“Determinación comparativa, de especificidad y sensibilidad, de técnicas Inmunohistoquímicas Herceptest y Cerb2, en pacientes con cáncer de mama infiltrante;

“Determinación comparativa, de especificidad y sensibilidad, de técnicas Inmunohistoquímicas Herceptest y Cerb2, en pacientes

con cáncer de mama infiltrante; experiencia en laboratorio Histomed, Viña del Mar, Chile”

Autores: Melissa Jiménez Onell Saúl Silva Miranda

Profesor Guía: T. M. Francesca Norero PinedaProfesor Co Guía: Dr. Raúl González Álvarez

Abril 2012

1. Marco Teórico1. Marco Teórico

2. Objetivos2. Objetivos

3. Materiales y Métodos3. Materiales y Métodos

4. Resultados de la investigación4. Resultados de la investigación

5. Discusión5. Discusión

6. Conclusiones6. Conclusiones

7. Bibliografía7. Bibliografía

1.1. Mama: Anatomía1.1. Mama: Anatomía

El tejido glandular mamario esta constituido por 15 a 20 lóbulos, separados por tejido adiposo y formados por varios lobulillos.

(Geneser, 1987).

Compuestas de piel, tejido fibroadiposo, tejido glandular y tejido conjuntivo.(Gonzáles et al, 2006).

“Atlas de Anatomía Humana Netter,1999”

“Atlas de Anatomía Humana Netter,1999”

Irrigación sanguínea:- Ramas de la arteria mamaria interna, torácica lateral,

intercostales y tóraco-abdominal.(Gonzáles et al, 2006).

Drenaje venoso:- venas intercostales, mamarias internas, ácigos.

(Lombardía y Fernández, 2007). Drenaje linfático:- vía axilar (97%): 20 a 30 ganglios aproximadamente. - Grupo pectoral, interpectoral y apical.- Además vía mamaria interna y vías accesorias

linfáticas.(Lombardía y Fernández, 2007).

Lobulillos rodeados por estroma laxo, mixoide y con capacidad de responder al estimulo hormonal.

(Cotran et al, 2000).

Estroma fibroconectivo y tejido adiposo. (Cotran et al, 2000).

Epitelio escamoso estratificado, Epitelio cilíndrico simple, Epitelio cúbico.

(Gonzáles et al, 2006)

“http://www.uv.es/histomed/practicas/02-epglan/02-epglan.htm”

“Atlas de histología Geneser,1985”

1.2. Mama: Histología1.2. Mama: Histología

Patología Benigna

1.3. Mama: Patología1.3. Mama: Patología

Neoplasias Benignas Neoplasias Malignas

Aplasia, amastia, macromastia, ginecomastia, mama ectópica, mastitis, ectasia ductal, esteatosis traumática, Ginecomastia.

(Stevens, 2001)

Ginecomastia.“Histopatología básica, Wheater” Hiperplasia Ductal. “Histopatología básica, Wheater”

Epiteliales: adenoma, papiloma intraductal.

Fibroepiteliales: Fibroadenoma, Cistosarcoma Filodes, Hamartoma, hiperplasias.

(Stevens, 2001)

Tumores Epiteliales No Invasivos:Carcinoma lobulillar in situCarcinoma ductal in situ

Tumores Epiteliales Invasivos•Carcinoma lobulillar infiltrante•Carcinoma mucinoso o coloide•Carcinoma ductal infiltrante

(Stevens, 2001)

Carcinoma lobulillar in situ

20% incidencia. Ambas mamas, 50%-70% no palpable. Células anillo de sello.

(Cotran et al, 2000)

“Servicio de Anatomía Patológica del Hospital General Obispo Polanco 2010 “

Carcinoma ductal in situ

“Histopatología básica, Wheater”

1.3.3. Neoplasias malignas1.3.3. Neoplasias malignas

80% incidencia. Precursor de invasión, 30%. No palpable (excepto comedo), multifocal. Comedocarninoma, sólido, cribiforme,

papilar y micropapilar.(Diaz y Ruibal, 2006)

Tumores epiteliales no invasivos

10% incidencia. Células pequeñas, uniforme. Infiltración lineal, concéntrica. Células con núcleo ovoide.

