

فرع التي تفوقت على جميع التداخالت معنويا باستثناء معاملة التداخل لصنف شدة سـوداء فـي

55

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 77: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

لـم تختلـف تـداخالت و. فـرع 1.77 بلغ معدل عدد األفرع فيها ه فقد نفسالمستوى الملحي

علـى عقـد 3 في معدل عدد األفرع الحاوية علـى 175 و 150األصناف الثالثة مع التركيزين

3 ملي مول أي فروع تمتلـك 175 عدم إعطاء مزارع الشدة سوداء وكمالي في التركيز الرغم

في الزراعة النـسيجية )Eris) 1999 و Sivritepeج عقد فأكثر وتنسجم نتائج الدراسة مع نتائ

الـى إضافةNaCl أعطيا لهذه الصفة أهمية في تحديد قابلية تحمل األصناف لملحاللذينللعنب

الحظا تباين أصناف العنب التي درسـاها مـن فقدالصفات المظهرية المرتبطة بنمو المزارع ،

د فأكثر والنامية في وسط التضاعف المجهز بتراكيز مختلفـة عق 3حيث عدد األفرع التي تحمل

عقد ترافـق مـع 3من ملح كلوريد الصوديوم وان درجة االختزال في عدد األفرع التي تمتلك

علـى )Ayyoubi)2004 و Charbajiحصل و. في وسط التضاعف NaClزيادة تركيز ملح

في الوسط الغذائي الخـاص بتـضاعف ملي مول 150نتيجة مشابهه عند رفع تركيز الملح الى

. أصناف محلية من العنب في سوريا 3أفرع

معدل طول األفرع 5-1-4

ان هنالك اختالفات معنوية بين أصـناف العنـب (7)تظهر البيانات الواردة في الجدول

في معدل أطوال الفروع الناتجة عن زراعة عقلها الدقيقة ذات العقدتين فـي وسـط التـضاعف

بتفوق الصنف شدة بيضاء معنويا علـى الـصنفين NaClي على تراكيز مختلفة من ملح الحاو

اآلخرين شدة سوداء وكمالي في هذه الصفة ، حيث أعطى الصنف شدة بيضاء معـدل أطـوال

شدة سـوداء وكمـالي علـى العنب صنفي ملم ل 7.37 و 9.40 ملم مقابل 12.20فروع قدره

ان اخـتالف . هما معنويا بتفوق صنف الشدة سوداء علـى كمـالي اللذين اختلفا فيما بين الترتيب

األصناف المدروسة فيما بينها في معدل أطوال الفروع قد يعود الى االختالفـات فـي تركيبهـا

56

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 78: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

في قابليتها على التكيف للتأثير السلبي للملوحة فـي انقـسام ونمـو الخاليـا يؤثر الوراثي الذي

. في النمو العام للفرع تأثيرهو

في معدل طـول األفـرع MS المضاف إلى الوسط الغذائي NaCl تأثير تركيز ملح )7(جدول . أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحيأربعةالجزء النباتي ألصناف العنب بعد )/ ملم(

في NaClتركيز ملح األصناف

الوسط الغذائي)mM(

شـــدة بيضاء

شـــدة سوداء

ماليك معدل تراكيز الملح

0 20.10 18.73 18.13 18.99 75 17.30 14.37 11.37 14.35

100 13.73 10.20 5.53 9.82 125 11.27 8.10 6.50 8.62 150 7.47 4.52 2.70 4.90 175 3.33 0.53 0.00 1.29

7.37 9.40 12.20 معدل األصناف 3.054 =للتداخل 1.763=للتراكيز 1.247 = لألصناف*)0.05 (م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف .أ *

و 1999) (Eris و Sivritepeو )1999( وآخـرون Troncosoوهذه النتائج تتفق مع ما وجده

Singh 2000(وآخرونa( في العنب و Tewary وآخرون )في التوت وعبد الحـسين )2000

النباتات التي درسوها في معـدل أطـوال في أصول التفاح من حيث اختالف أصناف )2004(

. NaClاألفرع المتكونة عند زراعة البراعم الخضرية في أوساط مجهزه بملح

في وسط التضاعف الى حدوث انخفاض معنوي في معدل NaClبينما أدى رفع تركيز

رع قـد أطوال الفروع المتكونة على األجزاء النباتية المزروعة حيث يالحظ ان معدل أطوال األف

ملم مقارنة بتركيز 1.29 ملي مول حيث بلغ 175انخفض ليصل الى أدنى مستوى عند التركيز

لوحظ وجود اختالفات معنوية بـين و ملم ، 18.99 الذي أعطى معدل NaCl ملي مول ملح 0

57

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 79: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

ملـي 125 و 100 جميع التراكيز الملحية في معدل أطوال الفروع باستثناء التركيزين الملحيين

و )(Samra 1986 وتنسجم هذه النتائج مع مـا أشـار اليـه .للذين لم يختلفا فيما بينهما مول ا

Prior 1992(وآخرون( و Charbaji و Ayyoubi)2004( في العنـب وكـل مـن حمـد

و Shibliو في المزارع النسيجية للمـوز )2002( وآخرون Harbو) 2001( وعثمان )1996(

AL-Juboory)2002 ( مـع في الزيتون وLankes و Zimmerman) 1990( وعبدالحـسين

في مزارع التفاح النسيجية ، الذين وجدوا انخفاضـا فـي 2007) (Sotiropoulos و) 2004(

في الوسط الغذائي المجهـز بـه ويمكـن NaClأطوال الفروع المتكونة مع زيادة تركيز الملح

ة للملوحـة علـى النمـو وغير مباشـر ) سمية(تفسير ذلك على أساس حصول تأثيرات مباشرة

والتطور كالتأثير في التوازن الهرموني واأليوني والفعاليات الحيوية او تأثيرات ازموزية تعمـل

فللضغطعلى تقليل الماء الممتص بدرجة كبيرة مما يؤثر في عملية انقسام الخاليا أو استطالتها ،

في استطالة الخليـة له أثر مهمالداخلي ر الجدا االنتفاخي الذي يولده الماء الداخل الى الخلية على

. استطالة الساقومن ثم

الى تفوق تداخالت الصنف NaClتشير نتائج التداخل بين أصناف العنب وتراكيز ملح و

ملي مول داخل كل مـستوى مـن هـذه 175و 150 و 125 و 100 شدة بيضاء مع التراكيز

معنوية بـين تـداخالت جميـع األصـناف المستويات الملحية في حين لوحظ عدم وجود فروق

باستثناء معاملتي التداخل شدة بيضاء وكمالي عند التركيز ( ملي مول0 , 75والتراكيز الملحية

.) ملي مول 75

58

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 80: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

معدل عدد االوراق 6-1-4

يتبين ان الصنف شدة بيضاء تفوق معنويـا (8)جدول المن خالل النتائج المعروضة في

فرع النامي فـي وسـط التـضاعف / سوداء وكمالي في معدل عدد األوراق على الصنفين شدة

4.64 خارج الجسم الحي ، إذ أعطى أعلى معـدل بلـغ NaClالمجهز بتراكيز مختلفة من ملح

فرع على / ورقه 3.46 و 3.98فرع مقارنة بصنفي شدة سوداء وكمالي اللذين أعطيا معدل /ورقه

عدد األوراق بين أصناف العنب الى االختالف الوراثي وقد يرجع االختالف في معدل . الترتيب

في قابليتها على التكيف ومواجهة األضرار السلبية المباشـرة وغيـر المباشـرة الذي يؤثر بينها

. لوجود الملح في وسط نموها

في معدل عـدد األوراق MS المضاف إلى الوسط الغذائي NaCl تأثير تركيز ملح )8(جدول ألفرع أصناف العنب بعد أربعة أسابيع من الزراعـة خـارج الجـسم ي الجزء النبات /

.الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 7.13 6.67 6.53 6.78 75 6.83 6.27 5.90 6.33

100 5.17 4.23 4.53 4.64 125 4.93 3.87 2.63 3.81 150 3.30 2.47 1.17 2.31 175 0.47 0.40 0.00 0.29

3.46 3.98 4.64 معدل األصناف 1.616=للتداخل 0.933=للتراكيز 0.659= لألصناف* )0.05 (م.ف . أ )0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ*

59

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 81: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

عام مع ما وجد من قبل العديد مـن البـاحثين ومـنهم وتتفق نتائج الدراسة في إطارها ال

Cano وآخرون )(و 1998 Mercado وآخرون)من حيث تباين أصناف الطماطـة فـي )2000

بملـح مزودةمعدل عدد األوراق على األفرع المتضاعفة خارج الجسم الحي في أوساط غذائية

. كلوريد الصوديوم

يات ملوحة وسط التضاعف قد أثر معنويا ان اختالف مستو (8)جدولالتبين النتائج في و

تراكيز ملـح فزيادة، في معدل عدد األوراق لألفرع المتضاعفة المزروعة في وسط التضاعف

NaCl 6.33و 6.78(فرع الذي ظهر بأعلى معـدل / قد رافقها انخفاض في معدل عدد األوراق

فا فيما بينها معنويا في حـين اللذين لم يختلالترتيب ملي مول على 75و 0 عند التركيزين) ورقه

الذي اختلف معنويا عن جميـع ) ورقه0.29( ملي مول أقل معدل175 أعطى المستوى الملحي

) Ayyoubi)2004 و Charbajiتتفق هذه النتائج مع ما جاء بـه . المستويات الملحية األخرى

األوراق في المزارع النسيجية للعنب من حيث تقليـل عـدد )2006( وآخرون Cavagnaroو

قد يعـزى ذلـك الـى و .NaClالمتكونة على األفرع عند التعريض لمستويات عاليه من ملح

الـذي يـضطر ) NaClبفعل وجود تراكيز ملح (ارتفاع الضغط االزموزي في وسط التضاعف

األنسجة المزروعة الى تحويل الجزء األعظم من الطاقة المتوفره للعمليـات االيـضية النبات او

لمزروع نحو بناء جهد اوزموزي داخل الخلية لمواجهة ارتفاع الضغط االزموزي العالي للنسيج ا

في الوسط على حساب عمليات البناء الالزمة إلدامة العمليات المـشتركة فـي النمـو المتمثلـة

. )1992 وآخرون، Smith(بانقسام الخاليا واتساعها

بان أعلى قيمـة لمعـدل عـدد NaClوتدل نتائج التداخل بين األصناف وتراكيز ملح

ورقة التـي اختلفـت 7.13 بلغ NaCl ملي مول 0األوراق لوحظت في معاملة شدة بيضاء و

60

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 82: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

ملي مول لألصناف الثالثة شدة بيـضاء 175معنويا مع معامالت التداخل عند المستوى الملحي

تختلف فيمـا التي ال الترتيب ورقة على 0.0 و 0.40 و 0.47وشدة سوداء وكمالي التي بلغت

لم تظهر اختالفات معنوية بين األصناف ضمن المستوى الملحي و .بينها معنويا عند هذا التركيز

ملي مول في حين لوحظت اختالفات معنوية عند التركيزين 100 و 75 و 0الواحد عند التراكيز

.الترتيب ملي مول على 150 و125

معدل الوزن الطري لألفرع7-1-4

عدم وجود فروق معنوية بين الصنفين شدة سـوداء (9)جدول ال نتائج ظهر من خالل

وكمالي في معدل الوزن الطري لألفرع المتضاعفة في وسط التضاعف المجهز بتراكيز مختلفـة

شـدة سـوداء العنب خارج الجسم الحي حيث بلغ معدل الوزن الطري لصنفي NaClمن ملح

بينما تفوق الصنف شدة بيـضاء معنويـا علـى . الترتيب ملغم على 50.14 و48.02 وكمالي

وتتفـق نتـائج هـذه الدراسـة مـع . ملغـم 72.29 معدل الوزن الطري كليهما فبلغالصنفين

Sivritepe و Eris) 1999( و Singh ــرون Doxastaki و Argyraki و)2000a( وآخــ

. في المزارع النسيجية للعنب)2002(

صناف لمعامالت الملوحة يعود الى االختالف في تركيبهـا إن سبب اختالف استجابة األ

تحتفظ بمحتوى معتدل من أن ه جعل خاليا في في قابلية الصنف األكثر تحمل يؤثرالذي الوراثي

علـى النمـو قـادرة مما يجعلهـا الملوحةالذي يزيد من قابليتها في تحمل ايونات البوتاسيوم

) نفاذية ( البوتاسيوم في الحفاظ على اختيارية ألثر نظرا ، الغذائيةوامتصاص الماء من األوساط

وفي زيادة نشاط Nilsen ، ( 2000 و Orcutt( الملحي اإلجهاد تحت ظروف الخلوية األغشية

في التقليل من و )Munns ، 1980و ( Greenwayاألنزيمات وبناء الكربوهيدرات والبروتين

61

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 83: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

وآخـرون ، Ben-Hayyim (حيث افترض . الخاليا وديوم داخلـون الصـالتأثير السمي ألي

ـ أ في المزروعة في نمو الخاليا النباتيه له أثرا مهما يوم ـان البوتاس ) 1987 ـ ـوس ة ـاط عالي

