Enzim-Linked Immunosorbent Assays (Elisa)
Tes serologi sering digunakan untuk mendiagnosis infeksi virus:
yaitu dengan menghitung antibodi terhadap virus yang spesifik
dengan menggunakan sistem deteksi seperti ELISA, radio-immunoassay
(RIA), imunofluoresen, atau complement fixasion test.
TES SEROLOGI
TEST SEROLOGI Test RIA
Test ELISA (Ab IgM dan IgG)
Radioimmunoassay (RIA) melibatkan pemisahan protein (dari
campuran) menggunakan spesifisitas dan kuantitasi pengikatan
antibodi dan antigen dengan radioaktifitas.RADIOIMMUNOASSAY (RIA)
3Endapan antigen-antibodi yang kompleks dengan menambahkan antibodi
kedua yang diarahkan terhadap antibodi pertama. Radioimmunoassay
digunakan secara luas karena kepekaannya yang besar.Menggunakan
antibodi dengan afinitas tinggi akan memungkinkan untuk mendeteksi
beberapa picogram antigen di dalam tabung.
Enzim-Linked Immunosorbent Assays (Elisa)Pertama kali digunakan
pada tahun 1969 untuk mendeteksi virus. Ikatan kovalen antara
molekul imunoglobulin dan enzim dapat digunakan untuk
mengaplifikasi reaksi antigen-antibodi. Elisa sejak tahun 1977
telah digunakan untuk mendeteksi antigen yang berasal dari tanaman,
seperti virus tumbuhan, mikoplasma, bakteri dan jamur.PERAN
ELISAPada awalnya, teknik ELISA hanya digunakan dalam bidang
imunologi untuk mendeteksi keberadaan antigen maupun antibodi dalam
suatu sampel seperti dalam pendeteksian antibodi IgM, IgG, dan IgA
saat terjadi infeksi. Seiring perkembangan ilmu pengetahuan, teknik
ELISA juga diaplikasikan dalam bidang patologi tumbuhan,
kedokteran, dll.Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ELISA
biasa digunakan sebagai metode untuk menghitung konsentrasi molekul
misalnya hormon atau obat dalam cairan seperti serum atau urin.
Metode ini dikenal pula sebagai enzyme immunoassay or EIA. ELISA
memiliki banyak keuntungan (misalnya, kepekaan, kemudahan
penanganan beberapa sampel) tanpa kerugian dalam hal radioaktivitas
(seperti di RIA).Molekul yang telah terdeteksi oleh antibodi
dinamakan antigen. Antibodi monoklonal yang sering digunakan. Hal
yang dibutukan untuk tes: Antibodi yang tetap di permukaan solid,
seperti permukaan bagian dalam dari suatu tabung reaksi; persiapan
antibodi yang sama digabungkan dengan enzim. Ini adalah salah satu
( misalnya -galactosidase ) yang menghasilkan sebuah produk
berwarna dari substrat yang tidak berwarna
FUNGSI ELISAUji Kualitatif: mengetahui ada tidaknya suatu
antibodi atau antigen
Uji Kuantitatif: mengukur kadar antibodi atau antigen yang diuji
dengan menggunakan alat bantu berupa spektrofotometer atau dengan
cara menentukan jumlah penambahan atau kadar antibodi atau antigen,
sehingga dapat dibuat suatu kurva standar dan kadar antigen atau
antibodi yang tidak diketahui dapat ditentukan.
Mengukur Kadar HormonHCG (as a test for pregnancy) LH
(determining the time of ovulation) TSH, T3 and T4 (for thyroid
function) hormones (e.g., anabolic steroids, HGH) that may have
been used illicitly by athletesMendeteksi
Infeksisexually-transmitted agents like HIV, syphilis, and
chlamydia hepatitis B and C Toxoplasma gondii
ALAT DAN BAHAN LAIN YANG UMUM DIGUNAKAN DALAM TEKNIK ELISA
ANTARA LAIN:
Antigen yang dimurnikan (jika sampel yang hendak dideteksi atau
dikuantifikasi berupa antibodi).Antibodi yang dimurnikan (jika
sampel yang hendak dideteksi atau dikuantifikasi berupa
antigen).Larutan standard (kontrol positif dan negatif).Sampel yang
ingin dites.Cairan pencuci (buffer).Antibodi atau antigen yang
tertaut dengan enzim signalSubstrat yang bersifat spesifik terhadap
enzim signalELISA reader (spektrofotometer) untuk pengukuran
kuantitatif.
MACAM TEKNIK ELISAELISA Direct ELISA Indirect
MACAM TEKNIK ELISASandwich ELISA ELISA Kompetitif
MEKANISME
www.themegallery.comKELEBIHAN dan KEKURANGAN ELISATeknik
pengerjaan relatif sederhana. Relatif ekonomis (karena jenis
antibodi yang digunakan hanya satu saja, sehingga menghemat biaya
untuk membeli banyak jenis antibodi) Hasil memiliki tingkat
sensitivitas yang cukup tinggi.Dapat digunakan untuk mendeteksi
keberadaan antigen walaupun kadar antigen tersebut sangat rendah
(hal ini disebabkan sifat interaksi antara antibodi dan antigen
yang bersifat sangat spesifik)Dapat digunakan dalam banyak macam
pengujian.Sedangkan kekurangan dari teknik ELISA antara lain:Jenis
antibodi yang dapat digunakan pada uji dengan teknik ELISA ini
hanya jenis antibodi monoklonal (antibodi yang hanya mengenali satu
antigen)
PCRPCR (Polymerase Chain Reaction) adalah metode enzimatis untuk
memperbanyak secara eksponensial suatu sekuen nukleotida secara
invitro.PCR dapat melipat memperbanyak molekul DNA dan memisahkan
gen-gen, kelebihan metode ini adalah suhu yang dapat tinggi dan
rendah dengan cepat selain itu juga dapat bekerja dengan komponen
yang jumlahnya sedikit.
Komponen PCR- DNA nukleotida, building block untuk DNA baru- DNA
template, sekuens DNA yang ingin diamplifikasi - Primer DNA, DNA
beruntai tunggal antara 20 dan 50 nukleotida panjang (
oligonukleotida ) yang komplementer untuk site pendek di kedua sisi
template dna - DNA polymerase, enzim yang dapat mengkatalisis dan
mensintesis DNA baru
Tahapan Reaksi1. Pada tahap denaturation, reaksi PCR terjadi
pada suhu tinggi ( 94oC) sehingga DNA utas ganda terdenaturasi atau
terpisah menjadi dua utas tunggal.2. Tahap awal sintesis sekuen
spesifik DNA secara in vitro dimulai pada tahap annealing, dimana
primer akan menempel pada sekuen komplementer utas tunggal DNA
cetakan (DNA template). 3. Pada tahap extension, umumnya terjadi
pada suhu 72oC, proses sintesis yang telah dimulai dari tempat
penempelan primer, terus berlanjut sampai bertemu dengan sintesis
DNA yang dilakukan oleh primer lainnya dengan arah yang berlawanan
pada komplemen utas DNA template, sehingga terbentuklah DNA utas
ganda yang baru.Tahapan PCR
Peningkatan eksponensial jumlah salinan selama PCR
Aplikasi Teknik PCRIsolasi GenDNA SequencingForensikDiagnosa
Penyakit
