Detecci³n-de-Trypanosoma-cruzi-en-Oryctolagus-cuniculus-y

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UNIVERSIDAD DE CHILE

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Y PECUARIAS ESCUELA DE CIENCIAS VETERINARIAS

DETECCIN DE Trypanosoma cruzi EN Oryctolagus cuniculus y Octodon degus MEDIANTE PCR Y

XENODIAGNOSTICO UTILIZANDO DOS ESPECIES DE VECTORES

RICARDO ANDRES CAMPOS SOTO

Memoria para optar al Titulo Profesional de Mdico Veterinario

Departamento de Ciencias Biolgicas

Animales

PROFESOR GUIA: ALDO SOLARI

Financiado por proyecto Fondecyt N 1040762 y proyecto Fondecyt N 1040711

SANTIAGO, CHILE 2007

UNIVERSIDAD DE CHILE

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Y PECUARIAS ESCUELA DE CIENCIAS VETERINARIAS

DETECCIN DE Trypanosoma cruzi EN Oryctolagus cuniculus y Octodon degus MEDIANTE PCR Y

XENODIAGNOSTICO UTILIZANDO DOS ESPECIES DE VECTORES

RICARDO ANDRES CAMPOS SOTO

Memoria para optar al Ttulo Profesional de Mdico Veterinario Departamento de Ciencias Biolgicas

Animales.

NOTA FINAL: .........................

NOTA FIRMA

PROFESOR GUIA : ALDO SOLARI ........................................ .......................................

PROFESOR CONSEJERO: PEDRO E. CATTAN ........................................ ........................................ PROFESOR CONSEJERO: FERNANDO FREDES ....................................... .......................................

SANTIAGO, CHILE 2007

INDICE

INTRODUCCIN ..........................................................................................................1

REVISIN BIBLIOGRAFICA .....................................................................................2

1.- Trypanosoma cruzi ......................................................................................................2

2.- Ciclo biolgico.............................................................................................................3

3.- DNA kinetoplastdico ..................................................................................................3

4.- Enfermedad de Chagas ................................................................................................4

5.- Vector ..........................................................................................................................5

6.- Aspectos clnicos .........................................................................................................5

7.- Diagnstico ..................................................................................................................6

8.- Reaccin de la polimerasa en cadena ..........................................................................7

a).-Denaturacin................................................................................................................7

b).-Alineacin....................................................................................................................7

c).-Elongacin....................................................................................................................7

9.- Hospederos silvestres y sinantrpicos .........................................................................8

HIPTESIS ...................................................................................................................10

OBJETIVO GENERAL ...............................................................................................10

OBJETIVOS ESPECFICOS ......................................................................................10

MATERIAL Y METODO ...........................................................................................11

1.- Roedores e insectos ...................................................................................................11

2.- Obtencin de sangre y procesamiento ......................................................................11

3.- Tcnica de PCR .........................................................................................................12

4.- Xenodiagnstico ........................................................................................................13

5.- Transferencia del DNA a membranas por simple difusin ......................................14

6.- Preparacin de la sonda .............................................................................................15

7.- Marcacin radioactiva de la sonda ............................................................................15

8.- Hibridacin con la sonda radiactiva ..........................................................................16

RESULTADOS .............................................................................................................17

1.- Deteccin de Tripanosoma cruzi....................................................................17

- Tabla 1: Resultados de los xenodiagnsticos realizados en Octodon degus con

Triatoma infestans y Mepraia spinolai, PCR del contenido intestinal del vector y sangre

del roedor.................................................................17

- Tabla 2: Resultado de los pesos de ambas especies de vinchucas antes y despus de ser

alimentadas en Octodon degus y N de vinchucas ocupadas..............18

- Tabla 3: Octodon degus infectados con Trypanosoma cruzi a travs de PCR en

muestras de sangre y contenido intestinal de ambas especies de vinchuca alimentadas

con los roedores...............................................................................................................19

2.- Genotipificacin de Trypanosoma. cruzi .................................................................19

- Tabla 4 : Resultados de la hibridacin del kDNA de Trypanosoma cruzi con las

diferentes sondas de los genotipos Tc I, Tc IIb, Tc IIC y TcIIe......................................19

- Figura 1: Electroforesis en gel de agarosa al 2% teido con bromuro de etidio de las

muestras positivas y Southern blott con las distintas sondas de los genotipos Tc I, Tc

IIb, Tc IId y Tc IIe.......................................................................................20

DISCUSION ..................................................................................................................21

CONCLUSIONES ........................................................................................................24

REFERENCIAS ............................................................................................................25

ABSTRACT

In this assay study we report the Trypanosoma cruzi-detection in the wild rodent

Octodon degus by means of blood and xenodiagnosis PCR using the domestic and wild

vectors of Chagas disease, Triatoma infestans and Mepraia spinolai, respectively. We

studied 35 Octodon degus and 33 Oryctolagus cuniculus collected in a endemic zone,

from Chile. Blood samples and intestinal contents of vectors fed with the animals were

used to perform PCR. The results indicate that the percentage of rodents naturally

infected with Trypanosoma cruzi depends on the biological sample used for PCR and

the vector species for the xenodiagnosis. PCR performed on blood samples did not

detect Trypanosoma cruzi-DNA, but PCR from intestinal contents indicated that both

vectors were positive to the protozoan and, therefore, more sensitive detecting

Trypanosoma cruzi in these species. Mepraia spinolai resulted four times more

sensitive to detect Trypanosoma cruzi-infected Octodon degus than Triatoma infestans,

22.9% and 5.7%, respectively.

The results with Oryctolagus cuniculus were negative either with blood or insect

samples. All positives PCR samples were analysed by hybridization test using four

different Trypanosoma cruzi genotype specific probes. The results of hybridization

indicate that Mepraia spinolai detected more Trypanosoma cruzi genotypes than

Triatoma infestans. These result suggest that Mepraia spinolai is an insect with better

vectorial capacity than Triatoma infestans. Finally we report the improvement of

Trypanosoma cruzi detection in sylvatic animals by a combination of PCR and

xenodiagnosis using the endogenous and sylvatic vector Mepraia spinolai.

RESUMEN

En este estudio demo

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