Bucuresti , 23 aprilie 2015Elaborarea legislaţiei privind experimentarea pe animale şi a celorlate acte normative care sunt în acord cu legislaţia europeană, în acest domeniu

Al 4 lea Simpozion ARSAL

Bucuresti , 23 aprilie 2015

1

Comitetul de organizare:

Coman Cristin

Zinca Cristian

Fenyo Mădălina

Marinescu Bogdan

Gonciarov Magda

Cotor Gabriel

Comitetul de Organizare multumeste următoarelor persoane fără de care

organizarea simpozionului nu ar fi fost posibilă:

Doamnei Academician Maya Simionescu, director general al Institutului de Biologie

şi Patologie Celulară ,,Nicolae Simionescu,, pentru amabilitatea de a găzdui

simpozionul.

Domnului Adrian Burcea director general al SAPACO 2000 sponsorul simpozionului

pentru spriijinul constant acordat asociatiei.

Domnului Doctor Ovidiu Croitoru pentru designul si grafica afisului.

Tuturor prezentatorilor pentru efortul depus.



2

PROGRAM

9.00 – 11.00

Cuvânt de bun venit – Acad. Maya SIMIONESCU, Institutul de Biologie si Patologie Celulară ,,Nicolae Simionescu”, Bucuresti, Director General.

Cuvânt de deschidere – Dr. Cristin COMAN, președinte ARSAL.

Animal Research: Time to Talk - Kirk LEECH, European Animal Research Association (EARA)/Animal experimentation in Europe after the publication of the EU Directive 2010/63 - Dr. Șerban MOROȘAN, Universitatea de Medicină ,,Pierre et Marie Curie”,

Paris.

Armonizarea legislației naționale cu legislația Uniunii Europene în domeniul protecției

animalelor utilizate în scopuri științifice – Șef Lucrari Dr. Magda GONCIAROV, Facultatea de Medicină Veterinară, București.

Evaluarea etică a proiectelor de cercetare – Dr. Cristin COMAN, Institutul Cantacuzino,

București.

Transporting Live Animals on safe environment, Ștefan ȘERB, World Courrier, Romania,

Country Manager.

11.00 - 11.30

Pauză de cafea

11.30 – 13.00

Noua biobază a Institutului de Biologie si Patologie Celulară ,,Nicolae Simionescu”, București, Dr. Mădălina FENYO, Institutul de Biologie si Patologie Celulară ,,Nicolae Simionescu”, București.

New technological developments in Health Monitoring of rodent colonies and 3 R’s – Dr. Șerban MOROȘAN, Universitatea de Medicină ,,Pierre et Marie Curie”, Paris.



3

Modern system for rodents – Dr. Gianpaolo MILITE, Tecniplast, Italia (prezentare in limba engleză).

Cercetarea pe animale: realizarea, analiza si raportarea experimentelor in vivo – Dr.

Bogdan PREDA, Institutul de Biologie si Patologie Celulară ,,Nicolae Simionescu”, București.

Protecting Animal Health - Dr. Șerban MOROȘAN, Universitatea de Medicină ,,Pierre et

Marie Curie”, Paris.

13.00 - 14.00

Pauză de pranz

14.00 – 15.30

Lentiviral transgenesis, a highly efficient approach to dissect cis-regulatory function – Dr. Sebastien DUSSAUD, Universitatea de Medicină ,,Pierre et Marie Curie”, Paris (prezentare in limba engleză).

Modificarile ultrastructurii la nivel cardiac si renal datorate hipertensiunii arteriale indusa cu L-NAME hamsterilor sirieni aurii – Dr. Mădălina DUMITRESCU, Institutul de Biologie si Patologie Celulară ,,Nicolae Simionescu”, București.

Efectul exercitat de nanosisteme metalice încarcate cu citostatic asupra șoarecilor purtători de melanom - Dr. Laurenţiu ANGHELACHE – Institutul Național de Cercetare-

Dezvoltare în Domeniul Patologiei și Știintelor Biomedicale ,,Victor Babeş”, București

Parazitoze subclinice la cobai – Șef Lucrari Dr. Bogdan BĂCESCU - Facultatea de

Medicină Veterinară ,,Spiru Haret”, București.

Monitorizarea unor parametri fiziologici în timpul anesteziei cu Izofluran si Ketamina la

șoarecele de laborator - Șef Lucrari Dr. Nicolae VELICU - Facultatea de Medicină Veterinară ,,Spiru Haret”, București.

15.30 - 16.00

Pauză de cafea 16.00 – 17.00

Adunarea Generala a ARSAL.



4

PROGRAM 9.00 – 11.00

Welcome speech: – Acad. Maya SIMIONESCU, Biology and Cellular Pathology Institute

,,Nicolae Simionescu”, General Manager.

Opening speech – Dr. Cristin COMAN, ARSAL president .

Animal Research: Time to Talk - Kirk LEECH, European Animal Research Association

(EARA)/Animal experimentation in Europe after the publication of the EU Directive

2010/63 - Dr. Șerban MOROȘAN, Universitatea de Medicină ,,Pierre et Marie Curie”,

Paris.

Harmonizing national legislation to the European Union laws in the field of the protection

of laboratory animals, used for scientific purposes. – Lecturer Dr. Magda GONCIAROV, Veterinary medicine Faculty Bucharest.

Ethical evaluation of the research projects. – Dr. Cristin COMAN, Cantacuzino Institute

Bucharest .

Transporting Live Animals on safe environment, Stefan SERB, World Courrier, Romania,

Country Manager. 11.00 - 11.30

Coffee break 11.30 – 13.00

The new animal facility of the Biology and Cellular Pathology Institute ,,Nicolae Simionescu”- Dr. Madalina FENYO, Biology and Cellular Pathology Institute ,,Nicolae Simionescu” Bucharest .

News Technological developments in Health Monitoring of rodent colonies and 3 R’s –

Dr. Serban MOROSAN, ,,Pierre et Marie Curie”Medicine University , Paris .

Modern housing system for rodents – Dr. Gianpaolo MILITE, Tecniplast, Italia (English

language presentation).

Research on animals: analyzing, realizing and reports of the in vivo experiments – Dr.

Bogdan PREDA, Biology and Cellular Pathology Institute ,,Nicolae Simionescu”

Bucharest .

