Guía de Aplicación Abacus- Arcus

5/11/2018 Guía de Aplicación Abacus- Arcus - slidepdf.com

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Analizador de Hematología

Guía de AplicaciónEmisión 1.0



Analizador de Hematología Abacus Abacus Abacus Abacus – –– – Arcus Arcus Arcus Arcus – Guía de Aplicación emisión 1.0 1

TABLA DE CONTENIDOS

1 INTRODUCCION.................................................................................................................. ……. 32 SANGRE............................................................................................................................... ……. 4

2.1 FUNCION DE LA SANGRE................................................................................................ ……. 42.2 COMPOSICION DE LA SANGRE.............................................................................................. 42.3 PARAMETROS DE LAS CELULAS SANGUINEAS...................................................................... 5

2.3.1 Células Sanguíneas Rojas, Hemoglobina ...................................................................... 52.3.2 Células Sanguíneas Blancas.......................................................................................... 62.3.3 Plaquetas ....................................................................................................................... 7

2.4 RANGOS HEMATOLOGICOS NORMALES DE SANGRE HUMANA ............................................ 73 METODOS DE MEDICION ............................................................ .......................... ................... 8

3.1 METODO DE IMPEDANCIA VOLUMETRICA .......................................................................... 83.1.1 Dilución de Sangre total ............................................................................................... 9

3.1.2 Hemolisis de células sanguíneas, método diferencial de WBC de 3-partes .................. 93.2 DETERMINACION DE HEMOGLOBINA POR FOTOMETRIA................................................... 11

4 RUTINA DE UTILIZACION........................................................................................................... 124.1 MANIPULACION DE LA MUESTRA ........................................................................................ 12

4.1.1 Anti-coagulante ............................................................................................................. 124.1.2 Extracción de sangre..................................................................................................... 124.1.3 Almacenamiento de muestras....................................................................................... 124.1.4 Manipulación de Controles y Calibradores ................................................................... 13

4.2 REACTIVOS Y CONDICIONES AMBIENTALES....................................................................... 134.3 APERTURA DE BLOQUEOS - OBSTRUCCIONES................................................................... 144.4 CALIBRACION............................................................................................................................ 154.5 CONTROL DE CALIDAD ........................................................................................................... 154.6 MEDICION DE SANGRE DE PACIENTES................................................................................. 15

4.7 USANDO EL MODO DE PRE-DILUCION .................................................................................. 164.7.1 Preparación de Muestra para Modo de Pre-dilución 1:10.............................................. 164.7.2 Preparación de Muestra para Modo de Pre-dilución 1:3................................................ 164.7.3 Calibración Modo de Pre-dilución ................................................................................. 16

5 RESULTADOS DE MEDICIONES, HISTOGRAMAS.................................................................. 175.1 HISTOGRAMA TIPICO.............................................................................................................. 175.2 AVISOS DE ADVERTENCIA ................................................................................................... 18

6 CASOS HUMANOS.................... ............. .................................................................................... 206.1 NEONATOS ............................................................................................................................. 206.2 NIÑOS DE TRES AÑOS DE EDAD.......................................................................................... 216.3 OBSTRUCCION DE WBC ....................................................................................................... 226.4 HISTOGRAMA DE WBC CON RBCS NUCLEADOS ............................................................. 236.5 LINFOCITOSIS: WBC FUERA DE LINEALIDAD..................................................................... 24

6.6 LINFOSITOSIS: MEDICION EN MODO DE PRE-DILUCION 1:10 ........................................ 256.7 MID ALTO Y MID% ................................................................................................................. 266.8 GRANULOCITOSIS ................................................................................................................. 276.9 TROMBOCITOPENIA................................................................................................................ 286.10 TROMBOCITOSIS, ANISOCITOSIS ....................................................................................... 296.11 MICROCITOSIS (MCV BAJO)................................................................................................. 306.12 MACROCITOSIS (MCV ALTO) .............................................................................................. 316.13 MUESTRA POCO LISADA...................................................................................................... 326.14 MUESTRA MUY LISADA ........................................................................................................ 33

7 CASOS VETERINARIOS.......................................................................................................... 347.1 HEMATOLOGIA NORMAL Y RANGOS DE ANIMALES......................................................... 347.2 EFECTO DE LA CONFIGURACION DE LISANTE EN EL DIFERENCIAL DE WBC DE 3-

PARTES.................................................................................................................................... 357.3 PERRO..................................................................................................................................... 36



2 ©Diatron Ltd. 2002

7.3.1 Perro: Muestra Normal .............................................................................................. 367.3.2 Perro: Alto LYM%, Bajo GRA%.................................................................................. 377.3.3 Perro: Alerta „D”, Alto PLT ......................................................................................... 387.3.4 Perro: Alerta „W”......................................................................................................... 39

7.4 GATO...................................................................................................................................... 407.4.1 Gato: Muestra Normal................................................................................................ 407.4.2 Gato: Alto LYM%, Bajo GRA%, Alto RBC y HGB...................................................... 417.4.3 Gato: Alerta “M”, Bajo RBC, HGB y muy Bajo PLT ................................................... 427.4.4 Gato: Alerta „R”.......................................................................................................... 43

7.5 CABALLO................................................................................................................................ 447.5.1 Caballo: Muestra Normal ........................................................................................... 447.5.2 Caballo: Bajo LYM%, Alto GRA y GRA% .................................................................. 457.5.3 Caballo: Bajo PLT....................................................................................................... 467.5.4 Caballo: Bajo RBC y HGB........................................................................................... 47

7.6 CONEJO................................................................................................................................. 487.7 RATA....................................................................................................................................... 49




1 INTRODUCCION

Esta Guía de Aplicación es un suplemento al Manual de Usuario de Abacus Abacus Abacus Abacus / // / Arcus Arcus Arcus Arcus .El Manual del Usuario describe las características y el uso de este analizador en una base funcional. En estaGuía de Aplicación trataremos de dar una visión general a los usuarios de Abacus Abacus Abacus Abacus / // / Arcus Arcus Arcus Arcus de cómo medir,entender, evaluar y validar los resultados, como enfrentarse a los avisos de advertencias.

Realmente creemos que una mejor comprensión de la operación dará lugar a una mayor confianza ennuestros analizadores. Tenemos que tener en cuenta que las maquinas e instrumentos pueden ayudar anuestro trabajo, pero el usuario tiene que tomar las decisiones, aceptar los resultados y la responsabilidadtotal es nuestra. Si conocemos la capacidad de nuestro analizador, vamos a tomar las decisiones necesariasmás fáciles, aceptar los buenos resultados – aunque haya avisos de advertencia – o repetir la medición si esnecesario.

Hemos tratado de evitar descripciones complicadas y definiciones de términos hematológicos. Ustedencontrará varias cifras simples y proyectos describiendo la funcionalidad básica, porque nuestro campo deaplicación es hacerle entender fácilmente, y al hacerlo, usted tendrá un mejor control de nuestro analizador.

En los capítulos 2 a 6 todos los datos hacen referencia a muestras humanas y sangre.

En el capitulo 2 discutimos la función de la sangre y describimos el objetivo del conteo de célulashematológicas (células sanguíneas). Luego definimos los parámetros hematológicos desde las característicasde las células sanguíneas (con muestras humanas).

En el capítulo 3 tipificamos diferentes métodos de conteo celular para dar una vista general de la tecnología dehoy.

En el capítulo 4 tratamos las reglas de utilización de rutina para el análisis desde la toma de sangre hasta losresultados y reporte de mediciones.

En el capítulo 5 un histograma normal típico y la visión general de las alarmas que se pueden encontrar.

Capitulo 6 contiene muestras humanas y su evaluación con histogramas y descripción de los resultados.Todos los casos son diferentes pero, tratamos de dar una descripción de los casos básicos que usted puedeencontrar en la práctica.

Capitulo 7 fue creado para nuestros usuarios Veterinarios. Vamos por las tres especies animales másestudiadas: perro, gato y caballo, sus características y luego unos pocos animales adicionales. Aunque ustedsea un veterinario, le sugerimos pasar por los casos humanos también, ya que estos contienen muchainformación no detallada en los casos veterinarios.

La información en esta guía está basada en el conocimiento de usuarios del manual. Así que, por favormanténgalo a mano, si lo necesita como referencia.

Las fuentes de literatura de los datos revelados en esta Guía de Aplicación son:




2 SANGRE

2.1 FUNCIÓN DE LA SANGRELa sangre circula en el cuerpo y actúa como un medio de transporte para llevar el suministro óptimo demateriales esenciales y remover productos de desecho de todas las células del cuerpo. Neuronas, célulasmusculares, células del tejido conectivo y células epiteliales extraen su alimento del espacio intersticial yreaccionan a la glucosa y oxígeno contenido del ambiente. El suministro fresco de oxígeno y glucosa sonobtenidos por el intercambio con la sangre circulante en los capilares. La sangre recibe su oxígeno de lospulmones y la glucosa del intestino e hígado.