. الملوحة

في معدل الوزن الطـري MS إلى الوسط الغذائي المضاف NaCl تأثير تركيز ملح )9(جدول يع مـن الزراعـة خـارج الجـسم الحـي ألفرع أصناف العنب بعد أربعة أساب )ملغم( .)الجزء النباتي/الوزن الطري(

في NaClتركيز ملح األصناف

الوسط الغذائي)mM(

شـــدة بيضاء

شـــدة سوداء

كمالي معدل تراكيز الملح

0 171.88 109.00 112.51 131.13 75 124.89 70.59 92.63 96.04

100 65.24 49.87 53.82 56.31 125 41.99 35.79 26.39 34.72 150 23.36 20.95 15.47 19.93 175 6.41 1.93 0.00 2.78

50.14 48.02 72.29 معدل األصناف 910 .19=للتداخل 11.495=للتراكيز 8.128= لألصناف *)0.05 (م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

NaClبان تضمين وسط التضاعف بتراكيز مختلفة من ملح 9) (جدول ال نتائجوأظهرت

كانت معـدالت الـوزن فأدى الى انخفاض الوزن الطري لألفرع المتضاعفة بارتفاع نسبة الملح

ملغم للتراكيز الملحية 2.78 و19.93 و34.72 و 56.31 و96.04 الطري لألفرع المتضاعفة

) التى اختلفت معنويا فيمـا بينهـا (الترتيب لي مول على م175 و150و 125 و100و 75

131.13 التي تفوقت على جميع التراكيز معنويـا اذ بلغـت NaCl ملي مول 0مقارنة بمعاملة

ــم ــده . ملغ ــا وج ــع م ــائج م ــذه النت ــق ه و)Eris)1999 و Sivritepeوتتف

62

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 84: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Troncoso 1999(وآخرون( و النسيجية للعنب في المزارع Niknam وآخرون )في )2004

في نبـات )1999(وآخرون Ali و النامية خارج الجسم الحي Nicotianaبادرات وأوراق التبغ

Bacopaو Neocleous و Minas )2007(في الرازبري .

ان االنخفاض في معدل الوزن الطري لألفرع المتضاعفة بفعل الملوحة قد يعـود الـى

موزي والتأثير األيوني السلبي الذي تسببه الملوحـة فعنـد زيـادة تركيـز كلوريـد التأثير االز

الصوديوم يتأثر نمو الخاليا نتيجة النخفاض معدل وكمية الماء الداخلة الى الخاليا ويتناسب تأثير

لذا فأن انخفـاض الجهـد المـائي ،األمالح طرديا مع الزيادة في الضغط األزموزي الخارجي

بسبب زيادة تركيز كلوريد الصوديوم يتسبب في انخفاض معدل انتقال المـاء الـذي لوسط النمو

عمليتي السيما يؤثر على الضغط األنتفاخي للخلية مما يؤدي الى أعاقة الفعاليات الحيوية للنبات و

. )1992 وآخرون ، Smith(البناء الضوئي والتنفس

بين الصنف شدة بيـضاء وتركيـز يالحظ من الجدول نفسه أيضا تفوق معاملة التداخل

حيث تفوقت معنويا على جميع التداخالت اذ بلغ معدل الوزن الطري فيهـا NaCl ملي مول 0

ملـي مـول وأصـناف 175ملغم بينما أعطت معامالت التداخل بين التركيز الملحي 171.88

فـرع المتـضاعفة العنب شدة بيضاء وشدة سوداء وكمالي معدالت منخفضة لألوزان الطرية لأل

هـذا ، التي لم تختلف فيما بينها معنويـا ضـمن الترتيبملغم على 0.0و 1.93 و 6.41 بلغت

. المستوى الملحي

63

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 85: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

معدل الوزن الجاف لألفرع 8-1-4

شـدة بيـضاء ( ان األفرع المتضاعفة ألصناف العنب )10(توضح النتائج في الجدول

بتها للشد الملحي ، إذ تفوق الصنف شدة بيـضاء وشـدة اختلفت في استجا ) وشدة سوداء وكمالي

إذ بلغ معدل الوزن الجاف لألفرع المتضاعفة فـي أصـناف . على صنف كمالي معنويا سوداء

إن . الترتيـب علـى ) ملغم 7.28 و 8.85 و 9.92( العنب شدة بيضاء وشدة سوداء وكمالي

عزى الى االخـتالف فـي تركيبهـا قد ي NaClسبب اختالف استجابة األصناف لمستويات ملح

) 2006( وآخـرون Cavagnaro و) Doxastaki) 2002 و Argyrakisالوراثي ، وقد وجد

إن أفرع أصناف العنب المختلفة التي درسوها النامية في وسط التضاعف ذو المستويات الملحية

.ينها في هذه الصفة األصناف فيما بفتفاوتتالمختلفة قد اختلف الوزن الجاف ألوراقها وسيقانها

يبين الجدول نفسه وجود تأثير معنوي لألجهاد الملحي في معدل الوزن الجاف لألفـرع

ـ المNaClالمتضاعفة اذ ترافق انخفاض معدالتها معنويا مع الزيادة في تركيز ملح ضمن فـي ت

يمـا مول التي ال توجد اختالفات معنويـة ف ل ي م100 و 75زين يوسط التضاعف بأستثناء الترك

ملي مول اقل معدل للوزن الجـاف بلـغ 175، وقد أعطت المعاملة في التركيز الملحي بينهما

، وقد ملغم 16.20 بلغ NaCl ملي مول 0 ملغم بالمقارنة بمعدل الوزن الجاف في تركيز 0.57

فضال على يعود هذا االنخفاض الى قلة امتصاص الماء واضطراب في الفعاليات الحيوية للنبات

Cavangaroوتتفق النتائج الحالية مع ما وجده . وث اختالل في امتصاص العناصر الغذائية حد

Neocleous و فـي اللـوز المـر )2003( وآخـرون Shibli وفي العنب )2006(وآخرون

انخفاض الوزن الجاف لألوراق وسـيقان النباتـات في الرازبري من حيث )Minas )2007 و

مـع مـا جـاء بـه تتعـارض ، في حين دة تراكيز الملح في وسط نموها التي درسوها مع زيا

64

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 86: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Dimassi-Therious )(1998 و في الكيويRoussos وآخرون )فـي نبـات )2007 و 2006

اذ ازداد الـوزن NaClعند زراعة األجزاء النباتية في وسط التضاعف المجهز بملح الهوهوبا

قد يعزى انخفاض معدل الوزن الجـاف الـى و . الجاف لألفرع المتضاعفة خارج الجسم الحي

والتـأثير )8(الجـدول ومعدل عـدد األوراق ) 7 و 6 و 5(عدادها الجداول انمو الفروع و تثبيط

السلبي للملوحة في حجم األوراق وعدد البالستيدات الخضراء نتيجة ارتفـاع ملوحـة الوسـط

عناصر المعدنية الضرورية للنمـو الغذائي التي تقلل من قدرة األنسجة على دخول الماء إليها وال

انعكاسها على المكونات االيضية والتمثيلية داخل أنسجة الفـرع من ثم سبب الجهد االزموزي و ب

. المعرض لإلجهاد الملحي

في معدل الوزن الجاف MS إلى الوسط الغذائي المضاف NaCl تأثير تركيز ملح )10(جدول أسابيع مـن الزراعـة خـارج الجـسم الحـي ألفرع أصناف العنب بعد أربعة )ملغم( .)الجزء النباتي/الوزن الجاف(

في NaClتركيز ملح األصناف

الوسط الغذائي)mM(

شـــدة بيضاء

شـــدة سوداء

كمالي معدل تراكيز الملح

0 18.93 16.21 13.47 16.20 75 13.89 10.66 10.02 11.52

100 11.19 10.81 8.40 10.13 125 8.24 8.31 7.89 8.15 150 6.10 6.55 3.92 5.52 175 1.17 0.54 0.00 0.57

7.28 8.85 9.92 معدل األصناف 2.953=للتداخل 1.705= للتراكيز 1.206= لألصناف*)0.05 (م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف .أ *

65

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 87: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

NaCl إلى وجود تداخل معنوي بين األصناف وتراكيز ملـح )10(دلت نتائج الجدول و

معنويـا علـى بـاقي NaCl )ملي مول ملـح 0 شدة بيضاء وتركيز(عاملة التداخل اذ تفوقت م

أعطت أعلى فقد NaCl ملي مول ملح 0التداخالت باستثناء معاملة التداخل شدة سوداء وتركيز

وبينت نتائج الجدول أيضا انخفـاض . ملغم 18.93ن الجاف لألفرع المتضاعفة بلغ معدل للوز

إذ في وسـط التـضاعف NaCl معدل الوزن الجاف للتداخل بين الصنف والملح بزيادة تركيز

ملي مول 175أعطت تداخالت األصناف شدة بيضاء وشدة سوداء وكمالي مع المستوى الملحي

ملغم على 0.0 و0.54 و 1.17عدل الوزن الجاف إذ بلغت األوزان الجافة انخفاضا ملحوظا في م

من جهة أخرى لم تظهر اختالفات معنوية بين معامالت التداخل لألصناف مع المستوى الترتيب

. ملي مول175 -100الملحي الواحد عند التركيز

الصفات البايوكيميائية للمزارع النسيجية 2-4

من الكلوروفيل الكليمحتوى األفرع 1-2-4

التأثير المعنوي للصنف في محتـوى األفـرع المتـضاعفة مـن 11)( الجدول يوضح

الكلوروفيل الكلي ، إذ تفوقت األفرع المتضاعفة لصنف شدة بيضاء في محتواهـا مـن صـبغة

غم وزن طري معنويا على محتوى األفرع المتضاعفة 100/ ملغم 23.32الكلوروفيل الكلي بلغت

غـم وزن 100/ ملغم 11.24 و 20.07 شدة سوداء وكمالي من صبغة الكلوروفيل لعنب ا لصنفي

وقد تعزى هذه االختالفات بين األصناف . ، اللذين اختلفا معنويا فيما بينهما الترتيبطري على

Singhو ) Eris) 1999 و Sivritepeالى أسباب وراثية وتتفق هذه الدراسة مـع كـل مـن

ــرون ــسيجية )2004 (Ayyoubi وCharbajiو ) 2000a(وآخ ــب الن ــزارع العن ــي م ف

66

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 88: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

-Abdel النـسيجية و Eucaliptus في مزارع الكالبتوس)Bennett)2005 و Woodwardو

Hussein) 2006(في مزارع التفاح النسيجية .

فـي محتـوى أفـرع MS إلى الوسط الغـذائي المضافNaCl تأثير تركيز ملح )11(جدول بعد أربعة أسـابيع مـن ) غم وزن طري 100/ملغم(عنب من الكلوروفيل الكلي أصناف ال

. الزراعة خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 29.13 23.23 17.73 23.36 75 26.12 21.43 12.32 19.96

100 24.51 20.11 13.24 19.29 125 24.15 22.06 12.23 19.48 150 19.73 18.84 11.92 16.83 175 16.27 14.75 0.00 10.34

11.24 20.07 23.32 معدل األصناف 0.265 =للتداخل 0.153=للتراكيز 0.108 =لألصناف*)0.05 (م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

إن محتوى األفرع المتضاعفة من الكلوروفيل الكلي قد انخفض )11( الجدول يالحظ من

غـم 100/ملغم 10.34 في وسط التضاعف وصوال الى اقل محتوىNaClمعنويا بزيادة تركيز

اذ كـان NaCl ملي مول ملح 0قياسا بالمعاملة NaCl ملي مول 175وزن طري عند التركيز

، وقد يعـزى ذلـك الـى التـأثير ري غم وزن ط 100/ ملغم 23.36 امحتوى الكلوروفيل فيه

في عملية بناء الكلوروفيل عن طريق تأثيره علـى العوامـل الـضرورية NaClالمحتمل لملح

لتكوين الكلوروفيل كالماء والعناصر المعدنية إذ إن الملوحة تعمل على اإلبطاء من سرعة بنـاء

صاص الماء والعناصر المعدنية الضرورية لبنـاءه مثـل الكلوروفيل نتيجة لعجز النبات عن امت

67

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 89: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

او ان الملوحة تعمـل علـى . Ross (1992 و (Salisbury الحديد والمغنيسيوم والنايتروجين

هدم الكلوروفيل وبطأ سرعة تكوينه لعدم وصول كميات كافية من النتروجين وقلة فعالية انـزيم

Nitrate reductase) ، اإلنـزيم زيادة الملوحة الى زيـادة فعاليـة وكذلك أدت) 1984احمد

. )Levitt ، 1980( انخفاض محتوى الكلوروفيل من ثم وChlorophylaseالمحلل للكلوروفيل

في الدراسة الحالية هـو مماثـل لمـا NaClأن انخفاض صبغة الكلوروفيل بتأثير ملح

ــده ــب و )Ayyoubi)2004 وCharbajiوج ــسيجية للعن ــزارع الن ــي الم Neocleous ف

ــري)Minas)2007و ــي الرازبـ ــرون Erturk و فـ ــرز)2007( وآخـ ــي الكـ فـ

. في التفاح)2007(Sotiropoulosو ) Abdel- Hussein )2006و

تأثيرا معنويـا فـي )11( الجدول وأصناف العنب NaClاظهر تداخل مستويات ملح و

ملـي 0معاملة التداخل لصنف شدة بيضاء مع تركيـز محتوى األفرع من الكلوروفيل اذ تفوقت

