Flav Ono Ides

FLAVONOIDES

Alejandro Martínez M., Químico M. Sc., Doctor en Ciencias, Facultad de Química Farmacéutica,

Universidad de Antioquia

Medellín, Septiembre 2005

Alejandro Martínez M.

2

Presentación

En la larga historia de la ciencia muchas personas, ideas y sueños han ido aportando su

grano de arena en la búsqueda de la comprensión de la naturaleza y el mismo misterio

enigmático de la vida. Muchos de ellos han pasado de ser despreciados y después alabados y

ensalzados. Esto también ha ocurrido con el caso de las sustancias naturales. En la

actualidad es bastante publicado en los medios de comunicación, en particular por la prensa

y la televisión, el hallazgo de nuevas sustancias naturales, que resaltan como panaceas para

la cura de enfermedades como el cáncer, o para el adelgazamiento, etc. Muchas son buenas

pero muchas también entran ó ya hacen parte de la lista negra de las indeseables como los

alcaloides tóxicos y que generan dependencia (cocaína, heroína, etc.). Casi podría hacerse

un escalafón de las sustancias buenas (la clorofila, fundamental para la vida de las plantas e

indirectamente para todos los demás seres vivos del planeta; la hemoglobina, una molécula

con una bella estructura arquitectónica y que participa en un proceso simple pero

fundamental para los mamíferos: la respiración; las penicilinas y su importante acción contra

los microenemigos; la artemisinina de los chinos y su utilidad para el tratamiento de la

malaria severa; los ácidos nucleicos y su importante aporte para el desarrollo evolutivo de la

vida, etc.). En el caso de las sustancias malas1, que son muy pocas, están entre otras: los

alcaloides que generan dependencia (cocaína, heroína, etc.), las sustancias que generan

cianuro (como son los glicósidos cianogénicos presentes en diferentes plantas). Sin

embargo, esta discriminación entre sustancias malas y sustancias buenas, se acaba cuando se

considera es su utilidad. De acuerdo con esto, hyy tres clases de sustancias naturales: Unas

con una utilidad reconocida y demostrada, otras con una utilidad potencial y otras poco

útiles ó inclusive peligrosas. Dentro de estas tres categorías se podrían hacer diferentes

listados, dependiendo de la persona que las haga. Por ejemplo, para un botánico resultan

más útiles aquellas sustancias que le permiten desarrollar su trabajo de clasificación, mientras

para un químico farmacéutico resultan más útiles otras sustancias (poco o nada interesantes

1 Es de anotar que no necesariamente son sustancias malas en el sentido estricto de la palabra, sino que el

calificativo de malas se refiere al uso que se les ha dado.


3

para el botánico) que le sirven para producir medicamentos, y para un agrónomo pueden ser

más interesantes las sustancias que tienen mayor valor nutritivo y agrícola. Con el propósito

de convencer a estos y otros profesionales, y a usted amigo lector, a continuación trataré de

presentar un grupo de sustancias que a medida que vaya avanzando en la lectura, notará que

no son tan desconocidas, sino que tal vez anteriormente no se las habían presentado, y al

final espero convencerlo de que resultan no solo unas sustancias buenas, sino útiles, muy

bellas y bastante románticas, sino también que resulta saludable en nuestra alimentación

consumir más repollo morado que blanco, menos remolacha, más vino rojo, más alimentos

derivados de soya, etc.

En buena parte de esta obra se utiliza un lenguaje especializado, esto con el fin de que

además de divulgar al público en general algunos aspectos de estas sustancias, esta pueda

servir de apoyo a profesionales y estudiantes relacionados con el conocimiento y

aprovechamiento de los productos naturales, en especial a profesionales químicos, químicos

farmacéuticos, biólogos y médicos.

Expreso mis agradecimientos a La Universidad de Antioquia donde he aprendido y se me ha

apoyado para elaborar este tipo de documentos, a los estudiantes de la asignatura de

Farmacognosia y Fitoquímica, que con sus opiniones y valiosos aportes han contribuido para

la elaboración de este y otros documentos,

Alejandro Martínez M., Medellín, Septiembre de 2005


4

1. Introducción

Las plantas mediante el proceso de la fotosíntesis producen las sustancias necesarias para

todos los ciclos vitales de la naturaleza. Mediante intrincados y cada vez más conocidos

mecanismos bioquímicos se constituyen en verdaderas factorías químicas de carbohidratos,

proteínas, grasas, vitaminas y oligoelementos como el hierro y el magnesio; y adicionalmente

mantienen la atmósfera rica en oxígeno y deficiente en dióxido de carbono, permitiéndonos

respirar. Son la base de la cadena alimenticia que soporta todas las demás formas de vida en

nuestro planeta. En la actualidad, gracias a la visión ecologista que se ha dado a las nuevas

generaciones de personas, existe una tendencia a mantener y conservar las especies de

plantas mediante la conservación de los bosques, las selvas, los parques naturales, los

estuarios marinos, los humedales, etc. Para toda persona indistintamente de su profesión u

oficio, no hay duda de que las plantas son importantes para la vida. Pero además de producir

sustancias como los carbohidratos, las proteínas y las grasas, que los investigadores han

denominado METABOLITOS PRIMARIOS, dado que se encuentran en prácticamente

todas las formas de vida y cumplen funciones básicas para la misma, existen otras que no se

encuentran tan distribuidas y que se hallan restringidas solo a ciertas especies, géneros o

familias como son los alcaloides, las saponinas esteroides, los aceites esenciales, los

terpenoides, etc., a los cuales se les denomina METABOLITOS SECUNDARIOS. Dentro

de este último grupo están los FLAVONOIDES, unas sustancias bautizadas así porque las

primeras que se lograron aislar eran de color amarillo, pero que como más adelante veremos

las hay incoloras ó con otros colores diferentes del amarillo como son el rojo, el violeta y el

azul.

A continuación se presentará una breve reseña histórica y una definición química de los

flavonoides, luego se hablará de su origen biológico, algunos aspectos sobre su aislamiento y

caracterización, y finalmente se destacará su utilidad real y potencial para ayudar a preservar

nuestra salud.


5

2. A manera de historia

Los flavonoides son un gran grupo de sustancias vegetales que fueron descubiertas por el

premio Nobel en Bioquímica Dr. Albert Szent-Gyorgi, quien les denominó como "vitamina

P". El Dr. Szent-Gyorgi descubrió que los flavonoides favorecen la función de la vitamina C,

mejorando su absorción y protegiéndola de la oxidación. Los flavonoides comprenden varias

clases de sustancias naturales, entre las cuales están muchas de las que les confieren colores

amarillo, naranja, rojo, violeta y azul, a muchas flores, hojas y frutos, especialmente. Cuando

usted amigo lector está observando una rosa roja, además de disfrutar la gracia artística de

su diseño, está disfrutando de su color, ese color es debido a los flavonoides; cuando

observe una fresa jugosa, una uva roja ó morada, una flor amarilla, usted está observando ni

más ni menos a sustancias flavonoides. Esos colores que disfruta nuestro cerebro al

percibirlos son en su gran mayoría debidos a los flavonoides. Entonces, usted ahora puede

comprender que esas aparentemente desconocidas sustancias han estado presentes en buena

parte de su vida, y también en buena parte de la historia de la humanidad.

Desde el comienzo de la humanidad, en el mismo paraíso terrenal de Adán y Eva, allí ya

estaban los flavonoides engalanando con sus colores ese idílico jardín celestial, y hasta en la

jugosa manzana de color rojo con la que nuestra madre Eva sedujo a nuestro abuelo Adán,

los flavonoides estaban participando de nuestro pecado original.

En todas partes de la historia de la humanidad los flavonoides han sido testigos y actores de

muchas desgracias, momentos heroicos, alegrías, etc. Al leer a los antiguos filósofos, poetas

y escritores, se pone de manifiesto que en el enamoramiento de la mujer siempre han

participado las flores de agradable aroma y de hermosos colores, esto quiere decir sin más

preámbulos que no ha existido mujer alguna sobre la tierra que no haya sucumbido ante la

presencia de los flavonoides de unas bonitas rosas rojas, un ramo de violetas o un

pensamiento. No hay nada que más agrade a una mujer que las flores, parece ser que ellas

tienen una percepción cerebral más desarrollada que nosotros hacia este tipo de sustancias.


6

Las casas y palacios más bellos han sido no los que ostentan grandes desarrollos

arquitectónicos, sino los que poseen los más variados, coloridos y exóticos jardines. En este

sentido, los flavonoides han sido privilegiados al ocupar los sitios más importantes para un

rey, un noble ó un plebeyo. Si se mira bien una flor es tan bella en un palacio como en un

comedor humilde.

Los flavonoides han sido testigos indirectos de momentos como el 20 de Julio de 1810,

cuando en la entonces ciudad de Santafé de Bogotá (Colombia), una riña entre un español y

un criollo por un florero, sirvió de punto de partida para que se diese el grito de

independencia. Aunque los flavonoides de las flores que iban a adornar este florero nunca lo

llegaron a tocar, allí estaban listos para cambiar la historia de un país.

Los flavonoides siempre han estado de alguna manera en sitios privilegiados, y bien podrían

ufanarse de ello. Para las plantas además del encantador adorno que dan a su ropaje, les

sirven de cosmético. Las plantas como todo lo bello son vanidosas. Estas sustancias además

de cambiar de colores y adornar las plantas durante toda su vida, son un maquillaje sutil para

protegerse de los rayos solares dañinos. Sí, las plantas usan flavonoides para eliminar ciertas

radiaciones indeseables y filtrar otras que junto con las clorofilas trabajan en llave en el

proceso de la fotosíntesis.

Los flavonoides han estado en todas las mesas y comedores desde los primeros hombres y

animales en el planeta. En mesas de reyes y plebeyos. Quién no se ha quedado mirando

algún momento una mesa revestida y adornada con uvas rojas y verdes, con fresas, con

moras, con manzanas, con bananos, con jugosas sandías. Pero ellos no solo están en

hermosas flores y agradables frutas, están en alimentos de pobres y ricos como las verduras.

Aunque no los vemos con sus festivos colores porque sus parientes más famosas como son

las clorofilas con su manto verde las opacan, pero si nuestra visión lograse filtrar y eliminar

el color verde que apreciamos cuando miramos una planta verde, sin duda podríamos

reconocerlos. Sí amigo lector, esta es otra buena razón para preferir las comidas a base de

vegetales, las espinacas además de hierro contienen vitaminas y flavonoides. Los jugos de


7

frutas como moras, fresas, uvas negras o rojas, cerezas, etc., todos contienen flavonoides, y

los hemos consumido casi a diario, y más adelante trataré de mostrar lo bueno que es

consumir flavonoides para mantener nuestra salud, y hasta donde he leído, para prevenir y

tratar varias enfermedades, y espero convencerlo de que esas bebidas con colorantes y

saborizantes artificiales no son tan saludables como las bebidas naturales con flavonoides.

A continuación se presentan algunos aspectos químicos y biológicos de los flavonoides, los

cuales le sugiero al lector que si tiene inconvenientes en la comprensión del lenguaje

científico pase al numeral 4, donde se hace énfasis en la utilidad potencial de los flavonoides

para el mantenimiento de la salud y para la prevención de algunas enfermedades (página 37,

numeral 10).

3. Aspectos químicos

Para los químicos los flavonoides tienen una estructura química muy definida como se

muestra en la figura 1. Puede observarse que de manera general son moléculas que tienen

dos anillos bencénicos (ó aromáticos, para los químicos orgánicos) unidos a través de una

cadena de tres átomos de carbono, puesto que cada anillo bencénico tiene 6 átomos de

carbono, los autores los denominan simplemente como compuestos C6C3C6. La Figura 2

muestra la estructura química de uno de los flavonoides más comunes: La quercetina.

Figura 1. Estructura básica de los flavonoides


8

Figura 2. Estructura química de uno de los flavonoides más comúnmente hallados en la naturaleza, la

quercetina. Nótese en color rojo la estructura básica de los flavonoides.

La Figura 2 muestra una de las maneras más utilizadas por los químicos para representar las

moléculas de los flavonoides en dos dimensiones, sin embargo existen otras maneras de

representarlas de manera más real, esto es en tres dimensiones como se ilustra por ejemplo

en la Figura 3.