La función normal de las células depende de la remoción rápida del producto metabólico toxico (CO2 y NH3) delfluido intersticial. Estos subtónicos se recogen del plasma y células sanguíneas rojas y se eliminan al paso dela sangre a través de los riñones y pulmones. La sangre entrega también hormonas, lípidos, aminos ácidos,sales y vitaminas y remueve urea y ácidos conjugados. Además, la sangre asegura el contenido normal de

agua del espacio intersticial.El calor, generado por el metabolismo de las células del cuerpo, es distribuido por la circulación sanguínea, demodo que la temperatura corporal se mantiene prácticamente en un nivel constante. Las plaquetas en lasangre y el mecanismo de coagulación del plasma previenen la pérdida de sangre en el evento de un dañovascular. Estos se agregan con otras plaquetas para formar grandes tapones hemostáticos.

Las células sanguíneas blancas nos protegen contra infecciones identificando y matando la bacteria invasiva.

El número, tamaño y distribución de las células sanguíneas proveen información importante para eldiagnóstico médico y terapia. El objetivo de la hematología es recoger esta información.

2.2 COMPOSICION DE LA SANGRELos tres grupos de partículas de la sangre total son:

1. Células Sanguíneas Rojas (eritrocitos, RBC)2. Células Sanguíneas Blancas (leucocitos, WBC)3. Plaquetas (trombocitos, PLT)

Células SanguíneasRojas

Células SanguíneasBlancas

Plaquetas

Densidad Normal 4.5 – 5.5 x 1012 cels/l 5 – 10 x 109 cels/l 150 – 450 x 109 cels/lNucleados ? No* Si No

Sub-poblaciones y sus%

RBC: 99.9%* NRBC (RBC Nucleados)

0.1%

GRAnulocitos: 65%

NEUtrofilos: 60%EOSinofilos: 4%BASofilos: 1%

LYMfocitos: 30%MONOcitos: 5%

Forma, tamañoForma Bicóncava

Diámetro: 7-8µmAncho: 1.8-2 µm

GRAnulocitos: 13-16 µmLYMfocitos: 8-15 µmMONOcitos: 15-25 µm

Fragmentos con undiámetro de 2-4 µm

Volumen de la célula 80 – 100 fl 50 – 1500 fl (nativo) 5 -15 fl% Volumétrico en

sangre total 45% 0.1% 0.3%

Tabla 1. Composición celular de la sangre total humana (Fuente: 2)




2.3 PARAMETROS DE LAS CELULAS SANGUINEAS

2.3.1 Células Sanguíneas Rojas, Hemoglobina

Las células sanguíneas Rojas – RBC – son formadas en la médula ósea. Una célula roja humana concrecimiento completo es no nucleada y su volumen corpuscular medio – MCV – es aproximadamente 90 fl.RBC son las células de mayor número en la sangre. Hay aproximadamente 5 x 1012 cel/l en la sangre de unapersona sana. Los RBC y MCV son parámetros primarios medibles, por lo que tienen factor de calibración:CALRBC y CALMVC.

Hematocrito – HCT – la medición suministra la proporción de RBC del plasma en sangre periférica. Este es elmétodo más exacto y simple para medir el grado de anemia. Es calculado de los valores de RBC y MCV.(Algunos instrumentos miden HCT y calculan MCV).

HCTporcentaje = RBC X MCV/10%, HCTabsoluto = HCTporcentaje / 10, típicamente HCT = 0.45 = 45%.

El histograma de RBC en una muestra sana evidencia una distribución normal (Gaussian). Este puede sercaracterizado por una desviación estándar – RDW-SD – y un coeficiente de variación – RDW-CV – deaproximadamente 14%. Ellos tienen un factor de calibración común de CALRDW.

El ancho de distribución de la población de RBC se deriva del histograma en 20% de pico. La definición deRDW depende de la fabricación de los analizadores. Nosotros usamos la siguiente formula.

Definición gráfica de RDW (Ancho de Distribución RBC):RDW-SD = CALRDW x (P2 - P1) en unidad de fl,RDW-CV = CALRDW x 0.56 x (P2 - P1) / (P2 + P1) %

Con el factor de 0.56, el CV es corregido al corte de 60%.(La pequeña población a la izquierda es PLT, la grande es RBC).

Figura 1. Definición de RDW

Hemoglobina –HGB – Es el principal componente de los RBC. Es una proteína conjugada (con Fe). Suprincipal función es el transporte de oxígeno de los pulmones a los tejidos y el transporte de dióxido de carbonode los tejidos a los pulmones. La concentración normal de HGB de las muestras humanas es aproximadamente14 g/dl = 140 g/l = 87 mmol/l*. La unidad es seleccionable en el menú Configuraciones.

Hemoglobina Corpuscular Media – MCH – es el promedio del contenido de hemoglobina de los RBC.Calculado de los valores de RBC y HGB.

MCH = HGB / RBC en unidades de pg o fmol*.

Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media – MCHC – es la concentración de HGB en el promediode RBC, calculado de los valores de HGB y HCT:

MCHC = HGB / HCTabsoluto en g/dl, g/l o mmol/l*.

*Las unidades especificas de HGB, MCH y MCHC.




2.3.2 Células Sanguíneas Blancas

Las células sanguíneas Blancas – WBC – son formadas en la médula ósea. Durante su secuencia de

maduración se diferencian de la misma célula madre a 5 sub-poblaciones. Las WBC son nucleadas ycomprenden los granulocitos, linfocitos y monocitos. Las WBC están equipadas con todos los organeloscelulares necesarios para vivir y llevar a cabo las funciones de protección vitales en el cuerpo. Las sub-poblaciones de WBC en una muestra de sangre siguen una distribución normal.

El valor normal de WBC es cercano a 7 x 109 cel/l. Es muy pequeño comparado a las RBC. En condicionespatológicas, el conteo de WBC puede incrementarse dramáticamente, ej.: a 500.000/µl en leucemia extrema.En este caso, se requiere una pre-dilución de la muestra (más sobre esto más adelante).

Los histogramas diferenciales de 3 partes (curvas de distribución de volumen) de WBC pueden ser usadoscomo una prueba de tamizaje para determinar el número absoluto y el porcentaje relativo de linfocitos –LYM,LYM% - monocitos – MID, MID% - y granulocitos – GRA, GRA%.

El conteo de WBC tiene factor de calibración: CALWBC La definición de los parámetros relacionados WBC:WBC = LYM+MID+GRA, y LYM% = LYM/WBC, MID% = MID/WBC, GRA% = GRA/WBC.Si los valores diferenciales están fuera de los rangos normales, puede ser necesario un diferencial completo enmicroscopio.

Tenemos que saber, que durante el conteo de WBC las células son tratadas, ya que estas pierden su volumennativo y el histograma derivado mostrara “células” muy pequeñas. Este histograma contiene células reducidasa sus núcleos (después de la hemolisis), pero esto depende del lisante usado y cantidad.

Los porcentajes de las sub-poblaciones de WBC son representadas por su área bajo el histograma de WBC.La operación del diferencial de 3 partes está ilustrada en la siguiente figura.

Para determinar las sub-poblaciones de WBC,primero el software calcula el discriminador 1 almargen de los RBC hemolisados + PLT (en laizquierda) y la población de LYM, luego las curvasde distribución normal se ajustan al histograma deWBC restante (ellos son mostrados en diferentesincubaciones).

Después de identificar la población MID (media) elsoftware ajustará los discriminadores 2 y 3 alpunto de ±CV (60%) de distribución normal de lapoblación MID (mostrada en gris). En otraspalabras, el software muestra donde se encuentra lapoblación MID

Figura 2. Definición de poblaciones WBC

Usted debe recordar este punto de la operación durante el proceso de verificación/validación, cuando acepte losresultados de WBC y diferencial de 3 partes. No olvide, las poblaciones MID contienen monocitos y una partede eosinófilos, algunas veces linfocitos gigantes, pero esto depende del paciente.




2.3.3 Plaquetas

Las plaquetas – PLT – son fragmentos no nucleados de megacariocitos. Se observa que las plaquetas están

formadas por fragmentación y no por secuencia de maduración normal como los RBC y WBC. Esto significaque el histograma de plaquetas en el lado izquierdo tiene una forma logarítmica y en el lado derecho tiene unaforma normal (distribución “log-normal”).

El rango de concentración normal de PLT es 150-450 x 109 cel/l en función del volumen promedio de plaquetas(MPV). PLT puede variar de 0 a 1 millón de cel/µl en diferentes condiciones.

Las PLT son relativamente pequeñas comparadas a los RBC. El volumen de plaquetas promedio – MPV – esaproximadamente 12 fl, de modo que pueden ser separadas de los RBC por su tamaño. PLT y MPV sonparámetros primarios medidos, por su factor de calibración: CAL PLT y CALMPV.

Como los RBC, calculamos el promedio volumétrico de PLT en sangre total por:

PCTporcentaje = PLT x MPV/10%, PCTabsoluto = PCTporcentaje / 10, típicamente PCT = 0.003 = 0.3%.

Las definiciones de PDW-CV y PDW-SD son similares a la definición de RBC (ver arriba).

La pantalla e impresión de estos parámetros xDW-SD y xDW-CV dependen de la configuración actual: losparámetros CV o SD pueden ser seleccionados uno a la vez (RDW y PDW, también)

2.4 RANGOS HEMATOLOGICOS NORMALES DE SANGRE HUMANA

La siguiente tabla muestra un resumen de los rangos normales de los parámetros de células sanguíneas depacientes adultos sanos. Los valores normales varían de población a población y pueden ser ligeramentediferentes en su localización.

