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endotoxin and microbial detection찰스리버래보래토리즈코리아(주) 서울특별시 서초구 양재동 333-5 한아름빌딩 2층 T:(02)2057-5200 / F:(02)2057-5203 Vol.4, No.1 May, 2010

엔도톡신 시험법(BET;Bacterial Endotoxin Test)의 진화James F. Cooper, Ph.D., Consultant and Founder of Endosafe, Inc. , 번역 : 박혜민

초기에 LAL 시험법은 그 발전이 매우 더뎠습니다. 신뢰할 수 있는 엔도톡신표준품의 부재와 통일되지 않은 시험법 그리고, 엔도톡신 기준에 대

한 합의가 없었기 때문입니다. 이에 미국식품의약품안전청과 미국 약전은 공동으로 E. coli로부터 유래한 엔도톡신(0113:H10:K0) 30g 분량을

생산하였는데, 이것이 현재의 Reference Standard Endotoxin(RSE)의 원료입니다. 처음으로 대량 생산된 Lot EC5(30,000개의 바이알)은 안정

성과 재현성이 우수하였습니다. 1982년, EC5의 도입으로 인해 LAL 시약을 생산하는 제조사는 해당 Control Standard Endotoxin(CSE)에 대해

신뢰할 수 있는 감도를 가진 겔 시약을 생산할 수 있었습니다. 한 바이알 당 포함되어 있는 10,000

EU를 하나의 배치(batch)로 지정하였으며, FDA는 RSE를 관리감독하고, 이것을 LAL 시약 생산자에

게 제공함으로써 시약에 대한 성적서를 작성할 수 있도록 하였습니다.

LAL 시약 사용법은 1980년 USP XX에“Bacterial Endotoxin Test(BET)”라는 이름으로 처음 실렸

습니다. 이 시험법에서 작성된 방법은 겔화법이었으며, 엔도톡신표준액을 준비하는 방법도 실렸습

니다. 이 시기에 FDA에서는 Terry Munson 지휘 아래 비 경구용 의약품과 의료용구에 대해 실시 중

인 토끼실험을 LAL 시험법으로 시험법 전환을 하고자 할 때 사용될 LAL 시험법 가이드라인의 초

안이 작성되고 있었습니다. Munson은 가이드라인에 대한 확실한 근거를 과학적으로 제시하기 위

지난 40년 동안 우리는 발열성 시험에 LAL 시약을 적용한 것으로

부터 시작하여, 오늘날까지 계속해서 발전해오고 있는 것을 목격

해 왔습니다. 최초의 LAL 시약은 1971년에 Cooper 박사와 Mill 박

사에 의해 버지니 아주의 Chincoteague에서 생산되었습니다. 이

후, 1973년에 미국FDA의 생물학평가부(현재, Center for Biologics

Research and Development)에서 LAL 시약을 생물학제제로 규정

하고 관리하고자 하였는데, 이는 LAL이 내독소증을 위한 진단시약

이나 토끼를 이용한 발열성 시험을 대체할 시약으로 사용될 가능

성이 있다고 판단했기 때문입니다. 비록 현재까지 내독소증 진단

을 위한 시약으로는 구체화되지 않았으나 FDA의 지속적인 관리·

감독하에 점차 안정적이고, 재현성 있는 시약이 만들어지게 되었

습니다. 드디어 1977년, 제품에 대해 엔도톡신 테스트를 수행할

수 있는 3개의 겔화법 시약이 제품으로서 승인을 받았으며, 이어

서 분석장비와 microplate, 강력한 분석소프트웨어를 이용한 보다

정밀하고 정량화가 가능한 카이네틱 시험 방법이 개발되게 되었습

니다. 이번 호에서는 엔도톡신 시험법의 개발과정과 LAL을 이용한

혁신적인 시스템이 어떻게 표준화된 약전에 따른 시험법이 되었는

지에 대해 다루었습니다.

참고문헌

1. Cooper JF. 2008 Bacterial endotoxins test, chapter 22. In: Prince R,

ed. Microbiology in Pharmaceutical Manufacturing , Vol. 2, 2nd Edition,

PDA, Bethesda, MD.

