Extractia in Sisteme Apoase Bifazice

EXTRACIA N SISTEME

APOASE BIFAZICE

Lucian Gavril Tehnici de separare si concentrare in biotehnologii 2

Extracia cu solveni organici - limitat la extracia unor componente biologice cu structur simpl i stabilitate relativ ridicat.

Moleculele de natur proteic: polare, solubilitate n solveni organici nepolari redus.

Solvenii organici pot provoca denaturri ale substanelor proteice n timpul extraciei.


Pentru separarea din faza apoas a proteinelor prin extracie lichid lichid, este necesar un solvent care: s aib capacitate mare de solubilizare pentru

proteine, s nu denatureze proteinele, s produc o tensiune interfacial sczut.


Solventul care corespunde cel mai bine acestor deziderate este chiar APA,

Problema: de a gsi lacuna de miscibilitate: zona n care un

sistem apos devine eterogen, aprnd dou faze nemiscibile ntre ele.


Formarea sistemelor apoase bifazice

Obtinerea sistemele apoase bifazice (SAB) se bazeaz pe: incompatibilitatea a doi polimeri hidrofili

diferii la dizolvarea lor ntr-un solvent uzual cum este apa,

incompatibilitatea dintre un polimer hidrofil i o sare anorganic,

termoseparare.


Majoritatea polimerilor hidrofili, naturali sau sintetici, sunt solubili n ap.

Conc. sczute de polimeri n soluia apoas= sistem omogen.

Peste o anumit conc. a polimerilor, strict determinat i msurabil prin metode turbidimetrice, se produce separarea fazelor.

Valorile concentraiilor la care sistemul devine eterogen depind de masa molecular a polimerilor, scznd cu creterea acesteia.


Sisteme apoase bifazice COMPONENT 1

polietilenglicol (PEG)

polietilenglicol (PEG)

COMPONENT 2 dextran alcool polivinilic (PVA) polivinilpirolidona ficoll fosfat de potasiu sulfat de amoniu sulfat de magneziu sulfat de sodiu

POLIMER - POLIMER

POLIMER - SARE


Alte sisteme apoase bifazice COMPONENT 1

polipropilenglicol (PPG)

ficoll metilceluloza

COMPONENT 2 dextran alcool polivinilic (PVA) polivinilpirolidona metoxipolietilenglicol fosfat de potasiu dextran dextran hidroxipropildextran polivinilpirolidona


PE

G (%

mas

ice)

Dextran (% masice)

A

B

M

F

AFB Curba binodalaAMB ConodaF punct critic

Zona omogena

Zona bifazica

Faza usoara de compozitia pct. A

Faza grea de compozitia pct. B

Toate amestecurile eterogene obinute pentru proporii ntre concentraiile PEG i dextranului situate pe aceeai conod vor avea aceeai compoziie a fazelor, diferind doar prin volumele ocupate de aceste faze.


AMBM

VV

=inf

sup


Faza usoara (compozitia pct. T)

Faza grea (compozitia pct. B)



Sistemul A (apropiat de punctul critic): 5.0% PEG si 6.5% Dxin tampon fosfat la pH = 7.0, 20 C;

Sistemul B (departe de punctul critic): 6.2% PEG si 8.3% Dx, in tampon fosfat la pH = 7.0, 20 C;

initial dupa 1 minut dupa 2 minute

dupa 30 minute


Diagrame de echilibru PEG - Dextran

4 C 20 C

M

A

BF


Diagrama de echilibruPEG 4000 Fosfat de potasiu


Formarea SAB prin termoseparare Prin utilizarea detergenilor neionici cu grupri

hidrofile oxietilenice. La temp. sczute = o singur faz: lichid de

fermentaie + micelele de detergent, (detergentul interacioneaza mai ales cu proteinele hidrofobe)

La creterea temp. peste o anumit valoare (dependent de sistem), apare turbiditatea care indic apariia unei faze noi.

Aceast temperatur = punct de tulburare (cloud point). Valoarea sa depinde n special de numrul mediu al gruprilor oxietilenice din detergent.

De ex., un detergent C12EO5 are pct. tulb. la 23 25 C.