Parámetro Unidad Hombre MujerWBC 109 cel/l 7.0 ± 3.0 7.0 ± 3.0

LYM% % 32.5 ± 7.5 32.5 ± 7.5

MID% % 5.0 ± 3.0 5.0 ± 3.0

GRA% % 67.5 ± 7.5 67.5 ± 7.5

RBC 1012 cel/l 5.0 ± 0.5 4.5 ± 0.5

HCT % 45.0 ± 5.0 41.0 ± 5.0

MCV fl 90.0 ± 5.0 90.0 ± 5.0

RDW-CV % 14.0 ± 2.0 14.0 ± 2.0

HGB g/dl 15.0 ± 2.0 13.0 ± 2.0

MCH Pg 30.0 ± 2.0 30.0 ± 2.0MCHC g/dl 33.5 ± 2.0 33.5 ± 2.0

PLT 109 cel/l 275 ± 125 275 ± 125

MPV fl 12.0 ± 2.0 12.0 ± 2.0

Tabla 2. Rangos Hematológicos Normales Humanos (Fuente 2).




3 METODOS DE MEDICION

En este capítulo realizamos una descripción general de los métodos hematológicos de medición. Es importante

conocer cómo trabaja su sistema, ya que así es más fácil manipularlo si los resultados no son los esperadosdurante la rutina de utilización.

3.1 METODO DE IMPEDANCIA VOLUMETRICA

Al comienzo solo era disponible el conteo manual de células sanguíneas en microscopio para determinar lasconcentraciones de células de una muestra de sangre. Debido a la inexactitud y alto tiempo de consecución enel conteo manual de células sanguíneas, surge una demanda de un método más exacto y rápido. El método deimpedancia volumétrica es un procedimiento electrónico automatizado de conteo de células sanguíneas.

Figura 3. Esquema del Método de Impedancia Volumétrica

El principio de esta medición es que la sangre diluida con solución isotónica (diluyente) pueda conducircorriente por conducción iónica. Una cámara de recuento hecha de material aislante (plástico) contiene estasolución de sangre, mientras que hay un agujero circular pequeño (apertura) en esta cámara, el cual haceposible el flujo de la sangre diluida.

Si ubicamos dos electrodos en dos sitios de esta apertura y aplicamos una corriente eléctrica constante, lasolución isotónica iniciará la conducción de electricidad y el voltaje podrá ser medido en la apertura.

La aplicación de presión a la dilución inicia el flujo a través de la apertura. Una vez una célula pasa por laapertura, un pequeño cambio en la impedancia eléctrica ocurrirá, haciendo el voltaje un poco más alto, ej.: unpequeño pulso eléctrico se presentará. La amplitud del pulso será proporcional a la relación del volumen celular(tamaño) y el volumen de apertura, de manera que la célula más grande, será el pulso más alto queobtendremos. El diámetro del tamaño de apertura y longitud es 80 µm.

Para un recuento apropiado – diferenciación – de células, necesitamos una alta probabilidad (mayor del 90%)de pasar una célula por la apertura por vez. Ya que la concentración celular es alta en sangre total, tenemosque diluir la sangre total para reducir la concentración.




Aunque diluimos la sangre, en casos deconcentración extremadamente altos (ej.: leucemia)la densidad de WBC puede ser 100x mayor que encasos normales causando que pasen dos o más

células por la apertura al mismo tiempo, generandoun pulso en vez de dos (o más). Esto se llamacoincidencia y dará resultado a un recuento celularno lineal. En este caso se evidenciarán las alarmasm y M.El rango de linealidad de WBC es: 7.5x109 cel/lpara Abacus, 100x109 cel/l para Arcus.En este caso usted debe pre-diluir la muestra yrepetir la medición.

Figura 4. Efecto de Coincidencia – no lineal

La relación de la pre-dilución depende de la configuración de su analizador (1:3 o 1:10). Ver sección 4.7 paradetalles del uso.

3.1.1 Diluyendo sangre total

Analizadores automatizados realizan los siguientes pasos automáticamente, para reducir la concentracióncelular al nivel deseado.

Secuencia de preparación de una muestra:

1. El analizador toma 25 µl de sangre totaltratada con EDTA. Esta será diluida en la

cámara de MEZCLA con 4 ml de diluyentepara formar una dilución MEZCLA 1:160 de sangre total.

2. Otros 25 µl de dilución de MEZCLA sontomados y llevados a la cámara RBC con 5ml de diluyente para formar una dilución1:32 000 RBC. Esta es la adecuada parala medición de RBC/PLT.

Figura 5. Proceso de Dilución para el Recuento Celular de Sangre

3. Luego son adicionados 0.8 ml de lisante a la dilución MEZCLA (prácticamente mientras se pasa a lacámara de recuento de WBC para evitar la contaminación de la cámara de MEZCLA con lisante) paraformar una dilución 1:200 WBC/HGB. Esta solución es la adecuada para la medición de WBC y HGB.

3.1.2 Hemolisando las células sanguíneas, método diferencial de 3 partes de WBC

Ya que los RBC están 1000 veces más concentrados en sangre normal, pueden interferir con el recuento deWBC, ej.: el alto número de RBC impediría el recuento de WBC, ya que la apertura que contiene los RBCestaría siempre “llena”.

De otro lado tenemos que medir HGB, la cual se encuentra dentro de los RBC, de manera que tenemos quesacarla de alguna manera de las células.Un reactivo hemolisante (lisante) puede usarse para disolver la membrana de las células sanguíneas,destruyendo los RBC y creando una solución compleja adecuada para la fotometría de HGB.




Figura 6. Cambios en las características de las células sanguíneas durante la hemolisis (diferencial de 2

partes)

La membrana de los WBC se convierte en una permeable selectiva, así en la solución lisante ligeramentehipertónica estas empiezan a reducirse a sus núcleos. El líquido hemolisado apropiadamente contienepartículas en la región 30-400 fl.

Figura 7. Histograma de WBC con diferencial típico de 3 partes de hemolisis selectiva

La hemolisis selectiva (diferencial de 3 partes) de WBCdepende del tipo de reactivo de lisis, tiempo de lisis y cantidadde lisante usado.Si agregamos mucho lisante o si esperamos demasiadotiempo, el resultado no será selectivo, todos los WBC seránreducidos a sus núcleos, ej.: obtendremos un histograma contodos los WBC en una población de la región 30-120 fl (ver

histograma de la izquierda). Nosotros llamamos este casomuestra totalmente o sobre-lisada.Usando lisis en el diferencial de WBC de 3 partes con Abacus Abacus Abacus Abacus

y Arcus Arcus Arcus Arcus , la cantidad de lisante es el único parámetro el cualpuede ser modificado.

Figura 8. Histograma de WBC lisados totalmente

Si el software obtiene un histograma sobre-lisado, este colocará la alarma E – “No diferencial WBC de 3 partes” – o alarma W – “Diferencial WBC de 3 partes no es confiable” – en los resultados.




Con la configuración de lisante predeterminado (0.7 – 0.9) la mayoría de las mediciones tendrán resultadossatisfactorios. En algunos casos el sobre-lisado o lisado-bajo de las muestras puede ocurrir, debido a lascaracterísticas de la sangre del paciente. Un lisado-bajo significa que muchos RBC permanecen intactos, ej.: ellado izquierdo del histograma inicia con un pico alto cercano a 20 fl.

Abacus Abacus Abacus Abacus y Arcus Arcus Arcus Arcus permite una medición adaptable de la muestra al incrementar o disminuir el reactivo de lisisdependiendo de los resultados. Si el histograma muestra un resultado sobre-lisado, usted puede repetir lamedición después de disminuir la cantidad de lisante presionando la flecha debajo de la tecla del cursor. Encaso de lisado-bajo, presionar la flecha arriba para incrementar el lisante y repetir la medición.Usted puede ajustar la cantidad de lisante en -0.2, -0.1 o +0.1, +0.2 ml puntos (remitirse al Manual del Usuario).

No hay manera de medir todos los 5 tipos diferentes de WBC con este método, usando una dilución y un sololisante. Hay analizadores con diferencial de WBC de 5 partes empleando citometros de flujo, lisis selectiva uotras técnicas para obtener información de la estructura celular interna de los WBC para una mejor clasificación.

Nosotros podemos clasificar los analizadores de hematología de acuerdo a su capacidad de diferenciación:

ParámetrosSin diferencial

WBCDiferencial WBC 3

partesDiferencial WBC 5

partesWBC Si Si Si

LYM, MON, GRA No Si Si

LYM,MON,NEU,EOS,BAS No No Si

Tabla 3. Características de los diferentes tipos de analizadores de hematología

Es importante conocer que – independientemente del fabricante del analizador – el método de impedanciavolumétrica (diferencial WBC de 3 partes) puede diferenciar el tipo de células únicamente basado en sutamaño, pero no de acuerdo a sus diferencias estructurales internas. Consecuentemente este método esúnicamente una técnica limitada de diferenciación para realizar un reporte de hematología cualitativo.

3.2 DETERMINACION DE HEMOGLOBINA POR FOTOMETRIALa determinación HGB es uno de los primeros métodos desarrollados y es uno de los parámetros másimportantes ya que relaciona la capacidad de la sangre de transportar oxígeno.

Se conocen varios métodos para la determinación de HGB, pero el método de cianometahemoglobina es elusado comúnmente. Es posible obtener un segundo reactivo neutralizante para el desecho de lisis quecontiene cianuro. (Hay reactivos de lisis libres de cianuro en el mercado para evitar la contaminaciónambiental).