غـم 100/ ملغم 29.13 معنويا على بقية التداخالت بإعطائها أعلى محتوى بلغ NaClمول ملح

غم وزن طري التـي أعطتـه 100/ ملغم0.0 و 14.75 و 16.27قياسا بأقل محتوى وزن طري

شدة بيضاء وشدة سوداء وكمالي مول وأصنافملي175 معامالت التداخل بين التركيز الملحي

. الترتيبعلى

68

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 90: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

لسكريات الذائبةا2-2-4

محتوى األفرع المتضاعفة ألصناف 12)( الجدول ظهر من خالل النتائج المعروضة في

تفوق الصنف شدة بيضاء على الصنفين شـدة سـوداء فالعنب المدروسة من السكريات الذائبة ،

ع من الزراعة في وسط التضاعف المجهز بتراكيز مختلفة من ملح كلوريـد أسابي 4وكمالي بعد

غـم وزن / ملغـم 3.421الصوديوم ، فقد بلغ محتوى أفرع الشدة بيضاء من السكريات الذائبـة

غم وزن جاف في الصنفين شدة سـوداء وكمـالي / ملغم2.590 و 3.362 جاف في حين بلغ

الـى العائـد راكم السكريات في خالياها تفي وراثيا نها فيما بياألصنافوتختلف . الترتيب على

.كون العوامل الوراثية هي المسيطرة على هذه العمليات

فـي محتـوى أفـرع MS إلى الوسط الغـذائي المضافNaCl تأثير تركيز ملح 12)(جدول بعد أربعة أسابيع من الزراعة ) غم وزن جاف /ملغم(أصناف العنب من السكريات الذائبة

. رج الجسم الحيخا

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 3.330 3.211 2.730 3.090 75 3.351 3.274 3.008 3.211

100 3.380 3.331 3.156 3.289 125 3.453 3.434 3.304 3.397 150 3.501 3.460 3.343 3.434 175 3.514 3.462 0.00 2.325

2.590 3.362 3.421 معدل األصناف 0.003=للتداخل 0.002=للتراكيز 0.001= لألصناف*)0.05(م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

69

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 91: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

ـ ال اللذين )Deviprasad) 1994 و Sasikala دراسة الباحثين وهذه تتفق مع ان احظ

مـن أخـرى أصـناف بينما تبقى ثابتة فـي األصنافكمية السكريات تتجمع وتزداد في بعض

الذين وجدوا اختالفـا فـي كميـة )2005(خرون أ و Zhang دراسة مع الدراسة تفقوتالبطاطا

. الملحياإلجهاد من البطاطا النامية تحت تأثير أصنافالسكريات في ثالثة

ع محتوى الفروع من السكريات الذائبة بزيادة مستويات ملـح ارتفا12) ( الجدول يبينو

NaCl ملـي مـول 150 في وسط التضاعف أذ بلغ أعلى مستوى لها عند التركيـز الملحـي

ملي مول ملـح 0غم وزن جاف عند المستوى / ملغم 3.090غم وزن جاف مقابل /ملغم3.434

NaCl.

2000a)( وآخـرون Singhعـام مـع مـا وجـده تنسجم هذه النتائج في إطارهـا ال

ــرونWatanabeو ــرونZhangو) 2000( وآخ ــرونShibliو) 2004( وآخ ) 2007( وآخ

الذين أشاروا إلـى زيـادة الـسكريات )2007 (Ali و Hamed و 2007) ( Sotiropoulosو

تعـزى وقد . NaClالذائبة في الفروع المزروعة للنباتات التي إختبروها في أوساط غنية بملح

هذه الزيادة الى قلة قابلية وكفاءة هذه النباتات في تحويل السكريات البسيطة إلى سكريات أكثـر

فأن هذه المركبـات من ثم و ) 2002 وآخرون ، Hanafy-Ahmed( تعقيدا أو تقليل استهالكها

، Munns و Greenway(العضوية البسيطة تعمل على رفع الجهد األزموزي للعصارة النباتية

. في مواجهة صدمة اإلجهاد الملحي ليؤثر )1980

ـ معنو ا فقد لوحظ إن هنالك تأثير ، NaClملح ال بين األصناف و التداخل أما لـه فـي اي

إذ أعطى تداخل الصنف شـدة بيـضاء مـع 12)( الجدول محتوى الفروع من السكريات الذائبة

غم وزن جاف التي اختلفـت معنويـا عـن / ملغم 3.514 ملي مول أعلى قيمه بلغت 175تركيز

70

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 92: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

يالحظ إن تداخالت األصناف ضمن المستوى الملحي الواحـد قـد و .جميع التداخالت األخرى

اختلفت معنويا فيما بينها بتفوق تداخالت الشدة البيضاء ضمن المستوى الملحي الواحـد مقارنـة

. نفسه بتداخالت الصنفين اآلخرين ضمن المستوى الملحي

البروتينات الذائبة الكلية 3-2-4

وجود اختالفات معنوية بين األصناف فـي محتـوى األفـرع )13( الجدول بينت نتائج

، إذ تفوق الصنف شدة بيضاء بمحتـوى أفرعـه مـن المتضاعفة من البروتينات الذائبة الكلية

ية البـروتين الـذائب فيـه البروتينات الذائبة الكلية معنويا على الصنفين اآلخرين ، فقد بلغت كم

14.44غم وزن جاف في حين بلغت كمية البروتين في شـدة سـوداء وكمـالي / ملغم 14.53

لقـد لـوحظ تبـاين . غم وزن جاف على التوالي اللذان اختلفا معنويا فيما بينهما /ملغم 12.04و

ملـح في محتوى مزارعهما النامية في أوساط غذائيـة غنيـة ب Trigonellaنوعين من جنس

NaCl ــات ــن البروتين ــة م ــرون ، و Niknam( الذائب ــد و )2006آخ Vijayanوج

أن التراكيب الوراثية للتوت المتحملة للملوحة كانت كمية البروتين عالية عنـد 2008)(وآخرون

تعرض أفرعها المزروعة خارج الجسم الحي لإلجهاد الملحي في حين انخفضت في التراكيـب

. لنباتالوراثية الحساسة لنفس ا

في وسط التضاعف فقد أدى إلى انخفاض محتوى األفـرع NaClأما زيادة تركيز ملح

ملي مول أقل محتـوى مـن 175 التركيز فقد أعطى 13)( الجدول من البروتينات الذائبة الكلية

ملغم NaCl ) 15.96 ملي مول ملح 0غم وزن جاف مقارنة بالمعاملة / ملغم 8.61البروتين بلغ

) .غم وزن جاف/

71

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 93: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

فـي محتـوى أفـرع MS إلى الوسط الغـذائي المضاف NaCl تأثير تركيز ملح )13(جدولبعد أربعـة أسـابيع ) غم وزن جاف /ملغم( أصناف العنب من البروتينات الذائبة الكلية

. من الزراعة خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

ملحمعدل تراكيز ال

0 16.13 15.80 15.94 15.96 75 15.24 15.73 15.21 15.39

100 14.93 14.97 14.90 14.93 125 14.00 14.08 13.68 13.92 150 13.67 13.51 12.52 13.23 175 13.24 12.60 0.00 8.61

12.04 14.44 14.53 معدل األصناف 0.031 =للتداخل 0.018=للتراكيز 0.013 =لألصناف*)0.05(م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

المتـضاعفة للطماطـة في األفـرع )2007( وأخرون Shibliوتتفق هذه النتائج مع ما جاء به

لذائبـة بزيـادة خارج الجسم الحي عند تعريضها لإلجهاد الملحي من حيث انخفاض البروتينات ا

الذي وجد أن البروتين يقـل )Debnath )2008وشاطره في النتيجة . تركيز الملح في الوسط

الناتجة عن زراعة براعمه القمية والجانبية في وسط غني Bacopa monnieriفي أفرع نبات

. بملح كلوريد الصوديوم

فـي وسـط NaClن انخفاض كمية البروتينات بشكل معنوي بزيـادة تركيـز ملـح إ

زيادة تحللـه المـائي فـي إلىالتضاعف تعود إلى أن الملوحة تعمل على تثبيط بناء البروتين و

حيث يؤثر أرتفاع الملوحة في الوسط الغذائي سـلبيا علـى بعـض ، العديد من األنواع النباتية

72

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 94: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

قلل مـن في Nitrate reductase أنزيم السيمااألنزيمات المهمة والمنظمة لعملية بناء البروتين و

. Plant ، (1974( أنخفاض كمية البروتين من ثمفعاليتها في عملية بناء البروتين و

التفـوق المعنـوي )13( الجـدول يظهر NaCl بين األصناف وتركيز ملح التداخل أما

على بقية التـداخالت ، اذ NaCl ملي مول ملح 0لمعاملة التداخل للصنف شدة بيضاء وتركيز

غم وزن جاف مقارنة بمعامالت التداخل فـي التراكيـز / ملغم 16.13ية البروتين فيها بلغت كم

أقل ) ملي مول 175 و 150كمالي وتركيزي (الملحية األخرى في حين أعطت معاملتي التداخل

فضال عن أن معامالت التداخل لألصناف الثالثة مع التراكيـز الملحيـة . محتوى من البروتين

. ملي مول قد اختلفت معنويا فيما بينها 175 و150 و 125

محتوى الفروع من البرولين 4-2-4

الى أن أفرع الصنف شدة بيضاء قد حقـق 14)( الجدول أشارت النتائج المعروضة في

زيادة معنوية في محتوى أفرعه من البرولين على الصنفين شدة سوداء وكمالي اذ احتوت أفـرع

غم وزن جـاف التـي اختلفـت / ملغم 0.56 مستوى من البرولين بلغ الشدة بيضاء على أعلى

لقـد . معنويا عن مستوياتها في أفرع الشدة سوداء وكمالي اللذان اختلفا معنويا فيما بينهما أيضا

أشارت العديد من الدراسات التي أجريت على المزارع النسيجية للعديد من النباتات الـى تبـاين

نـوعين و) 2005 وآخرون ، Zhang(تباين األصناف العائدة لها كالبطاطا محتوى هذه المزارع ب

. )2006وآخرون ، Trigonella)Niknam من جنس

73

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 95: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

في محتوى أفرع أصناف MS إلى الوسط الغذائي المضاف NaCl تأثير تركيز ملح )14(جدولجـسم بعد أربعة أسابيع من الزراعة خارج ال ) غم وزن جاف /ملغم( العنب من البرولين

. الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 0.15 0.09 0.07 0.10 75 0.50 0.30 0.21 0.33

100 0.52 0.37 0.27 0.39 125 0.61 0.39 0.30 0.43 150 0.75 0.43 0.32 0.50 175 0.81 0.46 0.00 0.42

0.19 0.34 0.56 معدل األصناف 0.02=للتداخل 0.01=للتراكيز 0.007=لألصناف*)0.05(م .ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

في الوسط أدى إلـى حـصول NaClإلى أن رفع مستويات ملح 14)(الجدول ويشير

في أفرع أصناف العنب المنماة علـى وسـط يحتـوي علـى زيادة معنوية في تراكم البرولين

غم وزن جاف الذي تفوق علـى جميـع التراكيـز /ملغم 0.50بلغت NaClملي مول ملح 150

وآخرون Singhالملحية األخرى في محتوى األفرع من البرولين وتتفق هذه النتائج مع ما وجده

2000a)( و فــي العنـــب Roussos و Pontikis) 2003(هوهوبـــا و فـــي ال Zhang

في أفـرع )2006( وآخرون Molassiotis و) 2004( في القوغ وعبدالحسين )2004(وآخرون

خـارج NaCl النامية في الوسط الغذائي المجهز بتراكيز مختلفـة مـن MM106أصل التفاح

حصول زيادة في محتوى الفروع من البرولين عند تعريض مزارعها النـسيجية فيالجسم الحي

.جهاد الملحي لظروف األ

74

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 96: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

هذه الزيادة قد تكون ناجمة عن األختالل في التوازن األزموزي داخل الخلية أذ يزداد إن

أنتاج هذا الحامض من قبل األنسجة المعرضة لألجهاد الملحي لتعديل األزموزية بـين الفجـوة

نسجة النبـات أذ أن مواد بناء البرولين في أ)2005 وآخرون ، Kavi Kishore( والسايتوبالزم

يـزداد تحولهـا إلـى ) حامض الكلوتاميك واألرجنين واألورنثين وأستيل حامض الكلوتاميـك (

البرولين تحت ظروف األجهاد عن طريق زيادة فعاليات األنزيمات الداخلة في البنـاء الحيـوي

ي الحيـو بناءيحفز تراكمه تنشيط االنزيمين المهمين بال و )2003 وآخرون ، Kumar(للبرولين