Separarea fazelor, datorat hidratrii reversibile a gruprilor polare de la extremitile moleculei formarea a 2 faze: faza mbogit n detergent; faza srcit n detergent.

Micelele sufer un proces de agregare n structuri laminate avnd proteina hidrofob ntr-o faz coacervat cu 70 80% ap.


Soluia apoas de detergent sub i peste punctul de tulburare

Protein

Micel

Detergent

Substan nedorit

Agregat protein-tensid


Mecanismul extraciei biopolimerilor in SAB

Extracia biopolimerilor = prin interaciuni de tip van der Waals ntre: molecula proteic i polimerul hidrofil; gruprile proteinelor, cu solubilizarea acestora

ntr-o anumit faz. Un sistem de extracie este proiectat a..:

proteina dorit s treac n faza superioar (PEG, de ex.),

materialul care trebuie ndeprtat, inclusiv celulele i resturile celulare, s treac n faza inferioar (sare sau dextran).


Puterea de separare a unui sistem este caracterizat de: gradul de extracie (Y) factorul de separare (F),

care sunt dependeni de: raportul volumelor fazelor (R) coeficientul de distribuie (KN).


Gradul de extracie n faza superioar este definit prin relaia:

n = numrul de moli de protein dorit n volumul fazei superioare (Vsup), respectiv inferioare (Vinf).

+

=+

=

NKVVnn

nY

11

1

sup

infinfsup

supsup


Factorul de separare: produsul dintre coeficientul de distribuie i raportul

volumelor fazelor:

Valorile Y, KN i R se influeneaz reciproc. De regul, Ysup crete la creterea lui KN la R = ct., sau la

creterea lui R la KN = ct. KN nu depinde de concentraia proteinei i (ci), atta timp

ct: concentraia ci este mult mai redus dect concentraia

polimerilor nu are loc formarea unor compleci.

inf

sup

VV

KRKF NN ==


Interdependena Ysup KN R

R =

N

N

N


exist o corelaie exponenial ntre KN i aria suprafeei (masa molecular) a proteinei i:

= factor dependent de potenialul chimic, Ai = suprafaa disponibil de interaciune, k = constanta lui Boltzmann, T = temperatura absolut (K).

TkAK iN

=ln


Astfel, celulele i resturile celulare vor prezenta, chiar la valori mici, un coeficient de distribuie tinznd spre zero ntr-o faz i spre infinit n cealalt faz, datorit valorii ridicate a suprafeei disponibile de interaciune;

Metaboliii prezint valori KN 1 Proteinele au valori KN = 0,1 10. Pe baza dependenei date de ecuaia anterioar

s-au putut izola antigenii de suprafa ai hepatitei B (avnd mase moleculare de 1.106 2.106 Da) ca vaccin produs din culturi de drojdii recombinante.


Principalii factori care influeneaz valoarea constantei de distribuie sunt: componenii care formeaz cele dou faze,

respectiv natura, concentraia i masamolecular a polimerilor,

tipul i concentraia ionilor din sistem, pH-ul, temperatura, adaosul de ali componeni (ageni haotropici,

de ex.), concentraia celulelor i a resturilor celulare


Solubilizarea proteinelor este dictat de hidrofobicitatea polimerilor existeni n soluia apoas, aceasta crescand n ordinea:

dextran sulfat < carboxi-metildextran < dextran < hidroxi-propildextran < metilceluloz < alcool polivinilic < polietilenglicol < polipropilenglicol

Hidrofobicitatea unui polimer este cu att mai mare cu ct masa sa molecular este mai mare.


Datorit migrrii ionilor din fazele apoase se stabilete un potenial electric de o parte i de alta a interfeei de separare, acesta influennd hotrtor distribuia macromoleculelor cu sarcin electric (proteine, acizi nucleici).

O modificare minor a: concentraiei sau triei ionicepoate conduce la modificri majore ale coeficientului de distribuie:


Concentraie K3PO4 [% masice]

KN

Log KN

Concentraie NaCl [% masice]

L-2-hidroxiizocaproat dehidrogenazaD-lactat dehidrogenaza

- amilazaimpuriti

a b


Concentraia proteinelor nu manifest nici un efect asupra repartiiei acestora ntre cele dou faze doar n domeniul concentraiilor foarte reduse (sub 1 g/L), aceast limit depinznd de tipul proteinei.