PERSPECTIVE

서언 (PERSPECTIVE)

엔도톡신 시험법(BET)의 진화

Laboratory Notebook :

엔도톡신 측정을 위한 저장된 표준 직선(Archived Standard Curves) 의 장점

LAL Pointers

이번 호에서는…

02

해 산업분야 뿐만 아니라 학계의 과학자들

을 모두 동원하였습니다. 엔도톡신 기준은

토끼를 이용한 발열성 시험으로부터 결정이

되었는데, 이 실험을 통해 토끼가 발열 반응

을 일으키는 시점이 RSE에 대해 kg 당 5EU

라는 것을 알아냈으며, 사람과 토끼를 비교

실험 한 결과, 사람의 엔도톡신 발열 역치

또한 토끼와 비슷하다는 연구결과를 얻을

수 있었습니다. 이후에도, 사람에 대한 발열

성 연구를 수행한 결과, 5EU/kg이라는 발열

역치를 구체화 할 수 있었습니다. 1987년

전까지 가이드라인이 완성되지 않았지만,

이미 가이드라인 초안만으로도 순차적으로

표준 시험법의 개발에 영향을 미쳤으며, 비

경구용 완제품의 최종 시험을 위한 시험 조

건을 검증하는 방법도 제시 하였습니다.

1987년에 발표된 LAL시험법 가이드라인 부

록에는 매우 중요한 정보가 수록되어 있습

니다. 비 경구용 의약품에 대해 품목별로 엔

도톡신 기준이 설정된 목록과 CSE값 측정

을 위한 RSE/CSE ratio 결정 방법 그리고,

현재의 ‘엔도톡신시험법’에 참고가 되었

던 문헌들이 수록 되어 있습니다. 이 가이드

라인에는, 비색법 및 비탁법이 막 시장에 나

온 단계였기 때문에, 광학적 방법에 대한 정

보도 일부 포함하고 있습니다.

BET, 발열성 시험을 대신하다1993년 USP XXIII 개정으로 거의 모든 비 경

구용 제품(Public Health Service Act.에 의

해 컨트롤되는 혈액제제를 제외하고)에 대

해 최종제품의 적부시험을 위해 토끼실험

대신 LAL 시험법을 수행하는 것이 공식화

되었습니다. 투여량을 바탕으로 한 엔도톡

신 기준은 주사제 각조(monograph)에 지정

되어 있습니다. 이 때 공식적인 LAL 시험법

은 겔화법 뿐이었습니다. 이 때에 광학적 방

법은 겔화법에 대한 대체 방법으로서 적법

성이 인증된 경우에 한해서만 수행되었습니

다. 2001년 harmonized BET의 도입은‘엔

도톡신시험법’에 중요한 변화를 가져왔습

니다. 현재에는 모든 광학적 방법이 공식화

되었습니다. 새로운 엔도톡신시험법을 쓴

사람들은 현명하게도 혁신적인 방법에 대한

도입을 억누를 수 있는 굉장히 구체적인 용

어의 사용을 피했습니다. 예를 들어, BET는

키네틱 표준직선 및 저장된 표준직선을 이

용한 직선회귀분석 방법 및 양성대조 값 선

택 등과 같은 방법에 대해 구체적으로 말하

지 않습니다. Harmonized BET의 출현 이후,

FDA의 LAL 테스트 가이드라인은 빛을 보지

못했습니다. Harmonization process를 통해,

오직 BET만이 지속적인 검토와 개정을 위한

메커니즘을 보유하게 되었습니다. 결국 이

것은 의약품 표준화를 확립하기 위한 약전

당국의 책임과 그러한 표준을 강제하게 하

는 연방기관의 책임입니다.

The BET chapter is powerful because it is comprehensive withoutbeing a prescriptive

document.

