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BÉJAR VILELA ROSARIO
CITOGENÉTICA MOLECULAR
Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridizarse entre sí.
Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.
CITOGENETICA MOLECULAR
Biología molecular y citogenética.
Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación por fluorescencia in situ (FISH).
CITOGENÉTICA MOLECULAR
Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con sustancias fluorescentes puede observarse la señal inmediatamente después del FISH al microscopio de fluorescencia.
Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas fluorescentes que permiten su observación al microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con la técnica “nick translation
FISH
ADNsc
Detección de cromosomas concretos Anormalidades numéricas
- Reconoce 2 - 3% secuencias centromericas. - Detección de cromosomas concretos - Anormalidades numéricas
- Secuencia especifica del ADN:
LOCUS DETERMINADO - Reordenamiento estructurales - Anormalidades estructurales
TECNICA DE FISH
PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA
PREPARACION DE LAS PLACAS
PREPARACION DE LAS SONDAS
HIBRIDACION
LAVADOS POST-HIBRIDACION
DETECCION
TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI)
VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
PCR
Técnica que permite la amplificación in vitro de una secuencia específica de ADN hasta generar millones de copias de una manera rápida y sencilla
Permite analizar muestras con cantidades mínimas de ADN
FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR
“Aparear” primers a la hebra molde para dirigir la síntesis de DNA . La síntesis de DNA requiere de primers para comenzar.
Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra madre como molde A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de forma exponencial, la secuencia diana de ADN
Separar las hebras molde para la síntesis de nuevas hebras
Sondas marcadas
fluorescentemente son para
cada cromosoma hechas
para marcar DNA específico
de cada cromosoma con
diferentes fluoróforos.
La diferencia espectral generada por el
etiquetado combinatorio son capturadas y
analizadas usando un interferómetro agregado a
un microscopio de fluorescencia.
El programa de procesamiento de imágenes
entonces asigna un pseudocolor a cada
combinación espectralmente diferente,
permitiendo la visualización de cromosomas
coloreados.
SKY
GRACIAS