Biosynthatic وهما Vizpyrroline carboxylic acid synthetase و Pyrroline carboxylic

acid reductase وهذه العملية مسيطر عليها مـن قبـل جينـات تـسمى الجينـات المنظمـة

لقـد أقترحـت . )Tyagi، 2004 و Osmotically regulated gene ) Sairamباالزموزية

ي التنظيم األزموزي على المستوى الخلوي لحماية النبات مـن األجهـاد للبرولين ف أدوار عديدة

المؤذي للملوحة أحداها عمل حالة توازن بين الفجوة والسايتوبالزم حيث يبدأ تراكم البرولين في

) -Na+ ، Cl( داخل النسيج وتجمع األيونات األحادية التكـافؤ NaClالسايتوبالزم بعد دخول

لبرولين المتراكمة مع بعض المركبات العضوية األخرى تكفي لعمل تـوازن ا فكميةفي الفجوات

) Das ، 2005 و Parida: 2000 وآخرون ، Hanafy-Ahmed( أزموزي عبر غشاء الفجوة

أن تراكم هذا الحامض داخل الخلية يزيد من قابليتها على سحب الماء مـن الوسـط الغـذائي و

أثره باألضرار الناجمة عن الملوحة العالية ، فضال عن الملحي لتخفيف سمية األيونات المرتبطة

Zhu، 2001 :Maggio( لألنزيمـات والعـضيات الخلويـة Protective) حماية(في وقاية

للكــاربون ) مــصدر(أو مركــب خزنــي) 2008 و Munns ، 2002 : 2002وآخــرون ،

. )2005 ، وآخرون Chinnusamy( والنيتروجين

75

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 97: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

دراسات الحديثة أن البرولين المتجمع قد يعود إلى سـيطرة الجينـات وقد أفترض في ال

Betaine التي تسيطر على أنتاج البـرولين والبيتـايين Osmotic tolerance genesالمسماة

Ashraf( التي تقوم بحماية الخلية ومحتوياتها أوزموزيا من الفقد الرطوبي وأضـرار الملوحـة

في الحفاظ على األغشيه الخلوية واألنزيمـات مـن التـأثر رهاث فضال عن Orooj ، (2006و

. بالملوحة

حصول )14(الجدولوبينت نتائج التداخل بين تراكيز الملح وأصناف العنب قيد الدراسة

زيادة معنوية في محتوى الفروع من البرولين في الفروع العائدة لألصناف عند زيادة تركيز ملح

NaCl ملي مول ملـح 175طت معاملة التداخل للشدة بيضاء وتركيز في وسط التضاعف أذ أع

NaCl غم وزن جاف والتي تفوقـت علـى جميـع / ملغم 0.81 أعلى مستوى من البرولين بلغ

. أن تداخالت جميع األصناف ضمن التركيز الواحد قد اختلفت فيما بينها معنوياو. التداخالت

محتوى الفروع من الكاليسين بيتايين 5-2-4

أن الصنف شدة بيضاء قد حقق زيادة 15)( الجدول أظهرت نتائج الدراسة الموضحة في

بلـغ فقد شدة سوداء وكمالي في محتوى فروعه من الكاليسين بيتايين العنب معنوية على صنفي

و Rhodesغم وزن جاف وتتفق هذه النتائج مـع مـا جـاء بـه / مايكروغرام 67.56محتواه

Hanson)1993 (و Kumar وآخرون )الذين وجدوا بأن تجمع الكاليسين بيتايين تحـت )2003

اإلجهاد الملحي يكون عالي في األنواع النباتية واألصناف المتحملة للملوحة بالمقارنة مع األنواع

. واألصناف الحساسة للملوحة

76

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 98: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

صناف في محتوى أفرع أ MS إلى الوسط الغذائي المضاف NaClتأثير تركيز ملح )15(جدولبعـد أربعـة أسـابيع مـن ) غم وزن جاف /مايكروغرام( العنب من الكاليسين بيتايين . الزراعة خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف

الوسط الغذائي)mM(

شـــدة بيضاء

شـــدة سوداء

كمالي معدل تراكيز الملح

0 45.06 40.08 40.10 41.75 75 53.05 42.05 50.10 48.40

100 61.10 55.04 59.09 58.41 125 78.01 70.06 61.12 69.73 150 80.09 75.10 70.07 75.09 175 88.10 84.04 0.00 57.38

46.75 61.06 67.56 معدل األصناف 3.638=للتداخل 2.101=للتراكيز 1.485 = لألصناف*)0.05(م .ف . أ

) 0.05لى مستوىع(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

وجود تأثير معنوي في محتوى األفرع من الكاليسين بيتـايين )15( الجدولويالحظ من

ملي مول أعلـى 150 في وسط التضاعف حيث أعطى التركيز الملحي NaClعند زيادة تركيز

ملي مـول 0غم وزن جاف مقارنة بالتركيز /مايكروغرام 75.09محتوى للكاليسين بيتايين بلغ

غم وزن جاف فـي حـين اختلفـت / مايكروغرام 41.75 والذي أعطى محتوى بلغ NaClملح

باستثناء التركيزين ( التراكيز الملحية فيما بينها معنويا في محتوى األفرع من الكاليسين بيتايين

Zhangهذه النتائج مع ما جاء بـه وتتفق . )اللذان لم يختلفا عن بعضهما معنويا 175 و 100

من حيث ارتفاع محتوى الزروعات النسيجية للقوغ الفراتي مـن الكاليـسين 2004)(وآخرون

في الوسط الغذائي أذ أن تجمع الكاليسين بيتايين يكـون عاليـا NaClبيتايين بزيادة تركيز ملح

تحت ظروف اإلجهاد الملحي في العديد من األنواع النباتية لكي يلعب دوره في حماية بـروتين

77

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 99: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

فـضال عـن 2000 ) وآخـرون Yeo، : 1998 Giridara kumar(بالزمية األغشية السايتو

وحمايـة Hanson ، (1990 و dehydration )McCueحمايته للسايتوبالزم من فقدان الماء

Jensen ، 1996: Rajasekharan وBohnert(الكلوروبالست من التضرر بفعل الصوديوم

. )1997وآخرون ،

في محتوى األفـرع مـن الكاليـسين NaCl وتراكيز ملح أثر التداخل بين األصناف و

غم وزن جـاف عنـد / ميكروغرام 88.10 الذي ظهر بأعلى قيمة وقدرها )15( الجدولبيتايين

40.08 و 0.00(ملي مول بالمقارنة مـع أقـل قيمـة 175معاملة التداخل للشدة بيضاء وتركيز

ملي مول و 175الي مع التركيز أعطتها معاملتي تداخل صنف كم ) غم وزن جاف /مايكروغرام

شـدة بيـضاء (وقد أظهرت هـذه المعاملـة . الترتيب ملي مول على 0شدة سوداء مع تركيز

الجـدول تبين نتائج و. تفوقا معنويا على جميع التداخالت في الدراسة ) ملي مول 175وتركيز

لملحي الواحد بـدأ عنـد أن االختالف المعنوي لتداخالت األصناف الثالثة ضمن التركيز ا نفسه

. ملي مول وبتفوق تداخالت الصنف شدة بيضاء مع هذه التراكيز 100التي تفوق التراكيز

Peroxidaseفعالية أنزيم البيروكسديز 6-2-4

الخاص بفعالية أنـزيم البيروكـسديز أن 16)(الجدول أظهرت نتائج التجربة المبينة في

غـم وزن / وحدة امتـصاص 43.44ية أنزيمية مقدارها فروع الصنف شدة بيضاء قد سجلت فعال

غـم /وحدة أمتـصاص 14.65 و 30.42(طري أعلى معنويا من الصنفين شدة سوداء وكمالي

فـي )2005(وآخـرون Zhang وتنسجم هذه النتائج مع ما وجده .الترتيب على ) وزن طري

في الوسط الغـذائي NaClمزارع صنفين من البطاطا خارج الجسم الحي من حيث وجود ملح

78

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 100: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

ملي مول قد أدى الى حصول زيادة في فعالية انـزيم 20 بتركيز Zihuabaiلزروعات الصنف

Peroxidase أكثر مقارنة بفعالية األنزيم في الصنف األقل تحمال للملوحة Jingshi-2 .

فـي فعاليـة أنـزيم MS إلى الوسـط الغـذائي المضاف NaCl تأثير تركيز ملح )16(جدولبعـد أربعـة في أفرع أصناف العنـب )غم وزن طري /وحدة أمتصاص (روكسيديزالبي

. أسابيع من الزراعة خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 30.23 22.41 12.18 21.60 75 38.09 27.55 16.23 27.29

100 46.38 29.05 17.31 30.91 125 45.21 30.13 18.06 31.13 150 47.43 33.19 24.13 34.91 175 53.32 40.17 0.00 31.16

14.65 30.42 43.44 معدل األصناف 0.062=للتداخل 0.036=للتراكيز 0.025=لألصناف*)0.05(م .ف . أ

)0.05 مستوىعلى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

وجود فروق معنوية بين التراكيز الملحية المستعملة فـي الدراسـة )16 (الجدولويبين

حيث ازدادت فعالية أنزيم البيروكسيديز معنويا في الفروع المتضاعفة النامية فـي المـستويات

قـد ، فملي مول 150 لى أعلى قيمه عند المستوى الملحيملي مول فما فوق لتصل ا75 الملحية

غم وزن طري الذي أختلف معنويا عن باقي التراكيز الملحية ثـم / وحدة أمتصاص 34.91بلغت

. ملـي مـول 125 ملي مول الذي لم يختلف معنويا عـن التركيـز 175 هبطت عند المستوى

عند تعريض بـادرات وكـالس )2006( وآخرون Niknamوتنسجم هذه النتائج مع ما وجده

قد سبب زيادة في فعالية األنزيمات المـضادة لألكـسدة مثـل NaCl لملح Trigonellaنبات

79

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 101: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Peroxidase والـ Catalase . كما وجدMolassiotis نتيجة مماثلة مـن )2006( وأخرون

في أفرع التفاح المزروعة خارج الجسم الحي في أوسـاط Peroxidaseحيث زيادة فعالية الـ

. الصوديومتضاعف مجهزة بتراكيز مختلفة من ملح كلوريد

وجود أختالفات معنويـة فـي معـامالت )16(الجدول في وظهر من النتائج الموضحة

التداخل بين األصناف والتراكيز الملحية حيث تفوقت تداخالت الصنف شدة بيـضاء والتراكيـز

فـي NaClالملحية معنويا عن باقي التداخالت بين الصنفين شدة سوداء وكمالي وتراكيز ملـح

ملي مول أعلى 175، وقد أعطت معاملة التداخل شدة بيضاء وتركيز نزيم البيروكسديز فعالية أ

غـم وزن طـري ، فـي حـين / وحدة أمتصاص 53.32معدل لفعالية أنزيم البيروكسديز بلغت

لوحظ و ، NaCl ملي مول 0انخفضت فعالية أنزيم البيروكسديز في تداخالت األصناف وتركيز

. فعالية األنزيمية ضمن المستوى الملحي الواحد لكل صنفوجود فروقات معنوية في ال

محتوى الفروع من أيونات الصوديوم والكلوريد والبوتاسيوم 4-3

محتوى الفروع من أيونات الصوديوم 1-3-4

وجود اختالفات معنوية بين أصناف العنب شدة )17(جدول ال تبين النتائج الموضحة في

ي المزروعة خارج الجسم الحي في أوساط غذائية مزودة بتراكيز مختلفـة بيضاء وسوداء وكمال

في األفرع المتضاعفة بتفوق فـروع شـدة +Na في تركيز أيونات الصوديوم NaClمن ملح

لقد الحـظ بعـض . غم وزن جاف على الصنفين شدة سوداء وكمالي / ملغم 7.88بيضاء أذ بلغ

ا في محتوى أوراقها وأفرعها من أيونـات الـصوديوم الباحثين اختالف أصناف العنب فيما بينه

Walker)(1994في نموها في الحقل والبيت الزجـاجي ومـنهم NaCl عند اختبار تأثير ملح

كما اختلفـت . )2007، 2002 ( وآخرونWalker و )2008 ، 1996( وآخرونStevensو

80

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 102: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

الـصوديوم خـارج ملح كلوريدمن بتراكيز مختلفة ةاألفرع النامية في األوساط الغذائية المجهز

الجسم الحي ألصناف العنب المختلفة فيما بينها من حيث احتوائها على الصوديوم فقد ذكر كـل

مـن أن األصـناف التـي 1999)( Eris و Sivritepe و 1999)( وآخـرون Troncosoمن

+Na يومقد احتوت أنسجتها على كمية أكبر من أيونات الصودNaCl أظهرت تحمال أكبر لملح

.-Cl والكلوريد

في وسط التضاعف قد أدى إلى حصول زيادة معنوية في كميـة NaClز أن رفع تركي و

أيونات الصوديوم داخل فروع أصناف العنب قيد الدراسة مقارنة بأفرعها المزروعة في وسـط

نات أعلى محتوى من أيوNaCl حملي مول مل150 وقد أعطى التركيز NaCl ملي مول ملح 0

غم وزن جاف مقارنة بالتراكيز األخرى التي أختلفت فيما بينها معنويا / ملغم 8.30الصوديوم بلغ

وقد يعود سبب ارتفاع كمية الصوديوم في فروع أصناف العنب إلى زيـادة تركيـز أيونـات .