“Histopatología básica, Wheater”“Histopatología básica, Wheater”

1.3.3. Neoplasias malignas1.3.3. Neoplasias malignas

Carcinoma lobulillar infiltrante Carcinoma ductal infiltranteCarcinoma mucinoso o coloide

2%. Posmenopáusicas. Blando, viscoso. Bien diferenciado.

79%. Fibroso (escirroso). Palpable,

microcalcificaciones. Invasión en cordones y

masas.

“Histopatología básica, Wheater”

Tumores epiteliales invasivos

Neoplasia maligna mas frecuente en occidente. 700.000 casos cada año. 30% descenso en mortalidad. Aumento 5% en países subdesarrollados.

1.4. Cáncer de Mama: Epidemiología1.4. Cáncer de Mama: Epidemiología

1995 inicio programa nacional cáncer de mama (pesquisa temprana).

Casos diagnosticados hasta año 2009: casos in situ (8.6%); casos estadios I-II de 46.7% a 69.4%; disminución de casos etapa IV en 72.2%.

Incidencia Mundial Incidencia Nacional

2000-2009: disminución de 37.3% en casos de mujeres menores de 35 años; aumento de 15.4% en mujeres de 55 a 64 años; aumento de 43.2% en mujeres con más de 75 años.


1º causa mundial de muerte en la mujer. Año 2008: en chile 2º lugar (14,5%) de muertes por cáncer en la mujer después del cáncer de vesícula y vías biliares. Año 2008: Magallanes (22,7%), Viña del Mar-Quillota (20,6%), Valparaíso-San Antonio(18,6%), mayor mortalidad.


Mortalidad

Para identificar grupos de alto riesgo. (Burke et al,

2003)

Clasificación:

1. Factores no genéticos.2. Hormonas Exógenas.3. Factores dietéticos.4. Radiaciones ionizantes.5. Tabaquismo.6. Lesiones Precursoras Previas.

1.5. Cáncer de Mama: Factores de riesgo1.5. Cáncer de Mama: Factores de riesgo

Hiperplasias epiteliala. Hiperplasia ductal típica (Cancer risks in BRCA2 mutation Carriers, 1999).

b. Hiperplasia ductal atípica: simula CDIS (Krieger et al, 1992).

Lesiones lobulillaresa. hiperplasia lobulillar atípica (4 veces mas riesgo) (Page et al, 1985).

b. carcinoma lobulillar in situ (10 veces mas riesgo) (Connolly et al, 1993).

7. Factores Genéticos

Genes BRCA 1/BRCA2:

BRCA1 mutado en 1% de población general (Newman et al,

1998) y en 20%-30% de población de alto riesgo (Couch et al, 1997).

BRCA1 mutado 87% frecuencia Cáncer de mama (Ford et al, 1995) .BRCA2 mutado 84% frecuencia Cáncer de mama (Ford et al, 1998) .

BRCA1 mutado y diagnóstico previo de cáncer de mama con riesgo de segundo primario(40%-65%). (Easton et al, 1995)

BRCA2 mutado y diagnóstico previo de cáncer de mama el riesgo es de 50%. (Cancer risks in BRCA2 mutation Carriers, 1999)

1.5. Cáncer de Mama: Factores de riesgo1.5. Cáncer de Mama: Factores de riesgo

1. Nivel primario: examen físico, mamografía y ecotomografía.

2. Nivel secundario (UPM) : histopatología (biopsia).

3. Nivel terciario: comité oncológico para evaluación tratamiento. (MINSAL,2011).

1.6. Cáncer de Mama: Diagnóstico y Tratamiento

1.6. Cáncer de Mama: Diagnóstico y Tratamiento

1. Terapia locorregional: Cirugía conservadora, Cirugía no conservadora y Radioterapia.

(Sánchez et al, 2008).

