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Hemocitología INTRODUCCION Hemograma básico Evaluación cuali-cuantitativa (cantidad y morfología) de los elementos formes de la sangre: Eritrocitos o Hematíes, leucocitos y plaquetas. El resultado se informa como concentración, cantidad de cada uno de los elementos por volumen de sangre. Asociado a estos recuentos se calculan otros parámetros de suma utilidad para establecer el tipo morfológico de anemia: volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM). La determinación de los reticulocitos permite evaluar la producción eficaz de la serie roja por la médula ósea. Su utilidad real es conocer la capacidad de respuesta de la médula en aquellos casos en los cuales hay disminución de hematíes en sangre periférica. Esta información es de fundamental importancia en el diagnóstico de anemias por falla en la producción (anemia aplásica) y por aumento en la destrucción (anemia hemolítica) y en el seguimiento de anemias carenciales. Los reticulocitos son células anucleadas predecesoras de los eritrocitos con la diferencia de que poseen gránulos de ribosomas y algunas mitocondrias que les son útiles para concluir el proceso de síntesis de hemoglobina en circulación. En general al laboratorio de Hemocitología llega la solicitud de Eritrosedimentación o VSG junto con la de hemograma. Consiste en medir la velocidad con la que sedimentan los hematíes de la sangre, provenientes de una muestra de plasma sanguíneo (Citratado), en un periodo determinado de tiempo, habitualmente una hora. Es un marcador inespecífico de fase aguda cuya elevación implica procesos inflamatorios, infecciosos o neoplásicos La VSG se utiliza como dato de rutina en el screening inicial de enfermedades, como seguimiento de múltiples enfermedades crónicas, y excepcionalmente como criterio de diagnóstico. Otras determinaciones para la clasificación de anemias que se suelen pedir y que se realizan en el laboratorio de hemocitología: Determinación Evaluación de Ferremia-Transferrina-TIBC Anemia carencial Metabolismo Vitamina B12-Folatos Anemia carencial Haptoglobina Anemia Hemolítica Glucosa 6 fosfato dehidrogenasa- Piruvato kinasa Enzimopatías Resistencia globular osmótica Membranopatías Electroforesis de hemoglobina Hemoglobinopatias Las pruebas de citoquímica no son determinaciones de rutina. Permiten por medio de coloraciones la identificación de granulaciones específicas de elementos de la progenie roja o blanca en sangre periférica. Investigación de hemoprotozoarios.

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Hemocitología

INTRODUCCION

Hemograma básico

Evaluación cuali-cuantitativa (cantidad y morfología) de los elementos formes de la sangre: Eritrocitos o Hematíes, leucocitos y plaquetas. El resultado se informa como concentración, cantidad de cada uno de los elementos por volumen de sangre.

Asociado a estos recuentos se calculan otros parámetros de suma utilidad para establecer el tipo morfológico de anemia: volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM).

La determinación de los reticulocitos permite evaluar la producción eficaz de la serie roja por la médula ósea. Su utilidad real es conocer la capacidad de respuesta de la médula en aquellos casos en los cuales hay disminución de hematíes en sangre periférica. Esta información es de fundamental importancia en el diagnóstico de anemias por falla en la producción (anemia aplásica) y por aumento en la destrucción (anemia hemolítica) y en el seguimiento de anemias carenciales. Los reticulocitos son células anucleadas predecesoras de los eritrocitos con la diferencia de que poseen gránulos de ribosomas y algunas mitocondrias que les son útiles para concluir el proceso de síntesis de hemoglobina en circulación.

En general al laboratorio de Hemocitología llega la solicitud de Eritrosedimentación o VSG junto con la de hemograma. Consiste en medir la velocidad con la que sedimentan los hematíes de la sangre, provenientes de una muestra de plasma sanguíneo (Citratado), en un periodo determinado de tiempo, habitualmente una hora. Es un marcador inespecífico de fase aguda cuya elevación implica procesos inflamatorios, infecciosos o neoplásicos La VSG se utiliza como dato de rutina en el screening inicial de enfermedades, como seguimiento de múltiples enfermedades crónicas, y excepcionalmente como criterio de diagnóstico.