Valoarea pH-ului controleaz disocierea gruprilor ionizabile ale proteinelor i, implicit distribuia acestora ntre cele dou faze.

Odat cu variaia pH-ului se produc modificri n disocierea ionilor polivaleni (PO43-), ceea ce va afecta potenialul electric dintre faze, respectiv distribuia proteinelor.

n sistemele PEG sare, de ex., s-au constatat variaii de 2 3 ordine de mrime ale KN pentru intervale nguste de pH.


Distribuia -amilazei pure n sisteme apoase bifazice PEG 4000 (10% m)

fosfat (11,5% m) n funcie de pH


Afinitatea biospecific dintre moleculele proteice i anumii liganzi (liganzi de afinitate) ataai unuia dintre polimeri poate fi utilizat pentru mbuntirea separrii.

Ca liganzi de afinitate se utilizeaz: colorani, acizi grai, glutation, ionii compleci de Cu(II)-iminodiacetat n sisteme PEG

dextran sau PEG sare, D-alanil-D-alanina n sisteme PEG 8000 dextran i

PEG 8000 K3PO4 (separarea vancomicinei)


Sensibilitatea coeficienilor de distribuie la variaia temperaturii este redus. Temperatura modific forma diagramelor de

echilibru de faze.

4 C 20 C

M

A

BF


Sensibilitatea coeficienilor de distribuie la variaia temperaturii este redus. Temperatura modific distribuia biomoleculelor, o

temperatur mai sczut conducnd la o mai bun separare a proteinelor ntre ele.

Coeficientul de distribuie al lizozimei i catalazei n diverse SAB

10,60,0680,7240

8,60,0420,3625 10,3 % Dextran 5007,65 % PEG 20000

11,20,0520,584

2,30,430,9840

2,20,210,4725 11,3 11,5 % Dextran 5007,9 % PEG 4000

3,00,220,654

26,50,0200,5340

19,40,0160,3125 10,0 % Dextran 105,6 % PEG 20000

250,0140,354

4,90,1740,8540

7,00,0630,4425 12,2 % Dextran 108,4 % PEG 4000

11,70,0460,544

SABFactor de separareKN catalazKN lizozimTemp. [C]


Proiectarea procesului de extracie n SAB Proiectarea procesului de extracie n SAB

implic: (i) stabilirea caracteristicilor moleculelor proteice

care trebuiesc separate; (ii) selectarea mai multor SAB capabile de a realiza

separarea componentului dorit; (iii) alegerea dintre acestea a sistemului de extracie

adecvat, n funcie de influena diverilor factori (natura soluiei proteice iniiale, trie ionic, pH, temperatur etc);

(iv) stabilirea schemei de flux a procesului de extracie necesare pentru obinerea puritii dorite, n condiiile eliminrii compuilor cu activitate concurent (enzime care pot transforma un substrat ntr-un mod nedorit, de ex.).


Un component oarecare i din soluia iniial va trece n faza superioar sau n cea inferioar, dup cum coeficientul de distribuie KN,i este supraunitar sau subunitar.

Dac KN,i 3, compusul i poate fi extras ntr-o singur treapt.

Cnd KN,i este sczut, gradul de extracie n una din faze poate fi mrit utiliznd un volum mai mare din solventul cu afinitate mai mare pentru componentul respectiv:

inf,infsup,sup

sup,sup

0,0

sup,supsup,

ii

i

i

ii CVCV

CVCVCV

Y+

=

= (4.11)


Analog:

unde: V0 volumul iniial al fazei care conine

componentul i, Ci,0 concentraia componentului i n faza

iniial.

inf,infsup,sup

inf,inf

0,0

inf,infinf,

ii

i

i

ii CVCV

CVCVCV

Y+

=

= (4.12)