Protecting Animal Health - Dr. Serban MOROSAN, ,,Pierre et Marie Curie” Medicine

University , Paris .



5

13.00 - 14.00 Lunch break

14.00 – 15.30 Lentiviral transgenesis, a highly efficient approach to dissect cis-regulatory function – Dr.

Sebastien DUSSAUD, ,,Pierre et Marie Curie” Medicine University , Paris .

Renal and cardiac ultrastructure level changes due to the arterial hypertension , induced

with L-NAME to the golden syrian hamsters – Dr. Madalina DUMITRESCU, Biology and Cellular Pathology Institute ,,Nicolae Simionescu” Bucharest .

The effects of metallic nanosystems, loaded with cytostatic , on mice with melanomas - Dr. Laurenţiu ANGHELACHE – ,,Victor Babeş” Institute Bucharest.

Subclinical parasitosis at guinea pigs – Lecturer Dr. Bogdan BĂCESCU – ,,Spiru Haret” Medicine Faculty ,,Spiru Haret”, Bucharest.

Vital functions monitoring on laboratory mice , during anesthesia using Isofluran and Ketamin - Lecturer Dr. Nicolae VELICU - ,,Spiru Haret” Medicine Faculty ,,Spiru Haret”, Bucharest.

15.30 - 16.00

Coffee break

16.00 – 17.00

ARSAL General Meeting .



6

Cuprins/Contents

ANGHELACHE L. - Efectul exercitat de nanosisteme metalice încarcate cu citostatic asupra șoarecilor purtători de melanoma/ The effects of metallic nanosystems, loaded with cytostatic, on mice with melanoma - 36/38

BĂCESCU B. - Parazitoze subclinice la cobai / Subclinical parasitosis at guinea pigs - 40/41

COMAN C. – ARSAL – Trecut şi viitor/ARSAL – Past ant Future - 8/10

- Evaluarea etică a proiectelor de cercetare /Ethical evaluation of the

research projects - 18/19

DUMITRESCU M. - Modificarile ultrastructurii la nivel cardiac si renal datorate

hipertensiunii arteriale indusa cu L-NAME hamsterilor sirieni aurii / Renal and cardiac ultrastructure level changes due to the arterial hypertension, induced with L-NAME to the golden syrian hamsters - 34/35

DUSSAUD S. - Transgeneza lentivirala, o metoda inalt eficienta pentru

investigarea functiei unor elemente cis-reglatoare / Lentiviral transgenesis, a highly efficient approach to dissect cis-regulatory function – 32/33

FENYO M. - Noua biobază a Institutului de Biologie si Patologie Celulară ,,Nicolae Simionescu”, București / The new animal core facility of the Institute of Cellular Biology and Pathology "Nicolae Simionescu” – 22/23

GONCIAROV M. - Armonizarea legislației naționale cu legislația Uniunii Europene în domeniul protecției animalelor utilizate în scopuri științifice / Harmonizing

national legislation to the European Union laws in the field of the protection of laboratory animals, used for scientific purposes – 16/17

LEECH K. - Experimentarea pe animale: E timpul să discutăm / Animal Research: Time to Talk – 12/13

MILITE G. – Sisteme modern de cazare pentru rozătoare / Modern housing system for rodents – 26/27

MOROŞAN Ş. - Experimentarea pe animale în Europa după publicarea Directivei EU 2010/63 / Animal experimentation in Europe after the publication of the EU

Directive 2010/63 – 14/15



7

- Dezvoltarea de noi tehnologii în monitorizarea sănătăţii coloniilor de rozătoare şi 3 R’s / News Technological developments in Health Monitoring of

rodent colonies and 3 R’s – 24/25 - Protejarea sănătăţii animalelor / Protecting Animal Health – 30-31

PREDA B. - Cercetarea pe animale: realizarea, analiza si raportarea experimentelor in vivo / Research on animals: analyzing, realizing and reports of the in vivo experiments – 28/29

ŞERB Ş. - Transportul animalelor vii într-un mediu sigur / Transporting Live Animals on safe environment – 20/21

VELICU N. - Monitorizarea unor parametri fiziologici în timpul anesteziei cu Izofluran si Ketamina la șoarecele de laborator / Vital functions monitoring on

laboratory mice, during anesthesia using Isofluran and Ketamin – 42/43



8

ARSAL – TRECUT ŞI VIITOR

Coman Cristin,

Preşedinte ARSAL

Asociaţia Română pentru Ştiinţa Animalelor de Laborator (ARSAL) s-a constituit în anul 2001, ca

persoană juridică non-profit. ARSAL are caracter ştiinţific şi are ca principal scop obţinerea şi

menţinerea în ţară a unui nivel ridicat al exigenţelor privind utilizarea în interes ştiinţific a

animalelor de laborator (AL).

ARSAL numără printre membrii săi persoane fizice din principalele centre universitare din ţară,

persoane ce lucrează în domeniu şi/sau utilizează animale de laborator. Membrii asociaţiei

provin din toate ramurile ştiinţelor care lucrează cu animale de laborator: biologi, medici umani,

medici veterinari, farmacişti, biochimişti. Asociaţia cuprinde atât persoane cu studii superioare,

dar cat şi tehnicieni.

Scopurile pentru care s-a dorit înfiinţarea unei astfel de asociaţie în acest domeniu au fost la

acel moment, (când ţara nostră nu avea o legislaţie pentru experimentarea pe animale),

următoarele:

• Informarea actualizată a membrilor asociaţi asupra ansamblului stiintei animalelor de

laborator şi organizarea activităţii de documentare în acest domeniu.

• Generalizarea in unitatile din Romania, în al caror profil de activitate este inclusa

cresterea si/sau utilizarea animalelor de laborator, a exigentelor si datelor stiintifice care au ca

obiect calitatea animalelor de laborator, conditiile optime si confortul de specie ce trebuie

asigurate acestor animale, cunoasterea directivelor si recomandarilor europene si americane cu

acest continut specific.

• Cunoasterea de catre unitatile utilizatoare de animale de laborator - si in general de

catre experimentatori insasi - a principiilor de etica si deontologie in experimentarea animala.

