Código de referencia del Programa: CSD2006-00044Web: http://www.consolider-tragua.com

4ª REUNIÓN PROGRAMA CONSOLIDER TRAGUA – 17, 18 y 19 de junio de 2009, Alicante

Tratamiento y Reutilización de Aguas Residuales para una Gestión Sostenible

Caracterización molecular de comunidadesmicrobianas de efluentes secundario y terciario

de dos EDAR: El Ejido y Depurbaix

Objetivos

Caracterizar mediante técnicas moleculares la diversidad de la comunidad procariótica presente en aguas procedentes de efluente de tratamientosecundario y terciario de dos EDAR: El Ejido (Almería) y Depurbaix (Barcelona)

Identificar los microorganismos más abundantes y dilucidar su posible papel en dichos sistemas

Métodos: DGGE (Electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante)

A BC

Resultados: Dendrogramas y secuencias

Extracción DNA PCR cebadoresgen RNA 16S

DGGE

Muestra efluente

ConclusionesEn general, el análisis estadístico a partir del patrón de bandas de los geles de DGGE sugiere la existencia de una posible agrupación estacional en todos los casos

La mayoría de las secuencias obtenidas pertenece a microorganismos no cultivados. Dichas secuencias están claramente asociadas a diferentes especies de bacterias de ambientes de aguasresiduales. El grupo taxonómico más común en estos sistemas es el de las β-proteobacterias. Grupos como Firmicutes y Nitrospira sólo aparecen en Depurbaix y ε-proteobacterias solamente enEl Ejido. Otros grupos importantes encontrados son: Bacteroidetes, α,δ,γ-proteobacterias, Cianobacterias y Chloroflexi. Muchos de estos grupos tienen el potencial de actuar como degradadores decontaminantes ambientales en EDAR

L. GARRIDO1, O. SÁNCHEZ1, N. TOMÀS1, N. VIGUÉS1, M.J. GÓMEZ2,A. RODRÍGUEZ FERNÁNDEZ-ALBA2, J. MAS1.1Grupo de Microbiología Ambiental. Universidad Autónoma de Barcelona2Grupo de Investigación de Residuos de Pesticidas. Universidad de Almería

El Ejido secundario Depurbaix secundario Depurbaix terciario

DB2_1 Bacteria no cultivada 86.2 (445) Candidato división TM7 EU104270Cianelo de Cyanoptyche gloecocystis (74.0)

DB2_2 γ-proteobacteria no cultivada 79.4 (385) γ-proteobacteria EF650960 Thioploca ingrica (75.0)DB2_3 Bacteria no cultivada 77.2 (383) Candidato división TM7 FJ592926 Desulfotomaculum sp. (74.5)DB2_4 Candidato division TM7 79.8 (402) Candidato división TM7 FJ386548 Oxobacter sp. (78.1)DB2_5 Bacteria no cultivada 76.3 (400) β-proteobacteria AY212367 Vogesella sp. (74.8)DB2_6 Bacteria no cultivada 84.2 (368) Cyanobacteria AY328600 Bacteria del rumen YS2 (79.9)DB2_7 Firmicute no cultivada 77.3 (391) Firmicutes DQ316815 Desulfotomaculum sp. (70.8)DB2_8 Bacteria no cultivada 82.2 (281) β-proteobacteria AY785239 Burkholderia sp. (75.1)DB2_9 Bacteria no cultivada 72.1 (379) β-proteobacteria AY785239 Rhodocyclus sp. (72.4)DB2_10 Bacteria no cultivada 75.2 (401) β-proteobacteria AY785239 Rhodocyclus tenuis (73.5)DB2_11 Bacteria no cultivada 90.4 (464) Nitrospira FM200870 Candidato Nitrospira defluvii (90.3)DB2_12 Legionella no cultivada 78.2 (272) γ-proteobacteria AY924091 Legionella sp. (77.7)DB2_13 Rhodocyclus sp. 84.3 (402) β-proteobacteriaDB2_14 Bacteria no cultivada 92.9 (471) Firmicutes EU134276 Clostridium sp. (83.0)DB2_15 Bacteria no cultivada 89.9 (455) Firmicutes FJ236040 Desulfotomaculum sp. (82.4)DB2_16 Bacteria no cultivada 83.7 (446) γ-proteobacteria FJ660577 Dokdonella sp. (83.5)DB2_17 Thauera sp. 92.3 (490) β-proteobacteria EU037291DB2_18 Bacteria no cultivada 88.2 (344) δ-proteobacteria AB154445 Pelobacter acetylenicus (84.8)DB2_19 Candidato Nitrospira defluvii 92.6 (475) Nitrospira EU559167DB2_20 Firmicute no cultivada 75.3 (357) Firmicutes DQ316815 Desulfotomaculum sp. (81.3)