Figura 3. Estructura química en tres dimensiones del flavonoide quercetina. Representación en esferas:

átomos de carbono de color gris, átomos de oxígeno en color rojo y átomos de hidrógeno en color blanco

Para su estudio sistemático los más de 4000 flavonoides naturales se han clasificado en

varias clases de acuerdo con las variantes estructurales que presenta la cadena central C3

(Figura 4). De acuerdo con esto los flavonoides se clasifican en varios grupos: Chalconas,

O

OH

OH

OH

O

HO

OH


9

flavonas, flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas, catequinas, epicatequinas,

auronas, isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, etc.

O

O

H

O

OOHH

FLAVANONAS

FLAVANONOLES


10

O

OH

O

OH

(+)-CATEQUINAS (-)-EPICATEQUINAS

O

O

ISOFLAVONAS

O

O1

2

3

45

6

6a 7

8

9

1011

11a

PTEROCARPANOS

O

O

O

1

2

3

4

56

6a

78

9

10

11

12 12a

ROTENOIDES Figura 4. Estructuras básicas de varias clases de flavonoides

La mayoría de flavonoides poseen nombres triviales con la terminación INA u OL. Estos

nombres les han sido asignados por los investigadores que los han ido descubriendo uno a

uno en la naturaleza. Por ejemplo la acacetina (Figura 5) se identificó por primera vez en una

planta del género Acacia y se clasifica como una flavona. La quercetina es un flavonol

identificado inicialmente en una planta del género Quercus. La naringenina es una flavanona

aislada inicialmente en la naranja. El eriodictiol es una flavanona y se aisló inicialmente en

una planta del género Eriodictyon. Sin embargo, esta clase de nombres no es muy útil

cuando se requiere información sistemática de estas sustancias, por lo cual los químicos han

convenido llamarlos con nombres que representen su estructura química. Así por ejemplo la


11

acacetina corresponde a la 5,7-dihidroxi-4'-metoxiflavona; la quercetina al 5,7,3',4'-

tetrahidroxiflavonol; la naringenina a la 5,7,4'-trihidroxiflavanona, etc.

Hasta ahora hemos visto aspectos relacionados con la estructura simple de los flavonoides,

sin embargo dentro de las plantas los estudios han mostrado que estas sustancias se

encuentran la mayoría de las veces, ligados a moléculas de carbohidratos. A este tipo de

combinación núcleo flavonoide básico + una o varias unidades de carbohidratos, se les

denomina GLICOSIDOS, y cuando no tienen ligadas moléculas de carbohidratos se las

denomina AGLICONAS FLAVONOIDES. Por ejemplo los que mencionamos

anteriormente (acacetina, eriodictiol, quercetina, naringenina, etc.) son agliconas

flavonoides. Un ejemplo de glicósido es la vitexina que corresponde al 8-C-β-D-

glucopiranósido de apigenina. Como puede intuirse, la nomenclatura de los glicósidos es

más compleja que la de las agliconas.

En las figuras y tablas siguientes se presentan varios ejemplos de diferentes clases de

flavonoides naturales y algunas de las fuentes vegetales más conocidas.

a. Ejemplos de flavonas

O

O

R1

R2

R3

R4

R5


12

NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 Fuente

Crisina - - OH - OH Populus

Baicaleína - - OH OH OH Scutellaria

Apigenina - OH OH - OH Petroselinum

Acacetina - OMe OH - OH Robinia

Escutelareína - OH OH OH OH Scutellaria

Hispidulina - OMe OH OH OH Ambrosia

Luteolina OH OH OH - OH Reseda

Crisoeriol OMe OH OH - OH Eriodictyon

Diosmetina OH OMe OH - OH Diosma

b. Ejemplos de flavonoles:

O

O

R1

R2

R3

R4

R5

OH

R6


13

NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 R6 Fuente

Galangina - - OH - OH - Alpinia

Fisetina OH OH - - OH - Rhus

Kaemferol - OH OH - OH - Delphinium

Herbacetina - OH OH - OH OH Gossypium

Quercetina OH OH OH - OH - Quercus

Ramnetina OH OH OH - OMe - Rhamnus

Quercetagetina OH OH OH OH OH - Tagetes

Gossipetina OMe OH OH - OH OH Gossypium

Isorramnetina OH OMe OH - OH - Cheiranthus

c. Ejemplos de antocianidinas:

O

R1

R2

R3

R5

R4

R6

X-


14

NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 R6 Fuente

Apigenidina - OH OH - OH - Rechsteineria

Luteolinidina OH OH OH - OH - Rechsteineria

Pelargonidina - OH OH OH OH - Pelargonium

Cianidina OH OH OH OH OH - Centaurea

Peonidina OMe OH OH OH OH - Paeonia

Delfinidina OH OH OH OH OH OH Delphinium

Petunidina OMe OH OH OH OH OH Petunia

Malvidina OMe OH OMe OH OH OHe Malva

d. Ejemplos de flavanonas:

O

O

R1

R2

R3

R4

R5


15

NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 Fuente

Pinocembrina - - OH - OH Pinus

Liquiritigenina - OH - - OH Glycyrrhiza

Naringenina - OH OH - OH Prunus

Sakuranetina - OH OH - OMe Prunus

Eriodictiol OH OH OH - OH Eriodictyon

Hesperetina OH OMe OH - OH Prunus

4. Distribución y estado natural

Los flavonoides se encuentran ampliamente distribuidos en las plantas verdes (especialmente

las angiospermas), y sólo algunos pocos se han detectado en hongos y algas. Se han

encontrado en las diferentes partes de las plantas, especialmente en las partes aéreas; y se les

encuentra en forma libre (también llamados agliconas flavonoides), como glicósidos (la

mayoría de las veces), como sulfatos y algunas veces como dímeros1 y polímeros2. Los

glicósidos pueden ser de dos clases: con los carbohidratos ligados a través de átomos de

oxígeno (enlace hemiacetal) es decir como O-glicósidos; o con los carbohidratos ligados a

través de enlaces C-C, es decir como C-glicósidos. De todas estas formas naturales, los O-

glicósidos son los más comunes de hallar. Las antocianinas por su parte se encuentran como

sales principalmente en flores, frutos y tejidos con coloraciones que van del rojo hasta el

violeta y el azul3. Muy pocas veces se encuentran varias clases de flavonoides en un mismo

tejido vegetal, sin embargo de las raíces de Lonchocarpus subglauscescens (leguminosas) se

aislaron varias flavonas, flavonoles, isoflavonas, rotenoides, chalconas y flavanoles4.

5. Propiedades físicas

Las propiedades físicas dependen de la clase de flavonoide considerado y su forma (libre,

glicósido ó sulfato). Por ejemplo las flavonas, flavonoles y auronas, debido al sistema

conjugado son compuestos sólidos con colores que comprenden desde el amarillo muy tenue

hasta el rojo. Las antocianidinas son de colores rojo intenso, morado, violeta y azul. Las


16

flavanonas y flavanonoles debido al carbono quiral C-2 presentan el fenómeno de la rotación

óptica. Los glicósidos son en general sólidos amorfos, mientras que las agliconas y los

altamente metoxilados son cristalinos.

La solubilidad depende de la forma en que se encuentren y el número y clase de

sustituyentes presentes. Los glicósidos, las antocianidinas y los sulfatos son solubles en agua

y alcohol. Las agliconas flavonoides altamente hidroxiladas son solubles en alcohol (etanol,

metanol y n-butanol), mientras que las poco hidroxiladas lo son en solventes como éter

etílico, acetato de etilo y acetona. Las agliconas flavonoides altamente metoxiladas son

solubles en solventes menos polares como el éter de petróleo y el cloroformo.

Los flavonoides con hidroxilos fenólicos son solubles en soluciones alcalinas, pero algunos

altamente hidroxilados se descomponen por acción de las bases fuertes, un hecho que

permite reconocerlos y diferenciarlos de otros, y que hace años se utilizó para su elucidación

estructural.

Los glicósidos flavonoides son sólidos amorfos que se funden con descomposición, mientras

que las correspondientes agliconas son sólidos cristalinos.

6. Biogénesis

Como se mencionó anteriormente los flavonoides son metabolitos secundarios vegetales de

origen biosintético mixto: el anillo A proviene de la ruta de la malonilcoenzima A y el anillo

B y la cadena C3 provienen de la ruta del ácido shikímico. Un tricétido se cicliza y se

condensa con una molécula de ácido p-cumárico. La enolización del ciclo proveniente de la

ruta de la malonilCoA da origen al anillo aromático A en las chalconas y flavanonas. Estas a

su vez son los precursores de las demás clases de flavonoides. Es importante recalcar que

este proceso de biosíntesis sustenta el hecho de que en la mayoría de flavonoides el anillo A

sea meta-oxigenado, es decir como es característico de los anillos aromáticos originados por

la vía de la malonilCoA; y por otro lado, el anillo B proveniente de la ruta del ácido

shikímico, generalmente es orto-oxigenado.

Para el caso de la biogénesis de los isoflavonoides tales como las isoflavonas, pterocarpanos

y rotenoides, los experimentos realizados por diversos investigadores sugieren que hay un

proceso de migración 2,3. Por ejemplo se ha demostrado que la (2S)-naringenina (una


17

flavanona) es convertida por una isoflavonasintasa de la soya (Glycine max) en genisteína

(una isoflavona):

OHO

OH

OH

O

OHO

OH OOH

Isoflavonasintasa

2

3

(2S)-Naringenina Genisteína


18

OH

O

HOCH3

OOHO

O

AcetilCoA Acido shikimico

OHO

O

H

OH

O

HO

OH

O

O

O

OH

OH

O

OHHO

OH

CHALCONA

O

OHO

OH

OH

(-)-FLAVANONA

7. Métodos experimentales de análisis

a. Extracción y aislamiento

Los flavonoides en general se extraen de muestras secas y molidas. La muestra se

desengrasa inicialmente con éter de petróleo ó n-hexano, y el marco se extrae con etanol

puro o del 70%. Este último es recomendado para garantizar la extracción de los más

polares. El extracto obtenido se evapora con calentamiento no superior a los 50°C y se le

hacen particiones sucesivas con éter etílico, acetato de etilo y n-butanol. Los flavonoides

apolares quedan en la fase etérea, los medianamente polares en la fase acetato de etilo y los

más polares en el n-butanol. Cada una de estas tres fracciones se puede analizar por


19

cromatografía en capa fina (CCF) y HPLC en fase reversa. Para el análisis por CCF de las

agliconas se pueden utilizar mezclas n-hexano/acetato de etilo y cloroformo/acetato de etilo

en diferentes proporciones, por ejemplo la mezcla cloroformo/acetato de etilo 60:40

utilizada por Wagner y col. para el análisis de drogas vegetales5. Para el análisis de

glicósidos flavonoides Wagner y col. utilizan una mezcla acetato de etilo/ácido

fórmico/ácido acético/agua 100:11:11:27.

Para el análisis por HPLC de los glicósidos pueden utilizarse columnas RP-18, detectando a

254 nm y eluyendo con mezclas ácido acético al 2% acuoso/acetonitrilo en diferentes

proporciones. El ácido acético previene la formación de picos asimétricos en el

cromatograma. Para el análisis cuantitativo HPLC de las agliconas también se usan columnas

RP-18, detección a 254 nm y elución con mezclas de acetonitrilo/agua con ácido acético al

1%6,7. Para el caso de flavonas metoxiladas y glicósidos de flavanonas en plantas del

género Citrus se puede consultar el trabajo de Mouly y col.8

Las antocianinas se pueden extraer de tejidos frescos (p. ej. pétalos) por maceración con un

solvente ácido como por ejemplo la mezcla metanol-ácido acético-agua (MAW) (11:1:5) ó

la mezcla MFW, es decir metanol/ácido fórmico/agua por ejemplo 10:1:9. El extracto

obtenido se concentra y se somete a cromatografía en papel unidimensional eluyendo con la

mezcla t-BuOH:AcOH:H2O (3:1:1). En estas condiciones las antocianinas presentan Rf bajo

y se pueden separar de otros tipos de flavonoides como los glicósidos de flavonoles los

cuales presentan un Rf alto. Una vez eluído del papel el extracto con las antocianinas se

puede purificar a través de un cartucho RP-8 eluyendo con AcOH al 7% acuoso y con

AcOH al 7% metanólico. También se pueden analizar por cromatografía en capa fina con

placas de celulosa y eluyendo con la mezcla HCl conc./ácido fórmico/agua 19.0/39.6/41.49.