• Participarea asociatiei ARSAL la formarea profesională-teoretiă şi practică în domeniul

animalelor de laborator, a personalului cu studii superioare, a tehnicienilor si operatorilor.

• Participarea la elaborarea de reglementari, la nivel naţional, pentru creşterea şi utilizarea

animalului de laborator.

• Aderarea la Federatia Europeana a Asociaţiilor Naţionale pentru Ştiinţa Animalelor de

Laborator (FELASA).



9

ARSAL promovează şi militează pentru:

Respectarea bunăstării animalelor de laborator în conformitate cu legislaţia naţională şi

europeană,

Utilizarea acestora cu discernământ,

Introducerea de metode alternative,

Respectarea principiilor de biotetică în relaţia cu animalul de laborator,

Îmbunătăţirea calităţii condiţiilor de creştere, de întreţinere şi de folosire a animalelor

de laborator.

Elaborarea legislaţiei privind experimentarea pe animale şi a celorlate acte normative

care sunt în acord cu legislaţia europeană, în acest domeniu.

Primită în 2007 ca observator in Federatia Europeana a Asociaţiilor Naţionale pentru Ştiinţa

Animalelor de Laborator (FELASA), ARSAL a fost primită ca membru cu drepturi depline în 2010. Beneficiile ca membru FELASA sunt reprezentate de recunoaşterea la nivel internaţional a comunităţii ştiinţifice româneşti din domeniul ştiinţei animalelor de laborator, de dezvoltare a

accesului la documente şi articole de profil şi de obţinere a credibilităţii în relaţiile cu alte societăţi naţionale şi internaţionale.

Implementarea Directivei Uniunii Europene 63/2010 pune ARSAL în faţa unor provocări generate de complexitatea acestei directive şi de prevederile ei restrictive, prevederi ce vor fi transpuse şi în legislaţia naţională.

In acest sens ne propunem:

să sprijinim în continuarea adoptarea legislaţia secundară Legii 43/2010 privind protecţia

animalelor folosite în scopuri ştiinţifice,

să popularizăm noua legislaţie,

să sprijinim organizarea de cursuri în domeniul experimentării pe animale,

să sprijinim introducerea metodelor alternative,

să creem o reţea naţională de informare în acest domeniu.



10

ARSAL – PAST AND FUTURE

Cristin Coman,

ARSAL President

Romanian Association for Science of the Laboratory Animals (ARSAL) was established in 2001

as a juridical person without patrimonial purpose Romanian Association for Laboratory Animal

Science (ARSAL) was established in 2001 as a non-profit legal entity. ARSAL is a scientifically

association national romaine and is mainly aimed at obtaining and maintaining in Romania a

high level of scientific interest for use in laboratory animals (AL).

ARSAL members are persons from a major universities in the country, persons which working in

the field of laboratory animals. Association members come from all branches of science who

work with laboratory animals: biologists, human doctors, veterinarians, pharmacists,

biochemists. Association includes both people with higher education, but also and technicians.

The registered office is situated in Bucharest.

The purposes for which we wanted to establish such an association in this area were at that

time (when our country had no legislation for animal testing), the following:

• updated information on all associate members science laboratory animals and organization of

the documentation in this area.

• Generalization in units of Romania, in whose activity profile is included growth and / or use of

laboratory animals, the scientific data requirements and covers the quality laboratory animal

species optimum conditions and comfort of the animals to be insured, knowledge of European

and American guidelines and recommendations in this specific content.

• Knowledge of user units of laboratory animals - and generally by experimenters itself - the

ethical principles in animal experimentation.

• Participation at theoretical and practical training in the field of laboratory animals with higher

education staff, technicians and operators.



11

• Participation in the development of regulations at national level for the growth and use of

laboratory animals.

• Accession to the European Federation of National Associations for Laboratory Animals Science

(FELASA).

ARSAL promotes and militates for:

• Compliance with laboratory animal welfare in accordance with national and European

legislation

• Laboratory animals use with discernment

• Introduction of alternative methods

• Compliance with the principles of bioethics in relation to laboratory animal

• Improving the quality of breeding, maintenance and use of laboratory animals.

• Develop legislation on animal experimentation and others normative acts that are in

line with European legislation in this area.

First in 2007 as an observer in the Federation European of Laboratory Animal Sciences

Associations (FELASA), ARSAL was received as a full member in 2010. The benefits of FELASA

membership are the international recognition of Romanian scientific community in laboratory

animals science, the development of access to documents and articles in the field and

credibility obtaining in relations with other national and international societies.

Implementation of EU Directive 63/2010 put ARSAL in front of some challenges posed by the

complexity of this Directive and its restrictive provisions that will be transposed also into

national law.

In this regard we aim:

• to continue to support adoption of secondary legislation Law 43/2010 on the

protection of animals used for scientific purposes,

• to popularize new legislation,

• to support the organization of courses in animal experimentation,

• to support the introduction of alternative methods,

• to create a national network of information in this area.



12

Sumarul prezentarilor Abstracts for presentations

Experimentarea pe animale: E timpul să discutăm

Kirk Leech,

European Animal Research Association (EARA)

Experimentarea pe animale rămâne o problemă controversată cu o opoziție puternică. Drept

urmare, angajamentul public al multor cercetători și instituții europene rămâne ezitant, și de

multe ori defensiv. Această lipsă de comunicare pozitivă permite ca vocile celor care se opun

cercetării pe animale să domine discursul public; astfel încât opinia publică și politică este de

multe ori în dubiu privind utilizarea animalelor în cercetare. Acest lucru are potențialul de a

conduce la restricții suplimentare privind cercetarea, în detrimentul stiinţei, medicinii, și

societăţii. De prea mult timp, comunitatea științifică a prins teama extremismului activiştilor

pentru drepturile animalelor, pentru a permite membrilor săi să vorbească în public despre

cercetarea pe animale. Astăzi, această teamă - deși de înțeles - este din ce în ce neîntemeiată.

În timp ce unii cercetători pot întâlni grupuri ce lupta pentru drepturile animalelor, implicați în

activități destul de vocale, dar legale, foarte puțini vor veni vreodată să discute cu extremiștii.