2. Terapia sistémica: Quimioterapia, Hormonoterapia (anti estrógenos, progestágenos e inhibidores de la aromatasa). (MINSAL,2011).

http://mastologica.com/htmls/CO.html

http://www.clinicadam.es/temas-de-salud/imagenes/17016.html

Diagnóstico

Tratamiento

http://es.globedia.com/test-genetico-permite-identificar-pacientes-beneficiaran-quimioterapia-cancer-mama

Factores Pronósticos : Características del tumor utilizados para predecir la historia natural de la neoplasia, recidiva y sobrevida de las pacientes (Pérez et al, 2008) en ausencia de un tratamiento adyuvante (Domínguez et al, 2001).

Factores Predictivos : Respuesta o falta de respuesta a un tratamiento en particular (Hurtado et al, 2004).

1. Categoría I: tamaño tumoral, afectación ganglionar (axilar, centinela, supraclaviculares y mamaria interna), micro-metástasis, tipo histológico, grado histológico (Elston y Ellis), clasificación tumoral (TNM), receptores hormonales.

2. Categoría II: Her2, P53, invasión vascular y linfática, Ki67.

3. Categoría III: Ploidía, catepsina D, angiogénesis, EGFr, Bcl-2, PS2.

1.7. Cáncer de Mama: factores pronósticos y predictivos1.7. Cáncer de Mama: factores pronósticos y predictivos

http://wdict.net/es/gallery/receptor+de+estr%C3%B3geno/

Bottino y Lanari, 2010

1.8. Cáncer de Mama: receptores hormonales 1.8. Cáncer de Mama: receptores hormonales

Fisiología mamaria regulada por estimulo hormonal; estrógenos (crecimiento ductal) y progesterona (desarrollo lobulillar).

(Díaz-Faes y Ruibal, 2006)

Proteínas de superficie nuclear (receptores de estrógenos (RE) y progesterona (RP).

(Bellido, 1999) REα: en mama, útero, ovarios. REβ: ovario, endotelio. (Noriega y Langley, 2008)

Funciones: estimulación mitosis y diferenciación mamaria, respectivamente.

15-30% de expresión de REα en células epiteliales mamarias.

REβ en células estroma mamario. RPA y RPB: modificación células del estroma

mamario. (Malgor y

Valsecia)

55%-65% de canceres primarios y 45%-55% de metástasis son positivos a marcación de RE .

(Hurtado et al, 2004)

45%-60% canceres primarios y metástasis son RP positivos. Expresión positiva RE : Buen pronóstico (Monroy, 2002), mejor diferenciados. Expresión negativa RE: Mal diferenciados, mayor recurrencia.

Pacientes RE+/RP+ : 77% responde a tratamiento. Pacientes RE+/RP- : 27% responde a tratamiento. Pacientes RE-/RP+ : 46% responde a tratamiento. Pacientes RE+/RP+ : 11% NO responde a tratamiento. (Cammarata, 2008)

1.8. Cáncer de Mama: receptores hormonales y cáncer de mama

1.8. Cáncer de Mama: receptores hormonales y cáncer de mama

1.9. Oncogén Her2: Biología y Expresión celular de Her2

1.9. Oncogén Her2: Biología y Expresión celular de Her2

Her2/neu(ERBB2): Oncogén identificado por transfección de etilnitrosourea a células de neuroblastoma.

Ubicación en cromosoma 17 q21.

Codifica proteína transmembrana.

Dominio extracelular (unión a FC).

Dominio intracelular con actividad tirosin-quinasa (fosforilación).

(Bargmann et al, 1986)

Dimerización de proteína activa fosforilación. (Hynes y Lane, 2005)

1.9. Biología y Expresión celular de Her21.9. Biología y Expresión celular de Her2

cADN de oncogén neu: codifica proteína transmembrana semejante a proteína de oncogen v-erb-b (EGFR), de ahí su denominación c-erb-2 o HER2.