BET- 겔화법엔도톡신 시험법에 부응하는 LAL 시험법을

어떻게 결정하십니까? 겔화법의 경우, 일상

시험을 위해 가장 중요시 되는 요소는 반응

저해의 조건과 간섭을 일으키는 시험 물질

을 검출하기 위한 시험 검액, 양성제품대조

(PPC)를 준비하는 검증된 방법입니다. 겔화

법의 한도 시험법에 대한 기술에 따르면, 음

성물대조와 양성물대조는 매번 시험을 수행

할 때마다 요구됩니다. 하지만 실제로는 충

분한 양성물대조가 적정한 간격으로 준비

되어 예상되는 엔도톡신 표준품과 반응하

는지, 즉 표시 감도, 미리 결정된 감도를 나

타내는 지를 보이는 시험을 진행합니다. 또

한, 음성물대조는 검액 준비나 시약을 용해

할 때 사용된 물이 엔도톡신에 오염되지 않

았다는 것을 검증합니다.

겔화법에는 양성대조에 사용되는 엔도톡신

에 대해 USP Endotoxin RS를 사용하라는

문구가 있으나, 실제로 업계에서는 LAL 제

조사가 제공하는 성적서에 따라 보다 경제

적인 CSE를 사용합니다.

시험자는 반드시 사용할 CSE와 LAL시약에

대한 감도확인시험 수행을 통해, 성적서 및

판매 회사에서 제공한 설명서에 따라 준비

된 LAL 시약이 해당하는 감도를 보이는지

사전에 확인을 해야 합니다.

BET-광학적방법광학적 방법의 경우 약전에 부합 여부는

USP Chapter <85>에서 있는 용어들을 확

인함으로 알 수 있습니다만, 실제로 업계에

서는 LAL 제조사의 시약설명서(package

insert)를 참고로 합니다. 중요한 광학적 시

험방법에 포함되는 요소로는 샘플, 간섭 조

건을 확인하기 위한 PPC, 시험 물질의 간섭

을 일으키지 않는 조건의 선정, 특정 기준을

만족시키기 위한 표준 직선의 작성, 항온기

능이 있는 분광 분석기기 등이 있습니다.

03

엔도톡신시험법 작성자들은 현명하게도 광학적 방법을 작성하는 과정에서 특정 기

준이나 조건을 제시하지 않았는데요, 예로, 엔도톡신시험법에는 시험과정 중 사용될

튜브 재료에 대해 유리로 사용해야 하는지 혹은 플라스틱 제품으로 사용하는지에

대한 언급이 없으며, 표준 직선의 농도 또한 지정해 준 값이 없습니다. 뿐만 아니라,

onset OD 값 및 측정 파장, 반응 시간, 표준 직선의 회귀분석방법 또한 정해진 것이

없습니다. 엔도톡신시험을 수행하는 시험자는, 광학적 방법에 대해 충분한 실험 기

술력을 가진 LAL 시약 제공자로부터 충분히 시험 교육을 받아 광학적 시험법에 대

해 흔들림 없는 시험법을 개발해야 합니다.

LAL 시약 사용자 또는 엔도톡신시험에 대한 중요한 도전은 카이네틱 LAL 시약

을 위한 감도확인시험의 부재를 극복하기 위한 시험 방법의 개발입니다. USP

Endotoxin RS에 대한 정확한 CSE 스탠다드 값이 없다면, 겔화법과 같이, 시험자는

카이네틱 시약에 의해 얻은 값에 대한 신뢰를 갖지 못할 것입니다. 만일 CSE 표준

품의 값이 너무 과도하게 측정된다면, 샘플 내의 엔도톡신 값은 제 값보다 낮게 측

정될 것이고, 반대로 너무 약했다면, 높게 측정될 것입니다. 엔도톡신시험은 시험자

가 가진 기술력과 적절한 시험 과정, LAL 시약의 품질에 따라 그 정확하고 믿을 수

있는 시험 결과를 얻을 수 있습니다.

광학적방법에 부합하는 LAL 카트리지PTS (Portable Test System)에 사용되는 LAL 카트리지에는 허가 받은 비색시약이

들어 있으며, FDA의 승인을 받은 제품입니다. 그러므로, LAL 카트리지를 이용한 시

험법은 LAL/엔도톡신 반응에 의해 발색 펩타이드가 쪼개져서 발색기가 나타나는

키네틱 비색법으로 분류됩니다.