El reactivo de lisis – contiene ferrocianuro de potasio y cianuro de potasio – convierte la hemoglobina acianometahemoglobina. Esta substancia absorbe la luz verde a 540 nm.

La medición de HGB es realizadapasando una luz de longitud de onda de 540 nm a

través de la dilución de WBC y midiendo la luztransmitida con un foto detector.

La intensidad de luz (l) de la muestra liquida eslogarítmicamente proporcional a la concentraciónde HGB:

HGB log (lreferencia / lmuestra)

Figura 8. Método de Medición de HGB El analizador toma como referencia la medición de HGB de un

diluyente limpio en cada ciclo durante la fase de limpieza para asegurar la estabilidad en tiempo y temperatura.




4 RUTINA DE UTILIZACION

4.1 MANIPULACION DE LA MUESTRA

4.1.1 Anti-coagulante

Ya que usualmente transcurre tiempo entre la obtención de la muestra y el recuento, es necesario preservar lamuestra con un anti-coagulante para prevenir grupos grandes de células formadores de coágulos o grumos decélulas que taponaran el contador de células. La elección del anti-coagulante es muy importante, ya quealgunos anticoagulantes afectan la forma y tamaño de las células sanguíneas. En general EDTA,preferiblemente en base de sodio o potasio, es el único anti-coagulante recomendado para usar con contadoresde sangre electrónicos.

Se debe tener cuidado cuando se usan tubos hechos en el laboratorio pre-dosificados con EDTA. Si el tubo nose llena completamente con sangre, la relación de EDTA y sangre puede alcanzar un nivel, el cual resulta enuna transferencia osmótica de los RBC, reduciéndolos. La relación de EDTA y sangre no debe exceder 3mg/ml. Generalmente, sugerimos usar tubos fabricados que contengan la cantidad necesaria de EDTA.

4.1.2 Extracción de sangre

Después de llenar los tubos de sangre al nivel requerido, no olvidar invertir el tubo de muestra – nunca agitar – varias veces para activar el anti-coagulante al mezclar correctamente. Esto puede ser un problema realespecialmente cuando se toma una pequeña cantidad de sangre de bebes o animales pequeños.

Tratar de mantener los 3 mg/ml máximos de la concentración de EDTA por norma.

(Ver sección 4.7 para detalles en modo pre-dilución).

4.1.3 Almacenamiento de Muestras

El anti-coagulante requiere tiempo para tomar su efecto en la muestra. De otro lado, destruirá las células por eltiempo. Las muestras frescas requieren al menos 5-10 minutos para estabilizarse luego de la toma y debenser medidas dentro de las 6 horas a temperatura ambiente estándar (25°C).

Esta regla aplica básicamente para el diferencial de WBC de 3 partes. Los granulocitos son destruidos primero,después de 12-16 horas usted obtiene un histograma muy diferente con una MID muy alta, debido a que elenvejecimiento dará resultado a un histograma con apariencia de sobre-lisado. El tiempo correcto del colapsode células sanguíneas blancas depende de la muestra del paciente.

Si usted quiere hacer la medición más tarde, lleve las muestras al refrigerador para extender su estabilidad. Eneste caso debe tener cuidado, ya que las muestras deben llevarse a temperatura ambiente antes de lamedición. Hacer rodar los tubos de muestra entre sus palmas para agilizar el calentamiento. Esto ayudará amezclar la muestra, también. Si la muestra no está mezclada completamente, las PLT y las WBC puedenquedar pegadas formando partículas mucho más grandes, las cuales darán resultado a recuentos de célulasdistorsionados (inferiores) y la apariencia de poblaciones que no existen (ej.: en la región alta del histograma deWBC).




4.1.4 Manipulación de Controles de Sangre y Calibradores

Los controles de sangre deben ser manipulados correctamente para asegurar su fiabilidad. Durante eltransporte y manipulación deben mantenerse a temperatura de 2-8°C. Proteger del calor y congelación. Llevara temperatura ambiente haciendo rodar el vial entre las palmas de las manos hasta que el sedimento de célulasrojas este suspendido completamente (aprox. 1-2 minutos). El control debe ser rojo, no negro. Si es negro, nousarlo.

Mezclar suavemente la muestra por inversión 5-10 veces. NUNCA agitar los tubos de muestra.

Luego del muestreo, limpiar la tapa del vial con una gaza o tejido libre de pelusa. Tapar inmediatamente.Llevar nuevamente el vial al refrigerador dentro de los 30 minutos de uso. Cuando se abre un vial por primeravez anotar la fecha en la etiqueta del vial ya que la estabilidad del vial abierto es limitada.

La estabilidad de un control abierto es usualmente 14 días únicamente (verificar en el manual del fabricante).

4.2 REACTIVOS Y CONDICIONES AMBIENTALESSiempre usar los reactivos recomendados y de mejor calidad. El uso de un reactivo de baja calidad puededisminuir el funcionamiento del analizador, especialmente para PLT – aumentando el valor del blanco – y eldiferencial de WBC de 3 partes al modificar las características de la hemolisis.

Los analizadores automáticamente montarán la medición de blanco para asegurar la limpieza del instrumentoy reactivo. Si los valores de blancos son altos, la medición del blanco se repetirá para asegurar si es un análisispreliminar alto estable o si solo es alguna contaminación temporal.

Una medición preliminar alta estable puede ser causada por varias razones:

1. Reactivo contaminado – si las tapas de reactivo son abiertas en depósitos y polvo o bacterias puedenentrar al reactivo. Reemplazar el diluyente, si el blanco de PLT es alto y no cambia aun después de variosciclos de lavado. Reemplazar el lisante, si el blanco de WBC está alto, pero el blanco de PLT es correcto.

2. Periodo de ruido – puede aparecer en el canal de WBC debido al crecimiento de proteínas en el tubo dedrenaje de WBC. Preguntar al servicio para disminuir el recuento del ciclo de limpieza automática.

3. Ruido eléctrico – puede interferir con la medición causando pulsos falsos. No olvide, nuestra aperturagenera signos eléctricos muy pequeños en los varios cientos de micro-voltios (100 µV) de la región. Si hayun dispositivo generador de señales de energía alta cerca al analizador, este puede dañar el recuento algenerar un ruido eléctrico.

La protección principal contra el ruido electromagnético es un buen polo a tierra y blindaje. Es por tantomuy importante que el suministro de energía tenga una solida conexión polo a tierra. Si no es suficientepara superar el problema, puede ser necesario separar el alambre de tierra conectado a la parte trasera delpunto de polo a tierra (marcado).

Si usted enfrenta un problema de medición preliminar alto:- Reemplace los reactivos para verificar su condición.- Trate de averiguar que pudo cambiar en el ambiente del analizador causando interferencia.- Trate de operar el instrumento desde otra salida de energía, o reubíquelo completamente (en otra

locación, si es posible), luego trate nuevamente.- Busque la ayuda de personal de servicio calificado, si es necesario.

Usted debe montar una medición de blanco si reemplaza cualquier reactivo durante el trabajo diario paraverificar la limpieza. Usted tiene que conocer, que el analizador almacenará estos valores y ej.: el resultado dePLT será compensado por el calor del blanco: PLTresultado = PLTmedición - PLTblanco




4.3 APERTURA DE BLOQUEOS – OBSTRUCCION

Cualquier crecimiento de proteína, etc. en la apertura, que no sea retirado puede causar bloqueos. Esto reducela sección de paso de la apertura.

Las obstrucciones pueden ser detectadas por el aumento del tiempo de medición (solo Abacu Abacu Abacu Abacus ss s ). El tiempobásico de medición esta cerca a los 5 segundos para WBC y 8 segundos para RBC/PLT. Si hay un aumento enel tiempo de recuento, la apertura correspondiente debe estar bloqueada, se recomienda la repetición de lamedición.

Su analizador está equipado con un sistema de limpieza para prevenir la obstrucción en tres pasos:1. Alta presión a ras (contra grandes partículas de obstrucción),2. Alto voltaje fuerte (contra el crecimiento de proteínas), y3. Limpieza química de aperturas (para mantener estabilidad).

Una obstrucción puede ser detectada electrónicamente analizando la base de la impedancia de la apertura. Encaso de cualquier taponamiento la base de impedancia de la apertura incrementa causando un valor alto. Estacaracterística es usada en los analizadores Abacus Abacus Abacus Abacus y Arcus Arcus Arcus Arcus . Usted puede monitorear el rango de voltaje de laprueba a RPrV y WPrV bajo el histograma PLT en la pantalla.

Si es detectado un taponamiento, aparecen las alarmas c o C. Usted debe repetir la medición.

Apertura Limpia Apertura parcialmente obstruida

V2 < V1 MCV2 > MCV1

Figura 9. Efecto de la Obstrucción Parcial a la MCV

Si la apertura está parcialmente obstruida, su volumen disminuye (V).

Debido a que la apertura de medición genera pulsos proporcionales a la relación del volumen de células (x) porel volumen de apertura (V), el resultado del pulso es mayor si la apertura está parcialmente obstruida. En estecaso los parámetros dependientes del tamaño (MCV, MPV) son mayores, consecuentemente el HCT estambién mayor. Tenemos que remover la obstrucción para resultados apropiados.