(Yamamoto et al, 1986)

Familia de receptores EGFR: HER-1, HER-3, HER-4, pero desconocido HER-2. HER2 se activa por formación de heterodímeros (mayor estimulación celular que

homodímeros). (Ross et al, 1999)

(Ross et al, 1999)

1.9. Significado biológico de la activación de Her2 en cáncer de mama


1897 por Slamon y cols lo asociaron con tiempo de recaída y sobrevida libre de la enfermedad.

Amplificado en 20%-30% de cánceres.

Amplificación génica de her2/neu en: tumor agresivo, resistencia a quimioterapia y terapia hormonal, asociado a pronósticos desfavorables

(Slamon et al ,1989) Peor pronóstico en metástasis ganglionares.

Valoración de tumores sensibles a Adriamicina, resistentes a Tamoxifen y derivación a trastuzumab

(Naber et al, 1990).

http://www.dfarmacia.com/farma/ctl_servlet?_f=37&id=13034839

Evolución en detección de nuevos marcadores: Proto-oncogén Her2/neu (Human Epidermal growth factor Receptor-2).

Relación inversa con expresión de RH:

29,4% amplificación RE-/RP- ; RE+/RP- (Medicina UPB, 2010)

Amplificación Her2 49,1% RE + Sin amplifiación Her2 78,17% RE + (Lal et al, 2005)

Amplificación Her2 24,3% RP + Sin amplificación Her2 53,1% RP + (Lal et al, 2005)



“HER2-Positive Breast Cancer: Current Standards and Future Directions. (Khan, 2006) vol 1. Num 1”



Otras técnicas de identificación:

Sourthern blot, Spot blot, PCR, IHQ (Inmunohistoquímica), FISH (hibridación fluorescente in situ) y CISH (hibridación cromogénica in situ).

FISH y CISH, morfología y sobrexpresión, sensibilidad 98% y especificidad 100%. El exceso de copias gen HER2, da un aumento de ARNm y finalmente aumento de

proteínas codificadas por HER2. Por lo anterior, estudio ADN, ARNm o proteínas. (Hanna et al, 1999)

Métodos aprobados por la FDA: IHQ (proteína), FISH (amplificación gen) (Medicina UPB, 2010)

1.10. Trastuzumab (Herceptin)1.10. Trastuzumab (Herceptin)

Aprobado en 1998 por la FDA. Administración por 12 meses. Mejora pronóstico, sobrevida, reduce recidivas. Denis Slamon año 2001 estudió beneficio de terapia

con Trastuzumab y quimioterapia: 50% mayor respuesta, 22% menos muertes en un 1 año.

Piccart año 2005 estudió adyuvancia Herceptin luego de quimioterapia, disminución 50% recurrencia.

Anticuerpo monoclonal tipo IGGI Kappa con región susceptible de actuar como ligando del receptor para HER2.

Estimula sistema inmune de la paciente. Bloquea los receptores her2 impidiendo su unión a los

factores de crecimiento epidermal (EGF).

Técnica Cerb2

Ensayo semicuantitativo. Anticuerpo primario policlonal anti

oncoproteína Her2, conjugado Her2-Her1 y conjugado Her2-Her3, humano (Dako. pharmDx™ Kit).

Anticuerpo diluido 1:50 en buffer PBS. Tejido fijados en formalina y

embebidos en parafina. Interpretación del resultado de la

muestra se basa en la intensidad de la tinción, el porcentaje de células marcadas y continuidad de tinción de la membrana.

1.11.Técnicas de detección Her2: Inmunohistoquímica1.11.Técnicas de detección Her2: Inmunohistoquímica

Técnica Herceptest Dako

Ensayo semicuantitativo. Anticuerpo primario monoclonal anti

oncoproteína her2 humano (Dako. pharmDx™ Kit).

Anticuerpo diluido 1:50 en buffer PBS Tejido fijados en formalina y

embebidos en parafina. Interpretación del resultado de la

muestra se basa en la intensidad de la tinción, el porcentaje de células marcadas y continuidad de tinción de la membrana.