على حساب بقية األيونات في وسط التضاعف المستخدم نتيجة إلضافة تراكيـز +Na الصوديوم

، أذ تقوم الخاليا الموجودة في قاعدة الفروع المزروعة بالـسماح لهـذه NaClفة من ملح مختل

األيونات بالدخول إليها لزيادة جهدها األزموزي نتيجة اإلجهاد الملحي مما يؤدي إلى تراكم هـذه

و Greenway(األيونات في سايتوبالزم وفجوات الخاليا المعرضة لإلجهاد الملحـي

Munns ، 1980 . ( وتنسجم هذه النتيجة مع ما وجدهTroncoso وآخـرون )(و1999 Singh

)2002( وآخرون Harb في الطماطة و 1998)( وآخرون Canoو في العنب )2000a(وآخرون

في الكيوي من )2004(Dimassiو Sotiropoulos في التفاح و )2004(في الموز وعبدالحسين

فق مع نقصان أيونات البوتاسيوم في األنسجة المزروعـة حيث أرتفاع كمية الصوديوم التي تترا

. خارج الجسم الحي عند زيادة ملوحة وسط التضاعف

81

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 103: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

محتـوى أفـرع فـي MS إلى الوسط الغـذائي المضاف NaCl تاثير تركيز ملح )17(جدول بعـد أربعـة أسـابيع مـن ) غم وزن جاف/ملغم (أصناف العنب من أيونات الصوديوم

. سم الحيالزراعة خارج الج

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 4.10 3.24 3.66 3.67 75 7.16 7.11 5.16 6.48

100 8.76 8.15 6.53 7.81 125 8.51 8.22 6.84 7.86 150 9.14 8.82 6.95 8.30 175 9.66 9.93 0.00 6.53

4.86 7.58 7.88 معدل األصناف 0.046=للتداخل 0.027=للتراكيز 0.019=لألصناف*)0.05(م .ف . أ )0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

سبب تداخل األصناف وتراكيز الملح اختالفا معنويا في محتوى األفرع من الـصوديوم و

في معاملة التداخل شدة سوداء وتركيـز ) غم وزن جاف / ملغم 9.93( الذي ظهر بأعلى كمية له

معـامالت التـداخل السيمامول متفوقة بشكل معنوي على جميع التداخالت األخرى و ملي175

من جهة أخرى فـأن . NaCl ملي مول 0لألصناف شدة بيضاء وشدة سوداء وكمالي وتركيز

تلفت معنويا فيما بينها بتفوق تـداخالت تداخالت األصناف ضمن المستوى الملحي الواحد قد أخ

الـذي ) ملي مول 175باستثناء التركيز ( NaClالصنف شدة بيضاء مع ذلك المستوى من ملح

. اظهر تفوق تداخلي شدة سوداء وشدة بيضاء على الكمالي

82

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 104: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

- Cl محتوى الفروع من أيونات الكلوريد 2-3-4

بأن الفروق كانـت معنويـة بـين )18(ل جدوالظهر من نتائج الدراسة الموضحة في

األصناف الثالثة في تراكيز أيونات الكلوريد في أفرعها الناتجة من زراعة العقل الدقيقـة فـي

أسابيع من زراعتها في وسـط التـضاعف 4 بعد NaClوسط مجهز بمستويات مختلفة من ملح

سـوداء وكمـالي الـذي الصنف شدة بيضاء متفوقا على الصنفين شدة فكانخارج الجسم الحي

غم وزن جاف ، أن هذا االختالف بين األصـناف /ملغم 10.17بلغت كمية أيونات الكلوريد فيه

علـى تـؤثر في محتواها من أيونات الكلوريد قد يعود إلى االختالفات الوراثية فيما بينها التـي

هذه النتائج مع ما جاء وتتفق . قابليتها على أخذ ونقل أيونات الكلوريد داخل األنسجة المزروعة

ــه ــرون Troncosoبـــ Walker و 1999)( Eris وSivritepe و )1999( وآخـــ

تباين أصناف العنب فـي محتـوى في 2008)( وأخرون Stevens و )2007,2004(وأخرون

.فروعها المعرضة لإلجهاد الملحي من ايونات الكلوريد

83

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 105: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

محتـوى أفـرع فـي MSلوسط الغـذائي إلى االمضاف NaCl تاثير تركيز ملح )18(جدول بعد أربعة أسابيع من الزراعة ) غم وزن جاف /ملغم (أصناف العنب من أيونات الكلوريد

. خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( شـــدة

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 4.31 4.11 3.25 3.89 75 10.50 9.98 7.80 9.43

100 12.10 10.30 8.17 10.19 125 11.12 11.01 9.31 10.48 150 11.22 11.11 9.22 10.52 175 11.80 11.40 0.00 7.73

6.29 9.65 10.17 معدل األصناف 0.051=للتداخل 0.030=للتراكيز 0.021= لألصناف*)0.05(م .ف . أ

)0.05على مستوى(ق معنويأقل فر= م .ف . أ *

تشير إلى حـصول نفسه أما تأثير الملوحة في هذه الصفة فأن النتائج الواردة في الجدول

في الوسط الغـذائي، NaCl زيادة معنوية في محتوى الفروع من أيونات الكلوريد بزيادة تركيز

إذ بلغـت ، أعلى معدل مقارنة بالتراكيز األخـرى NaClملي مول ملح 150 إذ سبب التركيز

غم وزن جاف واختلفت بقية التراكيـز معنويـا عـن /ملغم10.52 كمية الكلوريد المتجمعة فيه

غـم وزن جـاف / ملغم3.89 , 9.43 , 10.19 , 10.48 , 7.73 اذ بلغت األخربعضها البعض

وتتفق هذه النتائج مع ما. الترتيب ملي مول على 0 , 75 , 100 , 125 , 175للتراكيز الملحية

ــده ــرونStevensوجــ ــرون Troncosoو) 1996( و آخــ Singh و1999)(وآخــ

Harbو) 1996(وحمــد . فــي العنــب)2004(وآخــرون Walker و) 2000a(وآخــرون

84

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 106: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

في التفاح من حيث زيادة تجمع الكلوريد فـي )2004( في الموز وعبدالحسين )2002( وآخرون

.ل المستعم بزيادة التركيز NaClاألنسجة المعرضة لملح

ـ في هذه الـصفة ا معنوي اأن للتداخل بين المستويات الملحية واألصناف تأثير و يالحظ ف

زيادة في تركيز الكلوريد في الفروع المتضاعفة لألصناف شدة بيضاء وشـدة سـوداء وكمـالي

في وسط التضاعف حيث أعطت معاملة التداخل للشدة بيـضاء وتركيـز NaCl بزيادة تراكيز

غم وزن جـاف / ملغم 12.10 أعلى تركيز أليونات الكلوريد مقداره NaCl ملي مول ملح 100

فضال عن وجود أختالفـات معنويـة بـين . التي تفوقت معنويا على جميع التداخالت األخرى

معامالت األصناف وتداخالتها ضمن المستوى الملحي الواحد بتفوق تـداخالت الـصنف شـدة

. بيضاء

+K ت البوتاسيوممحتوى الفروع من أيونا 3-3-4

للصنف في محتـوى الفـروع ي وجود تأثير معنو )19(تبين النتائج الواردة في الجدول

غم وزن /ملغم 8.66 فقد أظهر الصنف شدة بيضاء تفوقا معنويا بلغ +K من أيونات البوتاسيوم

8.10 جاف على الصنفين شدة سوداء وكمالي الذي بلغ محتـوى أفرعهمـا مـن البوتاسـيوم

Troncosoبـه وتتفق هذه النتائج مع مـا جـاء . الترتيبغم وزن جاف على / ملغم7.13و

و )2007,2004( وآخـــرونWalker و 1999) (Eris وSivritepeو ) 1999(خـــرون وأ

Stevens تباين أصناف العنب في محتوى فروعها المعرضـة لإلجهـاد في 2008)( وآخرون

. +K لحي من أيونات البوتاسيوم الم

85

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 107: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

NaClفي حين وجد أن محتوى الفروع من البوتاسيوم قد قل معنويا مع زيادة نسبة ملح

ملـي 75 و 0في وسط التضاعف حيث اختلفت التراكيز فيما بينها معنويا بأستثناء التركيـزين

. من البوتاسيوم مول الذين لم يختلفا فيما بينهما معنويا في محتوى فروعهما

محتـوى أفـرع فـي MS إلى الوسط الغـذائي المضاف NaClتاثير تركيز ملح )19(جدول بعد أربعـة أسـابيع مـن ) غم وزن جاف /ملغم (أصناف العنب من أيونات البوتاسيوم

. الزراعة خارج الجسم الحي

في NaClتركيز ملح األصناف الوسط الغذائي

)mM( ـدة شــ

بيضاءشـــدة

سوداء كمالي

معدل تراكيز الملح

0 10.43 10.40 10.12 10.32 75 10.44 10.31 10.23 10.33

100 10.00 9.05 8.99 9.35 125 8.20 7.10 8.05 7.78 150 7.04 6.41 5.42 6.29 175 5.83 5.31 0.00 3.71

7.13 8.10 8.66 معدل األصناف 0.035 =للتداخل 0.020 =للتراكيز 0.014=لألصناف*)0.05( م.ف . أ

)0.05على مستوى(أقل فرق معنوي= م .ف . أ *

سبب انخفاض أيونات البوتاسيوم في الفروع المعرضة لإلجهاد الملحـي مـع زيـادة إن

إلـى الوسـط NaCl في وسط التضاعف قد يعزى ذلك إلى أن إضافة ملح NaClتراكيز ملح

تعمل الخلية على زيـادة لكدة سالبية الجهد المائي للوسط الغذائي لذ الغذائي سوف يعمل على زيا

ضغطها األزموزي عن طريق امتصاص األيونات في الوسط الغذائي ولكـون تركيـز أيونـات

الصوديوم هي السائدة في الوسط الغذائي مما يؤثر سلبا في عملية امتصاص ودخـول أيونـات

لإلجهاد الملحي نتيجة التنافس بين هذين األيونين بعمليـة البوتاسيوم إلى داخل الخاليا المعرضة

86

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 108: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Pumpوتأثير ذلك علـى مـضخة Munns , 1980) وantagonism) Greenwayالتضاد

H+ /K+ ونواقل البوتاسيوم في األغشية الخلوية )Orcutt و Nilsen 2000,( فـضال عـن أن

قنوات نقل البوتاسيوم تستعملقد +Naبعض الدراسات الحديثة قد أفترض أن ايونات الصوديوم

وآخـرون ، Ca++) K+ to Ca++ transporter) (Maser و +Kمن خالل أستخدامه لنواقل

)2004(وآخـرون Walker و)1999(وآخـرون Troncoso وهذا يتفق مع كل من . )2002

فـي فـي الطماطـة ، )2007( وآخرون Shibli في التفاح و )2004(في العنب وعبد الحسين

نخفاض تركيز أيونات البوتاسيوم المترافق مع زيادة أيونات الصوديوم عند تعـريض المـزارع ا

النسيجية لهذه النباتات للملوحة وأن شدة االنخفاض يترافق مع زيادة تركيـز الملـح المـضاف

. للوسط الغذائي

يونـات تأثيرا معنويا في محتوى الفـروع مـن أ NaClأظهر التداخل بين األصناف وتركيز و

يالحظ قلة تركيز هذه األيونات في أصناف العنب شدة بيضاء وشدة سوداء وكمالي فالبوتاسيوم ،

، أذ NaCl ملي مول ملـح 0 مقارنة مع تركيز NaClالمزروعة في المستويات العالية من ملح

أن تداخالت فروع الشدة بيضاء قد أظهرت أعلى مستويات من البوتاسيوم مقارنة مع الـصنفين

. آلخرين ضمن المستوى الملحي الواحدا

87

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 109: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

االستنتاجات و التوصيات - 5

:ستنتاجاتألا

باين بين أصناف العنب قيد الدراسة في قابلية تحملها للشد الملحي مـن حيـث نمـو وجود ت -1

.الزروعات وبقائها على قيد الحياة

وأختلـف هـذا MS في الوسط الغذائي NaClيز ملح أزداد تأثر أصناف العنب بزيادة ترك 2-

الصنف شدة بيضاء أعلى نسبة بقاء واقل درجـة تـضرر التأثر من صنف ألخر، أذ أعطى

التـي (لزروعاته مع استمرار تضاعف زروعاته بشكل جيد عند المستويات العالية من الملح

اج أن الـصنف شـدة مقارنة بالصنفين اآلخرين لذلك يمكن االسـتنت ) ملي مول 100تفوق

.بيضاء االكثر تحمال للملوحة ومن ثم يأتي بعده الصنفين شده سوداء وكمالي على الترتيب

من خالل النتائج المرتبطة بزيادة فعالية انزيم البيروكسيديز ومحتوى األفرع من الكاليـسين 3-

ـ والبرولين بيتايين دة بيـضاء في فروع الزروعات المعرضة لالجهاد الملحي في الصنف ش

الذي أبدى مقدرة عالية للتحمل مقارنة بمحتواها في األصناف األقل تحمل فـي الدراسـة ،