Las antocianinas se pueden separar a escala analítica por HPLC [(columna RP-18, 25 cm de

long., 5 µm); eluente: una mezcla 1:1 de A (H3PO4 al 1.5% acuoso) y B

(H2O:MeCN:AcOH:H3PO4 107:50:40:3) a un flujo de 0.8 ml/min; detectando a 352 y 530

nm]. A nivel preparativo puede usarse una columna RP-18 de 25 cm de long., los mismos

solventes citados arriba pero en una proporción 43:57 respectivamente, a un flujo de 2


20

ml/min y detectando a 440 nm. A las fracciones obtenidas luego de concentrarlas al vacío,

se les puede eliminar el ácido fosfórico pasándolas a través de un cartucho RP-8 lavando con

AcOH al 8% acuoso. Luego, las antocianinas se eluyen con AcOH al 8% metanólico, se

concentran a sequedad y se liofilizan para obtener los compuestos puros para su

caracterización química10. Existen métodos para estabilizar las antocianinas en micelias11.

Para la extracción y aislamiento de flavonoides sulfatados puede consultarse el artículo de

Chulia et al.12

Para la resolución de mezclas enantioméricas de flavanonas se utiliza actualmente la HPLC

con fases estacionarias quirales13.

8. Métodos de identificación

a. Ensayos de coloración

Los flavonoides se pueden reconocer experimentalmente mediante diferentes ensayos de

coloración. A continuación se describen un ensayo general de reconocimiento como es el

ensayo de Shinoda, y otros ensayos más específicos para varias clases de flavonoides.

• Ensayo de Shinoda

Los flavonoides con el núcleo benzopirona (p. ej. flavonas, flavonoles, flavanonas, etc.)

producen coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones acuosas o alcohólicas se les

adiciona magnesio seguido de HCl concentrado. Aunque no se conoce el mecanismo de esta

prueba, es muy utilizada para reconocer esta clase de compuestos.

• Ensayo con Zn/HCl

Al remplazar el Mg por el Zn en el procedimiento del ensayo de Shinoda, solamente los

dihidroflavonoles (o flavononoles) producen coloraciones rojo-violeta. Las flavanonas y

flavanoles no producen color o producen coloraciones rosadas débiles.


21

• Ensayo de Pacheco

El sólido flavonoide se calienta sobre una llama con unos pocos cristales de AcONa y 0.1 ml

de anhídrido acético. Luego con 0.1 ml de HCl conc. Los dihidroflavonoles producen un

color rojo característico. Las flavonas, chalconas, auronas, flavonoles y flavanonas dan una

respuesta negativa.

• Ensayo del estroncio-amoniaco

Este ensayo se utiliza para distinguir entre flavonas y flavonoles-3-O-sustituídos 5,6-

dihidroxilados y 5-hidroxil-6-metoxilados14.

• Reconocimiento de antocianinas

Las antocianinas se comportan como indicadores ácido-base debido al proceso:

O+

OGli

OH

OH

HO

OGli

OH-

H+

catión de cianina(pH =3, rojo)

OH

OGli

OGli

HO O

O

Base de la cianina(pH=8.5, violeta)

H+

OH-

O-

OGli

OGli

HO O

O

Anión de la cianina(pH=11, azul)

A pH ácido presentan coloraciones rojas, violetas y moradas; mientras que a pH alcalino

presentan coloraciones verdes y azules15.

Con esta prueba se pueden diferenciar entre las antocianinas y las betacianinas (pigmentos

nitrogenados de colores rojos y violeta de plantas del orden Centrosperma, como p. ej. los

pigmentos de la remolacha Beta vulgaris, Fam. quenopodiáceas y también presentes en otras

plantas como la Phytolacca americana, Fam. Fitolacáceas16)

b. Espectroscopía ultravioleta-visible

Los espectros UV de los flavonoides en metanol presentan bandas características debidas a

los sistemas conjugados de los anillos aromáticos.


22

Las flavonas y flavonoles muestran dos bandas definidas: La banda I, de mayor longitud de

onda en el rango 300-390 nm asociada con la funcionalidad cinamoílo, y la banda II, entre

250-280 nm debida al anillo aromático A (funcionalidad benzoílo), aunque a veces se

observan otras bandas de absorción. La posición de la banda I depende del tipo de

flavonoide: las flavonas la muestran en 310-350 nm, los flavonoles 3-O-sustituidos en 330-

360 nm, y los flavonoles en 350-385 nm.

La presencia de hidroxilos fenólicos en diferentes posiciones de la molécula puede

establecerse estudiando el comportamiento del espectro UV metanólico al añadirle los

denominados reactivos de desplazamiento: metóxido de sodio (NaOMe), acetato de sodio

(NaOAc), cloruro de aluminio (AlCl3) con y sin HCl, y ácido bórico (H3BO3).

El NaOMe es una base fuerte que ioniza los hidroxilos fenólicos presentes en la molécula y

particularmente permite reconocer la existencia de grupos hidroxilo en 3 y 4'. Las flavonas

4'-hidroxiladas y los flavonoles 3-O-sustituidos presentan desplazamiento batocrómico de

45-65 nm para la banda I al añadir NaOMe, y la intensidad de la banda no decrece. Los

flavonoles (ó 3-hidroxiflavonas) sin hidroxilo en 4', también presentan el mismo

desplazamiento batocrómico de 45-65 nm, pero la intensidad de la banda se ve disminuida.

En los flavonoles 3,4'-dihidroxilados, orto-dihidroxilados y diorto-trihidroxilados, el

espectro se descompone en pocos minutos luego de añadir el NaOMe. La aparición de una

banda alrededor de 330 nm (banda III) es característica de flavonas 7-hidroxiladas17.

El NaOAc es una base más débil que el NaOMe, y ioniza solo los hidroxilos fenólicos más

ácidos: 3, 4' y 7. La ionización del hidroxilo en 7 afecta la banda II y por lo tanto el NaOAc

es un reactivo útil para determinar la presencia de dicho hidroxilo. Si al añadir el NaOAc se

observa un desplazamiento batocrómico de 5-20 nm en la banda II se trata de una flavona o

flavonol 7-hidroxilado. Las flavanonas 5-hidroxiladas presentan un desplazamiento

batocrómico de 35 nm. Los flavononoles (sin 5-OH) presentan un desplazamiento

batocrómico de 60 nm. Sin embargo, Heinz y col. han reportado que se debe tener

precaución en la obtención del espectro con NaOAc18.


23

El H3BO3 en medio alcalino forma quelatos con hidroxilos fenólicos en posición relativa

orto:

O

R

O

HO

HO

OH

H3BO3 (exc.)

OH-

-OB

-O

O

R

O

O

O

OH

La formación del quelato produce desplazamiento batocrómico en la banda I. Si el

desplazamiento es de 12-36 nm se trata de un flavonoide (flavona, flavonol, aurona o

chalcona) orto-dihidroxilado en el anillo B, pero si el desplazamiento batocrómico es menor

es un flavonoide orto-dihidroxilado en el anillo A. Las isoflavonas, flavanonas y

flavononoles orto-dihidroxiladas en el anillo A muestran desplazamiento batocrómico de 10-

15 nm pero en la banda II.

El AlCl3 anhidro también forma quelatos con flavonoides orto-dihidroxilados, 3-

hidroxilados y 5-hidroxilados19. En el caso de los orto-dihidroxilados el quelato es inestable

a pH ácido, mientras que los quelatos formados con 3- y/o 5-hidroxilados son estables:

Por lo anterior, si al determinar el espectro con AlCl3 y HCl se mantiene un desplazamiento

batocrómico de 35-55 nm en la banda I (comparando con el espectro metanólico) se trata de

una flavona o un flavonol 5-hidroxilado. Si el desplazamiento es de 17-20 nm se puede tratar

de una flavona o un flavonol 5-hidroxilado y 6-oxigenado. Si el desplazamiento es de 50-60

nm se trata de una flavona o un flavonol 3-hidroxilado (con o sin 5-OH).

O

O

HO

OH

OH

OH

AlCl3O

O

HO

O

O

OAl

AlCl

Cl Cl

O

O

HO

OH

OH

OAl

Cl Cl

HCl


24

En el caso de flavonoides (flavonas y flavonoles) orto-dihidroxilados en el anillo B (sin 3-

OH ni 5-OH) al añadir el cloruro de aluminio se obtiene un desplazamiento batocrómico de

la banda I de 30-40 nm, el cual se pierde al añadir el HCl. Los orto-dihidroxilados en A (sin

3-OH ni 5-OH) muestran un desplazamiento de la misma banda de 20-25 nm, el cual se

pierde también al añadir el HCl.

Otros flavonoides como las flavanonas, isoflavonas y flavanonoles presentan

desplazamientos batocrómicos pero en la banda II. Las auronas, chalconas y antocianidinas

también presentan desplazamientos batocrómicos en la banda I20,21.

Los datos espectrales UV de varios flavonoides se dan en el trabajo de Jay y col.22

c. Espectrometría de Resonancia Magnetica Nuclear

El espectro de RMN-1H de los flavonoides permite reconocer características estructurales

importantes. Un resumen de los δ para los tipos de protones más comúnmente hallados se

presenta en la tabla 7.


25

Tabla 7. Desplazamientos químicos de varias clases de protones presentes en los flavonoides

δ (ppm) Tipos de protones

0.0 Tetrametilsilano

0.0-0.5 Trimetilsililo

1.0-1.2 Metilo de la ramnosa (doblete ancho)

1.7 Metilos del grupo isopentenilo

1.9-2.0 Metilos de acetatos alifáticos (de azúcares)

2.2-2.4 Metilos de acetatos aromáticos

2.7-3.1 H-3 de flavanonas (multiplete)

3.0-4.8 Protones de azúcares

3.5 Metileno del grupo isopentenilo

3.7-4.1 Metoxilos aromáticos

4.1-4.6 Protones 2 y 3 de isoflavanonas

4.2-6.0 Protón 1 de azúcares, protón 2 de flavanonoles y flavanonas (doble

doblete)

5.4 Protón 2 de flavanonoles y flavanonas (dd)

5.9-6.0 Metiléndioxi

6.0-6.8 Protones 3, 6 y 8 de flavonas

6.8-8.0 Protones aromáticos del anillo B

7.5-8.0 Protón 2 de isoflavonas

8.9 Protón 4 de antocianinas

12.0-14.0 Protón del hidroxilo 5

Las antocianinas23 se pueden reconocer en sus espectros RMN-1H por la señal en δ 8.9 (s,

H-4)24 y las señales características de otros protones aromáticos como en los glicósidos de la

delfinidina25:


26

O+

OR2

OH

OH

OHHO

OR1

H

H

H

H

H

R1, R2: Carbohidratos

7.7s

7.7s

7.0d, 2 Hz

6.9d, 2Hz8.9s

Las flavanonas se reconocen por las señales dd en δ 5.4 (H-2, J=13 y 2-3 Hz), 3.1 (H-3

trans, J=13 y 2-3 Hz) y 2.8 (H-3 cis, J=17 y 2-3 Hz)26. Las isoflavanonas se pueden

reconocer por RMN-1H por las señales: δ 4.1 (H-2a, dd, J=5 y 8 Hz), 4.5 (H-2b, dd, J=5 y

12 Hz) y 4.6 (H-3, dd, J=8 y 12 Hz)27.

Los protones de los grupos hidroxilos generalmente no se observan en los espectros cuando

estos se determinan en solventes próticos, sin embargo existen métodos para observarlos no

solo en los flavonoides sino en cualquier producto natural28.

Veáse a manera ejemplo el espectro de la flavanona:


27

En el espectro de RMN-13C se pueden reconocer varios tipos de carbonos, en la Tabla 8 se

presentan los rangos de desplazamiento químico para varios de ellos.

Tabla 8. Desplazamientos químicos de varios tipos de

carbonos de flavonoides

δ (ppm) Tipos de carbonos

18 C-6 de ramnosa

30 C-4 de flavan-3-oles29

42-46 C-3 de flavanonas30,31

56-61 Metoxilos32

60-80 C-OH de carbohidratos

70-75 C-3 de flavanonoles

80 C-2 de flavanonas33

85 C-2 de flavanonoles

100-115 C-3 de flavonas, C-1 de carbohidratos, C-10 de flavonas 5-hidroxiladas

115-128 aromáticos con H

130-140 aromáticos sulfatados

145 C-3 de flavonoles, C-5 de flavonas 5-hidroxiladas, C-3 y C-4 de

antocianinas34

150-165 C aromáticos hidroxilados y metoxilados, C-1a de flavonas, C-2 de

antocianinas, C-2 de flavonas, C-4' oxigenado, C-9 de flavonas

175-178 carbonilo C-4 sin OH en C-5 en flavonas, C-4 de flavonoles

182 carbonilo C-4 con OH en C-5 de flavonas35

190-196 carbonilo C-4 de flavanonas36

197-200 carbonilo C-4 de flavanonoles


28

Es posible también diferenciar entre un C-glicósido flavonoide y un O-glicósido flavonoide.