Gradul maxim de recuperare al componentului i n fiecare faz ntr-o unitate teoretic de extracie, rezult din ecuaiile (4.11) i (4.12), mprind att numrtorul ct i numitorul fraciei cu Ci,sup, respectiv cu Ci,inf:

inf,sup

infmaxinf,

,

infsup

supmaxsup, )( )( VKV

VY

KVV

VY

iNi

iN

i +=

+=


Schema general a procesului de extracie selectiva moleculelor proteice din lichidul intracelular

celuledistruse

PEG

Dextransausare

sare

Faza inferioar:- fragmente celulare- proteine- acizi nucleici- polizaharide

Faza superioar:- produs- proteine

impurificatoare

Faza superioar:- PEG- proteine

impurificatoare

Faza inferioar:- produs


Izolarea i purificarea enzimelor cu SAB

66203L-Hidroxi-izocaproatdehidrogenaz

911,92Lactobacillus confususD-Lactatdehidrogenaz

703,84Candida boidiniiFormiatdehidrogenaz

892,42Bacillus cereusLeucindehidrogenaz

873,12Bacillus sphaericusLeucindehidrogenaz

83333Bacillus megateriumGlucozdehidrogenaz75123Penicilinacilaz

82183E. coliAspartaz

70222Brevibacterium ammoniagenesFumaraz

862,51StreptomycesGlucozizomeraz

706,34Klebsiela pneumoniaePullulanaz

Grad de extracie global [%]

Factor de purificare

global

Numr de etapeOrganismulEnzima


Biomolecule purificate la scar industrial prin extracie n SAB

Proteine din zerIzoleucil-tRNAsintetazFormaldehiddehidrogenaz

Hibrid protein stafilococal A -galactozidaz

D-2-Hidroxi-izocaproatdehidrogenazCromatofori

FosforilazHexakinaza/b Proteine clorofilieneFosfolipaz-GlucozidazAspartat -decarboxilaz

FosfofructokinazGlucoz-6-fosfatdehidrogenaz-Amilaz

NADkinaz-GalactozidazAlcooldehidrogenazIzopropanoldehidrogenazFormiatdehidrogenazAcil-arilamidz


Extracia n SAB utilizeaz acelei principii ca i extracia fizic L L clasic.

Se pot utiliza aceleai echipamente pentru amestecarea i separarea fazelor.

Diferena rezid n proprietile diferite ale SAB n comparaie cu cele ale sistemelor clasice (faz apoas faz organic) ntlnite n extracia fizic L L, cea mai notabil diferen fiind tensiunea interfacial extraordinar de sczut:


Proprieti fizice ale SAB

1,25-2,112108516 % PEG 4000, 13 % fosfat

-4,020002,710467 % PEG 4000, 1,25 % dextran brut

-3,4943,010109 % PEG 4000, 2 % dextran T-500

[mN/m]

disp[mPa.s]

inf[mPa.s]

sup[mPa.s]

[kg/m3]Compozitia sistemului


n aplicaiile la scar mare, cele mai utilizate SAB sunt: PEG dextran ap PEG sare ap,

Avantaje: aplicabilitate cvasigenerala, viscozitate acceptabila Diferena de densitate acceptabila. n plus = netoxice i biodegradabile, fiind certificate de ctre

farmacopeele din cele mai multe ri. Dezavantaj:

costul ridicat al dextranului purificat (de ordinul sutelor de dolari pe kg).

Reducerea costurilor: nlocuire cu dextran brut, dextran brut hidrolizat sau amidon

hidroxipropilic. Dextranul brut conduce la o soluie cu viscozitate mai ridicat, n

timp ce dextranul hidrolizat reduce viscozitatea soluiei.


Procesul tehnologic de extracie n SAB Purificarea proteinelor intracelulare:

dezagregarea celulelor, adugarea componenilor SAB (PEG, dextran, fosfat etc.) ajustarea pH-ului, amestecarea suspensiei pentru atingerea echilibrului de faze.

Amestecarea se poate realiza fie n vase cu agitare prevzute cuicane, fie n amestectoare statice. Necesarul de energie este sczut datorit tensiunii interfaciale reduse, iar echilibrul este atins foarte rapid, n circa 30 s, dac amestecarea asigur un regim de curgere turbulent.

separarea fazelor = gravitaional sau centrifugal. separarea centrifugal la viscozitate ridicata a sistemului,

sau n cazul diferenelor mici de densitate dintre faze. Centrifugarea are avantajul suplimentar al unor randamente

mai ridicate, la acceleraii mari antrenarea resturilor celulare este mai sczut.