Otras determinaciones para la clasificación de anemias que se suelen pedir y que se realizan en el

laboratorio de hemocitología:

Determinación Evaluación de Ferremia-Transferrina-TIBC Anemia carencial Metabolismo Vitamina B12-Folatos Anemia carencial Haptoglobina Anemia Hemolítica Glucosa 6 fosfato dehidrogenasa- Piruvato kinasa Enzimopatías Resistencia globular osmótica Membranopatías Electroforesis de hemoglobina Hemoglobinopatias

Las pruebas de citoquímica no son determinaciones de rutina. Permiten por medio de coloraciones la identificación de granulaciones específicas de elementos de la progenie roja o blanca en sangre periférica.

Investigación de hemoprotozoarios.

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MUESTRA

1. Recuento de Hematíes, leucocitos y plaquetas:

Sangre tratada con anticoagulante.

EDTA: Etilendiamino tetraacético tripotasico. Mecanismo captura de calcio. No modifica la morfología de los elementos hasta 24 hs a 4°C.

Heparina Sodio o Litio. Interfiere en la coloración cuando se realiza el extendido a partir del tubo de recolección.

2. Extendido o frotis sanguíneo Utilidad: Análisis morfológico de las células hemáticas, recuento diferencial de leucocitos, detección de una pseudotrombocitopenia y verificación de parámetros del autoanalizador.

METODOLOGIA:

Recuento Manual en cámara. Microscopia óptica Automatizado

Frotis sanguíneo. Microscopia óptica.

Hematocrito es el porcentaje ocupado por elementos formes (Glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas) del volumen total de la sangre. El hematocrito se puede determinar por centrifugación de sangre anticoagulada en un tubo capilar ( microhematocrito) a 10.000 rpm durante cinco minutos. RECUENTO EN CAMARA: Se utiliza en laboratorios con muy bajo volumen de trabajo y para confirmación de resultados.

Recuento de hematíes: El tubo de recolección de la muestra sanguínea se debe homogeniezar por inversión por lo menos 60 veces durante un mínimo de 2 minutos. Se diluye la sangre con solución de cloruro de sodio en proporción 1:200. Se carga la cámara de Neubauer con la dilución bien homogeneizada, se deja en reposo para que sedimenten los glóbulos y se cuenta el contenido en 80 cuadraditos, (5 cuadrados de 16 cuadraditos cada uno del retículo central) Cálculo:

N X 200 X 10 X 400 = n X 10.000= cantidad de eritrocitos/ mm3 de sangre. 80

N: número de eritrocitos contados 200: título de dilución 10: corrección de profundidad de la cámara para llevar a 1 mm3

400: total de cuadraditos de la cámara 80: total de cuadraditos contados

Recuento de leucocitos

Liquido diluyente: Solución acuosa de ácido acético al 2%. Se emplea un título de dilución de la sangre 1/20 para lo cual debe medirse exactamente: Solución de ácido acético al 2%...................0,38 ml Sangre (pipeta de Hb)………………………..0,02 ml

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Con esta dilución se carga la cámara de Neubauer y se cuenta los 4 retículos para glóbulos blancos, de 16 cuadrados más pequeños c/u.

N x 20x10 que simplificando da: nx50= Leucocitos por mm3 4 Donde: n=cantidad de leucocitos en 4 cuadrados 20= título la dilución de sangre 10= corrección de profundidad de la cámara para llevar a 1 mm3

Recuento de plaquetas Reactivos: Clorhidrato de novocaína al 24.3 g/% Cloruro de sodio al 0,222g/% Técnica: Mezclar en el momento de usar Rvo 1……………………0,1 ml Rvo 2……………………0,9 ml Mezcla de reactivos …..0,38 ml Sangre…………………..0,02 ml Dejar hemolizar en tubo de hemolisis más o menos 20 minutos Contar en cámara de Neubauer (Retículo de rojos) Cálculo: n x 400 x 20 x 10 = n x 1000= Plaq /mm3 80

Formula leucocitaria Coloración panóptica (May-Grundwald- Giemsa) de frotis Solución de May-Grundwald: Es una solución de eosinato de azúl de metileno en alcohol metílico. Colorante de Giemsa: Es una solución de alcohol metílico y glicerina, de eosina, azul de metileno y azur II. Técnica:

1. Cubrir el frotis con solución de May-Grundwald durante 3 minutos. Fase de fijación. 2. Sin volcar agregar igual cantidad de agua de la destilada .Dejar 30 segundos. Volcar y lavar. 3. Se hace una dilución acuosa de Giemsa a razón de 11 gotas de colorante por cada ml de

agua de la canilla. Se cubre con ella el preparado y se deja n tiempo medio de 15 minutos. Lavar con agua de la canilla. Se deja escurrir y secar al aire.