Para evitar taponamientos fuertes, no permitir que el analizador se seque (ej.: formación de sales y reactivosresiduales) en caso de una prolongada permanencia sin usar. Montar el procedimiento “Preparación paraembalaje” para retirar los reactivos y drenar el sistema.




4.4 CALIBRACION

La calibración es usada para ajustar la exactitud absoluta del analizador. Para esto, medimos sangre controlteniendo conocimiento de los resultados. Si hay diferencias entre los valores referencia y los valores medidos,

nosotros modificamos los factores para obtener la mayor correspondencia en los resultados.

Abacus Abacus Abacus Abacus y Arcus Arcus Arcus Arcus ofrece calibración automática en la que el usuario debe ingresar los valores de referencia (oblanco) y luego medir la sangre control. Después de aceptar los resultados, los nuevos factores seráncalculados automáticamente.

La calibración debe ser realizada:

1. Si el analizador ha sido reubicado (cambio en altitud, temperatura, etc.).2. Luego de un servicio de reparación grande (cambio de los principales componentes, ej.: dilutores, aguja,

etc.).3. Si los resultados de mediciones de Q.C. muestran desviación de algunos resultados (ser cuidadoso: la

mayoría de las veces es debido al envejecimiento del control).

Asegurarse de montar la calibración solo en condiciones perfectas, si no hay obstrucción, contaminación, etc.de los contrario usted podrá tener resultados incorrectos. Se recomienda montar una limpieza y una mediciónde blanco antes de calibrar, para asegurar condiciones óptimas.

4.5 CONTROL DE CALIDAD

El Control de Calidad (Q.C.) es una característica para monitorear el funcionamiento y estabilidad delinstrumento. Abacus Abacus Abacus Abacus y Arcus Arcus Arcus Arcus ofrece la capacidad de 6 niveles de mediciones de Q.C. separadas, ej.: usted puede usar 6controles de sangre diferentes al mismo tiempo para verificar la estabilidad.Los fabricantes de control de sangre ofrecen usualmente al menos 3 niveles diferentes: 1 bajo anormal, 1

normal (apropiado también para calibración) y 1 alto anormal.Si usted programa los niveles 1, 2 y 3, puede medirlos todos los días antes de iniciar la rutina diaria demediciones para asegurar la estabilidad del sistema. En algunos laboratorios – trabajar bajo el sistema deaseguramiento de calidad – hay regulaciones por cumplir.Usted puede usar la gráfica Levy-Jennings para tener información visual sobre los resultados todos los días.Si algunos de los resultados están fuera de los rangos permitidos, probar otro vial de sangre control paraver si los resultados están también fuera de rango. Si el segundo control confirma que los resultados seencuentran fuera del rango permitido, usted puede re calibrar el analizador. No olvide, la estabilidad de un vial de sangre control abierto depende del fabricante, pero usualmente es de14 días únicamente. Los viales cerrados pueden ser usados por más tiempo (frecuentemente por 3 meses).

4.6 MEDICION DE SANGRE DE PACIENTE

Conservar las prescripciones de manipulación del Manual del Usuario.Usted puede tener grandes errores si la muestra no es homogenizada correctamente (el recuento de todos losparámetros será alto), contiene micro-burbujas (menor valor de efectividad de la muestra, recuento inferior deparámetros), o fría (recuento de PLT será incorrecto). Al menos se requieren 30 minutos para que un tubo demuestra alcance temperatura ambiente si ha sido refrigerado.Se recomienda usar un mezclador por rotación para conservar las muestras homogenizadas durante la sesiónde medición. Si usted no tiene un mezclador, invierta los tubos de arriba abajo varias veces antes delmuestreo. Nunca agite para evitar la formación de micro-burbujas en el interior, ya que las burbujaspequeñas evitan un muestreo correcto (se toma aire a cambio de sangre).Luego de la medición, verificar los resultados e histogramas para identificar cualquier clasificación dedesorden. Repetir la medición en caso de cualquier duda, ajustar la configuración del lisante si es necesario.




Validación (aceptación de los resultados) es un proceso muy importante. Durante la validación el hematólogoo médico puede clasificar los reportes que requieran confirmación por un recuento manual en microscopio. Noolvide, usar los resultados del diferencial de 3 partes para identificar los casos anormales y realizar el recuento

diferencial manual en estos si se necesita una mejor calificación de WBC.

4.7 USO DEL MODO DE PRE-DILUCION

El modo de pre-dilución es usado en dos casos:

1. Si es usado tubo capilar (ej.: 25µl de volumen) para extracción de sangre del paciente,2. En caso de error de linealidad debida a una alta concentración celular.

En ambos casos la muestra debe estar preparada antes de la medición. Crear la dilución necesaria de lamuestra de sangre total (o sangre capilar) de acuerdo al modo de pre-dilución configurada (usted puedeverificarla seleccionando el modo de pre-dilución en el menú Medición, la relación aparece en la pantalla 1:3 o1:10).

Preparar al menos 100µl de muestra pre-diluida, ya que en modo de pre-dilución el analizador toma doblevolumen (aprox. 60µ).

4.7.1 Preparación de la Muestra para Modo de Pre-dilución 1:10

1. Tomar 250µl* de diluyente limpio o solución isotónica en una copilla limpia o tubo de ensayo.2. Agregar 25µl* de sangre total o capilar y homogenizar por rotación.

La muestra anterior es apropiada para medición en modo de pre-dilución 1:10.

4.7.2 Preparación de la Muestra para Modo de Pre-dilución 1:3

1. Tomar 150µl* de diluyente limpio o solución isotónica en una copilla limpia o tubo de ensayo.2. Agregar 50µl* de sangre total o capilar y homogenizar por rotación.

La muestra anterior es apropiada para medición en modo de pre-dilución 1:3.

4.7.3 Calibración del Modo Pre-dilución

1. Calibrar el analizador en modo normal usando sangre control.2. Crear la pre-dilución deseada de sangre control (1:10 o 1:3) con el método que usted desee usar para

muestras de pacientes.3. Activar el modo pre-dilución en el Menú Calibración.4. Realizar la calibración con la muestra preparada.5. Luego de aceptar los factores de pre-dilución desactivar el modo pre-dilución en el menú Calibración

para evitar mezclar los factores de calibración.6. Asegurarse de usar el mismo método y procedimiento (herramientas, ajustes de pipetas, dispensadores

de volumen, etc.) para originar muestras para medición. Lo que hace que sea capaz de compensarinexactitudes del procedimiento de dilución.

*Los volúmenes exactos pueden variar. Mantener la relación: ej.: 1 unidad de muestra + 3 unidades de diluyente (para modo 1:3)




5 RESULTADOS DE MEDICIONES, HISTOGRAMAS

5.1 HISTOGRAMA TIPICO

Evaluación:WBC RBC PLT

Todas las células grandes en eldiscriminador RBC/WBC (cerca a30 fl) son contadas como WBC.El histograma de WBC tiene trespoblaciones:1. Linfocitos

2. Población MID (monocitos yalgunos eosinófilos) y3. Granulocitos

Los linfocitos se puedenencontrar aprox. Entre 30-90 fl.Los otros dos discriminadoresmuestran el lugar de poblaciónMID (90-140 fl).La población de granulocitos estasobre el discriminador 3 (140 fl).

Todas las células sobre eldiscriminador RBC/PLT (cerca a30 fl) son contadas como RBC.El histograma de RBC sigue unadistribución normal.El valor de RDW está dentro del

rango normal, así el ancho delhistograma de RBC es normal.El histograma total esnormalizado (100% ajustado) alpico de RBC.

El histograma de PLT es unaporción aumentada del inicio delhistograma de RBC.El valor de PLT es cercano a250.La población celular de PLT está

aproximadamente entre 2-30 fl.El histograma de PLT sigue unadistribución log normal, con unaclara separación de RBC.




5.2 ALARMAS DE ADVERTENCIA

En esta sección resumimos las alarmas de error y damos una explicación de su posible causa y unas pocassugerencias para sobrellevar el problema.

Las letras mayúsculas se refieren a problemas con WBC O HGB:Alarma Significado Acción recomendada para el usuario

W

Alerta de las tres partes deWBC o diferencial de tres

partes de WBCinsatisfactorio

Ver Caso 5, 14 y casos deperros

Posible problema de lisis. Tratar de reducir la cantidad de lisante yrepetir la medición. En casos de linfocitosis extrema usted puedetener esta alarma.Verificar los discriminadores en el histograma de WBC. Si losdiscriminadores están en la ubicación adecuada (las poblacionespueden estar separadas aun al ojo) los resultados son correctos yaceptables.

E Sin WBC de tres partesPosible problema de lisis, pero en algunas muestras patológicas(también con linfocitos altos), puede ocurrir.

H El blanco de HGB es alto ono hay blanco de HGB

Repetir la medición de blanco. Si el blanco de HGB no es estable,probablemente hay burbujas en la cámara de WBC. Montar unalimpieza y tratar de nuevo el blanco. Cerrar la puerta lateral si estáabierta durante la medición.

B El blanco de WBC es alto ono hay blanco de WBC

Repetir la medición de blanco o montar una purga de lisante ytratar de nuevo el blanco.Posible contaminación del lisante o problema de ruido.