Schema procesului tehnologic de extracie a proteinelor intracelulare n SAB

1

2

2 2

3

3

5

5

6

6

7 7

7 7

7

suspensiecelular

PEG + sare sare

Recirculare PEG

resturi celularei proteine produs

PEG i produsesecundare

fazainferioar

4

fazasuperioar

1 bioreactor; 2 pompe; 3 moar cu bile; 4 schimbtor de cldur; 5 amestectoare in-line; 6 separatoare centrifugale; 7 rezervoare.


Procesul tehnologic de extracie n SAB Dup separarea iniial, la faza superioar se adaug o

sare, pentru a genera un nou sistem bifazic, n care proteina de interes s se gseasc n faza inferioar.

Proteina din faza de polimer mai poate fi separat prin: centrifugare, adsorbie, ultrafiltrare, electroforez.

n procesele la scar mare, concentrarea i condiionarea produsului din faza inferioar a sistemului bifazic secundar se realizeaz prin: ultrafiltrare sau diafiltrare, faza superioar fiind

recirculat; prin cromatografie de interaciune hidrofob.


Procesul tehnologic de extracie n SAB

Extracia n SAB se realizeaz: n arje (cel mai uzual) n flux continuu (mai economic)

Exist 3 posibiliti de prel. n flux continuu: extracia n echicurent (a), extracia n contracurent (c), extracia n curent ncruciat (b).

Pentru capaciti mari de producie, extracia n contracurent ofer un randament mai ridicat, la un consum minim de chimicale.


Avantaje i dezavantaje ale modurilor de contactare n extracia continu n SAB

cel mai sczutcel mai ridicatcele mai sczuteKN sczutContracurent (c)

cel mai ridicatcel mai sczutca la echicurentKN ridicatCurent ncruciat (b)

mediumediuca la curent ncruciatKN sczutEchicurent (a)

Factor de purificareRandamentConsumuri

Potrivit pentruContactare

a b

c

( F) alimentare; (S) solvent; (E) extract; (R) rafinat.


Procesul tehnologic de extracie n SAB

Pentru o purificare avansat a biomoleculelor extrase este necesar realizarea extraciei n mai multe trepte.

Nu toate echipamentele de extracie L L sunt potrivite extraciei cu SAB, mai ales atunci cnd: proprietile celor dou faze sunt prea

asemntoare, tensiunea interfacial este prea redus.


Procesul tehnologic de extracie n SAB Pentru extracia n trepte cu SAB au fost

testate: baterii de amestectoare decantoare, coloane Khni, extractoare centrifugale Podbielniak, coloane cu pulverizare, coloane cu talere sit, coloane cu umplutur.

Toate pot fi exploatate cu succes cu luarea unor msuri de precauie mpotriva nnecrii.

Rezultate bune s-au obinut i cu extractorul Graesser n separarea -lactalbuminei din zer cu SAB PEG sare.


Extractor Graesser (actualmente RTL SA Londra)

a b

sensul normal de rotaie;sensul de rotaie la extracia n SAB.


Extractor Graesser Este format dintr-un rotor orizontal prevzut cu

cupe (de unde i denumirea de contactor n ploaie cu glei - Raining bucket contactor) care se rotete lent n interiorul unui tambur alimentat pe la extremiti cu fazele supuse extraciei.

Este singurul extractor care disperseaz att faza uoar n faza grea, ct i faza grea n faza uoar.

Pentru prevenirea nnecrii s-a redus viteza de rotaie de la 20 rot/min la 2 5 rot/min i s-a inversat sensul de rotaie al rotorului cu cupe, reducndu-se astfel i intensitatea amestecrii.


Recuperarea chimicalelor i reducerea costurilor

Pentru a reduce costurile ridicate cu reactivii i cu depozitarea deeurilor se recomand reciclarea sau recircularea materialelor auxiliare.

Recuperarea polimerilor dup extracia biomoleculelor este o etap important att la scar de laborator, ct i n instalaia industrial.

Posibilitatea de a recupera i recircula uor polimerii utilizai ar face mult mai atractiv extracia cu SAB n instalaii de mare capacitate.