En los O-glicósidos, el C-1 resuena alrededor de 100 ppm para los carbohidratos más

comunes, mientras que en los C-glicósidos resuena alrededor de 75 ppm. Por otro lado, en

los C-glicósidos el carbono de la aglicona ligado al carbohidrato resuena alrededor de 10

ppm a campo más bajo de su valor normal (sin sustituyente)37. Recientemente, se ha

publicado el estudio de 70 espectros de RMN-13C de flavonas polioxigenadas, y los autores

aplican el análisis de estos espectros a la asignación de las señales de los carbonos del anillo

A38. Para otras colecciones de espectros consultar los artículos de Markham y col.39

A manera de ejemplo se presenta a continuación el espectro RMN-13C de la flavanona:

d. Espectrometría de masas

Las agliconas flavonoides presentan fragmentos característicos en su espectro de masas de

impacto electrónico IE40. Por ejemplo, las flavonas y flavonoles presentan generalmente los

fragmentos M+., [M-H]+, y [M-CO]+. uno o varios de los fragmentos A1+., [A1+H]+,

B1+. y B2+ los que se originan por rompimientos Retro-Diels-Alder:


29

O

OR5

R7

R4'

R3O

R4'

B2+

R4'

R3

O

R5

R7

O

+

A1+ B1+

Las flavonas e isoflavonas generalmente muestran los fragmentos A1+., [A1+H]+, B1+. y

B2+. Los flavonoles muestran [A1+H]+ y B2+; además el fragmento [M-CHO]+. Las 3-

metoxiflavonas muestran A1+., [A1+H]+ y B1+.. Además se observa el fragmento [M-CO-

Me]+.

Las flavanonas muestran A1+., [A1+H]+, [B1+2H]+. y los fragmentos [M-anillo B]+ y

B3+.:

O

OR5

R7

R4'

M+.

O

R5

R7

OH

[M-B]+

R4'

B3+.

Los flavanonoles muestran A1+. y los fragmentos siguientes:


30

O

OR5

R7

R4'

OH

M+.

R4'

OH

R4'

OH

+CH2

R4'

B4+. B5+. B6+

Las chalconas tienden a producir fragmentos originados por ruptura a cada lado del

carbonilo:

OR5

R7

R4'R5

R7

R4'

[M-28]+.

OR5

R7

R5

R7

A2+ [A2-28]+

O

R4'

R4'B7+.

[B7-28]+.

Las 2'-hidroxichalconas pueden isomerizarse a flavanonas y generar los fragmentos

característicos de estas.

En general las agliconas flavonoides con uno o varios grupos metoxilo presentan el

fragmento [M-Me]+ , el cual es especialmente intenso en flavonoides 6- y 8-metoxilados.

En los flavonoides 2'-hidroxilados también se aprecia a veces el fragmento [M-OH]+,

mientras que los 2'-metoxilados presentan el fragmento [M-OMe]+.


31

El fragmento [M-agua]+ es común en flavonoles, flavan-3,4-dioles y C-glicósidos.

El fragmento [M-55]+ o [M-56]+. indica la presencia de un sustituyente isopentenilo.

Son ejemplos de este tipo de fragmentaciones en el caso de tricina, jaceosidina y eupafolina,

aisladas de Artemisia vulgaris.41

Es importante anotar que algunos autores como Goudard y col. reportaron que es posible

diferenciar 5-hidroxi-, 6,7-dimetoxi-, 7,8-dimetoxi-, 5,6,7-trimetoxi- o 5,7,8-

trimetoxiflavonas con base en las intensidades relativas de los iones M y M-1542.

La tabla 9 resume los fragmentos característicos de agliconas de flavonas y flavonoles y su

interpretación respecto al número de sustituyentes hidroxilos y metoxilos en los anillos A y

B:

Tabla 9. Valores m/z de fragmentos obtenidos a partir de rupturas de las moléculas de flavonas y flavonoles

m/z Número de sustituyentes en el ANILLO A43 Número de sustituyentes en el ANILLO B44

OH H OMe OH H OMe

105 - - - 0 5 0

120 0 4 0 - - -

121 0 4 0 1 4 0

135 - - - 0 4 1

136 1 3 0 2 3 0

150 0 3 1 - - -

151 0 3 1 1 3 1

152 2 2 0 - - -

153 2 2 0 3 2 0

165 - - - 0 3 2

166 1 2 1 - - -

167 1 2 1 2 2 1

168 3 1 0 - - -

169 3 1 0 4 1 0

180 0 2 2 - - -


32

181 0 2 2 1 2 2

182 2 1 1 - - -

183 2 1 1 3 1 1

184 4 0 0 - - -

185 4 0 0 5 0 0

195 - - - 0 2 3

196 1 1 2 - - -

197 1 1 2 2 1 2

198 3 0 1 - - -

199 3 0 1 4 0 1

210 0 1 3 - - -

211 0 1 3 1 1 3

212 2 0 2 - - -

213 2 0 2 3 0 2

226 1 0 3 - - -

227 1 0 3 2 0 3

240 0 0 4 - - -

241 0 0 4 1 0 4

255 - - - 0 0 5

Para los glicósidos y flavonoides sulfatados, aunque anteriormente se obtenían los

espectros de masas a partir de sus derivados permetilados45,46,47 y trimetilsililéteres48,49,

más recientemente se utiliza la Espectrometría de masas FAB50. Por ejemplo el espectro de

masas FAB permite reconocer los flavonoides sulfatados ya que presentan además del ión

pseudomolecular (M+H en modo positivo, ó M-H en modo negativo), pérdidas sucesivas de

80, 160, 240, etc. unidades de masa debidas a la pérdida de 1, 2, 3 ó más grupos sulfato. Por

ejemplo, el espectro FAB del siguiente compuesto, muestra los fragmentos m/z 505 (M-H),

425 (M-HSO3) y 345 (M-2HSO3)51:


33

O

O

O

O H

O

O M e

M e O

O M e

S O 3 H

S O 3 H

3,3'-disulfato de gossipetina-7,8-dimetiléter

Para el caso de los glicósidos flavonoides el espectro de masas FAB permite determinar el

número de unidades y la clase de carbohidratos ligados, por ejemplo52:

O

O

OHOMeHO

O

GluGlu

Li+

m/z 675

m/z 513

m/z 345

Actualmente se utilizan técnicas como la Espectrometría de masas de Ionización

Electrospray (sigla en inglés: ESI-MS), con la cual se pueden analizar flavonoides presentes

en bajas concentraciones en diferentes muestras53.

A manera de ilustración se presentan a continuación los espectros de masas IE de la

quercetina y la flavanona:


34

e. Difractometría de Rayos-X

La asignación de la estereoquímica y la determinación de la estructura espacial de algunos

flavonoides se ha realizado mediante los estudios de los espectros de Difracción de Rayos-

X. Un ejemplo es el 12aβ-hidroxidalpanol, un rotenoide aislado de las partes aéreas de

Amorpha fruticosa (leguminosas) y que es citotóxico a seis líneas celulares de cáncer

humano54.


35

OO

O

HO

H

OHO

OMe

OMe

H

f. Espectroscopia infrarrojo

Aunque el espectro infrarrojo de los flavonoides no se usa mucho actualmente, a manera de

ilustración se presentan a continuación los espectros infrarrojo de la quercetina y la

flavanona:


36

g. Hidrólisis55

Los O-glicósidos flavonoides se pueden hidrolizar en presencia de ácidos para liberar los

carbohidratos ligados y la correspondiente aglicona flavonoide. En general se utiliza HCl

2N: metanol 1:1 reflujando durante 1 hora.

Los O-glucurónidos flavonoides requieren condiciones más fuertes para su hidrólisis y ésta

se realiza con HCl 2N reflujando a 100°C durante 2 horas.

Los C-glicósidos no se hidrolizan en estas condiciones pero pueden sufrir el reordenamiento

de Wessely-Moser, como en el caso de la vitexina:

O

OH

O

Glu

HO

OH

O

OH

O

HO

OH

Glu

Vitexina Isovitexina

H+

En condiciones alcalinas fuertes (p. ej. reflujo con NaOH 2N, 100°C, 1 hora) el núcleo

flavonoide se rompe liberando sustancias de menor peso molecular:


37

O

OH

OOH

HONaOH 2M

100°C, 60 minN2

OH

OH

HO

+

OH

R

(R=CH2OH o COOH)

El análisis cromatográfico y espectral de estos productos de degradación ha sido utilizado

para confirmar la asignación de la estructura del flavonoide.

9. Interconversión de los flavonoides

Existen varios procedimientos experimentales para interconvertir un flavonoide en otro,

generalmente con el fin de facilitar su identificación. Por ejemplo, las flavanonas pueden

convertirse en flavonas con diclorodicianobenzoquinona/dioxano o con Se2O/Ac2O. Los

dihidroflavonoles a flavonoles con AcOK/AcOH/I2. Las isoflavanonas a isoflavonas con

Se2O/Ac2O o SeO2/alcohol amílico. Las proantocianidinas (o leucoantocianidinas) a

antocianidinas por ebullición en n-butanol con 5% de HCl concentrado durante 1-2 horas.

10. Utilidad de los flavonoides

Como se mencionó anteriormente, sin saberlo le humanidad ha consumido casi a diario esta

clase de sustancias, pero como muchas otras que son conocidas para los científicos

permanecen desconocidas para el ciudadano común. Como el objetivo de este texto es llegar

no sólo al auditorio académico-científico, sino también a ese ciudadano común, a

continuación trataré de usar un lenguaje de comprensión general, y para mostrar la utilidad

de los flavonoides hablaré de sus beneficios para la salud, muy especialmente lo relacionado

en las investigaciones más recientemente publicadas.

b. Los flavonoides y el hígado

Recientemente ha crecido mucho el interés y el uso de varias drogas naturales como

hepatoprotectores, esto es como protectores del hígado. Una de las más mencionadas y

comercializadas es el gingko. La droga la constituyen las hojas de Gingko biloba


38

(Gingkoaceae) un arbusto ornamental de origen asiático. Estas contienen flavonoides,

biflavonoides, proantocianidinas y otros. El extracto de gingko actúa al nivel circulatorio.

Inhibe la agregación plaquetaria56, aunque contiene una concentración baja de 4'-O-

metilpiridoxina, una sustancia neurotóxica57.

c. Los flavonoides y la arteriosclerosis

La arteriosclerosis es el endurecimiento progresivo de las venas y arterias por acumulación

de sustancias grasas, por lo tanto afecta la presión arterial y puede llevar a la muerte. Uno de

los medios más utilizados para su tratamiento es el manejo de dietas rigurosas y deficientes

en grasas y carbohidratos. Sin embargo, existen investigaciones recientes que demuestran

que las personas que consumen habitualmente bebidas como los vinos tintos y el té verde, se

ven beneficiados por el hecho de que son menos propensos a ataques cardíacos y prevenir la

arteriosclerosis.

A continuación se resumen algunas de las acciones benéficas de los flavonoidespara nuestro

organismo y nuestra salud:

Los flavonoides son importantes para la salud de los vasos sanguíneos. Regulan la

permeabilidad del capilar, por eso detienen el flujo de proteínas y células de sangre, pero

permiten el flujo de oxígeno, dióxido del carbono y otros nutrientes. Muchos flavonoides

incrementan la fortaleza de los vasos capilares, previniéndolos de cerrarse fácilmente. Esto

es en parte debido a que ciertos flavonoides tienen una acción similar a la de la vitamina C.

Esto puede ayudar a proteger los vasos sanguíneos contra las infecciones y las

enfermedades.

Los flavonoides también puede relajar el músculo liso del sistema cardiovascular,

disminuyendo así la presión de la sangre. Esto también mejora la circulación en el propio

corazón. Los flavonoides son antioxidantes y también pueden prevenir la oxidación del

colesterol LDL, previniendo el aumento de placa arterioesclerótica. También pueden detener


39

el agrupamiento de las plateletas de sangre, reduciendo la coagulación de la sangre y el daño

de los vasos sanguíneos.