DB2_21 Bacteria no cultivada 82.0 (405) Firmicutes EU134276 Desulforomonas svalbardensis (79.5)

DB2_22 Secuencia ambiental 76.7 (386) β-proteobacteria CU466684 Thauera sp. (75.1)DB2_23 Bacteria no cultivada 80.6 (395) Firmicutes EU981234 Clostridium straminisolvens (79.0)DB2_24 α−proteobacteria no cultivada 85.5 (437) α−proteobacteria AF255640 Tristella sp. (78.8)DB2_25 Bacteria no cultivada 86.7 (461) β−proteobacteria EU529738 Rhodocyclus sp. (85.9)DB2_26 Bacteria no cultivada 87.4 (459) Bacteroidetes EU421788 Bacteria Oil-Tsu-11 (85.9)

DB2_27 Bacteria no cultivada 80.0 (403) δ-proteobacteria EU160330 Candidato Magnetolobus multicelularis (73.3)

DB2_28 Bacteria no cultivada 80.0 (316) δ-proteobacteria EF429592 Desulfuromonas thiofila (79.6)DB2_29 Bacteria no cultivada 80.4 (411) β−proteobacteria AY662015 Imtechium assamiensis (80.0)DB2_30 Bacteria no cultivada 90.9 (480) Bacteroidetes EU796046 Bacteria PE03-7G4 (88.9)DB2_31 Bacteria no cultivada 89.6 (481) δ-proteobacteria FM200964 δ-proteobacteria G50VI (445)DB2_32 Bacteria no cultivada 75.8 (404) β−proteobacteria AY212637 Rhodocyclus sp. (73.8)DB2_33 Rhodoferax no cultivada 75.1 (398) β−proteobacteria AM749855 Rhodoferax ferrireducens (73.8)

DB2_34 Bacteria no cultivada 85.8 (458) Bacteroidetes AB286406 Citofagales/bacteria verde del azufre OPB56 (83.6)

Banda Microorganismo más cercano

Similitud (%) (nºbases) Grupo taxonómico Nº acceso

(Gen Bank)Microorganismo cultivado más

cercano (%similitud)

EJ2_1 Bacteria no cultivada 94.2 (506) Bacteroidetes FJ534976 Bacteroides sp. XDT-1 (83.1)

EJ2_2 Saprospiracea no cultivada 89.8 (488) Bacteroidetes EU177705 Candidato Aquirestis calciphila (82.7)

EJ2_3 Bacteria no cultivada 99.2 (540) β-proteobacteria DQ449527 Bacteria CYCU-0262 (99.0)

EJ2_4 Bacteria no cultivada 98.1 (533) β-proteobacteria FM201217 Imtechium assamiensis strain BPTSA16 (98.1)

EJ2_5 Bacteria no cultivada 92.8 (477) ε-proteobacteria EU104239 Acrobacter cryaerophilus (92.8)EJ2_6 Bacteria no cultivada 98.0 (506) ε-proteobacteria EU104239 Acrobacter cryaerophilus (98.0)EJ2_7 Bacteria no cultivada 86.7 (355) Bacteroidetes FJ202160 Lewinella coharens (85.4)EJ2_8 ß-proteobacteria no cultivada 86.6 (468) β-proteobacteria AM940953 Diaphorobacter sp. (86.5)EJ2_9 Bacteria no cultivada 95.9 (522) β-proteobacteria EU275391 Hydrogenophaga sp. (95.2)EJ2_10 Bacteria no cultivada 84.0 (441) β-proteobacteria AY212650 Acidovorax sp. (82.5)EJ2_11 Bacteria no cultivada 92.0 (452) γ-proteobacteria EU426848 Methylocaldum szegediense (82.8)EJ2_12 Bacteria no cultivada 91.9 (446) Bacteroidetes DQ906118 Parabacteroides distasonis (84.4)EJ2_13 Bacteria no cultivada 92.9 (498) Bacteroidetes FJ534976 Bacteroides sp. XDT-1 (92.9)EJ2_14 Bacteria no cultivada 88.6 (476) Bacteroidetes EU771211 Bacteria Oil-Tsu-11 (86.2)EJ2_15 Bacteria no cultivada 90.1 (469) Bacteroidetes EF515658 Prevotella oralis (86.7)EJ2_16 Bacteria no cultivada 93.0 (493) Bacteroidetes FJ534972 Bacteroides sp. XDT-1 (92.8) EJ2_17 Bacteria de cultivo de