Modaliti de recuperare a polimerilor i srurilor utilizate n extracia cu SAB

Din fluxurile lipsite de faz solid fosfatul poate fi recuperat prin cristalizare la 6 C.

Pentru recircularea PEG s-a propus: extracia cu cloroform, reextracia salin a proteinelor din faza bogat n PEG, cu

formarea unei soluii reciclabile de PEG liber de protein, Separarea PEG de enzimele extrase:

ultrafiltrarea, dializa, sau reinerea enzimei pe un adsorbant adecvat.

Recircularea detergenilor: extracie cu alcooli alifatici inferiori

Recuperarea srurilor: exploatarea lacunelor de miscibilitate n sistemele ternare ap

sare alcooli alifatici inferiori Recent s-a demonstrat formarea SAB n condiii normale (25 C i

presiune atmosferic) ntre PEG 2000, respectiv PEG 4000 i carbamatul de amoniu. Carbamatul fiind volatil, poate fi recuperat din sistemul de extracie i recirculat sub form de NH3 i CO2.


Solubilizare

Lichid defermentaie

Extracia proteinelor

Faza de coacervat

Extracie cu 2-metil-1-propanol

Cromatografie de schimb anionic

Purificare 160 xRandament total 80 %

Puritate analitic

Faza apoasde la extraciasecundar

Extracia primar

Extracia secundar

Omogenizatde celule PEG sare

sare

Faza inf. bogat n sare:resturi celulare, proteine,

acizi nucleiciFaza sup. bogat

n PEG: produs

Faza inf. bogat n sare: produs

Faza sup. bogat n PEG

Ultrafiltrare

Soluie de sare Concentrat:produs

Rec

ircul

are

sare

Rec

ircul

are

sare

Rec

ircul

are

PEG

Rec

ircul

are

dete

rgen

i

Schema de flux a extraciei colesteroloxidazeiutiliznd SAB bazate pe detergeni

Schema de flux a extraciei cu SAB PEG sare, cu recircularea extractanilor


Transpunerea la scar a extraciei n SAB

Unul dintre avantajele exctraciei n SAB:uurina transpunerii la scar a procesului, prin simpla cretere proporional a cantitii ingredientelor utilizate.

Echipamentele industriale de separare centrifugal existente pe pia pot fi selecionate utiliznd conceptul (vezi Centrifugarea).


Transpunerea la scar a extraciei n SAB Intre 1982 1995 au fost transpuse la scar industrial

27 de procese, marea majoritate utiliznd sisteme PEG sare, pentru separarea i purificarea: enzimelor, antigenului hepatitei B, interferonului, lactalbuminelor, lactoglobulinelor, hemoglobinei, altor proteine terapeutic active.

Scara de operare: de la 24 kg celule prelucrate / arj pn la 50 m3

material celular prelucrat / arj.


Factor de transpunere la scar

Gra

d de

sep

arar

e [%

]

Scara de 10 cm3 [%] Scara industrial [%]

Transpunerea la scar a diferitelor etape de izolare ipurificare a formiatdehidrogenazei din Candida boidinii


Aspecte economice ale extraciei n SAB Costurile recuperrii i concentrrii

biomoleculelor prin extracie n SAB depind n mod hotrtor de sistemul utilizat, de scara de operare, dar i de ali factori.

CT = costurile totale, CM = costurile cu materialele, CL = costurile cu fora de munc, CE = costurile energetice, CI = costurile de investiii, Y = gradul de extracie

YCCCCC IELMT

13,013,16,213,1 +++=


Structura costurilor de fabricaie a fumarazei din Brevibacterium ammoniagenes

Materia prima, 35.5

Materiale auxiliare, 14

Forta de munca, 13.3

Utilitati, 0.4

Aparatura de control, 33.9

Alte cheltuieli, 2.9

Fermentare, 40.1

Dezagregare, 17.2

Extractie 1, 21.5

Extractie 2, 6.6

Ultrafiltrare, 9.8

Ape reziduale, 4.8


IULMT CCCCC 6,113,16,213,1 +++=

Evaluarea costurilor n producia fumarazei din S. cerevisiae

-14-54,886,195,696,5Costuri totale1980,020,0160,0180,015Cu utilitile2800,230,140,180,14Cu investiiile

-8240,911,661,001,34Cu fora de munc

-24-431,891,412,482,48Cu materialeCont.Disc.Cont.Disc.Cont.Disc.