4. La solución de May-Grundwald se la puede reemplazar por alcohol metílico puro de buena calidad. Los resultados son comparables.

Índices hematimétricos

Los valores Hematimétricos se obtiene combinando los datos obtenidos por la determinación del volumen Globular, el dosaje de hemoglobina y el recuento de hematíes. Son los siguientes: Volumen corpuscular medio: Relaciona el hematocrito con los millones de glóbulos rojos. Expresa el volumen medio de cada eritrocito en femtolitros (10-15 litro) V.C.M.= Hematocrito x 100 2 primeras cifras de hematíes

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Hemoglobina corpuscular media: Indica la cantidad promedio de hemoglobina por hematíe H.C.M: = Hemoglobina g% x 100 2 primeras cifras de hematíes Concentración de hemoglobina corpuscular media: Expresa el porcentual hemoglobínico respecto al paquete eritrocitario. C.H.C.M. = Hemoglobina g% x 100 Hematocrito

Reticulocitos No se visualizan por la coloración del panaoptico, se debe utilizar un colorante supravital que es azul brillante de cresil. En condiciones vitales, sin la actuación de fijadores, los eritrocitos que contienen restos de basofilia protoplasmática fijan el azúl brillante de cresil, el cual los colorea en forma de filamentos o gránulos. Colorante: Azúl brillante de cresil 0,1 g/litro en citrato de sodio al 3,8% Técnica.

1. Se mezcla en un tubo de hemólisis 0,5 ml de la solución colorante con 3 a 5 gotas de sangre y se incuba a 37 °C 15 minutos.

2. Efectuar extendidos con una gota del contenido de los tubos homogeneizados por agitación suave.

Recuento: Se hace la relación con la cantidad de hematíes por campo microscópico, observando con inmersión y sin ninguna contracoloración agregada. Deben contarse los reticulocitos correspondientes a 1000 hematíes e informarlos en forma porcentual y absoluta , lo cual requiere conocimiento de la cantidad de glóbulos rojos por mm3. CAMARA DE NEUBAUER

RECUENTO LEUCOCITOS

RECUENTO HEMATIES

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CONTADORES HEMATOLOGICOS

La automatización proporciona mayor exactitud y precisión que los métodos manuales. Durante los últimos 20 años la automatización reemplazó casi en su totalidad el recuento manual, con la posible excepción del recuento de plaquetas con contraste de fase como un procedimiento confirmador. Numerosos fabricantes de instrumentos desarrollaron y comercializaron analizadores hemáticos. En los casos típicos, estos analizadores proporcionan en menos de un minuto, los ocho parámetros hemáticos estándar de hemograma completo [HC], más un recuento diferencial de leucocitos de tres componentes (o cinco componentes en equipos más modernos), en 100 ul a 300 ul de sangre entera. Por esto, la automatización permite el manejo más eficiente de mayor volumen de trabajo (n° de muestras), así como el diagnóstico y el tratamiento más oportuno de la enfermedad.

Ventajas de la automatización

Velocidad Precisión en el recuento Eliminación de fatiga visual del operador. El número de células que cuenta el analizador es 100 veces mayor que el manual lo que

indica un error estadísticamente menor. Los recuentos se realizan por triplicado. Los analizadores hemáticos tienen algunos componentes básicos comunes, como los sistemas hidráulicos, neumáticos y eléctricos. El sistema hidráulico incluye la unidad de aspiración, los dispensadores, los diluyentes, las cámaras de de mezclado, los baños de apertura, el flujo de células o ambos, y un hemoglobinómetro. Para recuento y discriminación de poblaciones usan dos principios básicos: Impedancia electrónica (resistencia) Dispersión óptica.