• Efectos Anti-inflamatorios

Los farmacólogos son personas profesionales en los medicamentos y quienes estudian todos

los procesos que ocurren en nuestro organismo cuando ingerimos o se nos inyecta un

medicamento, para ellos las sustancias que son fundamentales en los medicamentos las

clasifican de acuerdo a su acción, por ejemplo hay medicamentos antimicrobianos,

anticancerígenos, antinicóticos, antigripales, etc. Una de estas clases son las sustancias

antiinflamatorias, que como su nombre lo indica sirven para desinflamar. A los flavonoides

se les ha asociado con la acción antiinflamatoria, y es de las más estudiadas. Existen varios

ejemplos que demuestran con evidencia experimental entre ellos están por ejemplo: Algunos

dímeros flavonoides (biflavonoides) como el diinsininol58, isoflavanquinonas59, etc.

En Colombia varias plantas medicinales han sido aprobadas por el Ministerio de Salud como

antiinflamatorias, entre ellas están:

Flores de Arnica: Las flores de Arnica montana (Asteraceae) contienen quercetrina-3-O-

glucósido, luteolina-7-O-glucósido y kaemferol-3-O-glucósido entre otros. Esta droga es de

venta libre en Colombia y se usa como antiinflamatorio de uso externo60,61.

Flores de Caléndula: Las flores de Calendula officinalis (Asteraceae) contienen glicósidos

de iso-ramnetina y quercetina. En nuestro país es una droga de venta libre usada como

antiinflamatoria y regeneradora del epitelio62, y fue aprobada por el Minsterio de Salud para

su uso medicinal como antiinflamatorio y cicatrizante63. El extracto alcohólico mostró efecto

positivo en el tratamiento de úlceras varicosas y lesiones en la piel64.

Existen en Colombia otras plantas que aunque no están aprobadas por el Ministerio de

Salud, sí se han usado como antiinflamatorios, como el caso el caso del Chuchugüasí. Esta

corresponde a la corteza de Maytenus aelevis (Celastraceae), que contiene proantocianidinas

con actividad antiinflamatoria (artritis)65.


40

Las propiedades anti-inflamatorias de los flavonoides se deben a su acción antioxidante y a

su habilidad de actuar contra los histaminas y otros mediadores de inflamación, como las

prostaglandinas y los leucotrienos.

Otros efectos66

• Sistema cardiovascular

Los flavonoides son importantes para mantener sanos los conductos sanguíneos. Regulan la

permeabilidad capilar. Muchos de ellos incrementan la resistencia de los capilares evitando

que se plieguen o aplanen. Esto es debido en parte a que ciertos flavonoides mejoran la

acción de la vitamina-C. Estos efectos ayudan a proteger contra infecciones y enfermedades

de los vasos sanguíneos.

Los flavonoides también ejercen una acción relajante del músculo liso del sistema

cardiovascular, lo que lleva a la disminución de la presión sanguínea. Esta acción mejora

también la circulación del mismo corazón. Por su efecto autoxidante y pueden evitar la

oxidación del colesterol LDL, lo que a su vez previene la formación de la denominada placa

arterioesclerótica. También pueden evitar la acumulación excesiva de las plateletas, evitando

así el daño de los vasos sanguíneos y la coagulación de la sangre.

• Acción antiinflamatoria

Como se anotó anteriormente, a los flavonoides se les ha asociado principalmente con su

acción farmacológica. Esta es debida a sus efectos antioxidantes y a su capacidad de actuar

contra las histaminas y otros mediadores de los procesos inflamatorios como son las

prostaglandinas y los leucotrienos.

Aunque los flavonoides tienen muchas propiedades comunes a muchos de ellos, algunos de

ellos tienen propiedades específicas. Algunos tienen actividad estrogénica mientras otros

inhiben el crecimiento de tumores.

• Absorción Los flavonoides se absorben fácilmente desde el instestino, y los metabolitos y excesos se

excretan en la orina.


41

• Fuentes dietarias más comunes Los flavonoides se encuentran en la pulpa comestible de frutos como los cítricos, cerezas,

uvas, albaricoques, grosellas negras, etc. La pimienta verde, el brocoli, las cebollas y los

tomates son buenas fuentes vegetales, como también el trigo sarraceno. El té verde y el vino

tinto también contienen varios flavonoides. Muchas plantas aromáticas también contienen

flavonoides, y en ellas estos contribuyen a sus efectos terapéuticos. Entre estas se incluyen el

gingko, espino, cardo, etc.

• Deficiencia

No existen hasta ahora estudios experimentales que demuestren que en las personas puedan

existir deficiencias en cuanto a la ingestión de los flavonoides y se cree que la mayoría de la

gente consume en su dieta alimenticia la cantidad requerida. Es posible también que mucha

gente, especialmente las personas que consumen menos alimentos de origen vegetal no

consuman lo suficiente para mantener una salud óptima.

Por lo anterior, no existen recomendaciones dietarias respecto al consumo de los

flavonoides, sin embargo en el comercio se consiguen algunos suplementos de diferentes

tipos y dosis. Los extractos de corteza de pino y de semillas de uvas son fuentes de

proantocianidinas. La proporción de estos flavonoides, como otros nutrientes, varía de una

especie vegetal a otra. Ambas fuentes pueden utilizarse de manera alterna, pero el extracto

de semillas de uvas contiene un mayor porcentaje de proantocianidinas (92-95%), mientras

que los extractos de corteza de pino contienen 80 a 85% de tales compuestos. Además las

semillas de uvas contienen flavonoides que se encuentran también presentes en el té verde, el

cual como se muestra adelante también es benéfico para la salud.

• Efectos tóxicos

No se han reportado hasta ahora efectos tóxicos cuando se consumen relativamente grandes

cantidades de flavonoides.


42

• Usos terapeúticos de los suplementos

Mejoramiento de la acción de la vitamina C

Los flavonoides como los presentes en los cítricos, a menudo se administran junto con la

vitamina C, por ejemplo para el tratamiento de resfriados, hemorragias, úlceras, etc.

También tienen acción antiviral.

Desórdenes cardiovasculares

Debido a sus propiedades antioxidantes, los flavonoides protegen contra enfermedades del

corazón, lo que explica la denominada “paradoja francesa”. Esta se refiere al hecho de que

como los franceses consumen dietas más ricas en grasas saturadas, y tienen mayores niveles

de colesterol y presión arterial más alta que por ejemplo los norteamericanos, tienen 2.5

veces menos incidencias de enfermedades coronarias.

El vino tinto es una buena fuente de flavonoides y muchas personas han sugerido que el

amplio consumo de vino tinto por parte de los franceses, los protege de enfermedad

coronaria. Existen varios estudios que demuestran que el consumo diario de uno ó dos vasos

de vino tinto, protegen contra el infarto cardíaco y parece probable que precisamente el

vino tinto es más efectivo que el vino blanco, lo que de alguna manera descarta que la acción

benéfica sea debida al alcohol.

Una investigación que involucró a 805 hombres de 65 a 84 años de edad en 1985, y con un

seguimiento clínico durante 5 años, demostró que de ellos, los que más consumieron té,

cebolla y manzanas, presentaron menos incidencia de riesgo de ataques cardíacos, que los

que consumieron menores cantidades de tales vegetales.

El consumo de dietas ricas en flavonoides al parecer también protege contra el riesgo de

paro cardíaco. Algunos estudios demuestras que el consumo de dietas ricas en flavonoides,

especialmente quercetina, y más de 3 tazas de té negro al día, presentaron hasta un 75% de

menor riesgo, comparados con aquellos que ingirieron menores cantidades. El té negro

Los flavonoides son útiles el el tratamiento de la hipertensión arterial debido a su efecto

fortificante y tonificante en los vasos capilares. También en desórdenes circulatorios de la


43

retina y el ojo. Son particularmente útiles en el tratamiento de problemas de las venas y

capilares tales como las venas varicosas, insuficiencia venosa (disminución de la capacidad

de retorno de la sangres desde las piernas hasta el corazón), y problemas en los ojos tales

como la retinopatía originada por la diabetes.

• Té verde

El té verde contiene varias sustancias polifenólicas que tienen efectos benéficos, incluyendo

la protección contra enfermedades del corazón. Además se ha demostrado que disminuye los

niveles de colesterol, por ejemplo en una investigación realizada en Japón, donde se

consume habitualmente.

• Cáncer

Los flavonoides también ayudan a proteger contra el cáncer. Muchas investigaciones han

demostrado que varios flavonoides pueden inhibir la proliferación de células cancerosas. En

una investigación en el estado de Iowa, EE.UU., se encontró que de 35000 mujeres post-

menopaúsicas, aquellas que bebieron habitualmente más de dos tazas de té al día, el 32%

presentó menos probabilidad de desarrollar cáncer de boca, esófago, estómago, colon y

recto, y el 60% menor probabilidad de desarrollar cáncer del tracto urinario.

La cebolla es también rica en el contenido de flavonoides y hay estudios que demuestran que

hombres y mujeres que consumen habitualmente la cebolla presentaron menor riesgo de

cáncer estomacal.

• Té verde

Diferentes preparaciones y extractos de té verde han mostrado inhibición de la formación y

el crecimiento de tumores en animales de laboratorio. La evidencia de este efecto protector

ha sido obtenida para el caso de cánceres del tracto digestivo y de seno. Sin embargo se

encontró que cuando se consume algún tipo de bebida alcohólica se disminuye el efecto

protector.


44

• Alergias y autoinmunidad

Además de sus efectos antioxidantes, la capacidad de los flavonoides para afectar enzimas

involucradas en la producción de sustancias antiinflamatorias significa que son útiles para el

tratamiento de asma, alergias, artritis, etc.

• Quercetina

La quercetina ha mostrado efectos antiinflamatorios. La inflamación es mediada

parcialmente por la liberación de histamina. La quercetina puede estabilizar las membranas

de las células que liberan la histamina, reduciendo su liberación. También afectan la síntesis

de leucotrienos.

La quercetina también inhibe la enzima que convierte glucosa en sorbitol, un compuesto que

está relacionado con las complicaciones diabéticas, incluyendo las cataratas. Varios

compuestos químicamente relacionados con la quercetina han mostrado que inhiben la

formación de cataratas en animales diabéticos. La quercetina también mejora la secreción de

insulina y protege las células pancreáticas del daño por radicales libres. También existen

estudios que demuestran su acción benéfica en el tratamiento de tumores en próstata67

• Soya La soya contiene un tipo de flavonoides denominados como isoflavonas. Estas a su vez se

las refiere como fitoestrógenos, debido a que tienen propiedades estrogénicas y

antiestrogénicas. Cuando los niveles circulantes de estrógenos son altos, como en el caso de

las mujeres premenopaúsicas, estos compuestos pueden ligar receptores estrogénicos y

bloquear la acción de la hormona. En cambio, cuando los niveles de estrógenos son bajos,

como en el caso de las mujeres post-menopaúsicas los fitoestrógenos actúan

estrogénicamente. Los compuestos fitoestrogénicos de la soya incluyen la genisteína y la

daidzeína68. Las evidencias obtenidas a partir de experimentos de biología celular y

molecular, experimentos con animales, y ensayos clínicos con humanos, sugieren que los

fitoestrógenos pueden ayudar a prevenir enfermedades cardiovasculares, cáncer,

osteoporosis y síntomas de la menopausia. Los estudios epidemiológicos sugieren que las

tasas de estas enfermedades son más bajas entre poblaciones que consumen dietas ricas en

vegetales, particularmente en culturas como la China y la Japonesa, las cuales consumen


45

habitualmente productos a partir de soya. Además la soya contiene los fitoesteroles, los

cuales han demostrado que disminuyen el colesterol sanguíneo, posiblemente por un

mecanismo competitivo con el colesterol dietario.

Los productos de la soya también pueden reducir la oxidación del colesterol LDL e inhibir el

acumulamiento excesivo de las plateletas, dos procesos que disminuyen el proceso

arterioesclerótico. Además mejoran el funcionamiento de las arterias.

El consumo de soya también disminuye el riesgo de cáncer, particularmente los dependientes

de hormonas como el de seno y el de próstata. También se ha encontrado relación entre el

alto consumo de productos a base de soya y la menor incidencia de síntomas menopaúsicos

y osteoporosis, por ejemplo en mujeres japonesas. En el caso del cáncer de próstata, existe

controversia sobre su efecto benéfico, pues existen autores que asocian los isoflavonoides

con la promoción de tumores.

