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Laboratorio de Inmunología L-121 Equipo 3 Pérez Pérez José Manuel Pérez Sevilla Alma Beatriz 2802 2009-2

Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

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Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne.FESZ, 2009-2, 2802, QFB BC,

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Page 1: Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

Laboratorio de Inmunología

L-121

Equipo 3Pérez Pérez José Manuel

Pérez Sevilla Alma Beatriz

2802 – 2009-2

Page 2: Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

¿Qué es sistema inmune?

• Inespecíficos:

Comprende

Barreras Naturales

pH, piel, saliva,

lagrimas

Humorales

-Citocinas

-Interleucinas

-Interferones

-Complemento via

Lectinas

Celulares

- NK, Macrófagos,

Neutrofilos, basofilos

Específicos Linfocitos T y B

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Órganos linfoides

Primarios

Secundarios

Medula ósea

Timo

Medula ósea

Bazo

Ganglios linfáticos

Placa de Peye

Ganglios linfáticos

mesentéricos

Tejido linfoide

asociado a los

bronquios

Órgano

linfoides

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Bazo

Page 5: Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

Bazo

• Pulpa Roja:

• Se destruye a los eritrocitos viejos

• Pulpa Blanca:

• Se encuentran los linfocitos T y los linfocitos B, que se activan en presencia de antígenos.

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• GALT: es el tejido linfoide asociado al tubo digestivo, que incluye amígdalas, apéndice vermiforme y placas de Peyer.

• BALT: es el tejido linfoide asociado al aparato respiratorio.

• MALT: es el tejido linfoide asociado a las mucosas

Tejidos del sistema inmune

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• Por primera vez un Ag se pone en contacto con el Ab

• Periodo de latencia 7 a 10 días

• Predomina IgM

Respuesta Primaria

• segundo encuentro con el mimo Ag o con un Ag muy parecido

• Respuesta rápida de 3 a 5 días

• Cantidad mucho mayor de IgG

Respuesta Secundaria

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Inmunidad

• Respuesta inducida una vez producido el contacto con Ag

• Respuesta inmune formada por anticuerpos y linfocitos T

• Confiere resistencia a largo plazo (producción Ab)

• Lenta progresión de la resistencia y la necesidad de contacto prolongado con el antígeno

Activa

• Respuesta basada en anticuerpos ya existentes en otro hospedero

• transmitidos de forma natural a través de la placenta o a través del calostro

• forma de protección rápida, pero de corta duración

Pasiva

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Inmunidad

• Respuesta no especifica

• Respuesta rapidainmediata

• Mediada por células

• Macrófagos, Neutrofilos, basofilos

• Mediada componentes humorales:

• Complemento

• Citocinas, IL

• Sin memoria inmunológica

Innata

• Respuesta especifica contra patógenos y antígenos

• Tiempo de demora para una respuesta maxima

• Mediada por celulas

• Linfocitos T y B

• Mediada por componentes

• Complemento

• Conduce a Memoria

Adaptativa

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Inmunoglobulinas

Ig Fija complemento / Clase

% Suero Forma Sitios

IgM 1 5-10% Pentámero/10sitios

No difunde bien a tejidos

IgG 1,3 y 2* la 4 no 80% monómero

IgA no Dinero Leche materna, saliva, lagrimas,

IgD No 0.02% Monómero

IgE no Monómero

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• CFA vs un antígeno de eritrocito se suspenden en una capa de agar que contenga los antígenos de eritrocito, el anticuerpo secretado por una célula se difundirá a través del agar, reaccionara con los eritrocitos, y formara un complejo localizado

Fundamento

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• Cuando se añade complemento a la capa eritrocito-linfocito, solo aquellos eritrocitos que han reaccionado con el anticuerpo fijaran el complemento y se consumará su lisis. Esto produce zonas localizadas de hemólisis..

Fundamento

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Page 18: Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

Antes de la práctica

SE TOMA 4 ML DE

MEM

Page 19: Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

Preparar Tubo para Dilución en MEM

1.9 mL de MEM

Dilución 1:20

Dilución 1:30

2.9 mL de MEM

Page 20: Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

Se deja

sedimentar 1

minutos

0.1 mL del

sobrenadante

0.1 mL del

sobrenadante

Page 21: Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

0.1 mL de dilución

2 mL de Agarosa

45°C

2 mL de suero de cobayo

Esperar a solidificar

0.2 mL de GR al 10%

37°C 45 minutos

Agitar y vaciar rápido, uniformizar

37°C 30 minutosDesechar suero

complemento y

sustituir con 2 mL

MEM frio

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• Cálculos:

• CFP x 10 x Dilución x 4 = Células por bazo

• CPF: Placas líticas contadas

• 10: Se toma una decima parte

• Dilución: Sea 20 o 30

• 4: Medio total, 4 mL de MEM

• Ejemplo:

• CFP x 10 x 20 x 4 = miles de Células

• CFP x 800 = miles de celulas

Page 24: Cuantificación de células formadoras de colonias mediante Jerne

Roitt I, et al. Inmunología, 5ª edición. Harcourt, España 2000. pp

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Gualde N, Bourinat-Lafon J. Inmunología, Vol 20. Ed. Norma,

México 1994. pp 23-50

Hudson L. C. Hay F. Inmunología práctica. Ed. Jims. España

1979. pp 27-51.

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Blacknell Scientificc Publications.

Referencias: