Identificación de hongos filamentosos · Identificación de hongos filamentosos ... Micromorfologia : Conidióforoslargos. ... solos o en cadenas. CURVULARIA Cultivo

Identificación de hongos filamentosos

T.M María Cristina Diaz JProfesor Asociado

Programa de Microbiologia y MicologíaICBM, Facultad de Medicina

Universidad de Chilemcdiaz @med.uchile.cl

Zigomicosis

Hialohifomicosis

Feohifomicosis

Micelio hialino

no septado

o cenocítico

Micelio hialino

septado

Micelio pigmentado

(negro), septado

Micosis causadas por hongos filamentosos

Alternaria , CladosporiumCurvularia , CladophialophoraExophiala ,Phialophora

Orden Mucorales : Mucor , Rhizopus, Absidia

Mucormicosis

AspergillusFusarium spScedosporium spPaecilomyces spAcremonium spOtros.....

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

Examen Microscópico Directo

IdentificaciónObservación macro-microscópica de la colonia

Cultivo primario : Agar Sabouraud Subcultivo : Agar papa dextrosa, Agar malta , Agar Czapek

Criterios de Interpretación

Observación Microscópica

IDENTIFICACION !!!!!!!

COLONIA

1.- Observación a través de las paredes del tubo: estructuras reproductivas .

2.-Montajes directosLactofenol (con o sin colorante )

azul de lactofenol

Cinta adhesiva transparente

Examen Microscópico : Procedimientos

3.-Microcultivos o cultivos en lámina .

Hifas: hialinas septadas

hialinas aseptadas(cenocíticas)

hifas pigmentadas(dematiáceas),

Características micromorfológicas

Asexual: ConidióforosCélulas conidiógenasConidiosEsporangios, etc.

Sexual: AscosporasBasidiosporasZigosporas

Otras estructuras : sinemas, esporodoquios

Conidios: Morfología y tamaño de las estructuras

reproductivas.

Conidiog énesis

Blástica Tálica

Entero-

Fial ídicaFial ídica

Anel ídicaAnel ídica

Sincr ónicaSincr ónica

Holo-

SimpodialSimpodial

Holo-

Holot álicaHolot álica

-artrica

Holo ártricaHolo ártrica

Entero ártricaEntero ártrica

IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FILAMENTOSOS

AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSAOBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA

MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO COLONIAS GRISES A NEGRAS

OBSERVAR AL MICROSCOPIO:HIFAS SEPTADASPIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS

CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADASAlternaria Mucor,Rhizopus,AbsidiaCONIDIOS SEPTADOS, TRANSVERSALMENTECurvularia, Bipolaris

CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMÓRFICOSCladosporium Trichophyton HistoplasmaCladophialophora Microsporum Paracoccidioides Epidermophyton CONIDIÓFOROS QUE CONIDIÓFOROS CONIDIOS CONIDIOS

TERMINAN EN VESÍCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMOAspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium

Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium

Colonias :crecimiento muy rápido , invasoras

Identificación : géneros del orden Mucorales

Absidia : Colonia algodonosa blanca-grisácea

Mucor : al principio blanca y al madurar gris o amarilla, la superficie se cubre con manchas oscuras cuando se desarrollan los esporangios.

Rhizopus: Al principio es blanca y al madurar es gris a café, “ Sal y pimienta” reverso incoloro o crema.

Apófisishinchamientoapical del esporangió

foro)

Columela(prolongaciónestéril del esporangióforo)

Esporangiosporas ( conidios asexuales )

Esporangióforos( hifa fértil )

Esporangio( saco)

Hifas aseptadas

Estolón(hifas aéreas que conectan

los rizoides)

Rizoides( semejante a una raiz)

apófisis

esporangio

Esporangiosporas amarillas o café,ovales o elipsoides. Ausencia de rizoides.

Posee rizoidesEsporangio redondo, hialino con base aplanada- Apófisis y columela.

Columela en forma de cono con proyección en el ápice. Apófisis con collarete.

Mucor

RHIZOPUS

Absidia









ASPERGILLUSCULTIVO : Crecimiento rápido ( 3-6 dias ) .25 a 37ºC.

Colonia aterciopelada a granular.

Color inicial blanco, luego verde, amarillenta, gris, café o negra.

Reverso : blanco o puede observarse pigmento amarillo o marfil.

Agar extracto de malta estimula conidiogénesis

Agar Czapek estimula pigmentación.

–Hifas relativamente anchas, ramificación dicotómica en 45º.

–Conidióforos rectos, no ramificados, de tamaño variable.

–Vesícula apical redonda, hemiesférica, elipsoides.

–Fiálides nacen directamente de la vesícula (uni o biseriada).

–Conidios forman cadenas de disposición columnar o radiada.

Micromorfología

Principales Especies de Aspergillus

Colonia Micromorfología

A. fumigatus Verde azulada Vesículas subesférica, fiálidesa gris uniseriada y conidios columnar.

A. flavus Amarillo Vesículas pequeñas-achatadas y verdoso grandes-redondas, fiálides uni o

biseriadas y conidios columnary radiados.

A. niger Negra Vesículas grandes y redondas, fiálides biseriada, conidios

radiados

A terreus Canela a café Vesículas subesféricas, fiálidesbiseriadas y conidios columnar.

Fusarium• La identificación de las especies es bastante compleja .

• De Hoog y Guarro :

• Caracteristicas macromorfológicas :aspecto, textura, color de las colonias, velocidad de crecimiento.

Caracteristicas micromorfológicosde los cultivos :

- Forma y tamaño de los macroconidios

- Forma, cantidad y modo de formación de microconidios

- Naturaleza de la célula conidiógena

- Presencia o ausencia de clamidoconidios.

FUSARIUMCultivo

– Crecimiento rápido, entre 25 a 30ºC.

– 3 a 6 días, colonia inicial vellosa a algodonosa.

– Micelio aéreo inicialmente blanco con el tiempo pasa a rosado, rojo, violeta, púrpura, etc. sobre todo en la parte central, por la producción de pigmento.

– Periferia del micelio persiste de color blanco.

Micromorfología

Micelio hialino, septado, con conidióforos ramificados o no, a veces agrupados en esporodoquios. Fiálides nacen directamente de la hifa (ausencia de conidióforo).Macroconidios : aislados o en grupos; hialinos, alargados, fusiformes, curvos con extremo aguzados , multiseptados,( 2-7 células ) Microconidios :unicelulares, cilíndricos, únicos o en cadena o racimos por una sustancia mucoide.Clamidoconidios terminales.

Micromorfología

Fusarium solaniColonia : lisa y algodonoso,color blanco grisáceo, crema, ocre o rosa púrpura. Reverso no coloreado o crema pálido. Micromorfologia : Conidióforos largos.Macroconidios : 3-5 septos , forma de media luna con célula apical corta y redondeada y célula basal redondeada o con forma de pie, nacen de conidióforoscortos y ramificados - esporodoquios.

Microconidios :abundantes ,pequeños,ovales a reniformes, producidas en monofiálides alargadas y finas.Clamidoconidios : frecuentes, con una pared lisa o rugosa,aisladas o en parejas, terminales o intercalares .

Fusarium oxysporum

• Colonia : lisa y algodonosa,y con el tiempo un aspecto de fieltro, blanco o salmón pálido, púrpura en el centro. Reverso : púrpura.

• Conidióforos : cortos, únicos o ramificados. • Microconidios : abundantes, pequeños

,ovales a reniformes, ocasionalmente, con uno o dos tabiques , pueden formar masas pero nunca cadenas;

• Macroconidios : 1- 5 septos , fusiformes, puntiagudos, ligeramente curvados, de paredes finas y delicadas,

• Clamidoconidios : abundantes, grandes, hialinas, pared lisa o rugosa ,aisladas o en parejas, intercalares o terminales.

F. verticillioides• Colonia: algodonosa, blanco a melocotón

o rosa salmón a azulado o púrpura .Reverso: crema a lila, vino tinto o púrpura

• Conidióforos : nacen lateralmente de la hifa , escasamente ramificados.