L Advertencia de limite deWBC/RBC

Verificar el discriminador 1. RBC-LYM. Si está en el punto mínimo(o cercano a este), aceptar los resultados. De lo contrario repetirla medición.Si la repetición de la medición arroja resultados similares y eldiscriminador 1. Está en el lugar incorrecto entonces los resultadosde MID y GRA están OK, pero los resultados de WBC y LYMpueden estar altos debido a los RBC.

R

Demasiados RBC en el cortede WBC

Ver Caso 13 y casos deGatos

Repetir la medición con incremento en la cantidad de lisante.Si el tiempo de medición de WBC es demasiado alto (mayor a 8seg. en Abacus) esto puede ser obstrucción en la apertura. Eneste caso realizar limpieza y repetir la medición.

M

La coincidencia de WBC esdemasiado alta. Error de

linealidad.Ver Caso 5, 13 y casos de

Gatos

Los resultados están fuera del rango de linealidad. Hacer unadilución con un dilutor externo con la configuración de la relaciónde dilución (1:10 o 1:3).No olvidar calibrar el modo de pre-dilución antes de realizar lamedición de muestras.

D Errores en el paquete dedatos de WBC

Realizar la limpieza y repetir la medición (obstrucción de laapertura).Si es un problema general, favor llamar al Personal de Servicio.

S Error de tiempo WBC Acción igual al caso de alarma D.

C Obstrucción WBCVer Caso 3

Obstrucción de la Apertura. Acción igual al caso de alarma D.Reactivos con baja temperatura pueden causarlo también(principalmente diluyente), en este caso usted tendrá que esperarhasta que alcancen temperatura ambiente.

P Blanco de PLT alto o sinblanco de PLT

Realizar la limpieza y repetir la medición de blanco.Problema del diluyente o sistema de limpieza. Si permanece alto,reemplazar el diluyente abriendo un tanque nuevo.

B Blanco de RBC alto o sinblanco de RBC

Acción igual al caso de alarma P.

Tabla 4. Resumen de alarmas de advertencia relacionadas con WBC/HGB




Las alarmas de advertencia en minúscula se refieren a problemas de RBC o PLT:

Alarma Significado Acción recomendada para el usuario

l Alarma de limite RBC/PLTVer Caso 9

El valle RBC/PLT es demasiado alto o el pico PLT no es losuficientemente alto.Si el discriminador está en el lugar incorrecto (en el histogramaPLT o RBC) repetir la medición para un resultado correcto de PLT.

k Advertencia de pico de RBCRealizar limpieza y repetir la medición (probable obstrucción).Si se convierte a un problema general, cambiar la apertura deRBC.

mCoincidencia RBC/PLT es

demasiado alta.Error de linealidad.

Acción igual al caso de alarma M.

d Errores en el paquete dedatos de RBC/PLT

Acción igual al caso de alarma D.

s Error de tiempo RBC/PLT Acción igual al caso de alarma D.

c Obstrucción RBC/PLT Acción igual al caso de alarma C.

Tabla 5. Resumen de alarmas de advertencia relacionadas con RBC/PLT

Las alarmas de advertencia pueden ser agrupadas de acuerdo a las condiciones de medición y de acuerdo alos problemas relacionados a la muestra de sangre.

Condiciones de Medición: cuando las alertas están relacionadas a obstrucción (c, C, d, D, k), posiblesproblemas de hemolisis (E, b, B, p), fuera de tiempo (s, S) y problemas de presión (error de presión). En estecaso sugerimos repetir la medición.

Problemas relacionados con la muestra de sangre: pocos trombocitos ( l), posible presencia de RBC nucleados

(L), problemas en diferencial WBC de 3 partes (W). En este caso sugerimos cambiar la configuración dellisante y repetir la medición (usted puede usar las teclas de flechas antes de la medición para ajustar la falla en0.1 ml). Si tiene el mismo resultado, usted puede aceptar los resultados, teniendo en cuenta que losparámetros marcados con asterisco (*) no son 100% confiable.

Para PLT (l), la configuración de lisante no es aplicable, de manera que si el discriminador de PLT/RBC está enla posición correcta, acepte el resultado de PLT.

El tercer caso es cuando se requiere la repetición en modo pre-dilución. Hay un error de linealidad – laconcentración celular es demasiado alta causando coincidencia (m, M, R) (ver sección 3.1).

La alarma de asterisco (*) cerca al parámetro muestra algunas sospechas sobre la evaluación del parámetro.Las razones pueden ser: un blanco alto PLT (el valor PLT será marcado), un caso de configuración dediscriminador indefinida (la ubicación por defecto es usada para algunas razones, los parámetros relacionadosserán marcados), etc.

Otro método de marcación es la evaluación frente a rangos normales. Si algunos de los parámetros están porfuera de rango tendrá una alarma (-) si el rango está por debajo, o tendrá (+) si está sobre el rango. Ustedpuede personalizar los rangos para todas las clases de pacientes configurando los rangos inferior y superiorcorrespondientes. Si usted configura 0 para un límite de un rango, este no será verificado (ver Manual delUsuario: Limites).




6 CASOS HUMANOS

En la siguiente sección usted verá varios resultados impresos con histogramas y una pequeña explicación.

Trate de identificar las diferentes poblaciones, su posición y relación para mejor entendimiento del significadode los diferentes histogramas.

No olvide, el primer discriminador WBC separa PLT y RBC hemolisados (en la izquierda) de los WBC. Si ustedve aquí picos altos estos muestran partículas:

- RBC nucleados,- o muestra poco lisada, (grandes piezas de RBC hemolisados en solución de WBC),- o alguna tipo de reactivo contaminante, ruido, etc.

El segundo y tercer discriminador WBC muestra el lugar de población MID.

El discriminador RBC/PLT muestra la separación de las dos poblaciones. Usted puede decidir fácilmente si esuna buena posición o no. Normalmente este aparece en el valle entre las poblaciones de PLT y RBC.

6.1 NEONATOS

Esta muestra es de un bebe recién nacido enfermo.

Aceptar los resultados (no hay alarmas y todos los discriminadores están en posición correcta).

Evaluación:

WBC RBC PLTLYM altos, pero es normal en

sangre de bebesRBC bajos, anemia normal




6.2 NIÑO DE TRES AÑOS DE EDAD

Como un niño en crecimiento, la cantidad de LYM es baja (en un caso normal).Aceptar los resultados.

Evaluación:

WBC RBC PLT- LYM altos- GRA bajos- WBC ligeramente altos

HGB y MCH bajas PLT alta




6.3 OBSTRUCCION DE WBC

En casos de obstrucción de la apertura nosotros podemos ver un histograma agrandado hacia la derecha (laapertura más pequeña tiene una sensibilidad superior, de esta manera vemos las partículas como másgrandes). En caso de obstrucción de RBC, MCV – y por consiguiente – HCT estarán aumentadas.

Repetir la medición.

Evaluación:

WBC RBC PLT- La alarma C muestra obstrucción en la

apertura, la sensibilidad de la apertura seincrementa, la velocidad del flujo disminuye

- Podemos ver que el tiempo de medición deWBC (WBCt) es alto, el instrumento no daningún valor de WBC y el histograma esagrandado a la derecha (todos losdiscriminadores están altos)

(Para imprimir los tiempos de medición de RBCt yWBCt en el reporte, habilitar su impresión en lasconfiguraciones de impresión)

RBC bajo Normal




6.4 HISTOGRAMA DE WBC CON RBC NUCLEADOS

Usted puede tener alguna información mayor sobre la composición de la muestra aunque el analizador nopueda dar el resultado de N-RBC.

Este caso muestra un posible resultado con RBC nucleados. Esto es solo una sospecha, desde reactivoscontaminados, ruido, etc. y muestra poco lisada que pueden generar histogramas similares.

Aceptar los resultados correctos (ver la evaluación inferior).

Evaluación:

WBC RBC PLTHay probabilidad de N-RBC en la región

LYM, así WBC, LYM y LYM% es alto.Ya que este número adicional esproporcional al área del histogramamostrada con la flecha, podemos asegurar,que esta extra cantidad es aprox. 0.5, deesta manera podemos restar esto de WBC yLYM.Los parámetros estimados:WBC = 6.5, LYM = 2.7.Esta es la manera en la que puede corregirlos resultados.

normal Trombocitopenia: PLT bajo




6.5 LINFOCITOSIS: WBC FUERA DE LINEALIDAD

Debido a la coincidencia (ver sección 3.1) la linealidad de WBC es limitada. Esta muestra es una linfocitosistípica y muestra también error de linealidad.

Para obtener mejores valores de WBC analizar la muestra de sangre en modo pre-diluido 1:10 o 1:3dependiendo de la configuración de su sistema.(Ver también el siguiente caso).

Evaluación:

WBC RBC PLT- WBC muy altos: leucocitosis- Alarma M significa que la coincidencia WBC

es demasiado alta, los resultados están fueradel rango de linealidad. La alta cantidad depulsos de coincidencia causa superposiciónde poblaciones, por tanto no es posibleidentificarlas claramente (alarma W). Losvalores de porcentaje y absoluto estánmarcados con asterisco (*), ya que el softwareno está seguro que los discriminadores esténen los lugares correctos.

normal normal




6.6 LINFOCITOSIS: MEDICION EN MODO PRE-DILUCION 1:10

Para incrementar la linealidad del instrumento, usted debe pre-diluir la muestra en un tubo limpio para repetir lamedición. (Remitirse a la sección 4.7 y al Manual del Usuario para más detalles, ya que la operación puede serun poco diferente dependiendo de la versión del software).