La impedancia electrónica, o la resistencia a la corriente continua (CC) de bajo voltaje fue desarrollada por Wallace Coulter en la década de 1950. La radiofrencuencia (RF), o la resistencia a la corriente electromagnética de alto voltaje se utiliza junto con la impedancia electrónica de la CC. . En el equipamiento hemático actual con frecuencia se emplea la Impedancia junto con la dispersión óptica, que utiliza luz láser y no láser. Los equipos de útima generación utilizan la citometría de flujo. IMPEDANCIA ELECRONICA El principio de la impedancia en el recuento de células se basa en la detección y la medición de cambios en la resistencia eléctrica producida por las células cuando atraviesan una apertura pequeña. Las células suspendidas en un diluyente conductor de la electricidad, como solución fisiológica, se impulsan a través de una apertura (orificio) en un tubo de vidrio. En la cámara de recuento se aplica la corriente eléctrica de baja frecuencia entre un electrodo externo (suspendido en la dilución celular) y uno interno (alojado dentro del tubo de apertura). La resistencia eléctrica entre los dos electrodos, o la impedancia en la corriente, se produce a medida

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que las células atraviesan la apertura, que tiene sensores y produce pulsos de voltaje medibles cuando éstas interrumpen la corriente. El número de pulsos es proporcional al número de células contadas. El tamaño del pulso de voltaje es directamente proporcional al tamaño (volumen) de la célula, lo que permite la discriminación por tamaño y el conteo de células de tamaño específico. Los pulsos se reúnen y ordenan (canalizan) según su amplitud mediante analizadores de la altura de los pulsos.(osciloscopio) Los datos se trazan en un gráfico de distribución de frecuencia, o histograma de distribución de tamaño, con el número relativo en el eje Y y el tamaño en el eje X. El histograma producido representa la distribución del volumen de las células contadas. Los umbrales de tamaño separan las poblaciones celulares en el histograma, y el recuento corresponde a las células cuantificadas entre los umbrales fijos, inferior y superior, para cada población. Los histogramas de distribución por tamaño pueden utilizarse para la evaluación de una población celular o subgrupos dentro de una población. El uso de reactivos líticos para la lisis de tipos celulares específicos, permite separar y cuantificar a los leucocitos en sangre en tres poblaciones(linfocitos, células mononucleares y granulocitos) para el “recuento diferencial de tres componentes sobre el histograma de distribución de tamaños.

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Los equipos Coulter realizan una primera dilución para el recuento de hematíes y plaquetas. Si bien en la dilución se encuentran en suspensión también los leucocitos, el orificio de pasaje de la cubeta es de 50um, lo que permite el pasaje sólo de partículas que miden entre 2 y 20 fl como las plaquetas y las que superan los 36 fl son consideradas eritrocitos.

Debido a que en el rango de 35 a 360 fl puede haber población de hematíes la forma de separarlos es mediante el lisado de estos últimos. La segunda dilución se realiza con un reactivo que produce lisis de los eritrocitos. Nuevamente vemos diferentes amplitudes de pulsos para las 3 poblaciones de leucocitos

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Radiofrecuencia

La impedancia de CC de bajo voltaje puede utilizarse junto con la resistencia de RF, (corriente

electromagnética de alto voltaje) al mismo tiempo. El tamaño de la célula es proporcional al cambio en la

corriente continua, la densidad interna celular (volumen nuclear, etc.) es proporcional al tamaño del pulso o el

cambio en la señal de RF. La conductividad, medida por esta sonda electromagnética de alta frecuencia, se

atenúa por la relación núcleo-citoplasma, la densidad nuclear y la granulación citoplasmática. Los cambios de

voltaje de la CC y la RF pueden detectarse en forma simultánea y separarse por acción de dos circuitos de

procesamiento de pulsos diferentes.

Pueden graficarse en forma comparativa dos propiedades celulares diferentes la impedancia y la

conductividad, para la formación de un citograma de distribución bidimensional .Estos trazados muestran las

poblaciones celulares como cúmulos, con el número de puntos en cada uno que representa la concentración

de ese tipo de célula. Luego el análisis computarizado del cúmulo puede determinarlos recuentos absolutos

para poblaciones celulares específicas.

