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UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIAFACULTAD DE MEDICINADEPARTAMENTO DE FISIOLOGA Y BIOQUMICAMANUAL DE LABORATORIOHEMOGRAMA

INTRODUCCIONHEMATOLOGIA: Es el estudio de los tejidos hematopoyticos y de la sangre,la cual necesita extraerse del organismo y en ocasiones separarse en susdiferentes componentes: prasma, suero y clulas, para ser analizados enbsqueda de alteraciones en dichos componentes.

VELOCIDAD DE SEDTMENTACTN qLOBULAR (VSG) ERTTROSEDTMENTACTN (ESD)

OBJETIVODeterminar en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen loseritrocitos glbulos rojos para formar pilas de monedas. sirve comocomplemento diagnstico en enfermedades hematolgicas y no hematolgicas.FUNDAMENTOLa VSG se realiza por el mtodo de Westergreen, considerado como el mtodode referencia internacional. La sangre antioagulada con EDTA se coloca enuna pipeta de vidrio en forma vertical y se dela en reposo durante una hora.Los eritrocitos tienden a caer al fondo dd la columna y las protenasplasmticas (fibringeno, gammaglobulinas y otras) hacen resistencia a lacada. El valor de la VSG corresponde al punto done las clulas se separandel plasma. En los individuos sanos la VSG ocurre lentamente y en pr.otero.patolgicos ocurre ms rpidamente. En algunos casos es proporcional a lagravedad de la enfermedad.GONSULTE: como estar la vsG en un individuo con anemia?

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MATERIALES' sangre con EDTA. (consulte qu es el EDTA y cul es su mecanismo deaccin). Pipeta de Westergreen.. Gradilla para sedimentacin (Westergreen).'' Reloj o timer.La pipeta es un tubo recto de 300 mm de longitud y 2.5 mm de dimetro y estgraduada de 0-200 mm. Se coloca en forma vertical en la gradilla de su mismonombre.FACTORES QUE NTERVIENEN EN LA VSGEn general la sedimentacin est afectada por propiedades de los eritrocitos,del plasma y por factores de tipo tcnico. Entre ellos se encuentran:. Tamao y forma de los eritrocitos.. Aglutinacin de los eritrocitos.. Composicin del plasma.. Viscosidadsangunea.' Calibre y longitud del tubo.. Cantidad y calidad del anticoagulante.. Efecto de la temperatura y tiempo.METODOLOGiA. Mezclar suavemente la muestra por inversin del tubo.' utilizando el micropipetiador, aspirar la sangre y llenar la pipeta deWestergreen hasta la marca cero (0).. Llevar inmediatamente a la gradilla y fijar lala sangre. pipeta evitando que se derrame' Poner a correr el cronmetro durante t hora y leer exactamente cuando secumpla este tiempo.

IMPORTANGIA CLNICA:La VSG se utiliza como prueba de rutina en el diagnstico inicial y seguimientode mltiples enfermedades, es importante en la deteccin de entiadJs ocultasespecialmente de origen neoplsico, en el seguimiento de enfermedades comola fiebre reumtica, tuberculosis e infarto al miocardio y para establecerdiagnsticos diferenciales. Por corresponder a un reactante de fase aguda seconvierte en un marcador inespecfico no asociado a ninguna enfermdad enconcreto, pero su elevacin implica la existencia de un proceso inflamatorio,infeccioso o neoplsico. cifras mayores de 100mm/h se han asociado conenfermedades malignas (ca coln, Linfoma, ca de mama, entre otros).

