Graciela Cristina dos Santos Graciela Cristina dos Santos

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Text of Graciela Cristina dos Santos Graciela Cristina dos Santos

  • Araraquara

    2008

  • UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA JLIO DE MESQUITA FILHO

    FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS UNESP

    Tese apresentada ao Programa de Ps-

    Graduao em Alimentos e Nutrio como

    requisito obteno do ttulo de Doutor em

    Alimentos e Nutrio - rea de Cincias

    Nutricionais.

    Araraquara - SP

    2008

  • FOLHA DE APROVAO

    Graciela Cristina dos Santos Avaliao do efeito protetor do urucum e da bixina sobre a genotoxicidade induzida

    pelo antitumoral cisplatina em clulas da linhagem PC12.

    Tese apresentada ao Programa de Ps-

    Graduao em Alimentos e Nutrio para a

    obteno do ttulo de Doutor em Alimentos e

    Nutrio, rea de Cincias Nutricionais.

    Banca Examinadora

    Profa. Dra. Maria de Lourdes Pires Bianchi (orientadora)

    Assinatura___________________________________________________________

    Profa. Dra. Daisy Maria Fvero Salvadori

    Assinatura___________________________________________________________

    Prof. Dr. Alessandro de Oliveira Rios

    Assinatura___________________________________________________________

    Profa. Dra. Ceclia Rodrigues Silva

    Assinatura___________________________________________________________

    Prof. Dr. Joo Bosco Faria

    Assinatura___________________________________________________________

    Defendida e aprovada pela comisso julgadora em: ________________

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    SUMRIO

    Lista de Abreviaturas........................................................................................... i

    Lista de Figuras...................................................................................................ii

    Lista de Tabelas .................................................................................................iv

    Resumo..............................................................................................................vi

    Abstract ..............................................................................................................ix

    1 INTRODUO

    1.1 Cisplatina.................................................................................................... 02

    1.1.1 Histria............................................................................................... 03

    1.1.2 Mecanismos de ao da cisplatina .................................................... 04

    1.1.2.1 Etapas do mecanismo de ao da cisplatina............................. 07

    1.1.2.1.1 Acmulo celular de cisplatina ............................................ 07

    1.1.2.1.2 Hidrlise da cisplatina ....................................................... 08

    1.1.2.1.3 Ligao ao DNA e outros alvos celulares.......................... 09

    1.1.3 Limitaes no uso e danos neurotxicos induzidos pela cisplatina ... 09

    1.2 Antioxidantes.............................................................................................. 13

    1.3 Urucum e Bixina ......................................................................................... 16

    1.4 Avaliao de danos ao DNA....................................................................... 18

    2 OBJETIVOS

    2.1 Objetivo Geral ............................................................................................ 26

    2.2 Objetivos especficos ................................................................................. 26

    3 MATERIAL E MTODOS

    3.1 Material....................................................................................................... 28

    3.1.1 Obteno e cristalizao da bixina.................................................... 28

    3.1.2 Linhagem celular e condies de cultura. ......................................... 29

    3.2 Mtodos...................................................................................................... 30

    3.2.1 Protocolo experimental...................................................................... 30

    3.2.2 Avaliao da viabilidade celular ........................................................ 31

    3.2.3 Teste do microncleo ........................................................................ 32

    3.2.4 Anlise de eletroforese em gel de clula nica (Ensaio Cometa) ..... 35

  • 0

    3.3. Grupos Experimentais ............................................................................... 37

    3.4 Anlise Estatstica ...................................................................................... 39

    4 RESULTADOS

    4.1 Cisplatina.................................................................................................... 41

    4.1.1 Viabilidade celular .............................................................................. 41

    4.1.2 Microncleo........................................................................................ 42

    4.2 Urucum....................................................................................................... 46

    4.2.1 Avaliao citotxica e genotxica ...................................................... 46

    4.2.2 Avaliao antigenotxica ................................................................... 50

    4.3 Bixina ......................................................................................................... 54

    4.3.1 Avaliao citotxica e genotxica ...................................................... 54

    4.3.2 Avaliao antigenotxica .................................................................. 59

    4.4 Anlise comparativa entre o urucum e a bixina.......................................... 63

    4.4.1 Genotoxicidade do urucum e da bixina .............................................. 63

    4.4.2 Antigenotoxicidade do urucum e da bixina......................................... 65

    5. DISCUSSO ................................................................................................ 67

    6. CONCLUSES ............................................................................................ 87

    7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ............................................................. 89

    ANEXOS ........................................................................................................ 106

  • *"

    i

    LISTA DE ABREVIATURAS

    %DNA Porcentagem de DNA na cauda dos nucleides

    %BN Porcentagem de clulas binucleadas

    ATCC American Type Culture Collection

    BN Clulas binucleadas

    CAS Chemical Abstract Service

    cDDP Cisplatina

    Cit-B Citocalasina-B

    DMSO dimetilsulfxido

    DNA cido desoxirribonuclico

    EDTA cido etilenodiaminotetractico

    IPBC ndice de proliferao de clulas com bloqueio da citocinese

    MN Microncleo

    MTT 3-(4,5-dimetiltiazol-2il)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo

    NaCl Cloreto de sdio

    NaOH Hidrxido de sdio

    OTM Olive tail moment

    PC12 Linhagem celular de feocromocitoma de rato

    RNA cido ribonuclico

    TM Tail moment

  • ii

    LISTA DE FIGURAS

    Figura 1. Estrutura qumica da cisplatina. ........................................................ 03

    Figura 2. Representao esquemtica do mecanismo de ao da cisplatina. . 05

    Figura 3. Formao e efeito dos adutos da cDDP............................................ 06

    Figura 4. A via de ao da cisplatina na clula. ............................................... 08

    Figura 5. Toxicidades associadas ao tratamento com cisplatina...................... 10

    Figura 6. Fotos de urucum ............................................................................... 16

    Figura 7. Estrutura da bixina ............................................................................ 17

    Figura 8. Esquema simplificado da extrao e cristalizao da bixina............. 29

    Figura 9. Microfotografia de clulas PC12 obtidas na anlise de MN .............. 34

    Figura 10. Microfotografia de um nucleide ntegro (A) e em forma de cometa

    com diferentes intensidades de danos (B) obtido pe