• Otros estudios

Los flavonoides se han aislado de muchas drogas vegetales debido a que son productos

naturales muy comunes. Su presencia en una droga vegetal no necesariamente explica sus

propiedades farmacológicas. Se les ha atribuido una cantidad de propiedades

farmacológicas, incluyendo actividades inhibidoras de enzimas (hidrolasas,

ciclooxigenasas69, fosfatasa alcalina, cAMP fosfodiesterasas, ATP-asas, liasas, hidroxilasas,

transferasas, oxidoreductasas y kinasas)70, antiinflamatoria71, anticancerígena, antibacterial

y antiviral. La crisina se encuentra en el álamo (Populus sp.) y en la cereza salvaje (Prunus

sp.), la apigenina en el perejil, el kaemferol en el sen, y la liquiritigenina en el regaliz. La

rutina presente en la cáscara de los cítricos fue alguna vez considerada como la vitamina P,

pero actualmente no se le reconoce como tal. El uso de la rutina para el tratamiento de la

fragilidad capilar es motivo de controversia, pero sin embargo es utilizada para el

tratamiento de la hipertensión y en geriatría. Las flores de saúco (Sambucus niger), usadas

para el tratamiento de resfriados, influenza y reumatismo, contienen varios glicósidos

flavonoides. Una cantidad de isoflavonas (derivados de la 3-fenil-γ-cromona) posee actividad

estrogénica72 y producen esterilidad en las ovejas que consumen trébol. La silibina y la

silimarina son flavolignanos constituyentes del cardosanto (Silybum marianum) el cual se


46

utiliza ampliamente en Alemania para la protección del hígado73. La quercetina y la rutina

tienen efectos anticancerígenos potenciales. También existen algunas evidencias que los

consumidores de vinos rojos y vinotinto presentan baja mortalidad por enfermedad

coronaria74, y que ello se debe a los compuestos fenólicos presentes, entre los cuales están

los flavonoides catequina, epicatequina y quercetina75. Las procianidinas presentes en las

uvas tienen uso potencial en isquemias cardíacas76. Esto a llevado a que en Francia se

elabore un producto denominado la "Paradoja francesa", al cual se le atribuyen propiedades

benéficas para el tratamiento y prevención de enfermedades cardiovasculares77. La soya

contiene isoflavonoides antiestrogénicos78 y antimutagénicos79. Artemisia vulgaris contiene

flavonoides estrogénicos80. El Maytenus aquifolium, denominada "espinheira-santa" en

Brasil, donde es utilizada para dolencias estomacales, tiene acción contra úlceras en ensayos

con ratones81.

También se han reportado flavonoides que inhiben la agregación plaquetaria, con acción

vasodilatadora (naringenina, eriodictyol y luteolina)82, con acción antiarrítmica83, chalconas

con acción antimicótica, antibacteriana, citotóxica y antimitótica84,85, la 3-

ramnosilquercetina presenta actividad antidiarréica86, y antialérgica8788, flavonoles con

actividad antiespasmolítica89, isoflavonas y flavanonas antimicóticas, isoflavanos y

flavanonas antimicrobianos90 y flavanos con actividad leishmanicida91. Varios glicósidos del

kaemferol, la quercetina y la miricetina inhiben la infección por el virus VIH-192. Flavonoides

como la quercetina, flavona, catequina y crisina parecen desempeñar un papel importante

contra la acción de la morfina93. Las antocianinas por sus características se han sugerido

como colorantes de alimentos94. Además se ha informado el uso potencial de ciertos

flavonoides en cosméticos95. Otras clases de flavonoides como los denominados rotenoides

tienen uso como insecticidas96.


47

11. Relación Estructura-Actividad Biológica (REA)

Existen diferentes reportes en los que se presentan estudios de diferentes clases de

flavonoides respecto a su estructura química y su actividad biológica. Por ejemplo en el caso

de su acción antialérgica, Matsuda y col.2, encontraron que son requisitos los siguientes:

(1) El enlace doble 2-3 de las flavonas y flavonoles es esencial para la actividad antialérgica.

(2) Los 3- y 7-O-glicósidos tienen menor actividad. (3) Entre más grupos hidroxilos existan en las posiciones 3’, 4’, 5, 6 y 7, la actividad es

más fuerte. (4) Los flavonoles tipo pirogalol (3’,4’,5’ –trihidroxilados), presentan menor actividad

que los tipo pirogalol (4’-hidroxilados) o catecol (3’,4’-dihidroxilados). (5) Las actividades de las flavonas son más fuertes que las de los flavonoles. (6) En los flavonoles 3-O-metilados se sdisminuye la actividad. (7) Varias flavonas y flavonoles con grupos metoxilos en 4’ y en 7, no siguen las reglas

3, 4 y 5.

Otro trabajo, de Zhang y col., estudió la REA entre varios flavonoides y el cáncer de seno.

Estos autores encontraron que el enlace doble entre C-2 y C-3, el anillo B ligado al C-2, el

grupo hidroxilo en C-5, la no hidroxilación en C-3 y la presencia de sustituyentes apolares

en C-6, C-7, C-8 ó C-4’, son carácterísticas estructurales importantes para la interacción

entre los flavonoides y la BCRP (breast cancer resistance protein)3.

En cuanto a la acción antioxidante de los flavonoides, se ha propuesto que el enlace doble

C-2 C-3, el carbonilo C-4, y los hidroxilos en C-3 y C-5, son esenciales para la acción

antioxidante de los flavonoides4.

Existen otros estudios sobre REA de los flavonoides, como el de Alves y col., quienes

evaluaron la REA entre varios flavonides naturales y sintéticos, con actividad contra el virus

del sida5.

2 Matsuda, H., et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 10 (2002) 3123 –3128 3 Zhang, S., et al., Biochemical Pharmacology 70 (2005) 627–639. 4 Lien, E. J., et al., Free Radic. Biol. Med. 26 (1999) 285-294. 5 Alves, C. N., et al., J. Mol. Struct. (Theochem), 541 (2001) 81-88.


48

También se ha estudiado la REA entre flavonoides tipo antocianina como inhibidores de la

xantina-oxidasa, la cual desempeña un papel importante en el metabolismo del ácido úrico, y

los problemas fisiológicos asociados a este como la gota. Estos trabajos han permitido

proponer por ejemplo que la presencia de hidroxilo en C-5 y/o en C-7, y el anillo B sin

sustituyentes son requisitos para que tengan acción inhibidora de la enzima6.

12. Función Biológica

Aunque todavía no se conoce exactamente el papel que desempeñan los flavonoides en los

vegetales, se tienen algunas evidencias experimentales que sugieren que cumplen una o

varias de las siguientes funciones:

a) Su capacidad de absorber ciertas radiaciones ultravioleta, los convierte en filtros solares

para proteger los tejidos vegetales de radiaciones dañinas, y además se ha sugerido que

participan en el proceso de la fotosíntesis.

b) Sus variados colores y su presencia en tejidos como los de las flores, sugieren que

participan en procesos como la reproducción favoreciendo la atracción de insectos

polinizadores.

c) Las diferentes actividades biológicas halladas para algunos de los flavonoides

(antimicrobiana, antimicótica, etc.) y las evidencias experimentales de que algunos aumentan

la resistencia de ciertas plantas contra diferentes infecciones y enfermedades vegetales (es

decir que actúan como fitoalexinas97), sugieren que estas sustancias también son un

mecanismo químico de defensa vegetal.

d) La capacidad inhibidora de ciertas hormonas vegetales presentada por algunos

flavonoides sugiere que actúan como reguladores del crecimiento vegetal.

6 Amic, D., et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci. 38 (1998) 815-818.


49

13. Metabolismo

La mayoría de flavonoides son degradados en condiciones alcalinas fuertes rompiéndose el

anillo C. Por esta razón resultan no tóxicos para el hombre y los mamíferos pues son

degradados en las condiciones alcalinas a nivel del intestino. Por ejemplo la quercetina es

degradada según el siguiente esquema:

O

OH

OH

OH

OOH

HO

pH alcalino

OH

OH

OHO

OH

OOH

HO

OH+

OMe

OH

OHO

OH

OHO

-CO2

OH

OH

HO

14. Algunas drogas vegetales que contienen flavonoides98

• Flores de Acacia

Las flores de Robinia pseudoacacia (Fabaceae) contienen robinina.

• Flores de Manzanilla Romana

Las flores de Anthemis nobilis (Asteraceae) contienen apigenina-7-O-glucósido y luteolina-

7-O-glucósido.

• Flores de Cactus

Las flores de Cereus grandiflorus (Cactaceae) contienen glicósidos de iso-ramnetina y

rutina. Para el análisis HPLC de la rutina se puede consultar el artículo de Dimov y col.99


50

• Flores de Caléndula

Las flores de Calendula officinalis (Asteraceae) contienen glicósidos de iso-ramnetina y

quercetina. En nuestro país es una droga de venta libre usada como antiinflamatoria y

regeneradora del epitelio100. El extracto alcohólico mostró efecto positivo en el tratamiento

de úlceras varicosas y lesiones en la piel101.

• Espino

La droga la constituyen las hojas, flores y frutos de Crataegus sp. (Rosaceae). Contiene

glicósidos de quercetina y apigenina102.

• Tusílago


51

Las flores de Tussilago farfara (Asteraceae) contienen glicósidos de quercetina.

• Manzanilla Chiquita

Las flores de Matricaria chamomilla (Asteraceae) contienen quercimeritrina, glicósidos de

apigenina, luteolina y patuletina. Esta es una planta medicinal aprobada en Colombia y se usa

como carminativa y digestiva103,104.

• Primavera

Las flores de Primula sp. (Primulaceae) contienen glicósidos de quercetina, gossipetina y

kaemferol. En Colombia tiene uso ornamental.

• Endrino

Las flores de Prunus spinosa (Rosaceae) contienen glicósidos de quercetina y kaemferol.

• Saúco

Las flores de Sambucus niger (Caprifoliaceae) contienen glicósidos de quercetina, rutina,

hiperósido, etc. Esta planta está aprobada en Colombia y se utiliza como expectorante. La

especie relacionada Sambucus canadensis ha mostrado uso potencial contra el virus de la

influenza105.


52

• Reina de los prados

Las flores de Filipendula ulmaria (Rosaceae) contienen espiracósido, hiperósido y

avicularina.

• Pié de gato

Las flores de Helichrysum arenarium (Asteraceae) contienen glicósidos de naringenina,

kaemferol, apigenina y luteolina.

• Tilo

Las flores de Tilia sp. (Tiliaceae) contienen glicósidos de quercetina, kaemferol y miricetina.

La especie medicinal está aceptada en Colombia corresponde a Tilia sylvestris y sus hojas se

utilizan como sedante menor. Para el análisis HPLC de los glicósidos flavonoides del tilo se

puede consultar el trabajo de Pietta y col.106

• Abedul

Las hojas de Betula sp. (Betulaceae) contienen glicósidos de quercetina y miricetina.


53

• Nogal

Las hojas de Juglans regia (Juglandaceae) contienen hiperósido y otros glicósidos

flavonoides. En Colombia es de venta libre la Juglans cinerea (nogal blanco), cuyas hojas se

usan como antidiarréico.

• Bodas de Plata

Corresponde a la Potentilla anserina (Rosaceae) que contiene glicósidos de quercetina y

miricetina.

• Cola de caballo

Las partes aéreas de Equisetum arvense (Equisetaceae) contienen glicósidos de luteolina,

isoquercitrina y equisetrina107.

• Herniaria

La Herniaria sp. (Caryophyllaceae) contiene rutina y narcisina.


54

• Infusión madre

La Leonorus cardiaca (Lamiaceae) contiene rutina.

• Ruda

La Ruta graveolens (Rutaceae) contiene rutina.

• Retama

Sarothamnus scoparius (Fabaceae) contiene escoparina y vitexina.

• Verónica

Veronica officinalis (Scrophulariaceae) contiene luteolina-7-O-glucósido y rutina.

• Bastoncillo dorado

Solidago virgaurea (Asteraceae) contiene glicósidos de quercetina y kaemferol.


55

• Pensamiento

Corresponde a Viola tricolor (Violaceae). Contiene glicósidos de quercetina. Es una planta

medicinal aceptada en Colombia. Sus hojas y flores se usan como antitusivo.

• Sofora

Las yemas de Sophora japonica (Fabaceae) contienen rutina (ca. 20%).

• Naranja amarga

El pericarpio del fruto de Citrus aurantium (Rutaceae) contiene eriocitrina, rutina,

naringenina, naringina, etc. En Colombia el fruto se usa como laxante.

• Cáscara de limón

Además del aceite esencial el cual ha sido utilizado en la elaboración de diferentes fragancias

y saborizantes, el pericarpio del fruto de Citrus limon (Rutaceae) contiene hesperidósido el

cual se utiliza en el tratamiento de hemorroides. Otros flavonoides con actividad

antioxidante también ha sido aislados108

• Cáscara de cidra

El pericarpio del fruto de Citrus medica (Rutaceae) contiene eriocitrina, rutina, etc.