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MEDGIN DEL HEMATOCRITOOBJETIVOExpresar en porcentaje (%) el nmero de clulas rojas empacadas en unvolumen de sangre total.MToDoEl hematocrito corresponde al volumen ocupado por los glbulos rojos enrelacin con el volumen total de sangre. Puede obtenerse por centrifugacin(micromtodo o microhematocrito) o por mtodos electrnicos. pormicromtodo, se determina aplicando una fuerza centrfuga de 3.000 r.p.m.durante 3 minutos a una muestra de sangre total que est contenida en uncapilar especialmente diseado para esta prueba.MATERIALES. Sangre anticoagulada con EDTA.. Capilar.. Plastilina.' Centrfuga.. Tabla de lectura de capilares de microhematocrito.METODOLOGA' Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada por un minuto para obteneruna buena homogenizacin.' Llene el capilar con sangre aproximadamente % partes., Selle el extremo inferior con plastilina.. Llevar a la centrfuga durante 3 minutos a 3000 r.p.m.' Despus de centrifugar, retire el capilar y proceda a la lectura delhematocrito en Ia tabla correspondiente., En, el capilar se observan las clulas rojas empacadas, una , capablanquecina que corresponde a los glbulos blancos y plaquetas (que sloalcanzan un valor de 0.5 1 mm en condiciones normales) y elsobrenadante correspondiente al plasma (en l pueden observarse cambiosen el color, normalmente = amarillo claro, lctrico = amarillo fuerte,hemolizado = rojizo, lipmico = lechoso).' El volumen de clulas se lee desde cero (0) hasta donde termina la capa deglbulos rojos y empieza la capa de blancos, la cual no se incluye en lalectura.GONSULTE: Como estar el HTO en un individuo con hemorragia?

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MEDIGIN DE LA HEMOGLOBINAOBJETIVOcuantificar la cantidad de hemoglobina presente en los glbulos rojos.MToDoMtodo de la cianometahemoglobina: Al medir la hemoglobina se determinala suma de todas las formas de hemoglobina presentes en el eritrocito(oxihemoglobina, carboxihemoglobina, metahemoglobina y otras), Iisando losglbulos rojos para obtener un compuesto estable conocido comocianometahemoglobina, que puede ser medido en un espectrofotmetro, yasea por mtodos manuales o automatizados.FUNDAMENTOLa mezcla de reactivo de Drabkin (clANURo) con la sangre, transforma lahemoglobina en cianometahemoglobina. La intensidad Of color de estareaccin se mide en un fotocolormetro o espectrofotmetro.Pasos de la reaccin:1. Hemoglobina + ferrocianuro potsico = metahemoglobina.2. Metahemoglobina + cianuro potsico = cianometaemoglobina.MATERIALES' Sangre venosa anticoagulada con EDTA o sangre obtenida por puncincapilar., Tubos de ensayo.. Pipeta de Sahli (20 landas = 0.02 ml) o pipeta automtica.. Tapones de caucho o papel parafinado.' Fotocolormetro debidamente catibrado., Cubetas para el Fotocolormetro., Reactivo de Drabkin.El reactivo de Drabkin es txico, contene cianuro.Evite el contacto con ojos, piel, mucosas.INSTRUCCIONES DE PROCEDIMIENTO

' Deposite 5 ml del reactivo de Drabkin en eltubo de ensayo.' Mida exactamente 20uL (0.02 mr) de sangre en la pipeta de sahli.. Limpie los excedentes de sangre por fuer de la pipeta.' Lleve la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre expulsando yaspirando varias veces para lavar internamente las parees. Tape eltubo y mezcle suavemente por nversin.' Deje el tubo en reposo durantg 10 minutos para que se produzca lahemlisis total de las clulas rojas y se complete la reaccin., Deposite la solucin en la cubeta del Fotocolormetro.' Lea la solucin obtenida, usando como blanco el reactivo de Drabkin.

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r La concentracin de hemoglobina se calcula multiplicando laabsorbancia por una constante que resulta de la calibracin del mtodo.Ejemplo: Absorbancia de la muestra x24.g= hemoglobina en g/dlMToDoS ELEGTRNIcoSEn todos los analizadores semiautomatizados o automatizados, la hemoglobinase determina con la misma fundamentacin del mtodo manual(cianometahemoglobina), utilizando un hemoglobinmetro incorporado alinstrumento.La OMS estableci como lmites inferiores de normalidad valores: En ethombre 13 gr/dL y en mujeres 12 gr/dL. por debajo de estos valores seconsidera anemia.GONSULTE: cuanto es el mnimo de Hb que indique transfusin?