• Células conidiógenas: monofiálides, habitualmente delgadas y largas,

• Microconidios : abundante , ovales o en forma de maza con base truncada,con 1-2 septos, algunos forma cadenas. Macroconidias :3-7 septos , ligeramente fusiformes, casi rectas, con superficies dorsal y ventral casi paralelas, de pared fina y delicada. Las células basal y apical son alargadas y ligeramente curvadas.

• No forma clamidoconidios.

Acremonium• Cultivo

Crecen entre 25 a 37ºC, siendo 30ºC la óptima.

A los 4 o 5 días, colonia membranosa o aterciopelada.

Color : blanco a gris rosa con reverso beige

o rosado suave.

Colonia de A. falciforme es gris-violeta y pigmento violeta-púrpura.

Micromorfología: Hifas delgadas y delicadas. Conidióforos : fiálides finas, solitarios y se forman

directamente de la hifa en posición perpendicular.

Conidios :unicelulares,lisos, elipsoides, se producen individualmente, pero se mantienen unidas por una sustancia mucosa formando racimos esféricos.

PENICILLIUMCultivo• Colonia aterciopelada a pulverulenta,

verde azulada con periferia blanca. Algunos pueden ser amarillo, verde, caféy rojo.

• Algunos producen pigmentos que difunde al medio.

Micromorfología– Hifas relativamente delgadas que dan

origen a conidióforos rectos y septados. Pueden ser únicos (monoverticilados) o estar ramificados (bi o terverticilados)

– Típicamente tiene un penicilio con métulas y fiálides que generan conidios.

– Conidios ovoides a elipsoides, unicelulares ,en cadena. rugosas.

Paecilomyces spP lilacinus- colonias lanosas a pulverulentas , rosa pálido a lila.Conidióforos rugosos, ramificados, en su extremo se desarrollan grupos de fiálides de base ancha y cuello largo Conidios :unicelulares, lisos ,elipsoides , en largas cadenas divergentes.

P variotti: colonias de color amarillo verdoso o amarillo parduzco .Conidióforos lisos - conidios elípticos

SCOPULARIOPSISCultivo

– Colonia inicial aterciopelada, luego pulverulenta.

– Color inicial blanco, luego beige.

MicromorfologíaConidióforos:generalmente cortos pero ramificados,

con más de una célula conidiogénica(anélide) por rama.

Conidios: unicelulares en largas cadenas, globosos a piriforme ( limón), rugosos con una base plana por el lado proximal(basetruncada),conidios distales son de mayor tamaño y equinulados..

Scedosporium

S. apiospermum: colonias blancas y algodonosas, luego de color gris o gris parduzco.Conidióforos escasamente ramificados. Células conidiógenas( anélides ) cilindricos.Conidios ovales , solitarios o en masas mucosas.S.prolificans: colonias verde grisácea, gris a negra.

Anélide corta con base hinchada y angosta.

Conidios : redondos a ovales.









ALTERNARIACultivo : colonia algodonosa, café

oscuro a verde oliva oscuro con una franja blanca alrededor de la colonia.

Pigmento negro.

MicromorfologíaConidióforos septados,pigmentadossimples o ramificados

Conidios: oscuros, con septos transversales y longitudinales,, pared lisa o rugosa, pueden estar solos o en cadenas.

CURVULARIACultivo

Colonia aterciopelada, café oscuro o negro a verde oliva oscuro.

Reverso : café o negro.

MicromorfologíaConidióforos septados, simples o ramificados, con pigmento oscuro y geniculados.

Conidios: curvado, con septos transversales con 3 a 5 células , oscuros, la 3ra célula es asimétrica y más oscura que las otras.

Cladosporium

Colonias aterciopeladas a pulverulentas , verde oliva a verde oscuro.

Conidióforos ramificados , conidios en cadenas y ramificados con cicatrices prominentes y más oscuras.- Ramoconidios

Cladophialophora :

Colonias aterciopeladas, pulverulentas, gris oliváceo.( 42°C).Conidios unicelulares en cadenas poco ramificadas, pigmentadas.Chile :C.bantiana ( absceso cerebral ).

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