.في حماية الخلية وعضياتها يمكن االستنتاج بان لهما اثرا مهما

يمكن أعتبار مؤشرات صفات النمو ومحتوى الخاليا من الـسكريات الذائبـة واألنزيمـات 4-

.د تحمل الملوحة ألصناف العنب قيد الدراسة والبروتينات مؤشرات لتحدي

88

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 110: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

:التوصيات

بزراعـة عند الرغبة في زراعة األصناف المدروسة في األراضي المتأثرة بالملوحة نوصي -1

وكمـالي فـي شدة سوداءثم يأتي بعده األكثر تأثرا بالملوحة الصنف شدة بيضاء في المناطق

.تأثرا األقل

في برامج تقييم تحمل الملوحـة NaCl ملي مول من ملح 125 و 100 استعمال التركيزين 2-

.خارج الجسم الحي ألصناف العنب قيد الدراسة على األقل

جسم الحي في الحقل ومقارنتها مـع نوصي بمتابعة نمو األصناف المتحملة للملوحة خارج ال 3-

األصناف األقل تحمال للتأكد من أن الصنف المتحمل للملوحة خارج الجسم الحي يسلك نفـس

.السلوك في الحقل

أستخدام خليط األمالح في الترب العراقية النسبية المختلفة في تقويم أصناف العنب للملوحـة 4-

. لألنواع الملحية في الترب العراقية وذلك لألستفادة من التداخالت األيجابية

إجراء تجارب مستقبلية لدراسة اثر مجاميع إنزيمات البيروكـسيديز المختلفـة واإلنزيمـات - 5

. المضادة لالكسدة في قابلية تحمل أصناف العنب لالجهادات الملحية

89

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 111: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

6 - المصادر

جامعـة . مديريـة دار الكتـب . النبـات الماء في حياة . 1984. احمد ، رياض عبد اللطيف

. الموصل

دراسة خصائص ترب السبخة والشوره في بعـض منـاطق . 1984. الحسيني ، علي عباس

. العراق– جامعة بغداد –رسالة ماجستير ، كلية الزراعة . العراق

دار الكتـب للطباعـة والنـشر ، - أنتاج األعناب العملي 1992. .الدجيلي ، جبار عباس حسن

. وزارة التعليم العالي البحث العلمي ، العراق. جامعة بغداد

. جامعة بغـداد – االسس النظرية والتطبيقية –ملوحة التربة . 1989. ، احمد حيدر يالزبيد

. العراق. وزارة التعليم العالي والبحث العلمي –بيت الحكمة

تـصميم وتحليـل تطبيقـات فـي 1990..كريمـة محمـد ، مـدحت و وهيـب ، ساهوكيال

. العراق. جامعة بغداد. وزارة التعليم العالي والبحث العلمي.التجارب

وزارة التعلـيم العـالي .)الجـزء األول (إنتاج األعنـاب .2000 .السعيدي ، إبراهيم حسن

. العراق– جامعة الموصل –والبحث العلمي

عدیم ة الب ذور العن ب أص ناف ض دراس ة مواص فات بع .2001. ، عبد الرزاق عبد العزی ز المالك

.العراق. بغداد جامعة. كلیة الزراعة. رسالة ماجستیر. في المنطقة الوسطى من العراق

اسـتحداث صـفة تحمـل الملوحـة فـي المـوز باسـتخدام .1996.حمد ، محمـد شـهاب

جامعـة البـصرة - كليـة الزراعـة - دكتـوراه أطروحـة . تقنية زراعة االنسجة

. ،جمهورية العراق

90

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 112: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

لتحديد قابلية تحمل أصناف من األنسجة تقنية زراعة استخدام .1995.خضر ، حلمي حامد

ة ــ جامع– الزراعةكلية –أطروحة دكتوراه . الملحي لإلجهاد والرز والجت الحنطة

.العراق جمهورية–بغداد

وزارة . جامعة الموصـل . األغذية تحليل .1987 .ن صادق حس ،والحكيم داللي ، باسل كامل

. العراق. التعليم العالي والبحث العلمي

التف اح المكث رة خ ارج الج سم الح ي عل ى أص ول قابلی ة .1999.ش لش، جمع ھ س ند

جامع ة - كلی ة الزراع ة - دكت وراه أطروح ة . )NaCl(تحم ل الملوح ة

. جمھوریة العراق –بغداد

توظيف تقنية التطفير خارج الجسم الحي في تحـسين . 2004. سلم عبد علي م. عبد الحسين

أطروحـة . لملح كلوريد الـصوديوم Omara وعمارة MM 106تحمل اصلي التفاح

. جامعة بغداد. كلية الزراعة . دكتوراه

لظـروف الـشد البيئـي Musa spp تحـسين المـوز .2001. عبـد الـرحيم ، نسيمعثمان

ابن الهيثم / كلية التربية - دكتوراه أطروحة. وأشعة كاما األنسجةم زراعة باستخدا

. جمهورية العراق –جامعة بغداد

Abdel-Hussein, M.A.-A. 2006 . Evaluation of MM106 and Omara apple

rootstocks for salt tolerance in vitro . Journal of Karbala University

,4 (1): 184–191

Akbaş, F. A. : Ç. Işikalan : Y. KARA and D. Başaran .2004. The

Comparison on the Proliferation of Lateral Buds of Vitis vinifera L.

cv. Perle de Csaba during Different Periods of the Year in in vitro

Conditions. Int. J. Agri. Biol., 1560–8530/2004/06–2–328–330.

http://www.ijab.org

91

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 113: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

AL- Ansary, A.-R. M.F. : A. A. Rizkalla and A. M. Badr Elden .2007.

Micropropagation and Biochemical Genetic Markers detection for

Drought and Salt Tolerance of Pear Rootstock. Aust. J. Basic &

Appl. Sci., 1(4): 625-636

Ali, G. ; P.S. Srivastava and M. Iqbal .1999. Proline accumulation,

protein pattern and photosynthesis in Bacopa monniera regenerants

grown under NaCl Stress. Biol. Plant., 42, ( 1 ) 89-95.

Amini, F. : A.A. Ehsanpour : Q.T. Hoang and J.Sh. Shin .2007. Protein

pattern changes in tomato under in vitro salt stress. Russian J. plant

Physiol., 54 (4) : 464-471.

Antcliff, A.J. : H.P. Newman and H.C. Barrettt. 1983. Variation in

chloride accumulation in some American species of grapevine.

Vitis , 22: 357-362.

Argyrakis, E. M. and M. Doxastaki . 2002. Response of in vitro cultured

140Ru, 110R, 41B vine rootstocks to NaCl salinity conditions.

Agricultural Res., 25(2): 33-44.

Arzani, A. 2008. Improving salinity tolerance in crop plants: a

biotechnological view. In Vitro Cell. Dev. Biol. -Plant, 44:373–

383.

Ashraf, M. and M.R. Foolad . 2007. Roles of glycine betaine and proline

in improving plant abiotic stress resistance. Environ. Exp. Bot., 59(

2) 206-216

Ashraf, M. and A. Orooj . 2006. Salt stress effects on growth, ion

accumulation and seed oil concentration in an arid zone traditional

medicinal plant ajwain (Trachyspermum ammi [L.] Sprague). J.

Arid Environ., 64 : 209–220.

92

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 114: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Ashraf, M. and N. Parveen . 2002. Photosynthetic parameters at the

vegetative stage and during grain development of two hexaploid

wheat cultivars differing in salt tolerance. Biol. Plant., 45: 401-407.

Athar, H.R. and M. Ashraf .2009 . Strategies for Crop Improvement

Against Salinity and Drought Stress : An Overview .In : M. Ashraf

: M. Ozturk & H.R. Athar (Eds.) Salinity and Water Stress :

Improving Crop Efficiency. Springer Science and Business Media

B.V. chapter, 1. pp.1-16

Barlass, M. and K.G.M. Skene .1981. Relative NaCl tolerances of

grapevine cultivars and hybrids in vitro. Z. Pflanzenphysiol., 102:

147-156.

Bates, L.S. ; R.P. Waldren and I.D. Teare .1973. Rapid determination of

free proline for water stress studies. Plant Soil., 39:205-207.

Bavaresco, L ; M. Fregoni and E. Gambi .1993. In vitro method to

screen grapevine genotypes for tolerance to lime-induced chlorosis.

Vitis, 32: 145-148.

Ben-Hayyim, G. and U. Kalkafi and R. Ganmore-Neuman .1987. Role

of Internal potassium in maintaining growth of cultured citrus cells

on increasing NaCl and CaCl2 concentrations. Plant Physiol., 85 :

434- 440

Bischoff , J. 1999. Salt / salinity tolerance of common horticultural crops

in south Dakota – garden and vegetable / woody fruit crops. South

Dakota Extension , fact sheet .904.

Bohnert, H.J. and R.G. Jensen .1996. Metabolic engineering for

increased salt tolerance, the next step, Aust. J. Plant Physiol., 23;

661–666.

93

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 115: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Bray, E.A. 1993. Molecular responses to water deficit . Plant Physiol.

103:1035-1040.

Caboni , E. : S. Anselmi : E. Donato and F. Manes . 2003. In vitro

selection of Actinidia deliciosa clones tolerant to NaCl and their

molecular and in vivo ecophysiological characterization. Acta

Hort., 618 : 77-83

Cano E.A ; F. Peréz-Alfocea ; V. Moreno ; M. Caro and M.C. Bolarin

.1998. Evaluation of salt tolerance in cultivated and wild tomato

species through in vitro shoot apex culture. Plant Cell Tiss. Organ

Cult., 53:19-26.

Cavagnaro, J. B. ; M. T. Ponce ; J. Guzmán and M. A. Cirrincione

.2006. Argentinean cultivars of Vitis vinifera grow better than

European ones when cultured in vitro under salinity. BIOCELL,

30(1): 1-7.

Chapman, H.D. and P.F. Pratt .1961. Methods of Analysis for

Soil,Plants and Water. Division of Agricultural Science, University

of California .USA.

Charbaji, T. and Z. Ayyoubi . 2004. Differential growth of some

grapevine varieties in Syria in response to salt in vitro. In Vitro

Cell. Dev. Biol.- plant, 40( 2) 221-224.

Charbaji, T. and I. Nabulsi .1999. Effect of low doses of gamma

irradiation on in vitro growth of grapevine. Plant Cell Tiss. Organ

Cult., 57 : 129-132

Chee, R. : R. M. Pool and D. Bucher. 1984. A method for large scale In

vitro propagation of Vitis. New York food and Life Sciences

Bulletin, Number 109, 1-9

Chinnusamy, V. : A. Jagendorf and J. Zhu. 2005. Understanding and

improving salt tolerance in plants. Crop Sci., 45: 437-448

94

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 116: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Croughan, T.P. ; S.J. Stavarek and D.W. Rains .1978. In vitro

development of salt resistant plants. Environ. Exp. Bot., 21 (3/4 )

317- 324.

Debnath, M. 2008. Responses of Bacopa monnieri to salinity and drought

stress in vitro. J. Med. Plant. Res., 2(11) 347-351.

Delauney, A. and D.Verma 1993. Proline biosynthesis and

osmoregulation in plants. Plant, J., 4:215-223.

Demir, Y. and I. Kocaçaliskan .2002. Effect of NaCl and proline on bean

seedlings cultured in vitro. Biolo. Plant. 45 (4) 597-599 Dimassi-Theriou, K. 1998. Response of increasing rates of NaCl or CaCl

2

and proline on ‘Mr.S 2/5’ (Prunus cerasifera) peach rootstock

cultured in vitro. Adv. Hort. Sci., 12 : 169–174.

Dzazio , P. M. : L. A. Biasi and F. Zanette . 2002. Micropropagation of

‘420-A’ grapevine rootstock. Rev. Bras. Frutic., Jaboticabal - SP,

24( 3) 759-764.

Eris, A. and N. Sivritepe .1995. In Vitro propagation of grapevines by

axillary bud culture. Symposium über Wissenschafliche Ergebnisse

Deutsch-Türkischer Universitäts partnerschaften im Argarbereichs

(Verbände Deutsch-Türkischer Agrarund Naturwissenschaftler,

Ankara-Berlin), 12-17 September 1995, Ankara. 235-242.

Erturk , U. : N. Sivritepe : C. Yerlikaya : M. Bor : F. Ozdemir and I.

Turkan .2007. Responses of the cherry rootstock to salinity in

vitro. Biol. Plant., 51 (3): 597-600

FAO. 2003. Bulletin of statistics Vol. 4 No. 2

Flowers, T.J. 2004. Improving crop salt tolerance. J. Exp. Bot., 55(396)

307-319.

95

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 117: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Flowers, T.J. ; P.F. Troke and A.R. Yeo . 1977. The mechanism of salt

tolerance in halophytes . Ann. Rev. Plant Physiol., 28 : 89-121.

George, E. F. ; M. A. Hall and G.-J. De Klerk .2008. Plant Propagation

by Tissue Culture. Volume 1. The Background, 3rd Edition,

Published by Springer, Dordrecht, The Netherlands.

