GUÍA de Lab. A. Q. GRADO-FARMACIA GUÍA de Lab. A. Q. GRADO-FARMACIA

- Previo al Lab (Entregables al comenzar las prácticas)[1] Cuestiones (Leer la introducción del cuadernillo de prácticas en pdf. y acceder a los enlaces allí indicados. Hacer el cuestionario on-line en aula virtual)[2] Esquemas prácticas 1, 3, 4 y 5 (presentar el 1er día, según modelo para la práctica 2, resuelto al final del cuadernillo). El prof. Lo valorará y devolverá.

- Sesiones experimentales (Laboratorio). Breve explicación + 5 sesiones prácticas[3] Informe parcial-resultados. Al final de cada día/práctica presentar al prof. el borrador cumplimentado (tras los cálculos) del informe (al final del cuadernillo).El prof. lo valorará in situ.

- Posterior al Lab. Sesión seminario post-prácticas:[1] Desarrollo Prácticas (discusión grupal participativa. El prof. valorará in situ la participación activa, sobre todo el cuadernillo, el experimental, los esquemas)[2] Presentación Informe (discusión grupal participativa. El prof. valorará in situ la participación activa sobre los resultados del informe en el cuadernillo)[3] Informe-resultados (Entrega del informe, hoja de informe suelta-impresa aparte. El prof. valorará posteriormente los resultados de dicha hoja)

-------------------------Calificación final: Examen [1] 30% + Memoria [2] 20% + Resultados [3] 50%

Salvador Sagradosagrado@uv.es Dpto. Q. Analítica (Farmacia)

TAREAS EVALUABLES (SE VALORARA LA FECHA DE ENTREGA)TAREAS EVALUABLES (SE VALORARA LA FECHA DE ENTREGA)

ANÁLISIS

ANALITOS MUESTRAS

1) DUREZA (Ca, Mg) AGUA VOLUMETRÍA (complejos)

2) N-acetíl-L-cisteína MEDICAMENTO ESPECTROFOTOMETRÍA (Vis.)

3) FLUORURO DENTÍFRICO POTENCIOMETRÍA

4) Ca MEDICAMENTO ABSORCIÓN ATÓMICA

5) PARACETAMOL MEDICAMENTO HPLC ASPIRINA CAFEÍNA

TÉCNICA (método)

ANÁLISIS

ANALITOS MUESTRAS

1) DUREZA (Ca, Mg) AGUA

2) N-acetíl-L-cisteína MEDICAMENTO

3) FLUORURO DENTÍFRICO

4) Ca MEDICAMENTO

5) PARACETAMOL MEDICAMENTO ASPIRINA CAFEÍNA

1º 2º 3º 4º 5º

1,2

3,4

5,6

7,8

ORGANIZACIÓN PRACTICAS:

Parejas días exp.

1,2

3,4

5,6

7,8

1,2

3,4

5,6

1,2

3,4 1,2

7,8 5,6

7,8

3,4

5,6

7,8

INFORME (por pareja)

Nº patrones de Calibrado: 5 ó (justificar)

Pedir al profesor junto con la muestra o patrón-verificación

Verificar

PRÁCTICA (ANALITO)ETAPA (Código) (Resultado

previsto, unidades)

RESULTADOS(Completar. Media y s con cifras

significativas)

INCIDENCIAS (código)(Describir por detrás)

DUREZA Muestra: Agua

MUESTRA Dm .750-1350 mg.L-1 CaCO3

Media ±s = 1230 ± 50 (Verificado)RSD(%) = <5% ; n =

.

N-acetíl-L-cisteína Muestra: Medicamento

CALIBRACIÓN

VERIFICACIÓN Nv .10-40 %

MUESTRA Nm .Fabricante mg/unidad

np = 5 (o incidencia) ; R2=

>0.99

Media ±s =RSD(%) = ; n = 3 (o incidencia)

Media ±s =RSD(%) = ; n =

.

INCIDENCIAS:N1 . Eliminación de 1 patrón de calibrado por que se alejaba de la recta de calibrado, por lo que np= 4

N2 Eliminación de 1 réplica de la muestra discrepante por que superaba el ensayo Q, por lo que n = 2

N1N2

Ejemplos... y algunos datos esperables

CÁLCULOS (ver Guía en Cuaderno de prácticas):

statreg.xls (ordenadores prácticas)

- Calibrado + interpolación

- Media ± s, RSD%, n (+ ensayo Q)

HOJA EXCEL

Opcionalmente o para verificar...

Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Calibración del método (instrumental)- Patrón (p): NAC (puro, desecador)

Vpmp

vi

0

vp

Cp1

Cp5

Ap1

Ap5

Blanco, ‘Cero’ instrumento

Informenp=5(R2 >0.99)

Cp

*

‘Recta de calibrado’:

Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios

[Ap- 5.2] Pesar con precisión en balanza analítica 0.010 g de N-acetíl-L-cisteína… enrasar a 250 mL con agua. (aforado)

mp

Vp

~[0.01] g=0.25 L

[Ap- 6.1] Tomar alícuotas de la disolución de N-acetíl-L-cisteína de 0 a 5 mL (por ejemplo, 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL) (pipeta grad.) e introducir en matraces de 25 mL. (aforado) ...

vi

vp

=[0 – 5] mL=25 mL

Api

Cpi(mg/L)mp : masa de patrón

Vp : volumen disolución patrón (madre)

vi : volumen alícuotas patrón (alícuotas i )vp: volumen disolución patrones calibrado

Cpi : concentración patrones calibrado (mg/L)Api : absorbancia patrones calibrado

Marcar (rotular) material EsquemaEsquema

seco

NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir

Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Verificación del método (instrumental)- Patrón verif. (pve); [20-30%]-Analito (a): NAC

Va

mpve

vi

va

Ca1

Ca3

Aa1

Aa3

Ca

ma

* Interpolar en ‘Recta de calibrado’:

Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios

[Ap- 6.2] Pesar en balanza analítica 0.04 g del patrón de verificación… enrasar a 100 mL con agua (aforado). Por triplicado, tomar 1 mL (pipeta grad.) de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL …

mpve

Va

vi

va

~[0.04] g=0.1 L=1 mL=25 mL

Cai

mpve : masa de patrón-verif.

Va: volumen disolución analito-pve (madre)

vi : volumen alícuotas (réplicas i )

va: volumen disolución analito (réplicas)

Ca-pvei : concentración de analito en el pve (%); incógnita

Aai : absorbancia analitoCai : concentración estimada analito (mg/L)

Ca-pvei (%) ?Aai

Marcar (rotular) material EsquemaEsquema

seco

Cai

NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir

Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Análisis de muestra (m)- Analito (a): NAC (contenido según fabricante)

Va

mm

vi

va

Ca1

Ca3

Aa1

Aa3

Ca

ma

*

Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios

[Ap- 6.3] Pesar en balanza analítica el contenido de un sobre o cápsula. Triturar en un mortero. Pesar 0.125 g de muestra… llevar a 250 mL en un matraz aforado. Por triplicado, tomar 1mL de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL…

mc

mm

Va

vi

Va

~[0.125] g=0.25 L=1 mL=25 mL

Cai

mc

mc : masa de comprimido

mm : masa de muestra

Va: volumen disolución analito-muestra (madre)

vi : volumen alícuotas (réplicas i )va: volumen disolución analito (réplicas)ma-ci : masa de analito por comprimido (mg/unid.); incógnita

Aai : absorbancia analitoCai : concentración estimada analito (mg/L)

Interpolar en ‘Recta de calibrado’:

ma-c (mg/unid.) ?Aai

Marcar (rotular) material EsquemaEsquema

seco

Cai

NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir

Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Calibración del método (instrumental)- Patrón (p): NAC (puro, desecador)

Vpmp

vi

0

vp

Cp1

Cp5

Ap1

Ap5

Blanco, ‘Cero’ instrumento

Informenp=5(R2 >0.99)

Cp

*

‘Recta de calibrado’:

Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios

[Ap- 5.2] Pesar con precisión en balanza analítica 0.010 g de N-acetíl-L-cisteína… enrasar a 250 mL con agua. (aforado)

mp

Vp

~[0.01] g=0.25 L

[Ap- 6.1] Tomar alícuotas de la disolución de N-acetíl-L-cisteína de 0 a 5 mL (por ejemplo, 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL) (pipeta grad.) e introducir en matraces de 25 mL. (aforado) ...

vi

vp

=[0 – 5] mL=25 mL

Api

Cpi(mg/L)mp : masa de patrón

Vp : volumen disolución patrón (madre)

vi : volumen alícuotas patrón (alícuotas i )vp: volumen disolución patrones calibrado

Cpi : concentración patrones calibrado (mg/L)Api : absorbancia patrones calibrado

CálculoCálculoCpi (mg/L) = mp(g) / Vp(L) x 103(mg) / 1(g) x vi(L) / vp(L) = (mp(g) 103 vi(L)) / (Vp(L) vp(L))

Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Verificación del método (instrumental)- Patrón verif. (pve); [20-30%]-Analito (a): NAC

Va

mpve

vi

va

Ca1

Ca3

Aa1

Aa3

Ca

ma

* Interpolar en ‘Recta de calibrado’:

Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios

[Ap- 6.2] Pesar en balanza analítica 0.04 g del patrón de verificación… enrasar a 100 mL con agua (aforado). Por triplicado, tomar 1 mL (pipeta grad.) de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL …

mpve

Va

vi

va

~[0.04] g=0.1 L=1 mL=25 mL

Cai

mpve : masa de patrón-verif.