• Yerbasanta

Corresponde a Eriodictyon glutinosum (Hydrophyllaceae). Contiene homoeridictiol,

eriodictiol, etc.

• Ortosifonis

Las hojas de Orthosiphon spicatus (Lamiaceae) contienen sinensetina, escutelareína y

eupatorina. El extracto acuoso de Orthosiphon stamineus, Lamiaceae, usado

tradicionalmente en Malasia para el tratamiento de diabetes, mostró actividad hipoglicémica

en ratas109.


56

• Cardo de María

Los frutos de Sylibum marianum (Asteraceae) contienen flavolignanos, silibina, silicristina,

silidianina, silimarina, etc. La silimarina es hepatoprotector y se utiliza en el tratamiento de

trastornos digestivos funcionales110, ase dice también que protege el hígado de personas

que consumen drogas sicotrópicas111. Además la silimarina inhibe la hipercolesterolemia en

ratas112. Otros estudios reportan que los flavolignanos potencian la acción de sustancias

antimicrobianas113. Para el análisis por CG-EM de sus componentes fenólicos se puede

consultar el trabajo de Galetti y col.114

• Trigo sarraceno

Las flores de Fagopyrum sculentum (Polygonaceae) son de venta libre en Colombia y se

usan contra la fragilidad capilar.

• Eucalipto


57

• Gingko

Los extractos de Gingko biloba, han mostrado efectos benéficos en el tratamiento de

insuficiencia cerebrovascular y problemas de la circulación periférica. La actividad

farmacológica se ha atribuido a trilactonas terpénicas y glicósidos flavonoles. Sin embargo,

algunos alquilfenoles (ácidos gingkólicos, cardanoles y cardoles) se han identificado como

constituyentes peligrosos en los extractos de Gingko. Estos compuestos además de que

tienen propiedades alergénicas, poseen también actividades mutagénica y cancerígena, por lo

tanto no pueden estar presentes en concentraciones mayores de 5 ppm, según las

farmacopeas americana y europea7.

• Lespedeza

Corresponde a la Lespedeza capitata (Leguminosae). El extracto alcohólico se usa como

estimulante de la eliminación renal.

• Pycnogenol

El pycnogenol es un extracto de la corteza del pino marino francés Pinus maritima Lamk.

(Pináceas), que contiene bioflavonoides, catequina, ácidos fenólicos y procianidinas (también

denominadas leucoantocianidinas). Entre sus efectos están la inhibición de la agregación

plaquetaria y la inhibición de formación de trombos. Es comparativamente más activo contra

7 Fuzzati, N., Pace, R., Villa, F., Fitoterapia 74 247-256 (2003).


58

los radicales libres, que el té verde y el gingko. Existen estudios sobre su acción benéfica en

pacientes con insuficiencia venosa crónica, con manifestaciones como las venas várices115.

• Fuentes de antocianinas

Las antocianinas debido a sus propiedades como verdaderos pigmentos vegetales y a que

son fácilmente degradados en el intestino, se utilizan principalmente como colorantes de

medicamentos y alimentos. Se extraen de plantas comestibles como las uvas negras (Vitis

vinifera, Ampelidaceae)116, la mora, la fresa, el repollo morado, el pericarpio del rábano

rojo117, el grosellero negro (Ribes nigrum, Saxifragaceae), etc. Las antocianinas de los

frutos y hojas del arándano, Vaccinium myrtillus L., Ericaceae, presentan propiedades

vasoprotectoras y contra desórdenes oftalmológicos, y se vende el extracto con el nombre

comercial de Myrtocyan118. Las flores de albahaca Ocimum basilicum, contienen varias

antocianinas119.

15. Algunas plantas colombianas que contienen flavonoides

Dentro de la muy poco estudiada flora colombiana existen numerosas plantas que tienen uso

medicinal popular y que contienen flavonoides, especialmente de plantas de las familias

ericáceas, euforbiáceas y compuestas (p. ej. el género Eupatorium es uno de los más


59

estudiados a nivel mundial por su uso medicinal120). A continuación se mencionan algunas

de ellas121.

• Arnica

Corresponde al Senecio formosus de la familia Compositae. Se usa contra el reumatismo,

como sudorífica, para la depuración de la sangre y antisifilítica, pero contiene alcaloides lo

cual la hace tóxica.

• Cerraja

Corresponde a Sonchus oleraceus de la familia Compositae. Se usa su infusión en

enfermedades del hígado, como diurética, depuradora de la sangre, en trastornos biliares,

como laxante y antiespasmódica.

• Botón de oro

Corresponde a Spilanthes oppositifolia de la familia Compositae. Su decocción se usa

contra enfermedades del hígado, manchas en la piel y como dentífrico. Las flores como

analgésico. García-Barriga anota que se usa contra la diabetes122.

• Flor de muerto

Corresponde a Tagetes erecta de la familia Compositae. Su decocción se usa como

antihelmíntico y emenagogo. La infusión de las flores y hojas se utiliza para el lavado de

orzuelos y ojos infectados.

• Chaparro

Corresponde a la Curatella americana de la familia Dilleniaceae. Las hojas contienen la

avicularina y son usadas como sustituto del papel de lija. Se usa contra la artritis, la diabetes

y para disolver los cálculos biliares123.


60

• Ñame

El color violeta de los tubérculos de la Dioscorea trifida de la familia Dioscoreaceae, son

debidos a antocianinas del tipo malvidina.

• Angucho

Corresponde a la Befaria aestuans de la familia Ericaceae. La infusión de sus flores se usa

como expectorante.

• Uva caimarona

Corresponde a Cavendishia bracteata de la familia Ericaceae. Sus frutos son comestibles.

La decocción de las hojas se usa como astringente y contra el reumatismo.

• Uva de páramo

Corresponde a la Gaylussacia buxifolia de la familia Ericaceae. Los frutos son de color

morado debido a antocianinas.

• Maíz de perro

Corresponde a Pernettya prostrata de la familia Ericaceae. Sus hojas contienen flavonoides.

Sus frutos son tóxicos.

• Algayubo

Corresponde al Croton glabellus de la familia Euphorbiaceae. Las hojas contienen los

flavonoides ayanina y quercitrina. Se usa como digestiva e hipotensora.

• Contra-rayo

Las hojas de Euphorbia lathyris de la familia Euphorbiaceae contienen flavonoides.

• Ceiba

Corresponde a Hura crepitans de la familia Euphorbiaceae. Las semillas son venenosas. Las

hojas contienen kaemferol.


61

• Frailecillo

Corresponde a la Jathropa curcas de la familia Euphorbiaceae. Las hojas contienen

flavonoides. Las semillas se usan como purgantes pero son tóxicas.

• Chuchugüasí

La corteza de Maytenus aelevis (Celastraceae) contiene proantocianidinas con actividad

antiinflamatoria (artritis)124.

15. Problemas 1. J. NAT. PROD. 58(4) 475-482 (1995) Del extracto metanólico de la planta entera Polanisia dodecandra, se aisló por métodos cromatográficos una sustancia con actividad antimitótica potente y con las siguientes características: Prismas amarillos P.F. 176-7°C UV (MeOH): 257, 278, 345 nm UV (MeOH+NaOMe): 280, 396 nm EMIE: 404.1110 (74%), 389 (100), 371 (8), 359 (10), 331 (12), 303 (8), 275 (9), 211 (14), 202 (8), 183 (13), 164 (10), 151 (17), 123 (5). RMN-1H (CDCl3, 300 MHz): 3.88 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 4.11 (s, 3H), 7.00 (d, 1H, J=7.0 Hz), 7.77 (d, 1H, J=2.2 Hz), 7.78 (dd, 1H, J=2.2 y 7.0 Hz), 12.40 9s, 1H). RMN-13C (CDCl3, 75 MHz): δ 56.1, 60.1, 61.2, 61.7, 62.1, 107.5, 110.5, 114.6, 121.6, 123.7, 132.9, 136.2, 138.9, 144.9, 145.6, 149.0, 149.1, 152.9, 155.8, 179.4 ppm. Determine la estructura más probable para esta sustancia. 2. PHYTOCHEMISTRY 42(4) 1203-1205 (1996). De la fracción soluble en n-butanol del extracto metanólico de las partes aéreas de Lysionotus pauciflorus (Gesneriaceae) se aisló la nevadensina una sustancia que ha sido reportada como poseedora de actividad antiinflamatoria e hipotensora. Sus características son las siguientes: P.F. 198-199°C UV(metanol): 283, 330 nm UV (AlCl3): 210, 352 nm UV (AlCl3/HCl): 308, 351 nm UV (NaOAc): 283, 273 nm UV (H3BO3/NaOAc): 283, 321 nm EMIE: m/z 344, 329, 277, 197, 169, 133


62

RMN-1H (CDCl3, 360 MHz): 3.90 (s, 3H), 4.02 (s, 3H), 4.04 (s, 3H), 6.59 (s, 1H), 7.03 (2H, d, J=8.9 Hz), 7.89 (2H, d, J=8.9 Hz), 11.82 (s, 1H). RMN-13C (CDCl3, 90 MHz): δ 55.6, 60.2, 61.2, 103.0, 103.1, 114.7, 123.0, 128.0, 128.2, 131.6, 145.4, 148.4, 150.9, 162.4, 163.1, 182.3 ppm. Determine la estructura más probable y el nombre IUPAC de esta sustancia. 3. Una sustancia vegetal presenta las siguientes características espectrales: Espectro de masas de impacto electrónico: m/z = 300 (100%), 299 (12), 272 (4), 257 (10), 155 (3), 121 (13), 93 (4). Espectro de RMN-1H (60 MHz, CCl4): δ 3.83 (3H, s); 6.18 (d, 1H, J=2 Hz); 6.47 (d, 1H, J=2 Hz); 6.85 (d, 2H, J=8 Hz), 8.00 (d, 2H, J=8 Hz). Espectros UV MeOH: 366, 266 nm NaOMe: 418 nm (descompone) AlCl3: 423, 270 nm AlCl3/HCl: 426, 267 nm NaOAc: 369, 265 nm H3BO3/NaOAc: 366, 265 nm Determine la estructura más probable para esta sustancia, asigne las señales de RMN y el correspondiente nombre IUPAC. 4. Una sustancia vegetal presenta las siguientes características espectrales: Espectro de masas de impacto electrónico: m/z = 316 (100%), 301 (24), 288 (19), 285 (27), 273 (28), 271 (28), 166 (5), 137 (15), 109 (11). Espectro de RMN-1H (60 MHz, DMSO-d6): δ 3.90 (3H, s); 6.33 (d, 1H, J=2 Hz); 6.65 (d, 1H, J=2 Hz), 6.85 (d, 1H, J=8 Hz); 7.62 (dd, 1H, J=8 y 2 Hz); 7.58 (d, 1H, J=2 Hz); 12.45 (s, 1H). Espectros UV MeOH: 372, 255 nm NaOMe: 418, 294 nm AlCl3: 455, 275 nm AlCl3/HCl: 425, 268 nm