Aceste grupuri pentru drepturile animalelor sunt organizații adesea mari, bine finanțate, cu

avocați profesionişti, lobby-iști, și consultanți mass-media, care pot comanda cu succes o

dezbatere publică pe această temă a cercetării pe animale (de multe ori dezinformând, și având

opinii nefondate); în special în absența comunicării publice din partea comunității științifice. Ca

urmare, publicul are rar o imagine de ansamblu, bine informată, și echilibrată a subiectului.

O mai mare deschidere privind discuţiile privind utilizarea animalelor în cercetare poate încuraja

încrederea publică, și poate permite comunității științifice să aibă o singură voce; în acest sens,

se poate preveni izolarea unor persoane fizice și organizații. Comunicarea proactivă, ajuta în

acumularea de sprijin și o mai bună înțelegere; non-comunicarea va prelungi doar opoziția și

neîncrederea. Noi toți trebuie să jucăm un rol în lămurirea complexelor probleme sociale

implicate în cercetare pe animale, precum și beneficiile pentru sănătatea umană și animală.

Comunitatea științifică nu ar trebui să permită celor care se opun cercetării de animale să

stabilească agenda publică.

Scopul prezentării este de a discuta de ce ar trebui să încurajăm şi să practicăm o mai mare deschidere cu privire la experimentarea pe animale.



13

Animal Research: Time to Talk

Kirk Leech,

European Animal Research Association (EARA)

Animal research remains a contentious issue with a strong vocal opposition. As a result, public

engagement by many European researchers and institutions remains hesitant, and often

defensive. This lack of positive communication allows the voices of those opposed to animal

research to dominate public discourse; with the result that public and political opinion is often

uncertain on the use of animals in research. This has the potential to lead to further restrictions

on research, to the detriment of science, medicine, and society. For too long, the scientific

community has allowed the fear of animal rights extremism to prevent its members from

speaking publicly about animal research. Today, this fear – although understandable – is

increasingly unfounded. While some researchers may encounter animal rights groups, involved

in vocal but lawful activities, very few will ever come across extremists.

These animal rights groups are often large, well-funded organizations with professional

advocates, lobbyists, and media consultants, who can successfully command public discussion

on the subject of animal research (often with misinformation, and unfounded opinion);

particularly in the absence of public communication from the scientific community. As a result,

members of the public are rarely exposed to a comprehensive, well-informed, and balanced

overview of the subject.

Greater openness on the use of animals in research can encourage public trust, and allow the

scientific community to speak with a united voice; in doing so, it can prevent individuals and

organizations from being isolated. Pro-active communications will help to garner support, and

improve understanding; non-communication will only prolong opposition and mistrust. We all

need to play a role in illuminating the complex social issues involved with animal research, and

its benefits to human and animal health. The scientific community should not allow those who

are opposed to animal research to set the public agenda.

The aim of the seminar will be to discuss why we should encourage and practice greater openness about animal research.



14

Experimentarea pe animale în Europa după publicarea Directivei EU 2010/63

Şerban Moroşan,

Facultatea de Medicină Pierre et Marie Curie, Paris, Franţa

Directiva Europeană a fost finalizată, publicată în Jurnalul Oficial al Uniunii Europene şi a intrat în vigoare ca o lege a Uniunii Europene. Directiva stabileşte obiective şi standard comune

minime, pe care Statele Membre trebuie să le transpună în legislaţia naţională. Articolele din Directivă specifică cerinţele legale. Însă alegerea normelor şi metodelor de îndeplinire a cerinţelor este lăsată la latitudinea autorităţilor naţionale.

Noua Directivă oferă o nouă oportunitate de armonizare a legislaţiei în ţările Uniunii Europene. Aceasta ar trebui să facă cercetarea pan –europeană mai uşor de finanţat, atâta vreme cât finanţatorii vor fi asiguraţi că standardele de bunăstare şi cele etice precum şi

autorizarea proiectelor vor avea un status echivalent în toate ţările Uniunii Europene. Intrăm acum într-o perioadă critică pentru viitorul experimentării pe animale. Oamenii

de ştiinţă trebuie să fie vigilenţi pentru ca autorităţile să elaboreze o legislaţie în cel mai pozitiv spirit al Directivei. Această legislaţie trebuie să permită continuu utilizarea responsabilă a animalelor în cercetare pentru beneficiul ştiinţific maximum medical şi veterinar realizat în

condiţii optime ale bunăstării animale.



15

Animal experimentation in Europe after the publication of the EU Directive 2010/63

Serban Morosan,

Faculté de Médecine Pierre et Marie Curie, Paris, France

The Directive has now been finalised and published in the Official Journal of the European Union, and has entered into force as EU law. The Directive sets objectives and minimum common standards, which Member States must transpose into national law. The

articles of the Directive specify the legal requirements. However, the choice of form and methods to achieve those requirements is left to the national authorities.

The new Directive offers a new opportunity for harmonisation between European countries of regulatory outcomes of research involving animals. It should also make pan-EU research easier to fund, since funders will be assured of minimum welfare and ethical

standards, and the authorisation of a given project will have equivalent status in different EU states.

We are now entering a critical period for the future of animal research in Europe. Scientifics must be vigilant that their governments now enact legislation that is in keeping with the more positive spirit of the Directive. That legislation should continue to allow the

responsible use of animals in research for maximum scientific, medical and veterinary benefit carried out in conditions that optimise animal welfare.



16

Armonizarea legislației naționale cu legislația Uniunii Europene în

domeniul protecției animalelor utilizate în scopuri științifice

Magda Gonciarov,

Facultatea de Medicină Veterinară, București, România

Introducerea metodelor alternative în experimentarea pe animale a condus de-a lungul timpului,

la reducerea drastică a numărului de animale utilizate în scopuri ştiintifice în România. Cu toate

acestea, ţara noastră şi-a aliniat în permanenţă legislaţia din acest domeniu, cu cea a Uniunii

Europene. În acest sens, anul trecut a fost transpusă în dreptul intern Directiva 63/2010 privind

protecţia animalelor folosite în scopuri ştiinţifice, transpunere care s-a materializat prin Legea

nr. 43/2014.