Giridara Kumar, S. ; K.V. Madhusudhan, ; N. Sreenivasulu and C.

Sudhakar . 2000 .Stress responses in two genotypes of mulberry

(Morus alba L.) under NaCl salinity, Indian J. Exp. Biol., 38 : 192–

195.

Goodwin , T.W. 1976 . Chemistry and Biochemistry of Plant Pigment. 2nd

ed. Academic Press, London, N.Y., Sanfrancisco, p. 373.

Greenway, H. and R. Munns. 1980. Mechanisms of salt tolerance in non

halophytes. Ann. Rev. Plant Physiol., 31: 149-190.

Grieve, C.M. and S.R. Grattan .1983. Rapid assay for determination of

water soluble quaternary ammonium compounds, Plant Soil., 70 :

303–307.

Hamed, A. M. and E. A.M. Ali .2007.Effect of Different Sea Water

Concentrations on Growth Parameters of Pineapple (Ananas

comosus) in vitro and in vivo. J. Appl. Sci. Res., 3(8) 713-722.

Hanafy-Ahmed, A.H. ; H.M.Hassan, ; M.M.A. Gad, and

M.A.Amin,.2002. Micropropagation of Myrtus communis and

increasing its tolerance to salinity stress by using polyamines.

Proceedings of the 2nd Congress on Recent Technologies in

Agriculture, Faculty of Agriculture , Cairo University 28 – 30

October. Pp.995- 1011.

Hanafy- Ahmed, A.H. ; M.A. Higazy, ; Y.H. El-Shafey, and S.F.

Moussa .2000. Effect of salinity , silicon and proline on growth ,

yield and chemical composition of wheat plant .Xth International

96

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 118: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Colloquium for the Optimization of Plant Nutrition . April 8-13,

2000 , Cairo , Egypt

Harb, E.M . ; O.M. El – Shihy ; A . H .Hanafy Ahmed and Mualla ,

N.A . 2002 . Using plant tissue culture technique for rapid

propagation and salt tolerance in banana plant .Proceedings of the

2nd Congress on Recent Technologies in Agriculture, Faculty of

Agriculture , Cairo University 28 – 30 October. Pp. 979- 994.

Harinasut, P. : S. Srisunak : S. Pitukchaisopol and R.

Charoensataporn . 2000. Mechanisms of adaptation to increasing

salinity of mulberry: proline content and ascorbate peroxidase

activity in leaves of multiple shoots. ScienceAsia, 26 : 207-211.

Hartmann, H . J ; D . E . Kester ; R.L. Geneve and Jr. F . T. Davies .

1997 . Plant Propagation : Principles and Practices .( 6th edn.)

Prentice - Hall Inc., New Jersey , USA .

Hasegawa, P.M.; R.A. Bressan and A.K. Handa. 1987 . Cellular

mechanisms of salinity tolerance . HortSci. , 21 : 1317 – 1324.

He, S. : Y. Han : Y. Wang : H. Zhai and Q. Liu .2009. In vitro selection

and identification of sweetpotato (Ipomoea batatas (L.) Lam.)

plants tolerant to NaCl . Plant Cell Tiss. Organ Cult. 96 : 69–74

Heloir M-C : J-C. Fournioux : L. Oziol and R. Bessis .1997. An

improved procedure for the propagation in vitro of grapevine (Vitis

vinifera cv. Pinot noir) using axillary- bud microcuttings. Plant

Cell, Tiss. Organ Cult., 49 : 223-225.

Herbert, D. ; P . J . Phillips and R . E . Strange . 1971 . Determination

of total carbohydrate. In : Norris , J . R . and Robbins , D . W .

(eds.) Methods in Microbiology . chapter 3. pp.209- 344. Academic

Press , New York .

97

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 119: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Hossain, Z. ;A-K.A.Mandal : S.K. Datta and A.K. Diswas .2007.

Development of NaCl-tolerance line in chrysanthemum morifolium

Ramat. Through shoot organogenesis of selected callus line.

J.Biotechnology., 129 (4) 658-667.

Hu, C.Y. and P.J. Wang .1983. Meristem, shoot tip and bud cultures. In :

D.A. Evans ; W.R. Sharp; P.V. Ammirato and Y. Yamada (eds.)

Handbook of Cell Culture .(pp.177-227).

Hudson, T. S. ; D. K. Hartle ; S. D. Hursting ; N. P. Nunez ; T. T.Y.

Wang ; H. A. Young ; P. Arany and J. E. Green .2007.

Inhibition of Prostate Cancer Growth by Muscadine Grape Skin

Extract and Resveratrol through Distinct Mechanisms. Cancer

Res., 67 (17) 8396- 8405.

Hui, L.I. : L.I. Feng-Ian : D.U. Jing-Chuan : L.U. Hai and H.E.Zheng-

quan.2008 . Somatic embryogenesis and histological analysis from

zygotic embryos in Vitis vinifera L. ' Moldova'. For.Stud.China, 10

(4) 253-258.

Ibanez, A. : M. Valero and A. Morte .2003. Influence of cytokinins and

subculturing on proliferation capacity of single-axillary-bud

microcuttings of Vitis vinifera L. cv. Napolen . Anales de Biologia,

25: 81-90.

Jules, J. and J. N. Moore .1996. Fruit Breeding .volume II: Vine and

small fruit crops. John Wiley & Sons. Inc.

Karim, S. 2007. Exploring plant tolerance to biotic and a biotic stresses.

Doctoral thesis. 66pp. Faculty of Natural Resources and

Agricultural Sciences Department of Plant Biology and Forest

Genetics Uppsala,Swedish University of Agricultural Sciences

98

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 120: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Kavi Kishore, P.B. : S. Sangam : R.N. Amrutha,: P.S. Laxmi,: K.R.

Naidu : K.R. Rao : S. Rao : K.J. Reddy : P.Theriappan and N.

Sreenivasulu . 2005 . Regulation of proline biosynthesis,

degradation, uptake and transport in higher plants: its implications

in plant growth and abiotic stress tolerance. Curr. Sci., 88, 424–

438.

Kaya, C. : A.L. Tuna and I. Yokaş. 2009. The Role of Plant Hormones in

Plants Under Salinity Stress. In : M. Ashraf : M. Ozturk & H.R.

Athar (Eds.) Salinity and Water Stress : Improving Crop Efficiency.

Springer Science + Business Media B.V. chapter , 5. pp.45-50

Khales, A. and M. Bazziz . 2006. Peroxidases study of Opuntia ficus

indica L. ecoyypes in relation to the development under salt stress

condition. International Congress of Biochemistry Agadir , 9 -12

May , pp. 133-136.

Kim, S.H. and S.K. Kim .2002 . Effect of auxins and cytokinins on callus

induction from leaf blade , petiole and stem segments of in vitro

grown "Sheridan" grape shoots. J. Plant Biotechnology, 4 (1) 1-5

Kim, Y. ; T. Chung and W. Choi .1988. Increased regeneration from

NaCl tolerant callus in rice. Euphytica, 39 : 207 – 212.

Kotuby-Amacher, J. : R. Koenig and B. Kitchen . 1997. Salinity and

plant tolerance . Utah State University Extension : AG-SO-03

Krul, W.R. and G.H. Mowbray.1984. Grapes. In : Sharp,W.R. ; Evans,

D.A. ; Ammirato, P.V. and Yamada, Y.(eds )Handbook of Plant

Cell Culture. Vol.2. Crop Species. Pp. 396-434

Kumar, S. ; A. M. Reddy and C. Sudhakar . 2003. NaCl effects on

proline metabolism in two high yielding genotypes of mulberry

99

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 121: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

(Morus alba L.) with contrasting salt tolerance. Plant Sci., 165 ;

1245–1251

Kyte, L. and J. Kleyn . 1996. Plants From Test Tubes : An Introduction to

Micropropagation. 3th Edition, Timber Press, Inc

Lankes, C. and R.H. Zimmerman .1990. Impact of osmotic potential on

in vitro culture of apple. Acta Hort., 280 : 417-424.

Levitt, J. 1980. Salt and ion stress. In: Responses of Plant to

Environmental Stresses. II.PP.365-488. Academic Press, New

York.

Lin, J. : Y. Wang and G. Wang . 2006. Salt stress-induced programmed

cell death in tobacco protoplasts is mediated by reactive oxygen

species and mitochondrial permeability transition pore status. J.

Plant Physiol.,163 : 731-739.

Lowry, O.H. : N.J. Rosebrough : A.L. Farr and R.J.Randull

.1951.Protein measurement with Folin phenol reagent .J. Biol.

Chem., 193 : 295-297.

Maas, E.V. .1990. Crop salt tolerance. In : Agricultural Salinity

Assessment and Management. ASCE Manuals and Reports on

Engineering, No 71. K.K. Tanji (Ed.), pp. 262-304. ASCE, NY.

Maggio, A. ; S. Miyazaki ; P. Veronese ; T. Fujita ; J.I. Ibeas ; B.

Damsz,; M.L. Narasimhan ; P.M. Hasegawa ; R.J. Joly and

Bressan, R.A. 2002. Does proline accumulation play an active role

in stress induced growth reduction? Plant J., 31: 699–712

Mahmoud, R.A. .2000. Salt tolerance response and enhancement of some

banana genotypes in vitro .MSc. thesis , Fac.Agric.,Cairo

University

100

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 122: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Mäser, P. : M. Gierth and J.I. Schroeder . 2002. Molecular mechanisms

of potassium and sodium uptake in plants. Plant and Soil 247, 43-

54.

McCue, K.F. and A.D. Hanson .1990. Drought and salt tolerance: towards

understanding and application. Trends Biotechnol., 8: 358-62.

Meloni, D.A. : M.A. Oliva : C.A. Martinez and J.Cambraia .2003.

Photosynthesis and activity of superoxide dismutase , peroxidase

and glutathione reductase in cotton under salt stress. Environ. Exp.

Bot., 49 : 69-76.

Mercado JA ; M.A. Sancho-Carrascosa ; S. Jim´enez-Berm´udez ; R.

Per´an-Quesada ; F. Pliego-Alfaro and M.A. Quesada .2000.

Assessment of in vitro growth of apical stem sections and

adventitious organogenesis to evaluate salinity tolerance in

cultivated tomato. Plant Cell Tiss. Organ Cult., 62: 101-106.

Mhatre, M. : C.K. Salunkhe and P.S. Rao .2000. Micropropagation of

Vitis vinifera L.: towards an improved protocol. Sci. Hort., 84 :

357-363.

Mohamed, F.H., 2002. Responses of six strawberry cultivars to salinity

during the in vitro proliferation and rooting stages during and post–

acclimatization period in the greenhouse. Zagazig J. Agric. Res.,

29:

767–92

Molassiotis, A.N. : T. Sotiropoulos : G. Tanou : G. Kofidis : G.

Diamantidis and Ι. Therios .2006 .Antioxidant and anatomical

responses in shoot culture of the apple rootstock MM 106 treated

with NaCl, KCl, mannitol or sorbitol. Biol. Plant., 50 (3): 331-338

101

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 123: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Mungala, A. J. : T. Radhakrishnan and J. R. Dobaria. 2008. In vitro

Screening of 123 Indian Peanut Cultivars for Sodium Chloride

Induced Salinity Tolerance. World J. Agric. Sci., 4 (5): 574-582,

Munns, R. 2002. Comparative physiology of salt and water stress. Plant

Cell and Environ., 25 : 239-250.

Munns, R. and M. Tester .2008. Mechanisms of salinity tolerance. Annu.

Rev. Plant. Biol., 59: 651–681.

Murashige, T. and F. Skoog .1962. A revised medium for rapid growth

and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant., 15, 473-

497.

Neocleous, D. and G.J. Minas .2007. An in vitro test for salt (NaCl)

tolerance of red raspberry (Rubus idaeus l.) cultures. Acta

Hort.,741 : 289-294

Niknam, V. : M. Bagherzadeh : H. Ebrahimzadeh and A. Sokhansanj.

2004. Effect of NaCl on biomass and contents of sugars, proline

and proteins in seedlings and leaf explants of Nicotiana tabacum

grown in vitro. Biol. Plant., 48 (4): 613-615.

Niknam, V. : N. Razavi : H. Ebrahimzadeh and B. Sharifizadeh . 2006 .

Effect of NaCl on biomass, protein and proline contents, and

antioxidant enzymes in seedlings and calli of two Trigonella

species. Biol. Plant., 50 (4): 591-596,

Orcutt , D.M. and E.T. Nilsen .2000. The Physiology of Plants Under

Stress : Soil and Biotic Factors . John Wiley & Sons , Inc. : USA

Parida, A.K. and A.B. Das . 2005. Salt tolerance and salinity effects on

plants: a review. Ecotox. Environ. Safety, 60: 324–349.

102

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 124: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Perl, A. and Y. Eshdat .1998. DNA transfer and gene expression in

transgenic grapes. In: Tombs, M.P.(ed) Biotechnology and genetic

engineering reviews, vol. 15. Intercept, Andover, pp 365–386.

Plant, Z. 1974. Nitrate reductase activity of wheat seedlings during

exposure to and recovery from water stress and salinity. Physiol.