LAL 카트리지의 특징은 RSE에 의해 미리 만들어진 저장된 표준직선(archieved

standard curve)을 이용한다는 것입니다. 이 내용은 이번 호의 “엔도톡신 측정에

있어 저장된 표준직선(검량선) 사용의 장점”에서 자세히 다룰 것입니다. PTS를 이

용한 저장된 검량선법은 액상의 형태인 시약을 이용하여 표준 직선을 작성하고, 분

석기기의 사용에 의해 발생하는 변이를 제거해줍니다.

LAL 카트리지에 사용되는 표준 직선(검량선)은 표준직선의 각 농도 별로 생산 lot 마

다 5개의 카트리지를 이용해 제작됩니다. 한 종류의 표준 직선(검량선)을 제작할 때,

각 농도 별로 수회 실험한 반복군 중 최저 필요조건을 만족하는 값 10개를 평균 내

어 제작합니다. LAL 카트리지의 상관계수 또한 허용기준은 0.990 이상입니다. 그러

므로, LAL 카트리지는 엔도톡신 시험에서 요구하는 모든 조건을 만족할 뿐만 아니

라 그 이상의 요구 조건을 만족 시킵니다. 엔도톡신시험법에 부합하는 것 외에도, 각

lot의 카트리지에는 양성 대조 실험을 위해 알고 있는 특정 농도의 RSE가 사용됩니

다. FDA의 lot release 전에 정확성을 검증하기 위해 표준 직선의 고, 중, 저의 농도

에서 15개의 반복으로 실험을 진행합니다.

최종 사용자에 의한, LAL 카트리지 표준직선(검량

선)의 검증작업은, 물을 검액으로 사용하여 양성대

조의 회수율 확인을 통해서 이루어지는데, 이 작업

은 저장된 표준직선(검량선)의 감도뿐만 아니라 양

성대조의 회수율을 검증합니다. 광학적 방법에서와

같이, 양성대조의 농도는 표준직선(검량선)의 여러

농도 가운데, 중간 정도의 농도로 제작됩니다.

PTS 시스템에서는 시약을 용해하기 위한 물이 필

요가 없기 때문에 음성대조가 필요 없습니다. 카트

리지 시스템에서는 시험하고자 하는 검액 자체가

시약을 용해하는데 사용됩니다. 그러므로, 물이 필

요하다면, 그것은 유일하게 검액을 희석할 때에만

사용됩니다. 필요한 경우, 처음에 엔도톡신시험을

위한 물을 검증할 수도 있기 때문에, 음성대조의 부

재로 엔도톡신 시험법에 어긋난다는 염려는 따라

서 없습니다.

결론엔도톡신 시험법은 미리 자세히 설명되어 있지는

않으면서, 포괄적이기에 그만큼 강력합니다. 개선

또는 혁신을 억누르고자 하는 의도가 전혀 반영이

되어 있지 않는데, 그 증거로 1980년대 중반에 정

량분석법이 도입되고, 자리잡은 것을 보면 알 수 있

습니다. Endosafe®-PTS/MCS 카트리지 시스템

은 분명히 통합된 엔도톡신 시험법의 연장선에 있

습니다. 이 새로운 기술은 현재 이미 검증되어 있는

시험방법에서 요구하는 모든 조건을 충분히 이행

하고 있으면서, 오히려 더욱 더 빠른 결과와 사용함

에 있어 편리함까지 제공합니다.

04

저장된 표준 직선은 Charles River Endosafe○R - PTSTM

(Portable Test System)의 중요한 구성요소입니다. 또한 Limulus

amebocyte lysate (LAL) 카트리지는 2006년 미국 FDA로부터 매우

세밀한 검토 후 PTS에서 사용하는 것을 목적으로 승인을 받았습니

다. 그런데 저장된 표준 직선의 사용은 LAL 기술에 있어서 새로운

것이 아닙니다. 비탁법(turbitimetric LAL method)에 사용되는 tube

reader의 초기 세대는 이미 저장된 표준 직선법을 위한 기능이 있었

고, 1987년 LAL시험 가이드라인에서도 광학적 시험법에서 저장된

표준 직선의 사용을 간략하게 설명하였습니다.