Deşi legea este foarte complexă, cuprinzând un număr mare de aspecte, printre care cerinţele

generale şi speciale privind unităţile, îngrijirea şi adăpostirea animalelor, speciile de animale

care pot fi utilizate în proceduri, există o serie de aspecte pentru care legea cere elaborarea

unei legislaţii secundare, în domenii cum ar fi:

- autorizarea crescătorilor, furnizorilor şi utilizatorilor de animale de laborator,

- autorizarea proiectelor de cercetare,

- utilizarea animalelor capturate din sălbăticie,

- utilizarea animalelor fără stăpân şi a celor semi – sălbăticite,

- stabilirea contravenţiilor, etc.

Această lege, nouă pentru peisajul legislativ românesc va determina o creştere a

gradului de conştiinţă în utilizarea acestei categorii de animale şi efectuarea unor cercetari

ştiintifice de o mai buna calitate.



17

The harmonization of Romanian legislation with the

European Union in the field of protection of animals used for

scientific scope

Magda Gonciarov,

Faculty of Veterinary Medicine, Bucharest, Romania

The introduction of alternative methods in animal experimentation, led over time to a drastic

reduction in the number of animals used for scientific scope in Romania. However, our country

has always aligned legislation in this area with the European Union. In this regard, last year was

transposed into national law Directive 63/2010 which refers to animal protection used for

scientific scope, transposition materialized by Law no. 43/2014.

Although the law is very complex, including a large number of issues, including general and

special requirements on the units, care and housing of animals, animal species that can be used

in procedures, there are a number of issues for which the law requires the development of a

secondary legislation in areas such as:

- authorize breeders and users of laboratory animals,

- authorization of research projects,

- used of animals taken from the wild,

- used of stray and feral animals

-setting the penalty, etc.

This law, new for Romanian legislative landscape, will determine an increase in the level of

consciousness in the use of this category of animals and conducting scientific research of the

best quality.



18

Evaluarea etică a proiectelor de cercetare

Cristin Coman,

Institutul Naţional de Cercetare-Dezvolatare pentru Microbiologie şi Imunologie ,,Cantacuzino”,

Bucureşti, Romania

Opinia publică şi lumea ştiinţifică sunt de acord că utilizarea animalelor în experimente

ridică probleme etice complexe, iar evaluarea etică a proiectelor de cercetare este o cale

importantă prin care suntem asiguraţi că experimentarea pe animale este permisă numai atunci

când proiectele au fost supuse unei atente analize.

Evaluarea etică a proiectelor de cercetare este un proces prin care se verifică justificarea

unor investigaţii ştiinţifice particulare şi se pot aplica la nivelul instituţiilor, la obţinerea unei

aprobări la nivel naţional sau internaţional. Legea 43/2014 privind protecţia animalelor folosite

în scopuri ştiinţifice, lege care transpune Directiva Uniunii Europene 63/2010, prevede în

articolul 35 (1): ,,Proiectele ce implică utilizarea animalelor în proceduri se desfăşoară numai cu

o autorizare prealabilă din partea autorităţii competente şi cu aceasta”.

Aceasta presupune mai întâi evaluarea proiectelor. La nivel instituţional evaluarea etică a

proiectelor de cercetare ar trebui făcută de un ,,Comitet de Etică”, care ar trebui mai mult decât

un comitet formal să fie şi un centru de informare. Cele mai importante aspecte în evaluarea

proiectelor de cercetare se referă la:

Scopul şi descrierea studiului,

3R (înlocuire, reducere, rafinare),

Informaţii retrospective depre studii similare,

Informaţii despre cercetător şi instituţie

Calificarea personalului.

Procesul şi dinamica evaluărilor etice trebuie să fie continuu monitorizate luându-se mereu în

considerare dezvoltarea ştiinţifică şi modificările legislative.



19

Ethical Evaluation of Scientific Procedures

Cristin Coman,

National Institute for Research and Development in Microbiology and Immunology ,,Cantacuzino”,

Bucharest, Romania

The general public and the scientific community agree that the use of animals in

experiments raises complex ethical issues and the ethical evaluation of research projects is an

important way to assure us that the animals experimentation are permitted only if the projects

have been the subjects to careful scrutiny.

Ethical evaluation is a process of reviewing the justification for a particular scientific

investigation and may apply at institutional level or for approval of the study at national or

international level. The law 43/2014 regarding the protection of animals used in scientific

purposed, law that transpose the Europe Union Directive 63/2010, in article 35 (1) says: ,, The

projects that involved the use of animals in procedures is conducted only with prior

authorization from the competent authority and with it " .

This involves first evaluating projects. At the institutional level ethical evaluation of

research projects should be made by a ,, Ethics Committee ", which should be more than a

formal committee, also to be an information center. The most important aspects in evaluating

research projects relating to:

Purpose and description of the study

The 3 Rs (replacement, refinement, reduction)

Retrospective information from similar studies

Information about the researcher ant institution

Personal competence

Ethical review process and its dynamics must be continuously monitored, constantly

taking into account scientific development and legislative changes.



20

Transportul animalelor vii într-un mediu sigur

Ştefan Şerb

World Courier Romania

Scurt sumar: Biosecuritatea animalelor

Reglementări internaţionale

Cuvinte cheie în asigurarea siguranţei animalelor vii:

- Cunoaştere

- Planificare

- Comunicare

- Orar

- Personal dedicat

Metode de transport

Studii de caz



21

Transporting Live Animals on safe environment

Ştefan Şerb

World Courier Romania

Short summary: Animal Biosecurity

International Guidelines

Keys in ensuring live animals safety: -Knowledge

-Planning

-Communication

-Timing

-Dedicated staff Transportation methods

Case studies



22

Noua biobaza a IBPC

Ioana Madalina Fenyo

Institutul de Biologie si Patologie Celulara “Nicolae Simionescu” al Academiei Romane

In anul 2012, Institutul de Biologie si Patologie Celulara “Nicolae Simionescu” (IBPC) al

Academiei Romane a incheiat cu success proiectul de modernizare CARDIOPRO, finantat din

Fonduri Structurale Europene si de catre Guvernul Romaniei, proiect care a permis reabilitarea

completa a cladirii institutului, precum si achizitionarea de echipamente de ultima generatie.