Va: volumen disolución analito-pve (madre)

vi : volumen alícuotas (réplicas i )

va: volumen disolución analito (réplicas)

Ca-pvei : concentración de analito en el pve (%); incógnita

Aai : absorbancia analitoCai : concentración estimada analito (mg/L)

CálculoCálculoCa-pvi (%) = 100 ma(g) / mpve(g) = (Cai(mg/L) x va(L) / vi(L)

x Va(L) x 1(g) / 103(mg)) / mpve(g) = (Cai(mg/L) va(L) Va(L)) / (vi(L) 10 mpve(g))

Ca-pvei (%) ?Aai

Cai

Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Análisis de muestra (m)- Analito (a): NAC (contenido según fabricante)

Va

mm

vi

va

Ca1

Ca3

Aa1

Aa3

Ca

ma

*

Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios

[Ap- 6.3] Pesar en balanza analítica el contenido de un sobre o cápsula. Triturar en un mortero. Pesar 0.125 g de muestra… llevar a 250 mL en un matraz aforado. Por triplicado, tomar 1mL de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL…

mc

mm

Va

vi

Va

~[0.125] g=0.25 L=1 mL=25 mL

Cai

mc

mc : masa de comprimido

mm : masa de muestra

Va: volumen disolución analito-muestra (madre)

vi : volumen alícuotas (réplicas i )va: volumen disolución analito (réplicas)ma-ci : masa de analito por comprimido (mg/unid.); incógnita

Aai : absorbancia analitoCai : concentración estimada analito (mg/L)

CálculoCálculo

Interpolar en ‘Recta de calibrado’:

ma-ci (mg/unid.) = ma(mg) x mc(g) / mm(g) = (Cai(mg/L) x va(L) / vi(L) x Va(L) ) x mc(g) / mm(g) =

(Cai(mg/L) va(L) Va(L) mc(g) ) / (vi(L) mm(g))

ma-c (mg/unid.) ?Aai

Cai

CALIBRACIÓN DEL MÉTODO Datos primarios Resultados

Masa de biftalato potásico patrón (g) m p = 1.03E-02 g Señal

Volumen dis. patrón (madre) (L) V p = 0.25 L Disol. Conc. Abs.

Volumen alicuotas (L) v 1 = 1.00E-03 L P1 C p1 = 1.64800 mg/L A p1 = 0.1050

v 2 = 2.00E-03 L P2 C p2 = 3.29600 mg/L A p2 = 0.1928

v 3 = 3.00E-03 L P3 C p3 = 4.94400 mg/L A p3 = 0.3286

v 4 = 4.00E-03 L P4 C p4 = 6.59200 mg/L A p4 = 0.4027v 5 = 5.00E-03 L P5 C p5 = 8.24000 mg/L A p5 = 0.4917

Volumen patrones calibrado (L) v p = 2.50E-02 L

Ec. Recta ordenada pendiente R 2

y = 0.0092 + 0.059671 x 0.9912 VERIFICACIÓN DEL MÉTODO Datos primarios

Masa de patrón-verificación (g) m pve = 0.0399 g Interpolación Señal

Volumen dis. analito-pve (madre) (L) V a = 0.1 L Disol. Conc. est. Abs.

Volumen alícuotas (réplicas) (L) v 1 = 1.00E-03 L PVe1 C a1 = 3.5887 mg/L Aa 1 = 0.2233

v 2 = 1.00E-03 L PVe2 C a2 = 3.4907 mg/L Aa 2 = 0.2175v 3 = 1.00E-03 L PVe3 C a3 = 3.3958 mg/L Aa 3 = 0.2118

Volumen disolución analito (L) v a = 2.50E-02 L

Resultados Comparación:

Conc. est. PVe

Concentración analito en Pve C a-pve1 = 22.4858 % Media = 21.8782 ? [20 - 30] %

C a-pve2 = 21.8716 % s = 0.6043C a-pve3 = 21.2772 % RSD (%) = 2.8

n = 3

ANÁLISIS DE MUESTRA Datos primarios Informar con cifras significativas

Masa comprimido/unidad medic. (g) m c = 1.0198 g

Masa de muestra (g) m m 0.1250 g Interpolación Señal

Volumen dis. analito-m (madre) (L) V a = 0.25 L Disol. Conc. est. Abs.

Volumen alícuotas (réplicas) (L) v 1 = 1.00E-03 L M1 C a1 = 4.0362 mg/L Aa 1 = 0.2500

v 2 = 1.00E-03 L M2 C a2 = 4.0027 mg/L Aa 2 = 0.2480v 3 = 1.00E-03 L M3 C a3 = 3.8351 mg/L Aa 3 = 0.2380

Volumen disolución analito (L) v a = 2.50E-02 L

Resultados Comparación:

masa est. Medicamento (Fabricante)

Masa analito por comprimido (mg) m a-c1 = 205.8054 mg/u Media = 201.8176 ? 200 mg/u

m a-c2 = 204.0963 mg/u s = 5.4938m a-c3 = 195.5512 mg/u RSD (%) = 2.7

n = 3

Informar con cifras significativas

Incidencias (Código) Descripción

Ejemplo de Registro de ensayo(basado en los esquemas y cálculos)