이러한 기존에 존재했던 견해를 감안하면 왜 꽤 최근까지도 저

장된 표준 직선의 중요성이 축소되었었는지 의문을 가질 수 밖

에 없습니다. 그 한 가지 이유는 최근 20년 간 비탁법이나 비색법

(chromogenic assay)을 위한 kineic microplate reder에 의한 LAL

기술이 우세하였기 때문입니다. 엔도톡신과 LAL 반응의 시간은 열

에 의존하는 것이 두드러진 특징입니다. 그렇기 때문에 초기 세대

마이크로플레이트 리더들의 일정하지 않은 열 공급과 플라스틱 재

질인 폴리스티렌 마이크로 플레이트의 좋지 않은 온도 전달 특성으

로 인하여 많은 시험 결과에 변이를 가져왔고 저장된 표준 직선이

실제 사용되지는 못했습니다.

엔도톡신 표준품 희석액의 onset time은 또한 샘플의 숫자와 실

험자의 기술에 매우 의존적으로 측정 시작 시간의 영향을 받습

니다. 그러나 PTS는 PTS내에서의 정확한 온도 컨트롤과 신속성,

LAL카트리지 안에서의 동시 반응이 저장된 표준 직선을 위한 이

상적인 조건을 만들어냅니다. 통일된 엔도톡신 시험법(Bacterial

Endotoxin Test (BET))은 저장된 표준직선법이 선호되지 않았을

당시 쓰여졌고, 따라서 그러한 이유로 단순히 언급되지 않았습니

다. 이러한 논점에서 PTS는 광학적 표준 직선을 만들기 위한 기준

을 정확하게 충족합니다.

PTS사용상의 가장 큰 장점은 겔화법 LAL시약 판매 시 제조사들이

제공하는 감도 성적서와 유사한 pre-calibrate 된 시스템을 포함하

고 있다는 것입니다. 양쪽 방법에서 최종 사용자는 성적서에 표시

된 양성대조가 회수되는지를 확인하도록 요구됩니다. 예를 들어, 저

장된 표준 직선은 최종 사용자가 LAL카트리지 안에 고정된 positive

control을 재확인 할 때 검증됩니다. 이 pre-calibration은 최종 사용

자가 제조사와 같은 기술과 신뢰도로 LAL측정이 가능하게 합니다.

여기에서는 PTS의 저장된 표준 직선의 장점을 설명하기 위해 구체

적인 수치를 제공하려 합니다. 이러한 목적을 위하여 실시된 이 실

험에서는 먼저 양성 샘플 (Positive Sample)이 준비되었습니다. 각

각의 양성샘플(PS)는 single test vial에 U.S. Reference Standard

Endotoxin(RSE)희석액과 함께 마니톨(mannitol), 염화나트륨을 첨

가제로 넣어 만들어졌습니다. 바이알 간의 재현성은 광학적 비탁법

과 광학적 비색법에 의해 분석된 것으로써 4.2%-6.3%였고, 엔도톡

신 값(Potency)은 대략 0.2-0.3 EU/vial 이었습니다. 시험자는 LAL

Reagent Water (LRW) 1ml을 넣어 희석한 바이알로 양성 샘플을 사

용할 수 있었습니다. 녹인 양성 샘플은 추가의 희석이 없이 사용되

기 때문에 이 시험에서 양성 샘플 조제의 편차는 최소화되었습니다.

이 시험을 위하여 양성샘플의 한 바이알 씩이 매일 용해되었습니다.

Daily endotoxin standard curve는 일본 약전 엔도톡신 표준품

(Endotoxin Standard for the Japanese Pharmacopoeia(JPSE)으

로 0.5, 0.1, 0.02EU/ml 로 준비되었습니다. 녹여진 양성 샘플의 엔

도톡신 값은 매일 제조한 표준 직선에 의해 측정되었고 제조 회사에

의해 증명된 저장된 표준직선법에 의한 엔도톡신 측정값과 비교하

였습니다.