Noua biobaza SPF (Specific Pathogen-Free) a IBPC are o capacitate totala de 1215 custi de

soareci si 258 custi de sobolani (567 custi de soareci si 150 custi de sobolani in zona de

breeding, 567 custi de soareci si 108 custi de sobolani in zona experimentala si 81 custi de

soareci in aria de transductie BSL2). Biobaza este deservita de o spalatorie echipata cu masina

de spalat si dezinfectat custi AC 1400 (Steelco), statie de spalat/dezinfectat si umplut biberoane

(Steelco) si statie de golire custi (Allentown). Mancarea, apa, custile, consumabilele si

echipamentele sunt sterilizate inainte de introducerea in zona (autoclav cu doua usi E-27599,

Matachana), sau decontaminate cu peroxid de hidrogen (SAS E-27605, Matachana). Toate

animalele sunt cazate in rack-uri cu custi ventilate individual (Allentown) si manipulate in statii

de schimb custi cu flux laminar (Allentown). Personalul poarta echipament de protectie steril si

respecta reguli stricte de operare in interiorul biobazei. In zona experimentala sunt amenajate

doua sali de chirurgie echipate cu stereomicroscoape Stemi 2000-C (Zeiss) cu camera digitala

AxioCam ERc 5s, mese de chirurgie cu aspiratie descendenta, sisteme de anestezie gazoasa

(Minerve) cu modul de reglare a temperaturii (Minerve), camere cu CO2 (Minerve), surse de

lumina (Harvard Apparatus), unitate de injectare in vena caudala (Kent Scientific), sistem

PowerLab de monitorizare fiziologica (ADInstruments), sterilizator pentru instrumentar

(Matachana), ventilatoare (Harvard Apparatus, Ugo Basile), paturi homeotermice (Panlab),

microfuga (Hettich). Platforma este de asemenea dotata cu un iradiator cu raze X (RS2000 Rad

Source), un ecograf cu Doppler Vevo 2100 (VisualSonics) si un sistem de imagistica in vivo IVIS

Spectrum (Caliper, PerkinElmer). Biobaza dispune de un laborator de transgeneza care

functioneaza in interiorul zonei de breeding, echipat cu o statie de microinjectie Leica AM 6000

(Leica/Eppendorf). Camera de carantina este dotata cu izolatoare InnoSte isolators

(EuroBioConcept) si statie de transfer animale (Allentown).

Multumiri: Autorul multumeste proiectului CARDIOPRO (POS CCE – Axa II, ID: 143) si

Academiei Romane. Autorul are un sprijin financiar acordat prin proiectul

POSDRU/159/1.5/S/133391, 2007-2013.



23

The new ICBP animal core facility

Ioana Madalina Fenyo, PhD

Institute of Cellular Biology and Pathology “Nicolae Simionescu” of the Romanian Academy

In 2012, the Institute of Cellular Biology and Pathology (ICBP) “Nicolae Simionescu” of the

Romanian Academy, has completed successfully the project CARDIOPRO - a modernization

project funded by the EU Structural Funds and by the Romanian Government, which allowed full

rehabilitation of the building as well as the acquisition of last generation equipment. ICBP’s new

Specific Pathogen-Free animal facility has a total capacity of 1215 mouse cages and 258 rat

cages (567 mouse cages and 150 rat cages in the breeding area, 567 mouse cages and 108 rat

cages in the experimental area, and 81 mouse cages in the BSL2 transduction area). The animal

facility is serviced by a washing area equipped with an AC 1400 washer disinfector (Steelco),

baby bottle washer disinfector with filling station (Steelco) and a DS-500 Dump Station

(Allentown). All food, caging, consumables and equipment are sterilized prior to entry (892-liter

two-door autoclave, E-27599, Matachana), or decontaminated with hydrogen peroxide (SAS E-

27605, Matachana). All animals are housed in IVC racks (Allentown) and handled under

laminar-flow exchange stations (Allentown). All personnel wears sterile protective clothing prior

to entry and must follow strict standard operating procedures while in the facility. Inside the

experimental area, there are two surgery rooms equipped with Stemi 2000-C stereomicroscopes

(Zeiss) fitted with Digital Microscopy Cameras AxioCam ERc 5s, aspirating surgery tables, gas

anesthesia induction systems (Minerve) with temperature regulation module (Minerve), CO2

chambers (Minerve), light sources (Harvard Apparatus), tail vein injection unit (Kent Scientific),

PowerLab physiological monitoring equipment (ADInstruments), small sterilizer for instruments

(Matachana), ventilators (Harvard Apparatus, Ugo Basile), homeothermic blankets (Panlab),

microfuge (Hettich). The platform is also equipped with an irradiation unit (RS2000 Rad Source

X-ray irradiator), a Vevo 2100® High-resolution Imaging System (VisualSonics), and an IVIS

Spectrum in vivo Imaging System (Caliper, PerkinElmer). The facility has a transgenesis

laboratory functioning inside the breeding area equipped with a Leica AM 6000 platform for

micromanipulation applications (Leica/Eppendorf). The quarantine room is equipped with

InnoSte isolators (EuroBioConcept) and animal transfer station (Allentown).

Acknowledgements: CARDIOPRO project (POS CCE – Axa II, ID: 143) and Romanian

Academy. The author acknowledges the financial support of POSDRU/159/1.5/S/133391, 2007-

2013.



24

Dezvoltarea de noi tehnologii în monitorizarea sănătăţii coloniilor

de rozătoare şi 3 R’s

Şerban Moroşan,


Cuştile ventilate individual (IVC) sunt larg utilizate în zilele noastre cu scopul protejării

animalelor şi operatorilor. Monitorizarea sănătăţii acestor unităţi este tot timpul o problemă

deoarece fiecare cuşcă este, în realitate, o unitate independentă.

Aceste sisteme sunt monitorizate tradiţional cu animale santinelă expuse pe aşternut

murdar şi testate serologic, microbiologic şi parazitologic. Această abordare se bazează pe

variabilele cum ar fi prevalenţa bolii, cantitatea agenţilor transmişi prin animalele rezidente,

frecvenţa şi receptivitatea santinelelor.

Progresele în tehnologie fac posibilă altă abordare, permiţând utilizarea animalelor

imunodeficiente sau monitorizarea doar a mediului înconjurător.

În plus, la nivel molecular, există posibilitatea efectuarii de examene serologice la

rozătoare, fară eutanasierea animalelor.