Derivación a tratamiento con Herceptin (Trastuzumab).

Score Sobrexpresión de Her2 Patrón de tinción

0 NegativoNo se observa tinción o la tinción de membrana es observada en

menos del 10% de las células tumorales

1+ NegativoLeve tinción de membrana detectada en mas del 10% de las células tumorales. Las células exhiben coloración incompleta de membrana

2+ Débilmente positivoDébil a moderada membrana completa es observada en mas del

10% de las células tumorales.

3+ Fuertemente positivoTinción fuerte y completa de membrana es observada en mas del

10% de las células tumorales

1.11. Técnicas de detección Her2: Inmunohistoquímica1.11. Técnicas de detección Her2: Inmunohistoquímica

1.11. Técnicas de detección Her2: Inmunohistoquímica1.11. Técnicas de detección Her2: Inmunohistoquímica

http://latestbreastcancer.blogspot.com/2011/05/her2-part-4-how-doctors-determine-if.html

Determinación cuantitativa de amplificacion de gen Her2.

Casos derivados a tratamiento con herceptin (2+, 3+). sonda CEN-17 PNA marcada con fluoresceína (verde). sonda de ADN Her2 marcada con un fluorocromo (rojo). Los resultados de FISH: NA: no amplification; LA: low

amplification y HA: high amplification.

1.12. Hibridación in situ de fluorescencia (FISH) para detección de Her2

1.12. Hibridación in situ de fluorescencia (FISH) para detección de Her2

Estudio de 360 casos año 2004 Mrozkowiak et al (Arena et al, 2010) :

Casos 0/1+ : sin amplificación.Casos 3+ : 90% con amplificación de Her2.Casos 2+ : mayor diferencia, 80% sin amplificación.

1.12. Comparación FISH e IHQ1.12. Comparación FISH e IHQ

http://www.dako.com/28633_04may10_herceptest__brochure-9086.pdf

2. Objetivos2. Objetivos

1. Comparar, a partir de un estudio estadístico, la especificidad y sensibilidad de cada técnica Inmunohistoquímica, utilizada para el diagnóstico en muestras de pacientes con carcinoma de mama infiltrante en laboratorio Histomed, Viña del Mar.

2.1. Objetivo General2.1. Objetivo General

1. Estandarizar protocolos Herceptest y Cerb2 a un modo cerrado, manteniendo su calidad y reproducibilidad. Permitiendo realizar el estudio comparativo en condiciones similares.

2. Relacionar sensibilidad (intensidad) con especificidad (marcaje), de cada reacción Inmunohistoquímica, de tal manera encontrar si son proporcionalmente similares en su expresión.

3. Interpretar la sensibilidad y especificidad de Herceptest y cerb2, en condiciones similares para la expresión de Her2.

4. Examinar la expresión de estrógeno versus progesterona en patología infiltrante mamaria, bajo perspectiva de la expresión de Her2.

5. Establecer el mejor resultado según el número de pacientes candidatas a tratamiento efectivo basados en resultados de Cerb2 y Herceptest.

6. Analizar datos sobre patologías mas frecuentes, rangos edad de incidencia y metástasis, en presencia de expresión de Her2.

2.2. Objetivos específicos2.2. Objetivos específicos

3. Materiales y Métodos3. Materiales y Métodos

Dependencias laboratorio Histomédica Ltda., el cual consta con implementación requerida para realizar técnicas Inmunohistoquímicas.

Kit de técnicas Inmunohistoquímicas Herceptest y Cerb2 suministrados por el laboratorio patrocinador.

107 muestras, correspondientes a pacientes del año 2009 a 2011, en rango de edad entre 31 y 87 años, con asistencia médica en el Hospital Gustavo Fricke, de Viña del Mar, que presentan patología cancerígena infiltrante mamaria.