Citoquímica

El uso de varios métodos en un equipo dado para la determinación de por lo menos dos propiedades

celulares permite la separación diferencial de los leucocitos en cinco componentes (neutrófilos, linfocitos,

monocitos, eosinófilos y basófilos).

La actividad PEROXIDASA de la progenie mieloide es nula en los BLASTOS indiferenciados, y aumenta

con su diferenciación, alcanza un máximo de actividad en el PROMIELOCITOS, y luego declina manteniendo

alta actividad en todos los estadíos de diferenciación.

La correlación entre la intensidad de la reacción citoquímica (PEROX), con la complejidad nuclear, permite

clasificar el tipo celular presente. En el canal PEROX, los eritrocitos se lisan y los leucocitos se tiñen por su

actividad de peroxidasa (PX) convirtiendo el sustrato a un precipitado oscuro .

La suspensión celular pasa por una corriente de flujo laminar donde un sistema óptico halógeno de

campo oscuro con tungsteno mide:

ABSORBANCIA: proporcional al contenido de PX de cada célula

DISPERSIÓN FRONTAL.: proporcional al tamaño de cada célula

La hemoglobina puede medirse en los contadores hematológicos por el método tradicional de células en flujo

con cianometahemoglobina a 525 y 546 nm, según el fabricante del instrumento. Otros equipos determinan

sulfometahemoglobina.

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DISPERSIÓN OPTICA O CENTRADO HEMODINAMICO

La dispersión óptica puede utilizarse como la metodología primaria o en combinación con otros métodos. En

los sistemas de dispersión óptica (citómetros de flujo) una masa de muestra (centrada en forma hidrodinámica)

se dirige por un canal de cuarzo que genera un “flujo celular” (de a una por vez), sobre el que impacta la luz

también “centrada”.

La fuente suele ser de luz halógena, de tungsteno, o laser de helio y neón. La luz laser denominada

“monocromática” debido a que se emite con una longitud de onda individual, difiere de la producida por el

“campo brillante”, por su intensidad y su cohesividad (circula o moviliza en fase), como así también por su

divergencia o escasa diseminación. Esto permite la detección de “interferencia” en el haz de luz y posibilita

su cuantificación, de modo tal de dar valores que “caracterizarán a cada tipo celular”. Este sistema de

dispersión óptica permite identifica leucocitos, plaquetas y eritrocitos. A medida que las células circulan por la

“región sensora”, la luz impacta sobre ellas y se interrumpe el flujo lumínico unidireccional.

La luz se dispersa en todas direcciones con ángulos de desvío relativos a las características (densidad y

tamaño) del cuerpo golpeado. Se generan a su vez procesos de absorción, difracción y de dispersión

lumínica, que se convierten en señales eléctricas por fotoelectrodos, y en ángulos específicos. La luz dispersa

se colecta con lentes , así se genera un “saldo” neto de luz dispersa con diferentes ángulos que ingresan al

detector. Mediante filtros y espejos se separan las distintas longitudes de onda, y se presentan a los

fotodetectores, que traducen dichas longitudes de ondas y sus “cantidades” en señales eléctrónicas

proporcionales.

La dispersión frontal de luz (0°) se correlaciona con el volumen celular (tamaño), debido sobre todo a la

difracción de la luz. En tanto, la dispersión ortogonal de la luz (90°), o dispersión “lateral”, es consecuencia

de la refracción y reflexión lumínica, provenientes de las estructuras más grandes presentes dentro de la célula

(núcleo) y se correlaciona con el grado de “complejidad” de dichas estructuras. La dispersión frontal de la luz,

en ángulos bajos (2-3°), y en ángulos altos (5-15°), también se correlacionan con el volumen celular y el índice

de refracción, o la complejidad interna respectivamente.

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CITOMETRIA DE FLUJO

Es una técnica de análisis celular de última generación que mide las características de dispersión de

luz y fluorescencia que poseen las células cuando se las hace pasar a través de un rayo de luz laser

de argón. Para su análisis por citometría de flujo, las células deben encontrarse individualmente

en suspensión en una corriente liquida laminar.

Al atravesar el rayo de luz, las células interaccionan con este causando dispersión de la luz,

basándose en la difracción de la luz en sentido frontal, se puede evaluar el tamaño de las células que

pasan y al medir la reflexión de la luz de manera lateral se evalúa la granularidad o complejidad de

éstas .

