IMPACTO DE LOS AGENTES DE BIOCONTROL SOBRE LAS

COMUNIDADES MICROBIANAS

Laura Gasoni

Kazunari Yokoyama Nancy Kahn

Guido ChiessaViviana Barrera

Kiroku Kobayashi

CONTROL BIOLOGICOCONTROL BIOLOGICODE FITOPATÓGENOS DE SUELODE FITOPATÓGENOS DE SUELO

SELECCIÓN DE SELECCIÓN DE ANTAGONISTASANTAGONISTAS

REDUCCIÓN DE LAREDUCCIÓN DE LA ACTIVIDAD PATOGÉNICAACTIVIDAD PATOGÉNICA

INSTALACION EN EL SUELOINSTALACION EN EL SUELO

FORMULACIONESFORMULACIONES

IMPACTO SOBRE LASIMPACTO SOBRE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS ORIGINALESCOMUNIDADES MICROBIANAS ORIGINALES

El Análisis tradicional de comunidades microbianas contempla:

2) 2) Caracterización y/o identificación

3) 3) Descripción de la comunidad basada en la diversidad de los aislamientos.

1) 1) Aislamiento de los microorganismos

OTROS METODOS

Inoculación directa de muestras de suelo en microplacas con 96 fuentes de Carbono.

Obtención de perfiles multivariados de degradación, que se conocen como Community level Physiological Profile (CLPP), por la reacción colorimétrica que resulta de la utilización de las diferentes fuentes de carbono.

Indicadores de la dinámica temporal, que permiten relacionar la fracción de la comunidad analizada con la comunidad total.

Cell Suspension

Consiste en el aislamiento de los organismos del

suelo, su multiplicación e inoculación en microplacas.

Consiste en la inoculación directa de una suspensión de suelo..

ANÁLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS

Soil Suspension

COOPERACION

ENTRE AMBOS GOBIERNOS

Suspensión deSuspensión desuelosuelo

Suspensión deSuspensión decélulascélulas

CLPPCLPP

¿COMO SE VISUALIZA LA ACTIVIDAD?

El indicador ubicado en el fondo de cada celda reacciona con el NADH producto de la respiración, se reduce y se observa el color violaceo (placas GN/GP) o rosado (FF).

Placa FF

Placa GN/GP

FUENTES DE CARBONO AGRUPADAS EN MICROPLACAS GN , GP y FF

CARBOHIDRATOS

ESTERESESTERES

POLIMEROS

ACIDOS CARBOXILICOS

ALCOHOLES

AMIDAS

AMINAS

COMPUESTOS AROMATICOS

COMPUESTOS CONBROMO

COMPUESTOS FOSFORILADOS

AMINOACIDOS

•Antagonísmo entre organismos (tambien existe en el suelo).

Fuerzas de selección dentro de la placa

•Acción cooperativa entre microorganismos (tambien existe en el suelo).

• Incapacidad de ciertos microorganismos de crecer en un medio sólido pero si en medio liquido.

Diferentes a las del suelo

•Toxicidad causada por el colorante reductor (poco probable).

INTERPRETACION DE LAS LECTURAS

Lectura Positiva (+ / 1)Lectura Positiva (+ / 1)

Borderline (b / 0.5) Borderline (b / 0.5) Reacción lenta, inferior al Reacción lenta, inferior al umbral.umbral.

Lectura Negativa (- / 0)Lectura Negativa (- / 0)

• Esto depende de la Esto depende de la absorbanciaabsorbancia de cada celda y del de cada celda y del

umbral de corrección automáticoumbral de corrección automático del sistema (estrecha del sistema (estrecha

relación con la intensidad de color de las celdas).relación con la intensidad de color de las celdas).

A simple vista muchas reacciones son imposibles de A simple vista muchas reacciones son imposibles de visualizarvisualizar

Riqueza Riqueza funcionalfuncional

Diversidad Diversidad funcionalfuncional

Numero de celdas positivasNumero de celdas positivas al al momento de la lecturamomento de la lectura

No solo considera las No solo considera las lecturas positivaslecturas positivas, sino , sino también su también su distribución (Patron).distribución (Patron). Dos placas con el mismo numero de reacciones Dos placas con el mismo numero de reacciones positivas positivas (similar riqueza)(similar riqueza) pueden tener pueden tener diferente diferente diversidaddiversidad funcional en funcion de las fuentes funcional en funcion de las fuentes degradadas.degradadas.

Fusariosis

en TABACO

(Fusarium Wilt)

MONOCULTIVO

El El monocultivomonocultivo

puede favorecer la puede favorecer la

dominancia dominancia de una de una

población población

patogénicapatogénica..

Inmersión de raíces de plántulas de tabaco al momento del transplante (formulados líquidos)

Tratamientos:

•Trichoderma sp. (aislamiento R3P2)

• Control

Análisis de resultados

ENSAYO SOBRE PARCELAS CON MONOCULTIVO DE TABACO

RESULTADOS OBTENIDOS

Análisis de conglomerados

Índice de Biodiversidad

DI= ( i=1 n di) 2 / n

Análisis de Componentes Principales (ACP)

Reduce la

dimensionalidad (R96 a Rn<96)

BIPLOTSBIPLOTS

Agrupa por similitudes

BIPLOTBIPLOT

-905,42 -610,73 -316,05 -21,36 273,32 CP1

-445,44

-196,49

52,46

301,41

550,36

CP2

Aminas

Carbohidratos

Esteres

Polímeros

Ac.Carboxílilicos

Alcoholes Amidas

Compuestos fosforilados

Aminoácidos

Aromáticos

Compuestos c/ Bromo

Aminas

Dispersión de microorganismos del suelo luego del tratamiento con y sin el biocontrolador Trichoderma sp.

Trichoderma + ControlTrichoderma + Control

TrichodermaTrichoderma

TrichodermaTrichoderma

Variabilidad explicada: 84% (59% + 25%)Variabilidad explicada: 84% (59% + 25%)

• En el suelo tratado con Trichoderma sp. se ve mayor

dispersión (distancia) entre los puntos generados por

los microorganismos que consumen preferentemente

Compuestos Fosforilados.

• Esto podría estar asociado al estimulo de una flora

bacteriana diferente (antagonistas de Fusarium

sp??).

• Los cambios en la comunidad se ponen de

manifiesto con un aumento del índice de

biodiversidad (56865 vs 67608).

Trichoderma + ControlTrichoderma + Control

TrichodermaTrichoderma

TrichodermaTrichoderma

• La comunidad original se compone de microorganismos que degradan preferentemente Carbohidratos, Ac. Carboxílicos, Aminas, Amidas, Esteres y Polímeros.

• Luego del tratamiento con Trichoderma sp (círculos rojos) se estimulo la actividad de una microfloras que degrada compuestos fosforilados.

Los sustratos presentes en las placas se han

seleccionados por su capacidad discriminante

para establecer diferencias entre

microorganismos y no porque sean los que

usualmente se encuentran presentes en los

ecosistemas.

Es importante considerar que la observación

indirecta de la comunidad puede ser tan útil

como la directa para detectar cambios relativos.

MUCHAS GRACIAS