표1은 16개의 각각의 시험법의 결과입니다. 준비된 양성 샘플의 엔

도톡신 값의 평균은 저장된 표준 직선에서는 0.210이었고 매일 표

준직선을 만드는 경우에서는 0.250 이었습니다. Assay No.3에서

매일 표준 직선을 만드는 경우에서 높은 값을 보이고 있습니다. 0.5

LABORATORYNOTEBOOK엔도톡신 측정을 위한 저장된 표준 직선(Archived Standard Curves)의 장점

Masakazu Tsuchiya, Ph.D., Senior Research Scientist, Charles River, 번역 : 류옥경

05

EU/mL에서 표준엔도톡신 희석액의 활성은 16번 실험의 0.5 EU/

mL 희석액 평균의 71%였습니다. 3번의 양성샘플의 엔도톡신 값은

저장된 표준직선에 의해 엔도톡신 값이 148%이기 때문에 평균보다

조금 높을 지 모릅니다.

16개의 개별 시험에 대한 그래프(그림1)에서 또한 다른 것들보다 3

번 양성샘플의 엔도톡신 값이 높다는 것을 시각적으로 설명하고 있

습니다. 바이알 간의 재현성을 고려하면, 매일 표준직선을 만드는

경우에 207%의 percent potency가 나오는 것은 매우 높은 값이라

고 할 수 있습니다. 매일 제조된 표준직선에서의 낮은 표준품 희석

액 준비와 높은 양성샘플의 엔도톡신 값의 조합이 3번에서 매우 높

은 엔도톡신 값을 일으킨 것입니다.

저장된 표준 직선을 사용하는 PTS에 대한 정기적인 측정방법은 이

러한 비정상적인 값을 보이지 않았습니다. 이것은 저장된 표준 직선

방법이 무작위적으로 발생하는 불규칙한 엔도톡신 표준의 활성 변

화에 더 안정적이라는 것을 나타냅니다.

표1에서 3번 시험을 제외한 평균 ASC/DSC는 93%였습니다. PTS

를 가지고 측정한 편차는 JPSE vial을 사용한 것에 대하여 약 10%

정도입니다. 이 측정을 위하여 JPSE 3vial이 사용되었는데 JPSE의

vial 간의 편차도 약간 있습니다. 엔도톡신 시험에서 사용된 표준품

의 편차는 시험이 수행되는 동안에는 사실 알 수가 없습니다.

continued on page 6

(표1 설명) 저장된 표준 직선과 일상의 표준 직선으로 수행한

양성샘플의 16개의 개별 시험 결과

● 1,2,4번 시험에서 Mean ASC/DSC는 93%임.

● 3번 시험을 제외한 양성샘플의 Mean potency는 0.232EU/mL.

● PS% : 16개 시험의 평균을 100%로 보았을 때 양성샘플의

엔도톡신 값의 백분율.

● ASC/DSC: 일상의 표준 직선 대비 저장된 표준 직선에서의

양성샘플의 엔도톡신 값의 비율

저장된 표준 직선과 일상의 표준 직선으로 수행한 양성샘플의 16개의 개별 시험 결과 (표1)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