La concepción principal de la pre-dilución: al reducir la concentración de las células podemos llevar la mediciónal rango de linealidad.

Sugerimos usar el modo de pre-dilución 1:3 ya que la concentración celular es mejor en esta que en el modo1:10. El modo 1:10 puede ser mejor para usar con sangre capilar.

El resultado de una medición de muestra de sangre previa al modo de pre-dilución 1:10.

Usted puede ver el resultado elevado de WBC. Todos los asteriscos desaparecen de los parámetros deldiferencial.

Otro efecto viene de la exactitud de la pre-dilución.

Puesto que no calibramos el modo-predilución antes de la medición de la muestra pre-diluida, hay diferenciassignificativas en los resultados de RBC y PLT. Esto es debido al modo de pre-dilución no calibrado. Usteddebe calibrar el modo pre-dilución después de la calibración del modo normal para compensar lasdiferencias entre la dilución ideal (calculado) y la real (creada). (ver sección 4.7.3)

En situaciones como esta, usted puede aceptar los valores de WBC de esta medición, mientras los valores deRBC y PLT de las mediciones anteriores (caso 5).




6.7 MID Y MID% ALTOSEn caso de Monocitosis o Eosinofilia la población MID tendrá un pico significativo en el histograma de WBCentre 100 y 180 fl.

Aceptar los resultados.

Evaluación:

WBC RBC PLT- MID y MID% altos- Poblaciones de MID y GRA están

sobrepuestasRBC, HGB, HCT bajos normal




6.8 GRANULOCITOSIS

Este caso muestra Granulocitosis. El pico de la población de Granulocitos es tan alto que el software estánormalizando el histograma de WBC a este, de este modo la población de LYM se ve mucho más pequeña.


Evaluación:

WBC RBC PLT- Leucocitosis: WBC altos- GRA altos, LYM bajos

Anemia: RBC y HGB bajos normal




6.9 TROMBOCITOPENIA

En caso de Trombocitopenia el valor de PLT es muy bajo.


Evaluación:

WBC RBC PLT

- WBC normales- MID alto: sospecha de

monocitosisRBC microciticos

- Trombocitopenia: PLT bajo- Alarma de advertencia l: debido al pico

relativamente bajo de PLT, el analizadorno está seguro sobre la correcta ubicacióndel discriminador PLT/RBC, comoconsecuencia habrán asteriscos cerca alos resultados relacionados a las PLT

- si usted puede ver que el discriminadorPLT/RBC está en el lugar correcto (comoahora) podemos aceptar los resultadosmarcados.




6.10 TROMBOCITOSIS, ANISOCITOSIS

Este caso muestra Trombocitosis y Anisocitosis. El histograma de RBC tiene un pico alto de PLT, por lo tanto elsoftware normaliza el histograma de RBC para el pico de PLT.


Evaluación:

WBC RBC PLT

WBC altosAnisocitosis: la curva RBC es

ancha, RDWc es alta Trombocitosis: PLT muy altas




6.11 MICROCITOSIS (MCV BAJO)

Esta muestra exhibe parámetros bajos de MCV y GRA.


Evaluación:

WBC RBC PLTLinfocitosis: valor alto de LYM y

LYM%

Valor MCV bajo: RBC

microciticos Normal




6.12 MACROCITOSIS (MCV ALTO)

Si el MCV está más alto que en el caso normal, el histograma RBC mostrará un desplazamiento hacia laderecha (el analizador detecta las células altas).


Evaluación:El MCV alto usualmente se relaciona con RBC bajo. Esta es una situación típica donde el paciente estásangrando. La médula ósea trata de compensar la HGB baja (HCT) con la liberación de RBC muy grandes.

WBC RBC PLT

MID% alto

- RBC macrociticos: valor MCV es muy alto- Histograma de RBC ancho con

desplazamiento a la derecha- Anemia: RBC muy bajo, HGB baja

Normal




6.13 MUESTRA POCO LISADA

Si una muestra no esta hemolisada correctamente (poco lisada) los RBC residuales no desaparecerán de laregión LYM. Si su número es más alto que el número total de WBC el resultado se verá como el histogramainferior.

Verifique la lisis, purgue si es necesario y repita la medición con una cantidad de lisante mayor(presione la flecha hacia arriba una o dos veces antes de tomar la muestra).

Si el resultado de la medición con mayor cantidad de lisante es similar, usted puede sospechar de la presenciade N-RBC, contaminación de reactivos o ruido (ver Sección 4.2).

Evaluación:

WBC RBC PLT- Sangre poco-lisada- Tenemos alarmas M, R y W, el instrumento

suministra todos los resultados relacionados conWBC con asteriscos

- Alarma M: error de linealidad, demasiadaspartículas detectadas

- Alarma R: demasiados RBC han sidoencontrados en WBC

- Alarma W: diferencial de 3 partes no es exitoso

Normal Un poco bajo




6.14 MUESTRA SOBRE-LISADA

Si hay demasiado lisante en la muestra, el resultado del histograma WBC será muy estrecho.El problema es que los Granulocitos quedarán sobrepuestos con la población de MID haciendo imposible lacorrecta estimación de la región MID.

Repetir la medición con disminución en la cantidad de lisante (presionar la flecha hacia abajo una o dosveces antes de tomar nuevamente la muestra).

Evaluación:

WBC RBC PLT- Sangre sobre-lisada: todos los discriminadores

están debajo de 100 fl

- Aunque no tenemos alarmas, MID y GRA estánsobrepuestos, por consiguiente MID% está alto(valor correcto es 6%)

MCV alto normal




7 CASOS VETERINARIOS

En las siguientes secciones vamos a presentarle algunos histogramas típicos de diferentes animales.

Los analizadores Abacus Abacus Abacus Abacus y Arcus Arcus Arcus Arcus proporcionan mediciones de sangre animal en el modo veterinaria: perro,gato y caballo, y ellos tienen cinco modos veterinarios adicionales para otras especies que usted deseerealizar. Usted puede personalizar estos modos adicionales para su necesidad ajustando los rangos normalesy la cantidad de lisante a usar (ver en menú Límites).

Ajustar la cantidad de lisante (predeterminada es 0.5 ml) requiere unas pocas mediciones y entendimiento delos histogramas. A través de las siguientes paginas y después de tener algo de experiencia, usted será capazde juzgar si necesita más lisante (ej.: usted tendrá que repetir la medición de la misma muestra con unincremento en la cantidad de lisante), o menos.

No olvide que la misma muestra de sangre animal medida en diferentes modos tendrá valores diferentes, yaque estos modos predefinidos (ej.: modo perro) están optimizados para medir la muestra correspondiente de lamejor manera posible. Por tanto, analice sangre de gato en el modo gato para mejores resultados. En algunoscasos extremos usted puede incluso intentar analizar ej.: muestras de perro en otro modo #1.

El software ajustará automáticamente los discriminadores en los otros cinco modos, usted únicamente tendráque controlar el volumen de lisante y verificar los resultados. Puede ser necesario repetir algunas medicionesluego del análisis con la cantidad de lisante predeterminada. Esto es obvio, desde que el problema básicovenga de las características de la sangre animal (y el lisante usado).

Usted tiene que conocer que la medición de otras especies (ej.: pájaros) puede ser limitada, tal vez solo sonaplicables unos pocos parámetros (para pájaros la medición de WBC es imposible, debido a que ellos tienenRBC nucleados, de manera que la lisis de estos no es posible, nosotros solo medimos RBC/PLT).

Normalmente, los histogramas de sangre animal muestran curvas de RBC y WBC estrechas (comparadas a lashumanas). Esto es por las características de su sangre comparada a los casos humanos, comoquiera que

generalmente tienen células más pequeñas.

Una buena práctica cuando se extrae muestra de sangre de animales es rechazar las primeras gotas desangre. Esto previene piezas de pelo y piel en la muestra que pueden causar obstrucciones.

7.1 RANGOS HEMATOLOGICOS NORMALES DE ANIMALES

Tabla 6. Resumen de Rangos Veterinarios Normales (Fuente: 1)




7.2 EFECTO DE LA CONFIGURACION DE LISANTE EN EL DIFERENCIALDE WBC DE 3 PARTES

En los siguientes histogramas tratamos de demostrar la importancia de la configuración correcta del lisante, yaque el resultado del diferencial de WBC de 3 partes depende principalmente de la cantidad correcta de lisante.

Nosotros analizamos la misma sangre de perro tres veces con diferentes configuraciones de lisante. Elproceso total depende del tipo de lisante aplicado. Esto es solo una demostración del efecto de la configuracióndel lisante

Histograma de WBC de perro con 0.4 ml de lisante (un poco menos lisados)

Histograma de WBC de perro con 0.6 ml de lisante (un poco sobre-lisados)

Histograma de WBC de perro con 0.8 ml de lisante (sobre-lisados)

Si usted compara los histogramas de arriba, puede llegar a la conclusión que la cantidad de lisante determinaen gran medida los parámetros del diferencial de 3 partes.