Aceste noutăţi tehnologice, împreună cu alte tehnici de laborator, fac posibil screeningul

animalelor şi recoltarea de probe fără eutanasierea animalelor. Noile tehnologii permit diferite

monitorizări ale sănătăţii coloniilor de rozătoare prin combinarea recoltării de probe de la

animale, dar şi monitorizarea mediului înconjurător.

Combinaţia acestor tehnologii moderne pot reduce numărul de animale santinelă,

maximizănd efectele 3 Rs şi reducând costurile programelor de monitorizare a sănătăţii.



25

New Technological Developments in Health Monitoring of rodent

colonies and 3 R’s

Şerban Moroşan,


IVCs are widely used nowadays with the aim of protecting animals and operators. Health

monitoring of these units have always been problematic because each cage is, in reality, an

independent unit. Traditionally these systems are monitored with sentinels exposed to dirty

bedding, tested via serology, microbiological culture and parasitology. This approach relies upon

variables such as prevalence of disease, dose of agents that are shed by resident animals,

frequency and receptivity of the sentinel.

Advances in technologies have enabled other approaches enabling the use of

immunodeficient sentinels or relying on environmental monitoring only.In addition to the

improvement in this area of molecular diagnostic, it is now possible to perform non-terminal

serological tests in rodents.

This news technological, in conjunction with other laboratory techniques, makes possible

non-terminal sampling screening of animals.The new technologies can allow performing a

different health monitoring of rodent colonies with non-terminal samples from animal and

environment, in combination.

The combination of these modern technologies can reduce the number of sentinels,

enhancing the 3Rs and possibly reducing the cost of screening programs.



26

Soluţii moderne de gazduire a rozătoarelor

Dr. Gianpaolo Milite,

Tecniplast, Italia

Evolutia sistemelor de gazduire a rozatoarelor a schimbat radical modul de lucru in

cadrul biobazelor ca si bunastarea animalelor folosite in cercetare. Pornind de la custi de lemn ,

care erau nepotrivite pentru a mentine animalele curate din punctdevedere microbiologic , la

modernitatea custilor ventilate individual (IVC) cu posibilitatea lor e a gazdui toate categoriile de

rozatoare , tehnicienii , oamenii de stiinta , medicii veterinari se afla in fata unor noi provocari in

termenii intelegerii impactului pe care il are micromediul inconjurator asupra animalelor de

laborator.

Vechi probleme cum ar fi temperatura , umiditatea relativa , intensitatea luminii si altele

sint astazi revizuite atunci cind luam in considerare mediul in IVC.In plus , modul in care sint

ventilate custile poate diferi de la un brand de fabricatie la altul , acest lucru avind un impact in

termeni de performanta si ca rezultat asupra bunastarii animalelor.

O trecere in revista a principalelor aceste aspecte legate de solutiile modern de gazduire

a animalelor si care se aliniaza legislatiei internationale ,va fi facuta in cursul acestei expuneri.



27

Modern housing system for rodents

Dr. Gianpaolo Milite,

Tecniplast, Italia

The evolution of housing systems for rodents has dramatically changed the way to work

in the animal facilities and the welfare of rodents used in research. From wood cages,

unsuitable to maintain microbiologically clean animals, to the state of the art of Individually

Ventilated Caging Systems (IVCs) with the possibility to house all microbiological categories of

rodents, technicians, scientist, veterinarians are facing new challenges in terms of

understanding the impact of microenvironment on laboratory animals.

Old issues like temperature, relative humidity, light intensity and more are today

revisited when considering the environment in IVCs. In addition the way to ventilate cages can

be different between brands of equipment and this can have an impact in terms of

performances and consequently animal welfare.

An overview of key aspects pertaining modern rodents’ housing also in the light of

international guidelines and laws will be given during the talk.



28

Cercetarea pe animale: realizarea, analiza si raportarea

experimentelor in vivo

Mihai Bogdan Preda

Institutul de Biologie si Patologie Celulara „Nicolae Simionescu”

Insuficienta cardiaca reprezinta una din cauzele majore de mortalitate la nivel mondial.

Unul dintre factorii care contribuie la progresia insuficientei cardiace il reprezinta moartea

cardiomiocitelor in urma unui infarct miocardic, ce determina modificari arhitecturale complexe,

inclusiv formarea unei cicatrice fibroase si pierderea functiei ventriculare. Pentru a preveni sau

vindeca insuficienta cardiaca, este imperativ sa se inteleaga patogeneza bolii cardiace ischemice

si sa se dezvolte noi terapii. Pentru aceasta, modele experimentale animale sunt instrumente

importante ce pot fi utilizate pentru a se descoperi mecanismele moleculare implicate in

patologia inimii. Cu toate acestea, progresul medicinei prin experimentele pe animale inca mai

are loc de imbunatatiri. Astfel, principiile celor 3R (înlocuire, reducere și imbunatatire) trebuie

mutate din “crescatoriile de animale" inspre larga comunitate stiintifica, deoarece ele sunt

concepute ca un cadru pentru efectuarea stiintei de inalta calitate.

In aceasta prezentare voi discuta cateva aspecte legate de designul, analiza și

raportarea experimentelor efectuate pe animale, exemplificandu-le pe un model de soarece cu

infarct miocardic indus experimental. Va fi subliniata importanta cunoasterii detaliate a

obiectivelor stiintifice si a proiectarii experimentelor, precum si modul in care noi modele

animale si instrumentele moderne vor ajuta la intelegerea biologiei umane si vor anticipa

eficacitatea si siguranta noilor medicamente.

Multumiri. Rezultatele prezentate au fost obtinute cu sprijinul CNCSIS-UEFISCSU, PNII-

IDEA Program, 250/2007, CNCSIS (PCCA-1-THERION 79/2012), Proiectului CARDIOPRO (ID:

143) si al Academiei Romane. Autorul are un sprijin financiar acordat prin proiectul

POSDRU/159/1.5/S/133391, 2007-2013.