82%

86%

60%

111%

89%

75%

75%

81%

91%

88%

78%

94%

107%

89%

80%

94%

116%

80%

207%

91%

79%

98%

118%

77%

85%

93%

89%

87%

71%

108%

104%

96%

0.289

0.199

0.517

0.228

0.198

0.245

0.296

0.192

0.213

0.232

0.223

0.218

0.177

0.270

0.261

0.239

113%

82%

148%

121%

84%

88%

106%

74%

92%

97%

84%

98%

91%

114%

100%

107%

0.236

0.171

0.311

0.254

0.177

0.184

0.223

0.156

0.193

0.203

0.175

0.206

0.190

0.239

0.210

0.225

85%

80%

90%

Vial# 1

Vial# 2

Vial# 3

NoArchived Standard Curve

PS (EU/mL) PS (EU/mL)PS% PS%

Daily Standard CurveASC/DSC Mean

ASC/DSC JPSE

MeanSDCV

86%12%14%

100%0.31632%

0.2500.07932%

100%0.18418%

0.2100.03818%

06

저장된 표준 직선에서의 측정 편차는 저장된 표준 직선의 작성을 위

한 엔도톡신 표준 희석액에 의해서 발생되고 한 카트리지 lot 안에서

는 일정합니다. 전통적인 광학적 표준 직선에서의 측정 편차는 엔도

톡신 표준 희석액의 엔도톡신 값과 시험자의 기술에 의존하기 때문

에 변하기가 쉽습니다. 편차의 정도는 결정하기 어렵지만 경향분석

이 유용한 도구가 될 수도 있습니다. 그러나 저장된 표준 직선법은

이에 반해 매일 표준 직선을 만드는 방법에서 시험법의 절차가 잘

통제된다 할지라도 더욱 더 신뢰할 만합니다.

마이크로플레이트 리더는 측정의 시작 시점이 마이크로플레이트 전

체에 일관적이지 않기 때문에 저장된 표준 직선을 만드는 데 적합하

지 않습니다. 반면 Charles River PTS는 샘플/LAL시약의 준비와 혼

합 시간이 PTS reader에 의해 통제되고 온도 컨트롤이 우수하므로

저장된 표준 직선법을 위한 이상적인 도구입니다.

Pre-calibration은 PTS system 내에서의 저장된 표준직선의 정확성

을 위한 핵심입니다. 이 직선은 LAL Test에 숙련되고 경험 많은 전

문가가 있는 LAL 제조사에 의해 만들어집니다.

제조사의 QC laboratory는 불규칙적인 endotoxin standard potency

변화를 찾아내고 제거할 수 있도록 훈련되어 있습니다. 바꾸어 말하

면, PTS의 전체적인 신뢰성은 저장된 표준직선의 신뢰성으로 인해

서 매우 높다는 것입니다.

결론적으로 이 실험 결과들은 PTS가 가진 저장된 표준 직선을 만드

는 방법의 장점을 뒷받침하고 있습니다. 제조사가 검증한 저장된 표

준 직선법은 엔도톡신 표준 희석액의 준비에있어서 부주의한 시험

오차의 위험을 고려하면 전통적인 광학적 LAL 시험법 보다 더욱 신

뢰할 수 있는 결과를 보여줍니다. LAL 카트리지는 저장된 표준 직

선의 사용을 위한 이상적인 조건을 만들어냅니다.

0.005EU/mL의 감도를 20분 이내에 시험 할 수 있습니다!

0.005EU/mL의 감도에 대해 20분 내에 시험 할 수 있는 Endosafe-PTS 카트리지가 출시 되었

습니다. FDA 승인 제품인 카트리지는 Endosafe-PTS Portable Spectrometer를 이용하여 LAL

시험을 수행 하는데 필요한 모든 시약이 미리 카트리지 안에 들어 있습니다. 필요시 0.005EU/

mL의 감도는 더 많은 희석배수를 허용해 제품의 간섭 현상을 극복하는데 도움을 줍니다. 정량

분석 결과는 스크린에 표시되며 또한 중앙정보처리 시스템으로 다운 받을 수 있습니다.

30분 내에 글루칸의 오염을 측정할 수 있습니다 !

Endosafe-PTS Glucan 시험법은 제품이 (1,3)-beta-D-glucan에 오염되지 않았는지를 검사

하기 위한 목적으로 고안된 빠른 시험법입니다. 글루칸은 대부분의 yeast나 mold의 세포벽에

서 발견되는 분자입니다. 글루칸은 세포배양 용액, 이스트 단백제품, 공기질 측정용 샘플과 셀

룰로스 재질의 필터를 오염시키고, 이것은 LAL 반응에서 위양성의 결과를 일으켜, OOS의 상황

을 야기 시킵니다. 글루칸 카트리지는 10-1,000pg/mL의 범위의 민감도를 가지고 30분 내에

결과를 얻을 수 있습니다. 또한 동일한 Endosafe-PTS 장비를 이용하여 엔도톡신시험, Gram

Identification 뿐만 아니라 이 글루칸 시험도 병행 할 수 있습니다.

LABORATORYNOTEBOOKContinued from page 5

A vendor-certified archived standard method is more reliable than traditional kinetic LAL methods, considering the risk of the inadvertent errors in the preparation of the endotoxin standard dilutions.