Modificare [%]Cu recirculareFr recirculareCosturi


CONCLUZII Extracia n SAB:

consumuri energetice sczute, investiii minime, cheltuieli mari cu fora de munc cheltuieli mari cu materialele.

Reducerea costurilor materialelor: alegerea corespunztoare a rapoartelor volumice ale fazelor, introducerea de noi SAB, perfecionarea proceselor de recuperare recirculare.

Reducerea duratei procesului: utilizarea separrii centrifugale;

obinerea unor randamente superioare, obinerea unor produse calitativ superioare, datorit absenei unei

degradri proteolitice semnificative.


Extracia n SAB - tehnologie integrativ EX: Obinerea -amilazei din Bacillus sp. prin

tehnologia convenional i prin extracia n SAB. Fa de procesul convenional:

Extracia n SAB necesit mai puine etape, Randamentul global:

80% la extracia ntr-o singur treapt 95% la extracia n dou trepte, numai 70% prin procedeul convenional.

Costurile se reduc cu: 35% la extracia ntr-o singur treapt, 50% la extracia n dou trepte.


Fermentaie Fermentaie

Condiionare lichid de

fermentaie

Filtrare / centrifugare

Concentrare

Precipitare

Recuperareprecipitat

Solubilizareenzim

Filtrare

Decolorare

Finisare

Formularizare

BiomasBiomas

FiltratFiltratPropilenglicolPropilenglicol

Materialinsolubil

Materialinsolubil

Condiionare lichid de

fermentaie

Centrifugare

Decolorare

Finisare

Formularizare

ApSare

Biomas

ApSare

Biomas

a b

Obinerea -amilazeidin Bacillus sp.:

a procedeul convenional; b - procedeul prin extracie n SAB

Obinerea -amilazeidin Bacillus sp.:

a procedeul convenional; b - procedeul prin extracie n SAB

/ColorImageDict > /JPEG2000ColorACSImageDict > /JPEG2000ColorImageDict > /AntiAliasGrayImages false /CropGrayImages true /GrayImageMinResolution 300 /GrayImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleGrayImages true /GrayImageDownsampleType /Bicubic /GrayImageResolution 300 /GrayImageDepth -1 /GrayImageMinDownsampleDepth 2 /GrayImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeGrayImages true /GrayImageFilter /DCTEncode /AutoFilterGrayImages true /GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG /GrayACSImageDict > /GrayImageDict > /JPEG2000GrayACSImageDict > /JPEG2000GrayImageDict > /AntiAliasMonoImages false /CropMonoImages true /MonoImageMinResolution 1200 /MonoImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleMonoImages true /MonoImageDownsampleType /Bicubic /MonoImageResolution 1200 /MonoImageDepth -1 /MonoImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeMonoImages true /MonoImageFilter /CCITTFaxEncode /MonoImageDict > /AllowPSXObjects false /CheckCompliance [ /None ] /PDFX1aCheck false /PDFX3Check false /PDFXCompliantPDFOnly false /PDFXNoTrimBoxError true /PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [ 0.00000 0.00000 0.00000 0.00000 ] /PDFXSetBleedBoxToMediaBox true /PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [ 0.00000 0.00000 0.00000 0.00000 ] /PDFXOutputIntentProfile () /PDFXOutputConditionIdentifier () /PDFXOutputCondition () /PDFXRegistryName () /PDFXTrapped /False

/Description > /Namespace [ (Adobe) (Common) (1.0) ] /OtherNamespaces [ > /FormElements false /GenerateStructure true /IncludeBookmarks false /IncludeHyperlinks false /IncludeInteractive false /IncludeLayers false /IncludeProfiles true /MultimediaHandling /UseObjectSettings /Namespace [ (Adobe) (CreativeSuite) (2.0) ] /PDFXOutputIntentProfileSelector /NA /PreserveEditing true /UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged /UntaggedRGBHandling /LeaveUntagged /UseDocumentBleed false >> ]>> setdistillerparams> setpagedevice

Documents

Extractia in Sisteme Apoase Bifazice