CONSTANTES GORPUSCULARES I,OICCS DE WINTROBEson el resultado matemtico de la relacin entre la hemoglobina, elhematocrito y el recuento de eritrocitos por mm3'Determinan el tmao y elcontenido de hemoglobina de los eritrocitos bajo los conceptos del volumencorpuscular medio (vcM), hemoglobina corpuscular media (HGM) yconcentracin de la hemoglobina corpuscular media (CHCM). Estos :trespromedios o constantes corpusculares de Wintrobe se constituyen en pilarespara la clasificacin MORFOLGICA de las anemias.

1. v.c.M = volumen corpuscular medio. Tambin llamado promedio deVolumen Corpuscular (PVG)Se refiere al tamao de los eritrocitos, se expresa en fentolitros (fl-)t y seobtiene al relacionar el volumen de clulas rojas empacadas (Hicl) y elrecuento de glbulos rojos, con la siguiente frmula:

Hro (%)VCM PVC = -x 10Rto de G.R./ milln Valor de Referencia80-10oflUna de las desventajas en el mtodo clsico o manual es la variabilidad y elerror en el conteo de los glbulos rojos. Pero el VCM obtenido por mtoosautomatizados es mucho ms confiable.En el neonato el VCM vara de la siguiente forma: En el recin nacido 106 fL;a la semana de nacimiento 101 fL, y durante la tercera y cuarta semanadespus del nacimiento alcanza los varores normales del adulto.2. HcM = Hemoglobina corpuscular media. Tambin llamada promediode Hemoglobina Gorpuscular (pllC)Representa la cantidad de hemoglobina presente en cada eritrocito,expresada en picogramos (pg) como unidad de peso. Relaciona la

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concentracin de Hb y el recuento eritrocitario por milmetro cbico, a travsde la siguiente frmula:

3. cHcM = concentracin de hemoglobina corpuscular media. Tambinllamada Promedio de la concentracin de Hb Gorpuscular (pcHG)Relaciona el peso de la hemoglobina en un volumen total de eritrocitos (HTO).Nos da una visin global de los niveres de hemoglobina y se expresa enporcentaje (%). Se obtiene de la siguiente frmula:cHcM pcHc = ::l::1 :]:1f]::l- x 100 varor RererenciaHematocrito (%) 32-36%

HbHCMPHC= ----X10Rto G.R. en millones

CLASIFICACIN DE LA ANEMIANormoctica NormocrmicaMacroctica N ormocrmicaMicroctica H ipocrmica

Valor Referencia28-32p9

VCM. HCM.CHCM80-100f1 - 28-32p9- 32-36%>105fl - >32p9 - 32-36Yo

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Valor absoluto. 22,5 * 147,5 x 10e/LINTERPRETACINEl conteo de reticulocitos es importante porque refleja la cantidad de clulasrojas viables que se producen en mdula sea (M.o). una disminucin en elnmero de reticulocitos se asocia con anemia aplstica y con disminucin enla produccin de clulas rojas en M.O. Los reticulocitos se encuentranaumentados en anemias hemolticas, anemias por deficiencias de hierro quereciben tratamiento, talasemias, anemias sideroblsticas y prdida de sangreaguda o crnica.La produccin de reticulocitos se puede estimar basados en la siguientefrmula: ndice de Produccin de Reiiculocitos (lpR)

%reticulocitos x HTO (paciente)IPR Hematocrito normal (45%) x das de maduracin (2)El valor obtenido es evidencia de la respuesta medular a las necesidades delindividuo, cuanto ms severa es la anemia mas inmaduro el reticulocito y porende la respuesta medular debe ser mayor. Los valores del lpR permitenestimar los niveles de respuesta de la medula sea. si el valor es < 2 seconsidera que es una medula hipoproliferativa y si es > 2 es hiperproliferativa.