Diagnosticul Bacteriologic in Sifilis

  • View
    32

  • Download
    7

Embed Size (px)

DESCRIPTION

medcina

Text of Diagnosticul Bacteriologic in Sifilis

DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC IN SIFILIS

DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC IN SIFILISSpecii din Genul Treponema, de interes medical:

1. Treponeme patogene pentru om: care produc boli endemice, cu transmitere sexuala:

Treponema pallidum: agentul etiologic al sifilisului venerian,

2. Treponeme saprofite: Tr. genitalis, Tr. microdentium, Tr. mucosum etc.

Treponema pallidum este un parazit exclusiv al omului, care nu se intalneste in mediul exterior, avand o rezistenta extrem de redusa.Transmiterea veneriana reprezinta calea aproape exclusiva de contagiune interumana pentru sifilis.Structura antigenica:

1. haptena Wassermann: apartine unor fractiuni lipoidice (antigen lipoidic ubiquitar), identificate in tesuturi umane sau animale (miocard, SNC), dar exista si lipoizi specifici treponemici, lipoidul ubiquitar este extras si din cord bovin (cardiolipina), utilizat ca antigen netreponemic, in diagnosticul serologic de rutina al sifilisului,2. antigen proteic de grup, comun genului Treponema (se extrage din Treponema Reiter, tulpina obtinuta in laborator, in conditii de anaerobioza, utilizata pentru extragerea componentelor antigenice utile in diagnosticul serologic al sifilisului/ RFC),

3. antigen poliozidic de grup (specific Treponemei pallidum, util in testul de imunofluorescenta (IF),

4. antigen somatic treponemic (util in testul Nelson de imobilizare a treponemelor/ TIT).Detectarea si identificarea treponemelor patogene

1. Sifilis primar: examen bacteriologic direct din serozitatea sancrului dur, aspirat ganglionar, biopsie leziune primara,2. Sifilis secundar: exudat din leziuni specifice (placi mucoase), biopsii,3. Sifilis tertiar: LCR (neurosifilis), piese bioptice sau necroptice,

4. Sifilis congenital: prelevate din cordon ombilical, placenta, secretii nazale, leziuni cutanate.

Diagnosticul bacteriologic direct:1. Microscopia directa:

metoda ce permite un diagnostic rapid, necostisitor, in forme precoce de boala,

treponemele patogene pot fi vizualizate numai la microscopul cu fond intunecat sau prin coloratie imunofluorescenta,

Microscopia in camp intunecat:

probele trebuie examinate in maxim 20 min, pentru a pastra viabilitatea treponemelor,

se evita antrenarea hematiilor, resturilor celulare, microorganismelor contaminante,

serozitatea exprimata la suprafata leziunii se recolteaza prin amprentare pe lama de sticla sau prin capilaritate (prin aspirare cu o pipeta Pasteur), prelevatul este aplicat pe lama si acoperit cu lamela, apoi examinat la microscop cu camp intunecat, cu obiectiv de 40X,

Treponema pallidum: apare sub forma de spirochete fine, caracterizate prin miscari de insurubare sau flexie rigida si brusca,

demonstrarea prezentei treponemelor cu morfologie si miscari caracteristice, constituie un diagnostic pozitiv pentru leziunile sifilitice precoce,

pacientii cu leziuni primare, in fazele incipiente, au teste serologice negative, iar aceasta metoda permite aplicarea precoce a tratamentului antibiotic, un rezultat microscopic negativ nu exclude infectia treponemica: numar insuficient de microorganisme, tratament intercurent cu antibiotice, leziuni pe cale de vindecare, tehnica microscopica defectuoasa.Fig. 1: Treponema pallidum, microscopie in camp intunecat

Microscopia fluorescenta (DFA-TP: Direct Fluorescent Antibody test pentru Treponema pallidum): test microscopic standard pentru sifilis, alternativa practica la microscopia cu camp intunecat, tehnica utilizeaza anticorpi monoclonali cuplati cu substanta fluorescenta, strict specifici pentru Treponema pallidum,

DFA- TP este cea mai specifica tehnica pentru evidentierea T. pallidum in exudate sifilitice, LCR, piese bioptice (piele, ganglioni, cordon ombilical, placenta etc) sau necroptice (creier),

Evidentierea T. pallidum in tesuturi reprezinta un diagnostic definitiv in sifilis,

Fig. 2: Treponema pallidum- imunofluorescenta (conjugate monoclonale fluorescente):

2. Metode de biologie moleculara: reactia de amplificare genica, PCR: testele nu sunt inca standardizate,

amplificarea genei care codifica antigenul de suprafata imunodominant (47 kDa), pentru diagnosticul sifilisului neonatal (lichid amniotic, LCR, ser),

amplificarea genei care codifica proteina membranara de 39 kDa, utilizata pentru diagnosticul neurosifilisului (testul detecteaza ADN din treponeme viabile in LCR sau ADN rezidual, rezultat din microorganismele moarte in urma aplicarii tratamentului),

tehnica de tip Multiplex- PCR 9amplificare simultana a doua sau mai multe fragmente ADN), PCR va deveni unul din testele de electie pentru diagnosticul sifilisului congenital, neurosifilisului, sau sifilisului primar, precoce.

Fig 3: RT- PCR in diagnosticul molecular al sifilisului:

3. Testul de infectivitate pe iepure (RIT/ Rabit Infectivity Testing):

inocularea prelevatului patologic se face intradermic sau intratesticular la iepure,

acest test este inalt specific (identifica T. pallidum) si cel mai sensibil pentru diagnosticul sifilisului (poate detecta doar cateva treponeme vii), testul este dificil tehnic, foarte costisitor, necesita pana la 3 luni pentru obtinerea rezultatului,

este utilizat numai pentru cercetare si ca test de referinta in evaluarea altor teste de diagnostic.

Diagnostic bacteriologic indirectDiagnostic serologic:1. Teste cu antigene netreponemice, cardiolipinice:

utilizeaza ca antigen extracte lipoidice nespecifice, extract alcoolic purificat din muschi de cord bovin, numit cardiolipina; evidentiaza anticorpii antilipoidici,

a) Reactia de floculare VDRL (Venereal Disease Research Laboratory),

Principiu: VDRL foloseste un antigen care contine cardiolipin lecitina si colesterol, pentru a pune in evidenta, prin aparitia unor grunji de dimensiuni microscopice, anticorpii antilipoidici, testul poate fi calitativ sau cantitativ,

Indicatii: test de screening in diagnosticul sifilisului,

in monitorizarea terapiei antibiotice,

evidentierea anticorpilor antilipoidici in LCR (sensibilitate redusa)