Además de la dispersión de la luz, si previamente a su análisis se coloca a las células en presencia

de ANTICUERPOS MONOCLONALES marcados con FLUOROCROMOS se pueden evaluar que

células poseen los ANTÍGENOS complementarios (por ejemplo reticulocitos, enzima peroxidasa,

contenido de ADN) a los anticuerpos monoclonales usados.

El uso de moléculas fluorescentes distintas (naranja de acridina, tioflavina T, isotiocianato de

fluresceina y ficoeritrina) permite analizar la presencia de varios marcadores de manera simultánea y

realizar un análisis multi paramétrico.

Los impulsos de luz se enfocan sobre tubos fotomultiplicadores y la señal se convierte en una señal

digital cuantificable.

Las determinaciones hematológicas solicitadas con mayor frecuencia al Laboratorio de Guardia son el

recuento de glóbulos blancos, el recuento de plaquetas, el hematocrito. Por ello, los analizadores más

pequeños se usan a menudo en laboratorios para pruebas inmediatas (determinaciones de guardia) y

laboratorios pequeños. Estos equipos miden eritrocitos, leucocitos y plaquetas. Se generan ocho

parámetros medidos o calculados : leucocitos, eritrocitos, plaquetas, hemoglobina, hematocrito,

volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración media de

hemoglobina corpuscular(CMHC).

Los sistemas más grandes y complejos se emplean en laboratorios clínicos más grandes. Los

parámetros básicos adicionales incluyen información sobre la morfología de los eritrocitos expresada

como ancho de distribución eritrocitaria (ADE), volumen plaquetario medio (VPM) y un histograma

diferencial de leucocitos.

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FISIOPATOLOGIA

ANEMIAS

El descenso de hemoglobina con el consiguiente déficit de la capacidad de la sangre de transportar oxígeno

son las características de la anemia y constituyen la base patológica de la mayoría de síntomas y signos de la

hipoxia tisular que son disnea, taquicardia, debilidad.

Para los fines prácticos 12 g/dl de hemoglobina pueden considerarse como línea divisoria para mujeres adultas

y 13,5 g/dl para varones adultos.

Para determinar la causa de una anemia es necesario hacer mediciones que puedan establecer la

eritropoyesis efectiva (producción y liberación de eritrocitos a la circulación), la eritropoyesis inefectiva y la

destrucción de hematíes.

VALORES NORMALES PARA UN ADULTO NORMAL

- Hematocrito: 36% a 45%

- Hemoglobina: 12g/dl a 15 g/dl

- Recuento de eritrocitos: 4 a 5 X 106/ mm3

- Volumen corpuscular medio (VCM): entre 80 fL y 100 fL

- Distribución del diámetro (RDW): entre 12% y 17%

CLASIFICACION MORFOLÓGICA, ETIOLÓGICA Y CLÍNICA DE LAS ANEMIAS

TIPO DE ANEMIA VCM CHCM CAUSA

MACROCITICA >90 >30 Deficiencia Vit B12 Radiaciones

Absorción defectuosa Requerimiento>suministro Superactividad de la medula

NORMOCITICA 83-99 >30 Pérdida súbita Hemolisis excesiva Causas extra globulares Causas globulares Molécula anormal de HB Defectos enzimáticos Hemopoyesis defectuosa

Hemorragia Procesos infecciosos Procesos inmunes o no inmunes Esferocitosis hereditaria Hemoglobinopatías-Drepanocitosis Defecto glu 6 PDH Pancitopenia, Radiaciones

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MICROCITICA <83 <30 Formación imperfecta de la sangre

Enf. Subagudas o crónicas.

MICROCITICA HIPOCROMICA

<83 <30 Carencia de hierro Anomalía genética

Dieta deficiente Malabsorción Hemorragia crónica Talasemias

ANOMALÍAS EN EL RECUENTO LEUCOCITARIO

El examen de los leucocitos comprende dos fases técnicas. En la fase cuantitativa se determina el recuento de leucocitos totales y las cifras absolutas y relativas de las diversas formas de glóbulos blancos. El término leucocitos se refiere a un aumento del número total de leucocitos por encima del límite superior normal para la edad y sexo. Leucopenia es el descenso por debajo del límite de valores de referencia.

Un aumento o disminución del número total de células en cada serie se denominará:

o NEUTROFILIA / NEUTROPENIA o EOSINOFILIA / EOSINOPENIA o LINFOCITOSIS / LINFOPENIA o BASOFILIA / BASOPENIA o MONOCITOSIS / MONOCITOPENIA

En el aspecto cualitativo se determinan las anormalidades en núcleo y citoplasma y extensión su funcionalidad.

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LEUCEMIA

Es una proliferación o acumulación neplásica generalizada de células leucopoyéticas con invasión o

sin ella de la sangre periférica. Pueden ser agudas, subagudas o crónicas de acuerdo a su evolución.

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En pacientes que no tienen leucemia, un recuento leucocitario muy elevado (generalmente mayor de

50.000/ml) puede producir un frotis de sangre periférica similar a una leucemia. El tipo más común de

reacción leucemoide es granulocítico. Las infecciones bacterianas y algunas neoplasias (como la

enfermedad de Hodgkin) pueden ocasionar una reacción leucemoide.

LEUCEMIAS AGUDAS:

El comienzo de la enfermedad es súbito y se parece a una infección aguda o séptica. Se observa

elevado recuento de formas blásticas circulantes.

En la leucemia linfocítica aguda (LLA) se observa una combinación de anemia, trombocitopenia y leucopenia. El elemento predominante es el blastocito inmaduro mieloblasto en el adulto , linfoblasto en el niño.

En la leucemia granulocítica aguda, mielomonocitica,eritroleucemia tiene como célula común el mieloblasto, ya que monocitos,granulocitos y células eritroides proceden de una célula primitiva común.

LEUCEMIAS CRONICAS

LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA

Ocurre principalmente en adultos jóvenes y de edad media. Su aparición descubrirse accidentalmente

durante una prueba sanguínea habitual. El recuento leucocitario supera generalmente los 50.000/ml y

puede rebasar 300.000/ml. El recuento diferencial es característico y se aprecia un espectro completo

de células granulocíticas, desde algunos mieloblastos hasta los neutrófilos maduros. Por otra parte,

casi siempre se observa basofilia.

LEUCEMIA LINFOCÍTICA CRÓNICA

Más frecuente en varones mayores de 50 años. El recuento leucocitariosuele estar entre 30.000 y

200.000 mm3 y un 80 a 09 % de linfocitos pequeños. La citometría de flujo de sangre periférica puede

ayudar a establecer un diagnóstico.

MIELOMA

Proliferación neoplásica de células plasmáticas normales o morfológicamente anormales que se dan

generalmente en la médula. En general aparece una gammapatía monoclonal y proteinuria.

INTERPRETACION DE DATOS INSTRUMENTALES

HISTOGRAMA

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Los histogramas son representaciones gráficas de frecuencias de las células (eje y) contra sus

tamaños (eje x). En una población celular homogénea la curva adquiere una forma de campana

simétrica o distribución de Gauss. La curva es más ancha o aplanada cuando se aumenta la

desviación estándar del promedio. Los histogramas también muestran la presencia de

subpoblaciones.

HISTOGRAMAS DE ERITROCITOS

El eje X representa el volumen en fl, en el eje Y se representa el número relativo de células.

1. Curva con desviación a la derecha: Presencia de hematíes más grandes como es el caso de las anemias megaloblásticas. VCM ALTO

2. Curva con desviación a la izquierda: Las células son más pequeñas de lo normal, como en las anemias microcíticas ferropenicas VCM BAJO

3. Distribución bimodal : Puede verse en varias situaciones, como la enfermedad por aglutininas en frío, después de transfusión de eritrocitos normales a una persona con eritrocitos de tamaño anormal, en presencia de fragmentos de eritrocitos o cuando hay aglutinación.

ANCHO DE DISTRIBUCIÓN DE LOS ERITROCITOS

Es un parámetro exclusivo de los analizadores electrónicos.

Es el coeficiente de variación del tamaño eritrocitario. Da idea de la homogeneidad de la población. Indica la presencia de ANISOCITOSIS.

(DE/MEDIA) *100 =RDW ö ADE 11,5 a 15,1 %

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Se encuentra aumentada en anemias megaloblastica, anemias por deficiencia de hierro.