3.1. Materiales3.1. Materiales

Obtención de datos/muestras:

Selección muestras70 muestras correspondientes al 65,42% del total de casos presentados serán evaluadas en este estudio estadístico comparativo. Siendo descartadas 37 muestras ligadas al 34,58% del total presentado, las cuales son casos de carcinoma in Situ, que se realizaron a petición del médico Oncólogo.

•Criterios de inclusión

Muestras obtenidas por tumorectomía o mastectomía de pacientes con diagnóstico de carcinoma infiltrante de mama.

•Criterios de exclusión

Muestras de pacientes obtenidas por biopsias Core y aquellas con diagnóstico de carcinoma In situ, además de patologías asociadas que ocasionen falsos positivos como la hepatitis tipo B.

3.1. Materiales3.1. Materiales

3.2. Método3.2. Método

Procesamiento de muestras

1.Fijación.2.Procesamiento.3.Inclusión.4.Corte.5.Tinción.6.Técnica IHQ: Herceptest – Cerb2.

Cerb2 Protocolo Original (DAKO®) Cerb2 Protocolo Modificado

Desparafinar e hidratar hasta el agua. Desparafinar e hidratar hasta el agua

Recuperación antigénica 15 minutos Recuperación antigénica 40 minutos

Enfriar placas 10 minutos Enfriar placas 20 minutos

Lavado agua destilada 20 segundos Lavado en buffer PBS 5 minutos

Bloqueo peroxidasa 10 minutos Bloqueo peroxidasa 5 minutos

Lavado buffer PBS 20 segundosLavado agua destilada 2 minutos

/lavado buffer PBS 2 minutos

Anticuerpo primario 20 minutos Anticuerpo primario 30 minutos

Lavado buffer PBS 20 segundos Lavado buffer PBS 2 minutos

Polímero marcado 15 minutos Polímero marcado 30 minutos

Lavado agua destilada 20 segundos Lavado buffer PBS 2 minutos

Cromógeno AEC 10 minutos Cromógeno AEC 10 minutos

Lavado agua destilada 20 segundos Lavado agua destilada 2 minutos

Contraste hematoxilina 30 segundos Contraste hematoxilina 30 segundos

Viraje Viraje

Montaje acuoso Montaje acuoso


•Evaluación presencia receptores hormonales

Criterios para positivo en Receptores Hormonales

Score control para

línea celular REScore control para

línea celular RPScore intensidad

Basado en escala (0-3) 2-3 2-3


•Evaluación presencia receptores hormonales

Score Total (sumatoria proporción y puntuación de

intensidad)

Interpretación

0 a 2 Negativo≥ 3 Positivo

Score Proporción (proporción de células tumorales con núcleos positivos en el tejido)

Observación Score Proporción

0 Ninguno

1 >0 a 1/100

2 >1/100 a 1/10

3 >1/10 a 1/3

4 >1/3 a 2/3

5 >2/3 a 1

Score Intensidad (intensidad promedio de todas las células

tumorales)

Observación de Score

Intensidad0 Ninguno1 Débil2 Intermedio3 Alto


Evaluación presencia proteína Her2

Cerb2 y Herceptest: campo de 20x

0: negativo, no se observa coloración de membrana o esta sólo se encuentra en menos del 10% de las células.

1+: negativo, coloración de membrana débil e incompleta en menos del 10% de las células.

2+: débilmente positivo (dudoso) coloración de membrana de mediana intensidad e incompleta de membranas en más del 10% de las células.

3+: fuertemente positivo, tinción fuerte y continúa de membrana en más del 10 % de las células.

Además se considera un rango de error de un 5% para el diagnóstico de intensidad y continuidad de membrana, por la subjetividad de cada observador, para precisar este dato, se establece una cantidad de 4 observadores.

Selección variables estudioLos parámetros establecidos para el estudio son:1. Edad.2. Sexo.3. Porcentaje ganglios linfáticos que presentan metástasis.4. Diagnóstico.5. Receptores de Estrógeno (RE): marcaje.6. Receptores de Progesterona (RP): marcaje.7. Herceptest: marcaje, intensidad, continuidad de membrana.8. Cerb2: marcaje, intensidad, continuidad de membrana.