enriquecimiento 99.6 (530) β-proteobacteria FJ799161 Bacteroides sp. (99.4)EJ2_18 Bacteria no cultivada 84.9 (457) Bacteroidetes FJ229351 Riemerella sp. (84.3) EJ2_19 Bacteria no cultivada 97.5 (525) Bacteroidetes AB196061 Lewinella nigricans (86.3)EJ2_20 α-proteobacteria no cultivada 89.7 (456) α−proteobacteria AF255640 Rhizobium sp. (83.0)EJ2_21 Bacteria no cultivada 95.6 (507) Bacteroidetes EU546335 Flexibacter sp. (89.0)EJ2_22 Bacteria no cultivada 90.7 (470) Bacteroidetes AB240489 Prolixibacter bellariivorans (87.1)EJ2_23 Bacteria Burkholderiales no

cultivada 95.2 (519) β-proteobacteria EU641505 Aquabacterium sp. (95.2)EJ2_24 Bacteria no cultivada 98.2 (515) β-proteobacteria FJ534997 Acidovorax sp. (97.5)EJ2_25 Bacteria no cultivada 96.5 (508) γ-proteobacteria EF443088 Thiodictyon bacillosum (93.5)

Nº acceso (Gen Bank)

Microorganismo cultivado más cercano (%similitud)Banda Microorganismo más

cercanoSimilitud (%)

(nºbases) Grupo taxonómico

DB3_1 Bacteria no cultivada 93.4 (482) Firmicutes EU473924 Clostririum sp (92.8))DB3_2 Bacteria fecal 99.8 (515) Firmicutes FJ753815 Clostridium sp. (99.8)DB3_3 Bacteria no cultivada 99.6 (514) Firmicutes FJ825522 Clostridium maritimum (98.0)DB3_4 Comamonadacea no cultivada 96.9 (503) β-proteobacteria EU642389 Hydrogenophaga sp (96.9)DB2_5 Comamonadacea no cultivada 95.1 (494) β-proteobacteria EU639791 Variovorax sp (93.4)DB3_6 Bacteria no cultivada 98.4 (511) Bacteroidetes FJ006842 Coccinistipes vermicola (89.8)DB3_7 Bacteria no cultivada 100 (512) β-proteobacteria EU000441 Acidovorax sp.DB3_8 Chloroflexi no cultivada 98.6 (503) Chloroflexi CU923706 Dehalococcoides sp. (87.7)DB3_9 ß-proteobacteria no cultivada 92.3 (474) β-proteobacteria CU926665 Comamonas sp. (92.3)DB3_10 Cianobacteria no cultivada 94.8 (482) Cianobacteria CU926467 Desulfotomaculum sp. (83.7)DB3_11 Bacteria no cultivada 83.3 (360) Actinobacteria DQ298343 Amycolatopsis fastidiosa (82.5)DB3_12 Bacteria no cultivada 88.5 (464) Bacteroidetes EU771211 Bacteria Oil-Tsu-11 (87.3)DB3_13 Beta proteobacteria 95.5 (497) β-proteobacteria AF236014 Azospira restricta (92.5)DB3_14 α-proteobacteria no cultivada 93.1 (477) α−proteobacteria AF255640 Tristrella sp. (84.0)DB3_15 Comamonadacea no cultivada 98.0 (509) β-proteobacteria EU640756 Malikia spinosa (98.0)DB3_16 Bacteria reductora de hierro 99.6 (518) β-proteobacteria FJ802332 Imtechium assamiensis (99.6)DB3_17 Bacteria no cultivada 95.9 (496) β-proteobacteria AY212596 Rhodoferax ferrireducens (95.5)DB3_18 Bacteria no cultivada 99.6 (520) β-proteobacteria FJ660530 Aquabacterium sp (98.2)DB3_19 Bacteria no cultivada 100 (522) Nitrospira FJ660604 Candidato Nitrospira defluvii (100)DB3_20 Firmicute no cultivada 100 (515) Firmicutes CU926587 Clostridium maritimum (98.0)DB3_21 Cloroplasto de diatomea 99.8 (507) Bacilariofita FJ002185 Navicula sp (99.4)DB3_22 Bacteroidetes no cultivada 96.9 (504) Bacteroidetes CU925900 Flexibacter flexilis (87.0)DB3_23 Bacteria no cultivada 94.9 (508) β-proteobacteria AY212637 Vogesella sp (90.8)DB3_24 Bacteria no cultivada 93.3 (480) Cianobacteria AY328600 Schizothrix sp. (83.0)DB3_25 Bacteria no cultivada 98.8 (515) Nitrospira FM200870 Candidato Nitrospira defluvii (98.8)DB3_26 Bacteria no cultivada 99.8 (517) γ-proteobacteria FJ356055 Methylocaldum szegediense (89.0)DB3_27 Bacteria no cultivada 99.0 (511) Firmicutes EU474151 Clostridium sp (99.0)

Nº acceso (Gen Bank)

Microorganismo cultivado más cercano (%similitud)Banda Microorganismo más

cercanoSimilitud (%)

(nºbases)Grupo

taxonómico