Plant., 30 : 212-217.

Poudel, P.R. ; I. Kataoka and R. Mochioka .2005. Effect of plant growth

regulators on in vitro propagation of Vitis ficifolia var.ganebu and

its interspecific hybrid grape. Asian J. plant Sci., 4 (5) 466 – 471.

Prior, L.D. ; A.M. Grieve and B.R. Cullis. 1992. Sodium chloride and

soil texture interactions in irrigated field grown Sultana grapevines.

1.Yield and fruit quality. Austral. J. Agr. Res., 1067-1083, 1992.

Rajasekharan, L.R. ; P.E. Kriedemann, : D. Aspinall and L.G. Paleg .

1997. Physiological significance of proline and glycinebetaine:

maintaining photo-synthesis during NaCl stress in wheat,

Photosynthetica, 34 357–366.

Roussos, P.A. and C.A. Pontikis .2003 . Long term of sodium chloride

of salinity on growing in vitro, praline and phenolic compound

content of jojoba explants. European J. Hort.Sci., 68 (1) 38-44.

Roussos, P.A. : E. Tsantili and C.A. Pontikis .2006 . Responses of

jojoba explants to different salinity levels during the proliferation

stage in vitro. Industrial Crops and products, 23 (1) 65- 72 .

Roussos, P.A. : S. N. Vemmos and C.A. Pontikis .2007 . The role of

carbohydrates on the salt tolerance of jojoba [ Simmmondsia

chinensis (Link ) ] explants in vitro. European J. Hort.Sci., 72 (6):

103

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 125: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Rudulier, D. ; A. Strom ; A. Dande Kar ; L. Smith and R. Valentine

.1984. Molecular biology of osmoregulation. Science, 224:1064-

1068.

Sairam, R. K. and G.C. Srivastava. 2002 . Changes in antioxidant

activity in sub-cellular fractions of tolerant and susceptible wheat

genotypes in response to long term salt stress. Plant Sci., 162 : 897-

904.

Sairam, R. K. and A. Tyagi. 2004 . Physiology and molecular biology of

salinity stress tolerance in plants. Curr. Sci., 86( 3) : 407-417

Salisbury, F.B. and W.C. Ross . 1992. Plant Physiology. - Wadsworth,

Inc., Belmont.

Samra, J.S. 1986. Effect of soil sodicity on the growth of four cultivars of

grape. Indian J. Hort., 43(1/2): 60-65.

SAS. 2001. SAS/STAT. Users guide for personal computer release 6.12.

SAS Institute Inc., NC, USA.

Sasikala, D.P.P. and P.V. Deviprasad. 1994. Salinity effects on in vitro

performance of some cultivars of poatao, Braz. J. Plant Physiol.,

6:1-6.

Shani, U. and A. Ben-Gal .2005. Long-term Response of Grapevines to

alinity: Osmotic Effects and Ion Toxicity. Am. J. Enol. Vitic., 56 ( 2

) 148-154

Shannon , M.C. .1997. Adaptation of plants to salinity . Advances in

Agronomy , 60 : 75 – 120 .

Shibli, R. A. and K. Al-Juboory . 2002. Comparative responses of

"Nabali" olive microshoot, callus, and suspension cell cultures to

salinity and water deficit . J. plant Nutrition, 25 ( 1) 61 - 74.

104

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 126: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Shibli, R. A. : M. A. Shatnawi and I. Q. Swaidat . 2003. Growth,

osmotic adjustment, and nutrient acquisition of bitter almond under

induced sodium chloride salinity in vitro. Commun. Soil Sci. plant

Anal., 34 ( 13/14) 1969-1979.

Shibli, R. A. : M. Kushad : G. G. Yousef and M. A.Lila . 2007.

Physiological and biochemical responses of tomato microshoots to

induced salinity stress with associated ethylene accumulation. Plant

Growth Regul., 51:159–169

Shim , S.-W. : E.-J. Hahn and K.-Y. Paek .2003 . In vitro and ex vitro

growth of grapevine rootstock ‘5BB’ as influenced by number of

air exchanges and the presence or absence of sucrose in culture

media. Plant Cell Tiss. Organ Cult ., 75 : 57–627

Singh, S.K. ; H.C. Sharma ; A.M. Goswami : S.P. Datta and S.P. Singh

.2000a. In vitro growth and leaf composition of grapevine cultivars

affected by sodium chloride. Biol. Plant., 43(2): 283-286.

Singh, S.K. ; H.C. Sharma ; A.M. Goswami and S.P. Singh .2000b. In

vitro screening of some grape genotypes(Vitis spp.) for NaCl

tolerance. Physiology and Mol. Biol . Plant, 6 (2) 175-178

Sivritepe, M. and A. Eris .1997. Determining salt tolerance of some

grapevine rootstocks under in vitro conditions. Bahce, 26 (1- 2):

49-65.

Sivritepe, M. and A. Eris .1999. Determination of salt tolerance in some

grapevine cultivars (Vitis vinifera) under in vitro conditions.

Turkish J. Biol., 23: 473-485.

Smith, M.A.L. ; Spomer, L.A. ; Shibli, R.A. and Knight, S.L.

1992.Effect of NaCl salinity on miniature dwarf tomato , shoot and

root growth responses , fruit production and osmotic adjusment. J.

Plant Nutrition., 15 : 2329- 2341

105

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 127: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Solomen, A. ; S. Beer ; Y. Waisel ; G. Jones and G. Paleg. 1994. Effects

of NaCl on the carboxylating activity of Rubisco from Tamarix

jordanis in the presence and absence of Proline – related

compatible solutes. Physiol. Plant., 90:198-204.

Sotiropoulos, T.E. 2007. Effect of NaCl and CaCl2 on growth and

contents of minerals, chlorophyll, proline and sugars in the apple

rootstock M 4 cultured in vitro . Biol. Plant., 51 (1): 177-180

Sotiropoulos, T. E and K. N. Dimassi . 2004. Response to increasing

rates of boron and NaCl on shoot proliferation and chemical

composition of in vitro kiwifruit shoot cultures. Plant Cell Tiss.

Organ Cult., 79: 285–289

Sotiropoulos, T. ; S. Fotopoulos ; K. Dimassi ; V. Tsirakoglou and I.

Therios . 2006. Response of the pear rootstock to boron and

salinity in vitro. Biol. Plant., 50(4): 779-781.

Stevens, R. M. ; G. Harvey and G. Davies (1996). Separating the effects

of foliar and root salt uptake on growth and mineral composition of

four grapevine cultivars on their own roots and on ‘Ramsey’

rootstock. J. Amer. Soc. Hort. Sci., 121(3):569–575.

Stevens, R.M. : J.M. Pech : M.R. Gibberd : R.R. Walker : J.A. Jones :

J. Taylor and P.R. Nicholas . 2008 .Effect of reduced irrigation

on growth, yield, ripening rates and water relations of Chardonnay

vines grafted to five rootstocks. Austr. J. Grape Wine

Res., 14( 3) 177-190.

Tewary, P.K. : A. Sharma : M.K. Raghunath and A. Sarkar .2000 . In

vitro response of promising mulberry (Morus sp.) genotypes for

tolerance to salt and osmotic stresses. Plant Growth Regul., 30: 17–

21.

106

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 128: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Torregrosa, L. and A. Bouquet .1995. In vitro propagation of Vitis x

Muscadinia hybrids by microcuttings or axillary budding. Vitis, 34

: 237-238.

Trigiano ,R.N. and D.J. Gray. 1996. Plant Tissue Culture :Concepts and

Laboratory Exercises.CRC.Press.

Troncoso A. ; C. Matte ; M. Cantos and S. Lavee .1999. Evaluation of

salt tolerance of in vitro-grown grapevine rootstock varieties. Vitis,

38(2): 55-60.

Venkatesan , A. and K.P. Chellapan .1998. Accumulation of prolin and

glycine betaine in Ipomoea pes-caprae induced by NaCl. Biol.

Plant., 41 (2) 271-276.

Vidal, J. R. : J. Rama : L. Taboada : C. Martin : M. Ibanez : A.

Segura and M. E. Gonza´lez-Benito. 2009 . Improved somatic

embryogenesis of grapevine (Vitis vinifera) with focus on induction

parameters and efficient plant regeneration. Plant Cell Tiss. Organ

Cult ., 96 : 85–94

Vijayan, K. ; S. P. Chakraborti and P. D. Ghosh .2003. In vitro

screening of mulberry ( Morus spp.) for salinity tolerance. Plant

Cell Rep., 22( 5 ) 350-357.

Vijayan K. : S. P. Chakraborti : S. Ercisli and P. D. Ghosh .2008. NaCl

induced morpho-biochemical and anatomical changes in mulberry

(Morus spp.). Plant Growth Regul., 56 : 61–69

Volkmar, K.M. : Y. Hu and H. Steppuhn .1998. Physiological responses

of plants to salinity: a review. Can. J. Plant Sci., 78: 19-27.

Wahome, P. K. : H. H. Jesch and I. Grittner .2001. Mechanisms of salt

stress tolerance in two rose rootstocks: Rosa chinensis ‘Major’ and

R. rubiginosa., Sci. Hort., 87 (3) 207-216

107

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 129: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

Walker, R.R. 1994. Grapevine responses to salinity. Bull O.I.V. 67: 634-

661.

Walker, R.R. : D.H. Blackmore : P.R. Clingeleffer and F. Iacono

.1997. Effect of salinity and Ramsey rootstock on ion

concentrations and carbon dioxide assimilation in leaves of drip-

irrigated, field-grown grapevines (Vitis vinifera L. cv. Sultana).

Austr. J. Grape Wine Res., 3( 2) 66-74

Walker R.R. ; D.H. Blackmore ; P.R. Clingeleffer and R.L.Correll

.2002. Rootstock effects on salt tolerance of irrigated field grown

grapevines (Vitis vinifera,L. cv. Sultana). 1. Yield and vigor inter-

relationships. Austr. J. Grape Wine Res., 8 : 3-14.

Walker, R. R. : D. H. Blackmore : P. R. Clingeleffer and R. L. Correll.

2004. Rootstock effects on salt tolerance of irrigated field-grown

grapevines (Vitis vinifera L. cv. Sultana) 2. Ion concentrations in

leaves and juice . Austr. J. Grape Wine Res., 10 (2 ) 90 - 99

Walker, R.R. : D.H. Blackmore : P.R. Clingeleffer and C.R. Tarr

.2007. Rootstock effects on salt tolerance of irrigated field-grown

grapevines (Vitis vinifera L. cv. Sultana). 3. Fresh fruit composition

and dried grape quality. Austr. J. Grape Wine Res.,13( 3) 130-141.

Walker , R.R ; M.Sedgley ; M.A. Blesing and T. J . Douglas .1984.

Anatomy , ultrastructure and assimilate concentrations of roots of

Citrus genotypes differing in ability of salt exclusion .J.Exp . Bot .,

35 : 1481-1494 .

Watanabe, S. : K. Kojima and S. Sasaki .2000. Effect of saline and

osmotic stress on proline and sugar accumulation in Populus

euphratica in vitro. Plant Cell Tiss. Organ Cult., 63: 199-206.

Woodward, A. J. and I. J. Bennett .2005. The effect of salt stress and

abscisic acid on proline production, chlorophyll content and growth

108

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com

Page 130: In vitro evaluation of three grape (Vitis vinifera L.) cultivars for NaCl  tolerance

of in vitro propagated shoots of Eucalyptus camaldulensis. Plant

Cell Tiss. Organ Cult., 82( 2) 189-200

Xiong, L. : K.S. Schumaker and J.-K. Zhu .2002. Cell signaling during

cold, drought, and salt stress. Plant Cell (Supplement 2002), 165-

183.

Yeo, A. 1998. Molecular biology of salt tolerance in the context of

whole-plant physiology, J. Exp. Bot. 49 :915–929.

Zhang, F. ; Y. L. Yang ; W. L. He ; X. Zhao and L. X. Zhang .2004.

Effects of salinity on growth and compatible solutes of callus

induced from Populus euphratica. In Vitro Cell. Dev. Biol.- plant,

40(5) 491-494

Zhang, X. : R. R. Walker : R. M. Stevens and L. D. Prior . 2002 .Yield-

salinity relationships of different grapevine (Vitis vinifera L.)

scion-rootstock combinations. Austr. J. Grape Wine Res., 8 (3 ) 150

– 156.

Zhang, Y. . 1998. Development of in vitro bioassays for determination of

salinity tolerance in potato (Solanum spp.). PhD Thesis -

Department of Plant Science - Faculty of Graduate Studies and

Research - McGill University, Canada

Zhang, Y. and D. J. Donnelly .1997. In vitro bioassays for salinity

tolerance screening of potato. Potato Res., 40 : 285- 295

Zhang, Z. : B. Mao : H. Li : W. Zhou : Y. Takeuchi and K. Yoneyama .

2005 . Effect of salinity on physiological characteristics, yield and

quality of microtubers in vitro in potato. Acta Physiolo.Plant. (27) 4 :

481-489

Zhu, J.K. .2001. Plant salt tolerance. Trends Plant Sci., 6: 66–71.

109

PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com