63

H3BO3/NaOAc: 386, 259 nm Determine la estructura más probable para esta sustancia, asigne las señales de RMN y el correspondiente nombre IUPAC. 5. Xang, F. et al.; PHYTOCHEMISTRY 42 (3) 867-869 (1996). Del extracto de la corteza de Colebrookea oppositifolia (Labiatae), usada en China para el tratamiento de fracturas, heridas y artritis reumatoide, se aislaron dos compuestos con las siguientes características: Compuesto A: Polvo amarillo, [α]D25 = -27° (DMSO, c 0.48). IR (KBr): 3270, 1650, 1600, 1580, 1485, 1441, 1350, 1290, 1196, 1112, 1065, 1045, 840, 800, 765, 680 cm-1. EM-FAB: m/z 447 [M+H]. EMIE: m/z 284 (100), 266 (41), 238 (44), 181 (15), 153 (35), 139 (32), 102 (48). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.89 (s, 1H), 8.10 (2H, dd, J=7.6 y 1.6 Hz), 7.60 (3H, m), 6.98 (1H, s), 7.03 (1H, s), 5.05 (1H, d, J=7.6 Hz), 3.90 (s, 3H). RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): δ 56.56, 60.91, 69.95, 74.13, 76.54, 77.21, 91.77, 102.05, 104.93, 105.16, 126.35 (dos carbonos), 128.31, 129.05 (dos carbonos), 130.62, 132.01, 151.60, 152.75, 158.99, 163.39, 182.31 ppm. Compuesto B: Polvo amarillo, [α]D25 = -48° (DMSO, c 0.36). IR (KBr): 3430-3240, 1650, 1610, 1560, 1500, 1442, 1350, 1280, 1240, 1162, 1075, 1040, 850, 830, 751, 740 cm-1. EM-FAB: m/z 432 [M]. EMIE: m/z 432, 280, 270, 242, 152, 124, 118. RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.88 (s, 1H), 7.87 (1H, d, J=8.1 Hz), 7.53 (1H, dd, J=8.4 y 7.4 Hz), 7.33 (1H, d, J=8.4 Hz), 7.20 (1H, dd, J=7.5 y 7.8 Hz), 7.00 (1H, s), 6.45 (1H, s), 6.20 (1H, s), 5.10 (1H, d, J=8 Hz). RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): δ 60.63, 69.62, 73.28, 76.73, 77.12, 93.69, 98.76, 100.26, 103.77, 110.19, 115.53, 120.32, 121.91, 129.00, 132.73, 155.35, 157.64, 160.76, 161.36, 164.30, 181.79 ppm. 6. Wesson, K. J.; Haman, M. T.; J. NAT. PROD. 59 (6) 629-631 (1996). 7. Van den Berg, J. J., et al.; PHYTOCHEMISTRY 42 (1) 129-133 (1996). 8. Palme, E. et al.; PHYTOCHEMISTRY 42 (3) 903-905 (1996). 9. Zheng, W. F. et al.; PLANTA MED. 62 (2) 160-162 (1996). 10. (Salvigenina y cirsimaritina) Youssef, D. et al.; PLANTA MED. 61 (6) 570-573 (1995). 11. Jong, T. T.; Hwang, C. C.; PLANTA MED. 61 (6) 584-585 (1995).


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12. PHYTOCHEMISTRY 42 (4) 1011 (1996) 13. (Flavonoides prenilados) Li, W-K. y col.; PHYTOCHEMISTRY 43 (2) 527-530 (1996). 14. (Crisoeriol, Jaceosidina, Diosmetina, Eupatorina), Schinella, G. R., y col., J. PHARM.

PHARMACOL. 50, 1069-74 (1998). 15. Shilin, Y. Y col., PHYTOCHEMISTRY 28(5) 1509-1511 (1989) En 1989 Shilin y col. de la Universidad de Londres publicaron un estudio de las partes aéreas de Artemisia annua, una planta medicinal china que presenta actividad contra el parásito de la malaria debido a la artemisinina125, una sesquiterpenlactona que contiene. En dicho estudio reportaron la identificación de 17 flavonoides, entre ellos 5,2’,4’-trihidroxi-6,7-dimetoxiflavona (compuesto 16). Son consistentes los datos espectrales allí publicados con esta estructura ? Porqué ? 16. Vaishnav, M. M. y col., FITOTERAPIA (1) 78 (1996). 17. Vaishnav, M. M. y col., FITOTERAPIA (1) 80 (1996). 18. Qais, N. y col., FITOTERAPIA (5) 476 (1996). 19. Tripathi, M. y col., FITOTERAPIA (5) 477 (1996). 20. Grayer, R. J. y col., PHYTOCHEMISTRY 47 (5) 779 (1998). (Glucosilflavona) 21. Imperato, F., PHYTOCHEMISTRY 47 (5) 911 (1998) (Glicósido de Kaemferol). 22. Carnat, A. P. y col., J. NAT. PROD. 61 (2) 272 (1998) (C-Glicosilflavona) 23. Chan, S. C. y col., PLANTA MED. 64 (2) 143, 153 (1998). 24. Sinz, A., y col., PHYTOCHEMISTRY 47 (7) 1393-1396 (1998). (O-glicosil-3-

metoxiflavonas) 25. Kassem, M. E., y col., FITOTERAPIA LXVII (5) 432-433 (1996). 26. Adelakun, E. A., y col., FITOTERAPIA LXVII (5) 478 (1996). 27. Vaishnav, M. M., y col., FITOTERAPIA LXVII (1) 78-80 (1996). 28. Ahmad, V. U., y col., FITOTERAPIA 71, 84-85 (2000) (5,7,4’-Trihidroxiflavona;

5,3’,4’-trihidroxi-7-metoxiflavona y 5,3’-dihidroxi-6,7,4’-trimetoxiflavona). 29. Yadava, R. N., y col., FITOTERAPIA 71, 88-90 (2000) (5,6-dihidroxi-7-metoxiflavona

6-O-ß-D-xilopiranósido) 30. Kumar Kruthiventi, A., y col., FITOTERAPIA 71, 94-96 (2000). 31. La morina es un flavonoide de fórmula molecular C15H10O7 y que presenta los espectros

UV mostrados a continuación. Determine la estructura más probable para esta sustancia.


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32. Da Silva, B. P., et al., PHYTOCHEMISTRY 53, 87-92 (2000).

Costus spicatus Swartz (Costáceas), es comúmmente llamada "cana do brejo" en Brasil. La

raíz de esta planta es utilizada para eliminar cálculos renales, hemorragias, etc. De las partes

aéreas se prepara una infusión para tratar resfriados, disentería y diarrea. Un extracto

metanólico de las hojas secas se fraccionó por cromatografía con mezclas de cloroformo-

metanol. Aislándose los compuestos 1 (125 mg), 2 (70 mg) y 3 (45 mg). Estos compuestos

presentan las siguientes características:

Compuesto 1:

Polvo amorfo amarillo desde metanol, P.F. 180-190°C desc., [α]20D -78 (DMSO, c 0.001).

UV λmáx (MeOH, nm, log E): 254 (3.3), 286 (1.0), 373 (3.5). AlCl3: 268, 298, 386.

AlCl3/HCl: 270, 300, 376. NaOMe: 271, 328, 414. NaOMe/H3BO3: 252, 282, 370. IR

(KBr): 3400, 1651, 1600, 1560, 1506, 1289, 1205, 1166, 1129, 1050, 1030, 980 cm-1.

LSIMS Negativo m/z: 623 [M-H-] (30%), 315 (100), etc.


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RMN-1H (200 MHz, DMSO-d6): δ 0.68 (d, 1H, J=6.2 Hz), 3.83 (s, 3H), 5.06 (1H, bs), 5.80

(1H, d, J=7.2 Hz), 6.22 (1H, d, J=1.8 Hz), 6.48 (1H, d, J=1.8 Hz), 6.86 (1H, d, J=8.54 Hz),

7.54 (1H, dd, J=8.4 y 1.82 Hz), 7.98 (1H, d, J=1.8 Hz), 12.52 (1H, s), etc.

RMN-13C (50 MHz, DMSO-d6): δ 17.00, 55.74, 60.60, 68.29, 69.73, 70.20, 70.62, 71.90,

76.56, 77.13, 77.34, 93.71, 98.77 (2 carbonos), 100.75, 104.05, 113.56, 115.59, 121.08,

121.89, 132.60, 146.88, 149.38, 156.32, 156.34, 161.24, 164.19, 177.30 ppm.

El compuesto 1 (40 mg) se reflujó con HCl 2M (5 ml) durante 2 horas. La aglicona se

extrajo con acetato de etilo, y se recristalizó en metanol obteniéndose la tamarixetina (18

mg). La fase acuosa se ajustó a pH 6 con NaHCO3, se liofilizó. Después de la liofilización

los azúcares se disolvieron en piridina y se analizaron por Cromatografía en Capa Fina

(CCF). Después de rociar las placas, la rhamnosa se observó como una mancha de color

verde de Rf 0.75, y la glucosa como una mancha azul de Rf 0.70.

Compuesto 2

Polvo amorfo amarillo desde metanol, P.F. 170-180°C desc., [α]20D -85 (DMSO, c 0.001).

UV λmáx (MeOH, nm, log E): 252h, 266 (3.0), 353 (3.5). AlCl3: 254, 270, 418. AlCl3/HCl:

256, 270, 355. NaOMe: 280, 323, 411. NaOMe/H3BO3: 254, 268, 355. IR (KBr): 3438,

1650, 1600, 1558, 1504, 1287, 1203, 1163, 1127, 1048, 1029, 975 cm-1. LSIMS Negativo

m/z: 607 [M-H-] (27%), 299 (100), etc.

RMN-1H (200 MHz, DMSO-d6): δ 0.76 (d, 1H, J=6.2 Hz), 3.87 (s, 3H), 5.08 (1H, bs), 5.68

(1H, d, J=7.2 Hz), 6.22 (1H, d, J=1.8 Hz), 6.46 (1H, d, J=1.8 Hz), 6.92 (2H, d, J=8.4 Hz),

8.06 (2H, d, J=8.4 Hz), 12.53 (1H, s), etc.

RMN-13C (50 MHz, DMSO-d6): δ 17.25, 55.95, 60.58, 68.28, 69.71, 70.18, 70.62, 71.88,

76.54, 77.13, 77.32, 93.70, 98.37, 98.72, 100.60, 104.03, 115.13 (2 carbonos), 120.93,

130.77 (2 carbonos), 132.74, 156.06, 156.08, 159.91, 161.23, 164.20, 177.29 ppm.

El compuesto 2 (40 mg) se reflujó con HCl 2M (5 ml) durante 2 horas. La aglicona se

extrajo con acetato de etilo, y se recristalizó en metanol obteniéndose el kaempferido (18

mg). La fase acuosa se ajustó a pH 6 con NaHCO3, se liofilizó. Después de la liofilización


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los azúcares se disolvieron en piridina y se analizaron por Cromatografía en Capa Fina

(CCF). Después de rociar las placas, la rhamnosa se observó como una mancha de color

verde de Rf 0.75, y la glucosa como una mancha azul de Rf 0.70.

Compuesto 3

El compuesto 3 se sometió a hidrólisis ácida como se describió para los dos compuestos

anteriores y se obtuvo quercetina, glucosa y ramnosa.

Determine la estructura de estos compuestos y describa la biogénesis de las agliconas.

33. (Espectros proporcionados por Marín L., Juan C., "Fitoquímica y Evaluación Biológica de Polygonum punctatum", Tesis de Maestría, Instituto de Química, Universidad de Antioquia, Medellín, 2001) Del extracto en acetato de etilo de Polygonium punctatum, y mediante procedimientos cromatográficos se aislaron 4 sustancias, una de ellas con las siguientes características espectrales:


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R


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Espectro HMBC


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RMN-1H (DMSO-d6): δ 3.84 (s, 6H), 6.33 (d, 1H, J=1.7 Hz), 6.75 (d, J=1.4 Hz), 6.94 (d, 1H, J=8.5), 7.74 (dd, 1H, J=8.5 Hz), 7.76 (d, 1H, J=1.7 Hz), 9.52 (bs, 1H), 9.75 (bs, 1H), 12.44 (s, 1H). UV (MeOH): 371, 254, 205 nm

EMIE: 330 (100%), 315 (4), 301 (8), 287 (11), etc. Determine la estructura más probable para esta sustancia Marín L., Juan C., "Fitoquímica y Evaluación Biológica de Polygonum punctatum", Tesis de Maestría, Instituto de Química, Universidad de Antioquia, Medellín, 2001)

Agradecimientos

A Juan C. Marín L., por los datos y espectros del último ejercicio planteado. Por los otros espectros a: SDBSWeb : http://www.aist.go.jp/RIODB/SDBS/ (National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Sep. 28 2005) Las imágenes de plantas en blanco y negro fueron escaneadas en su mayoría del libro: Hernando García-Barriga, Flora Medicinal de Colombia, Tomo II, 1978, Instituto de Ciencias Naturales, Universidad Nacional, Bogotá.


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+., si es impar corresponde a A1+H+.

44El valor m/z corresponde al fragmento B2+.

45Bouillant, M. L. et al.; PHYTOCHEMISTRY 14, 2267-2274 (1975). 46Bouillant, M. L. et al.; PHYTOCHEMISTRY 17, 527-533 (1978). 47Bouillant, M. L., et al.; PHYTOCHEMISTRY 19, 1755-1759 (1980). 48Echeverri, L. F.; "Espectroscopía de Productos Naturales", Universidad de Antioquia, Departamento de Química, Medellín, 1986, Capítulo V. 49Schels, H.; et al.; PHYTOCHEMISTRY 17, 523-526 (1978). 50Saito, N. et al.; PHYTOCHEMISTRY 22 (4) 1007-1009 (1983).


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