HISTOGRAMA DE LEUCOCITOS

Debido a que para el conteo de los leucocitos se ha realizado una lisis anterior, el tamaño que presentan no es el real sino es un tamaño relativo.

Anormalidades detectables con el histograma

1- Células por debajo de 35 fL: partículas como plaquetas aglomeradas o gigantes, eritrocitos nucleados y

eritrocitos íntegros.

2- Células entre la región de los linfocitos y las células mononucleares: linfocitos más grandes de lo

normal, ciertas formas blásticas, células plasmáticas, eosinofilia, basofilia.

3- Células entre las poblaciones mononucleares y de granulocitos: aumento de granulocitos inmaduros o

en otras poblaciones de células anormales como ciertos tipos de blastos y eosinófilos.

4- Células en la región derecha lejana de la curva: casi siempre un recuento de granulocitos alto.

5- Alguna anormalidad detectada justo en el límite de 35 fL.

6- Un aumento significativo en la población mononuclear.

7- Una alerta múltiple, cuando se afecta más de una de estas regiones.

HISTOGRAMA DE PLAQUETAS

PARAMETROS PLAQUETARIOS

RECUENTO: 15000-450000 /mm3

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VPM (VOLUMEN PLAQUETARIO MEDIO) 6,9 a 10,5 fl

ADP (ANCHO DE DITRIBUCIÓN DE PLAQUETAS) 15,4 a 16,8 fl

PCT (PLAQUETOCRITO) 0,15 a 0,45 %

Las partículas que se encuentran dentro del intervalo del tamaño de las plaquetas pueden interferir con el recuento y el histograma plaquetario:

1- Las partículas pequeñas pueden superponerse en el extremo bajo del histograma: burbujas, polvo.

2- Los eritrocitos microcíticos interfieren en el extremo superior.

INTERPRETACIÓN DE DISPERSOGRAMAS.

Representación gráfica que representa la distribución de 2 variables en una población de muestra: Volumen celular y contenido celular. La densidad del acumulo representa cantidad y evidencia así aumento o disminución o presencia de células inmaduras o atípicas.

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NEUTROPENIA-LINFOCITOSIS- LINFOCITOS ATIPICOS?

-EOSINOFILIA?

GRANULOCITOS INMADUROS?

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VALORES DE PANICO

Procedimiento de laboratorio para la notificación de valores críticos

I. Serán verificados confirmando el test. II. Reportados inmediatamente al médico III. Registrado en el sistema.

VALORES MENOS DE MAS DE

PLAQUETAS 20.000 ul 1.000.000 ul

HEMOGLOBINA 7,0 g/dl 18 g/dl

HEMATOCRITO 21% 55 %

RBC 2,0 *106 / ul 7,0 * 106 /ul

WBC 1.500 /ul (ONCOLOGICOS: 0,5) 30.000 /ul

BLASTOS CONFIRMADO POR FROTIS CONFIRMADO POR FROTIS

DELTA CHECK

Cuando el resultado de un paciente difiere significativamente de un resultado previo inmediato.

POSIBLES CAUSAS DE INTERFERENCIAS

I. Aumento de VCM / discrepancia entre HB y HTO / CHCM anormalmente alto: Presencia de crioaglutininas.

II. Pseudo trombocitopenia: Agregación EDTA dependiente

III. Pseudo trombocitosis: Fragmentos eritrocitarios, fragmentos citoplasmáticos en leucemias.

IV. Normocitopenia. Trombocitopenia enmascarada por fragmentos de blastos

V. Pseudoleucocitosis: Contaminación grasa por venipuntura traumática-Agregados plaquetarios-Plaquetas gigantes-GR resistentes a lisis de reactivos.

VI. Pseudoneutropenia: deficiencia de mieloperoxidasa

CONTROL DE CALIDAD: CBC

I. Uso de sangre control estabilizada

II. Monitoreo de moving averages (VCM, MCH,CHCM)

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III. Muestras retenidas de pacientes o combinación de los anteriores.

Procesar al menos 2 niveles de sangre cada 8 horas y evaluar.

Observar modificaciones o cambios repentinos fuera de los 2DS.

Checkeo del background (Dentro de los límites de aceptabilidad del fabricante)