WBC total disminuye al irse aumentando el lisante, debido a que la lisis de RBC es mejor con más lisante. Deotro lado, la población de GRA queda sobrepuesta con los LYM haciendo imposible su superación correcta pordiscriminadores.Como resumen, podemos decir que la mejor cantidad de lisante aquí es aprox. 0.4 ml (probablemente 0.45mL) para el diferencial de 3 partes, mientras que WBC es aceptable en todos los casos. Esta es la razón porla que usted debe repetir el análisis en algunos casos con volúmenes de lisante diferentes.




7.3 PERRO

Las muestras de perro exhiben picos de RBC alrededor de 60 fl seguidas de una buena separación de las PLT

de los RBC.

En el diferencial de 3 partes algunas veces hay dificultades debido a los Granulocitos pequeños y Linfocitosgigantes (esto hace sobreposición de estas poblaciones en algunos casos). Un pequeña baja de lisante de lasmuestras ofrece mejores resultados en el diferencial.

7.3.1 Perro: Muestra Normal

Esta muestra exhibe un histograma de perro normal.

Evaluación:

WBC RBC PLT- Todas las células superiores a

35-40 fl son contadas comoWBC.

- El histograma de WBC tienevisualmente dos de las trespoblaciones, de este modoestos son diferentes de lasmuestras humanas.

- Todas las células superiores a 27fl son contadas como RBC

- El histograma de RBC sigue unadistribución normal

- MCV esperado está cercano a 60fl

- RBC esperado está cercano a7.0 x 1012 cel/l

- La población celular de PLT estáentre 2 fl y 30 fl

- El histograma de PLT sigue unadistribución log normal como en lasangre humana

- En muchos casos hay un valleclaro de PLT/RBC, así eldiscriminador puede poner eldiscriminador fácilmente en sulugar




7.3.2 Perro: Alto LYM%, bajo GRA%

Esta muestra tiene un LYM% alto. Usualmente LYM% es cercano a 25-30% para perros.

Aceptar estos resultados.

Evaluación:

WBC RBC PLT- LYM% alto- GRA% bajo- Población MID se estima a la

derecha del valle de LYM/GRA, porlo general hace esto en el modoPERRO

normal PLT ligeramente bajo




7.3.3 Perro: Alarma “D”, PLT altoEsta muestra tiene una alarma de advertencia D. Este caso es similar a algunas clases de obstrucciones,porque en estas no se calculan los parámetros de WBC.

Repetir la medición con el mismo volumen de lisante.

Evaluación:

WBC RBC PLT

- Los parámetros de WBC no estándisponibles aunque hay un buenhistograma

- La alarma D significa un error dedatos de WBC

- La razón del error de datos essimilar a obstrucción

normal

PLT altas(ver histograma RBC: el pico

de la curva es más alto que enun caso normal)




7.3.4 Perro: Alarma “W”

La alarma de advertencia W puede aparecer si no hay trazas de poblaciones de WBC diferentes (Granulocitosen este caso), de esta manera los resultados del diferencial de 3 partes son sospechosos de estar incorrectos.En este caso el software puede configurar los discriminadores a las posiciones incorrectas.

Pre-diluir la muestra y luego repetir la medición en modo pre-dilución.

Evaluación:

WBC RBC PLT- WBC están demasiado altos, otros

valores relacionados estánmarcados con asteriscos

- La alarma W significa advertenciade WBC en tres partes: ningunatraza del diferencial de 3 partespudo encontrarse

- Esta muestra tiene linfocitosprincipalmente

- Discriminador 2 y 3 están en lasposiciones incorrectas

normal PLT bajas




7.4 GATO

La característica importante de la sangre de gato es que el tamaño de los RBC es mucho más pequeña (entre20 y 50 fl, MCV = 35-40 fl) mientras sus PLT son normales en tamaño (2-30 fl). El resultado es que loshistogramas de RBC y PLT están sobrepuestos. Esta superposición hace algunas veces muy difícil laseparación de PLT de RBC, de esta manera el resultado de PLT puede tener mayor variación (o valor aúnmenor).

Es normal para los gatos, que durante la extracción de sangre, sufran un tipo de shock, que desencadena unmecanismo protector, el cual influye negativamente en la muestra.Una buena práctica durante la extracción de sangre de gatos es descartar las primeras gotas de muestra. Estopuede prevenir piezas de pelo y piel en la muestra haciendo que se eviten obstrucciones.

Es común para las muestras de gatos que algunos RBC resistentes puedan permanecer en su sangre, por loque normalmente la hemolisis total de sus RBC raramente ocurre dando como resultado un pico pequeño en elinicio del histograma de WBC.

7.4.1 Gato: Muestra Normal

Esta muestra no es normal, es un caso ideal de muestras de gatos.

Evaluación:

WBC RBC PLT- WBC ligeramente bajos- Buen diferencial de 3 partes de

WBCNormal

Caso ideal: PLT están bienseparadas de los RBC




7.4.2 Gato: LYM% Alto, GRA% bajo, RBC y HGB altos

Esta muestra demuestra algunas características de la sangre de gato. Aceptar estos resultados.

Evaluación:

WBC RBC PLT

- WBC bajos- LYM% alto- GRA% bajo

- RBC y HGB altos- Los gatos t ienen RBC muypequeños, de manera que elvalor de MCV es normal

- PLT bajas

- Caso normal de gato: el histogramade PLT está en parte sobrepuestocon el histograma de RBC enmuchos casos




7.4.3 Gato: Alarma “M”, RBC bajo, HGB y PLT muy bajas

La siguiente muestra es la sangre de un gato muy enfermo.

Pre-diluir la muestra y analizar de nuevo en modo pre-dilución.

Evaluación:

WBC RBC PLT

La alarma M muestra que lacoincidencia de WBC es

demasiado alta, el resultadoesta fuera del rango de

linealidad

- RBC y HGB bajos- MCV alto, presencia de RBC

macrocitos, la curva está másancha que en un caso normal(RDWc es alta)

Valor de PLT demasiado bajo




7.4.4 Gato: Alarma “R”

Un problema típico de las muestras de gatos es la presencia de algunos residuos de RBC (algunas veces RBCnucleados) en el inicio del histograma de WBC. En casos extremos la cantidad de estos residuos influye en lacorrecta medición de WBC interfiriendo e incrementando los WBC en la sección LYM.

Repetir la medición con un volumen mayor de lisante.

Evaluación:

WBC RBC PLTLa alarma R: demasiadosRBC encontrados en WBC

Normal

- PLT un poco bajas- PLT/RBC sobrepuestas, pero el

discriminador está ajustadocorrectamente




7.5 CABALLO

Las muestras de sangre de caballo son relativamente fáciles de analizar. El único problema puede ser causadopor las PLT muy pequeñas. La buena separación de PLT/RBC y un histograma de WBC correcto son lascaracterísticas típicas de las muestras de caballo.

El MCV es relativamente bajo, mientras RBC alto da resultado a un correcto HCT cercano al 40%.

Para las muestras de caballo el MID% es bajo es muchos casos, debido a que hay pocos monocitos en susangre.

7.5.1 Caballo: Muestra Normal

Evaluación:

WBC RBC PLT

- El valor de WBC es normal- Parámetros de 3 partes son

correctosNormal

PLT están correctas, debido a quehay una buena separación en eldiscriminador PLT/RBC




7.5.2 Caballo: LYM% bajo, GRA y GRA% altos

Esta es una muestra normal de caballo con un MCV bajo.


Evaluación:

WBC RBC PLT

- LYM% ligeramente bajo yGRA% alto

- Buen diferencial de 3 partesen el histograma

MCV bajo: RBC microciticos Normal (MPV bajo)




7.5.3 Caballo: PLT bajo

En muchos casos las PLT están bajas. Usted puede comparar la elevación del pico de PLT con el de RBC (enel histograma de RBC)


Evaluación:

WBC RBC PLT

- Separación perfecta deWBC de RBC/PLT

- Buenos resultados en eldiferencial de 3 partes

Normal

- Valor bajo de PLT, como semuestra en el histograma de RBC

- El valle entre PLT y RBC está biendefinido, de modo que el valor dePLT es correcto




7.5.4 Caballo: RBC y HGB bajos

Este caso exhibe una muestra normal


Evaluación:

WBC RBC PLT

Normal RBC (HCT) y HGB bajos evidencia anemia normal




7.6 CONEJO

Como lo demuestran los histogramas de la parte inferior, la sangre de conejo es similar a la sangre humana,pero generalmente con MCV más bajo y RBC mayor.

La separación entre las poblaciones en todos los histogramas es correcta debido a la estupenda segregaciónpor tamaño.

La medición de la sangre de conejo debería realizarse en cualquiera de los modos adicionales (otros). Noolvide configurar este modo para conejos: nombre, lisante y rangos normales.

Evaluación:

WBC RBC PLTWBC y parámetros de 3

partes correctosComo el perro: MCV está cercana a

60 flSeparación perfecta de

PLT/RBC




7.7 RATA

La sangre de rata es similar a la sangre humana en las características de medición. Sus rangos normales sondiferentes (normalmente LYM son mayores que GRA).

Es mejor analizar la sangre de rata en uno de los otros modos luego de configurarlo (nombre, cantidad delisante, límites, etc.).

Evaluación:

WBC RBC PLT

Separación perfectaHistograma RBC normal

MCV de las ratas generalmente es inferior

que el de los perros

alto

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Documents

Guía de Aplicación Abacus- Arcus