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Charles River Laboratories Korea News1. 사무실을 확장 이전하였습니다. 기존의 주소 6층에서 2층으로 변경되었습니다. 기존의 6층은 계속해서 세미나 공간과 실험실로 사용되고

있습니다. 우편물 등은 2층으로 보내주십시오.

2. 2010년 5월 18일 서울교육문화회관에서 대규모 세미나를 개최할 예정입니다. 초대장과 참가 신청서를 함께 보내드립니다. 참가를 원하

시면 신청하여 주시고 문의사항 있으시면 02)2057-5200 류옥경 대리(내선 201)에게 연락주시기 바랍니다. 장소 여건상 인원 제한이 있

을 수 있습니다. 빠른 신청을 부탁드립니다.

3. 2010년 4월 영업을 담당할 직원을 충원하였습니다. 배조천 대리와 더불어 함께 영업을 수행할 직원을 소개합니다.

백승대 010-6395-5202, seungdae.baek@crl.com

4. 고객님들의 편의를 위해 각 업무 담당자를 소개합니다.

■ 대표번호 02)2057-5200

■ 영업 담당:배조천 대리(010-3792-5201), 백승대 (010-6395-5202) ■ 실험 및 기술 문의:박혜민 과장 (내선203)

■ PTS 및 장비 기술지원 : 류옥경 대리 (내선201) ■ 주문 및 고객 지원:신기현 대리 (내선205), 윤지선 (내선206)

문의가 있으시면 전화나 메일로 가능하며, 관련 문의는 endo-asia@crl.com으로 하시면 빠른 답변을 받으실 수 있습니다.

5. 비정기적으로 기술지원을 위한 소규모 워크샵을 진행하고 있습니다. 워크샵 일정은 www.criver.co.kr 에서 확인 하실 수 있습니다. 겔화

법 과정과 정량 분석법 과정이 각 1일씩 진행되며, 이론 교육과 실습을 하고 있습니다. 찰스리버 고객에 한하여 무상으로 진행하며 소수

로 진행하므로 미리 예약 부탁드립니다.

약전에 기술된 엔도톡신 시험법의 예비시험은 최초로 미국 식약청의 LAL 시험법

가이드라인에 상술된 시험자, 시약 실험실에 대한 적격성 시험과 비슷합니다. 광

학적시험법의 예비시험에 보면, USP는 다음과 같이 말하고 있습니다.

표준 엔도톡신용액을 이용하여, 적어도 세 개의 엔도톡신 농도를 준비하여 표준

직선을 만듭니다. 각 표준 엔도톡신 농도에 대하여 적어도 세 반복으로 LAL 시약

의 제조자 설명서에 따라 시험합니다.

유효성 평가의 기준은 USP에 다음과 같이 기술되어 있습니다.

“상관계수의 절대값, |r|, 이 0.980 보다 크거나 같아야 한다.”

LAL 카트리지 시스템에 대한 저장된 표준직선의 기준은 이 보다 더 엄격합니다. 각 표준 농도에 사용된 반복수는 10이고, 상관계

수의 절대 값은 0.990 보다 크거나 같습니다.

카트리지 시험 시스템을 이용하면 더 이상 시험자가 표준직선을 준비하는데 숙련될 필요가 없습니다. 따라서, FDA 승인을 받은 시

약의 사용설명서에는 초기 적격성 시험에 대하여 카트리지 시스템에 적용되는 적격성 시험법을 다음과 같이 기술하고 있습니다.

새로운 lot의 카트리지는 입고 시 적격성을 시험한다. 최초의 적격성 시험은 하나의 카트리지를 LAL 시험용 물을 샘플로 하여 시험

한다. 평가의 기준은 엔도톡신이 검출되지 않아야 하고, 회수율이 수용범위(50~200%)에 있어야 한다.

즉, LAL 카트리지 시스템을 이용하여 LAL 시험을 수행하기 위해서는 시험자는 단순히 오염을 피해 정확히 파이펫팅 할 수만 있으

면 됩니다.

LAL POINTERS