Metodología para análisis de datos1. Estudio individualizado por cada técnica inmuhistoquímica.

2. Estudio de relaciones entre parámetros de cada técnica Inmunohistoquímica.

3. Estudio diagnóstico predictivo, para pacientes con posibilidad de tratamiento con Herceptin.

4. Promedio y frecuencia de datos anexos.


Estudio validados con ANOVA para datos dependientes y CHI2 para datos independientes, realizados en software STATA.

4. Resultados de la investigación4. Resultados de la investigación

4.1. Herceptest4.1. Herceptest

Score -

Score +++Score ++

Score +


Marcaje Frecuencia Porcentaje Total

Negativo- 21 30%

57,1%+ 19 27,1%

Positivo++ 22 31,4%

42,8%+++ 8 11,4%


+

0

2

4

6

20 30 40 50 55 60 70 75 80 85 90 95 98 99 100

Frec

uenc

ia

Herceptest Marcaje - Intesidad

+

++

+++

4.2. Cerb24.2. Cerb2

Score -

Score +++Score ++

Score +


Marcaje Frecuencia Porcentaje Total

Negativo- 18 25,7%

58,6%+ 23 32,9%

Positivo++ 14 20%

41,4%+++ 15 21,4%

+

0

2

4

6

8

30 40 50 60 70 80 90 95 98 99

Frec

uenc

ia

Cerb2: Marcaje - Intesidad

+

++

+++


4.3. Resumen técnicas IHQ para Her24.3. Resumen técnicas IHQ para Her2

Herceptestmarcaje

Cerb2marcaje

Herceptest intensidad

Cerb2intensidad

HerceptestCont. membrana

Cerb2Cont. membrana

- 30% 25,7% 0% 0% 0% 0%

+ 27,1% 32,9% 63,82% 69,78% 55,79% 35,44%

++ 31,4% 20% 73,35% 71,79% 67,96% 41,79%

+++ 11,4% 21,4% 85,59% 83,6% 88,25% 88,6%

4.3. Resumen técnicas IHQ para Her24.3. Resumen técnicas IHQ para Her2

Herceptestmarcaje

Cerb2marcaje

Herceptest intensidad

Cerb2intensidad

HerceptestCont. membrana

Cerb2Cont. membrana

- 30% 25,7% 0% 0% 0% 0%

+ 27,1% 32,9% 63,82% 69,78% 55,79% 35,44%

++ 31,4% 20% 73,35% 71,79% 67,96% 41,79%

+++ 11,4% 21,4% 85,59% 83,6% 88,25% 88,6%

4.4. Datos Anexos al estudio4.4. Datos Anexos al estudio

Diagnóstico

Frecuencia Porcentaje

Carcinoma Mucoideo 2 2,9

Carcinoma Ductal

Infiltrante61 87,1

Carcinoma Lobulillar

Infiltrante7 10,0

Total 70 100,0Sexo Frecuencia Porcentaje

F 69 98,6

M 1 1,4

Total 70 100,0

Frecuencia Porcentaje

Sin ganglios 40 57,14Con ganglios 30 42,86

Total 70 100

N Mínimo Máximo Media Desv. típ.

Edad 70 31 87 64,29 13,823

Ganglios metástasis % 30 0,00 100,00 48,6247 38,36037

4.4. Datos Anexos al estudio4.4. Datos Anexos al estudio


Aplicación de técnicas Cerb2 y Herceptest en igualdad de condiciones cada cual con sus características de especificidad y sensibilidad (Selvarajan et al, 2004).

Se infiere que Herceptest presenta mayor especificidad para Her2, ya que presenta un total de 42,8% de casos candidatos a tratamiento versus un 41,4% para Cerb2. (Hynes y Lane, 2005).

Herceptest reveló que de 27 casos con ambos receptores hormonales positivos: 62,9% reportaron negatividad (-,+) para Her2 y 7,4% positivos (+++) para Her2, siendo inversamente proporcional (López, 2006), lo cual es útil como factor predictivo tanto para tratamiento hormonal (Tamoxifen) como tratamiento con Trastuzumab (Herceptin). (Medicina UPB, 2010).

Con la técnica Herceptest, de las 8 pacientes positivas para Her2 (+++), solo 5 son precandidatas a tratamiento con Herceptin (62,5%), se descartan 3 por presentar sobre expresión de receptores hormonales.

Con la técnica Cerb2, de las 15 pacientes positivas para Her2 (+++), sólo 4 son precandidatas a tratamiento con Herceptin (36,37%), se descartan 11 por presentar sobre expresión de receptores hormonales.


• Se evidencia que la expresión de Her2 aumenta según la edad (Vogel et al, 2003) y con una frecuencia mayor (55,71% de los casos) entre los 60 y 80 años. (Revista medica Clínica Las Condes, 2011);(MINSAL, 2008).

• Las metástasis tienen relación y aumentan con la expresión de Her2 (Piccart-Gebhart, 2005) evidenciándose en el promedio de intensidad de los casos con un 73,56%. De 70 casos 30 fueron enviado a estudio histopatológico con ganglios linfáticos anexos, de éstos, 24 presentaron metástasis con una presencia del 42,86% del numero total de ganglios estudiados. (Pérez et al, 2008); (Vera, 2011).

• En cuanto a sexo se refiere, se observa una mayor incidencia en mujeres (98,6%), versus hombres (1,4%).

• Se evidenció carcinoma ductal infiltrante con mayor frecuencia. (Martínez-Tlahuel et al, 2006).

• La expresión de Her2 se observa más frecuentemente en carcinoma Ductal infiltrante (38,57%), disminuyendo en carcinoma lobulillar infiltrante (4,29%) y una nula expresión en carcinoma coloideo (0%). (MINSAL, 2009) ; (Vera, 2011).

1. Estandarización de protocolos obteniéndose resultados similares .

2. La técnica Herceptest arrojó una relación directamente proporcional entre especificidad (marcaje) y sensibilidad (intensidad/continuidad de membrana), resultados similares se observaron para Cerb2, corroborando que estas características tienen relación proporcional con la expresión de Her2.

3. En cuanto a casos en estudio, se infiere que Herceptest posee mayor especificidad y sensibilidad, debido a que se presenta un mayor número de casos candidatos a tratamiento con Herceptin, sin embargo, estos en su mayoría son considerados inciertos y necesitan diagnóstico posterior mediante FISH y/o biología molecular.

4. La sobre expresión de Her2, determinada tanto con la técnica Herceptest como con Cerb2, fue inversamente proporcional frente a receptores hormonales.

5. Her2 tiene relación con la metástasis y patologías mamarias con mayor frecuencia en cáncer ductal infiltrante, que puede afectar tanto a sexo femenino (98,6%) como masculino (1,4%), con un promedio de edad de 64 años, aumentando la frecuencia de patología cancerígena, según la edad de las pacientes.

6. Conclusión6. Conclusión

• Como conclusión final se infiere que Herceptest presenta mayor ventaja diagnóstica para las pacientes frente a Cerb2, otorgando un mayor número de casos positivos e identificando más específicamente los casos pre seleccionados para tratamiento con Herceptin. Esto es atribuible a la especificidad de Herceptest que utiliza un anticuerpo monoclonal versus el anticuerpo policlonal de Cerb2, otorgándole la capacidad de identificar y clasificar de forma más precisa la sobre expresión de HER2, esto se comprueba por lo expuesto anteriormente, otorgando una posibilidad más alta de dar tratamiento específico a las paciente que se ven afectada por la patología cancerígena mamaria, siendo la recomendación efectuada al servicio de anatomía patológica.

6. Conclusión6. Conclusión

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“Determinación comparativa, de especificidad y sensibilidad, de técnicas Inmunohistoquímicas Herceptest y Cerb2, en pacientes con cáncer de mama infiltrante;