29

Animal research: the design, analysis and reporting of in vivo

experiments

Mihai Bogdan Preda

Institute of Cellular Biology and Pathology „Nicolae Simionescu”

Heart failure is a major cause of mortality worldwide. One of the contributing factors in

the progression of heart failure is the loss of cardiomyocytes after myocardial infarction, which

promotes complex architectural alterations, including the formation of fibrous scar and the loss

of ventricular function. In order to prevent or cure heart failure, it is imperative to understand

the pathogenesis of ischemic heart disease and develop novel therapies. In this respect, animal

models of cardiovascular disease are important tools to uncover the molecular mechanisms of

the heart pathology. However, advancing medicine through experiments on animals still has

room for improvement. Thus, the principles of the 3Rs (Replacement, Reduction and

Refinement) have to move „out of the animal facility” and engage the wider scientific

community; as they are designed as a framework for conducting high quality science.

In this presentation, I will highlight several aspects related to the design, analysis and

reporting of experiments conducted on animals, giving as an example the mouse model with

experimentally induced myocardial infarction. I will discuss the importance of deep

understanding of the scientific objectives and experimental designs, as well as how better

models and cutting edge approaches help us understand human biology and predict the efficacy

and safety of new medicines.

Acknowledgements. Presented work was supported by CNCSIS-UEFISCSU, PNII-IDEA

Program, 250/2007, CNCSIS (PCCA-1-THERION 79/2012), CARDIOPRO Project (ID: 143), and

Romanian Academy. The author acknowledges the financial support of

POSDRU/159/1.5/S/133391, 2007-2013.



30

Protejarea sănătăţii animalelor

Şerban Moroşan,


Calitatea microbiologică a animalelor utilizate în experimente pot influenţa critic atât

bunăstarea animalelor cât şi validitatea şi reproductibilitatea datelor ştiinţifice. De aceea este

important pentru crescătorii şi centrele experimentale să stabilească un program de

monitorizare a sănătăţii animalelor de laborator ca parte integrantă a oricărui sistem de

asigurare a calităţii.

Factorii de mediu,cei genetici precum şi interacţiunea dintre ei pot influenţa condiţia

animalelor utilizate în cercetare.Mai multe grupe de microorganism sunt responsabile de

infectarea rozătoarelor. Majoritatea infecţiilor nu duc la semne clinice vizibile. De aceea, absenţa

simptomelor de boală are doar o valoare limitată de diagnostic. Infecţiile latent sau inaparente

pot avea oricum un impact considerabil asupra rezultatelor experimentelor pe animale.

Este important ca animalele să fie libere de agenţi patogeni care pot interfera cu

modelele specifice sau cu proiectele de cercetare. Cea mai bună utilizare a resurselor limitate

pentru supravegherea sănătăţii este corelarea frecvenţei monitorizării cu riscul contaminării,

fiind necesare frecvente testări a unui număr reprezentativ de animale pentru cei agenţii

patogeni cei mai frecvenţi şi testări mai rare pentru agenţii mai puţin frecvenţi. In considerare

trebuie luaţi şi agenţii emergenţi precum şi noile tehnologii de monitorizare. Un nou agent

monitorizat sau o nouă tehnică nu schimbă scopul programului de monitorizare a sănătăţii,

poate schimba doar raportarea sau modalităţile de efectuare a monitorizării. Programul de

monitorizare a sănătăţii trebuie să permită evaluarea corectă a măsurilor de protecţie puse în

practică în unitate.

Designul programului de monitorizare a sănătăţii trebuie să fie adaptat la necesităţile

locale şi impune luarea în considerare a tipului microbiologic al unitaţii, speciile de animale,

statusul immunologic, numărul de animale, frecvenţa monitorizării, animalele şi probele ce se

vor colecta, microorganismele care se vor testa, metodele de diagnosticare precum şi istoricul

sanitar al unităţii.



31

Protecting Animal Health

Şerban Moroşan,


The microbiological quality of experimental animals can critically influence animal

welfare and the validity and reproducibility of research data. It is therefore important for

breeding and experimental facilities to establish a laboratory animal health monitoring (HM)

programme as an integrated part of any quality assurance system.

Environmental and genetic factors and their interactions may influence the suitability of

the animal for use in research. Several groups of microorganisms are responsible for infection in

rodent. Most infections do not lead to overt clinical signs. Therefore, an absence of disease

symptoms has only limited diagnostic value. Latent or inapparent infections, however, can have

a considerable impact on the outcome of animal experiments.

It is important that animals are free of agents that may interfere with specific models or

projects. The best use of limited health surveillance resources is to correlate monitoring

frequency with the risk of contamination, frequently testing a representative number of

appropriately chosen animals for the most prevalent agents in an area and infrequently testing

for rare agents. Emerging infectious agents and new technologies are also considerations. A

new agent or technique does not change the goal of a health monitoring programme, only the

reporting or the means of monitoring. The health monitoring programme must allow for the

accurate assessment of the protective measure put in place in the unit.

The design of the programme must be tailored to local needs and requires consideration

of the microbiological unit(s), the animal species, the immune status and the number of the

animals in the unit(s), the frequency of monitoring, which animals are sample(s) are to be

collected, the organisms for which to test, the detection methods and the health history of the

unit.



32

Transgeneza lentivirala, o metoda inalt eficienta pentru

investigarea functiei

unor elemente cis-reglatoare

Sebastien Dussaud,

Facultatea de Medicina Pierre et Marie Curie, Paris, Franţa

Factorul de transcriere Neurogenin 3 este responsabil pentru diferentierea endocrina in

dezvoltarea pancreasului. In prezent, aspectele privind controlul transcriptional care

orchestreaza dezvoltarea pancreatica sunt aproape complet elucidate. Cu toate acestea,

informatii cruciale privind controlul expresiei in vivo a ngn3 lipsesc. Studii anterioare au

demonstrat ca secventa upstream de 5.7 kb din gena umana NEUROG3 determina un patern de

expresie spatio-temporal corect in soarecii transgenici, insa elementele cis-reglatoare critice din

aceasta secventa raman a fi elucidate. Cateva studii au stabilit existenta unor factori de

transcriere care interactioneaza cu secvente specifice din regiunea 5’ a Neurog3, desi functia in

vivo a unor astfel de elemente reglatoare nu a fost investigata.

Pentru a studia acest aspect particular, am dezvoltat metode de investigatie in vivo bazate pe

transgeneza, folosind fie injectia de ADN, fie transductia lentivirala pentru investigarea acestor

elemente reglatoare. Am identificat un fragment de 2.2 kb care controleaza expresia unei gene

raportor in celulele care exprima ngn3 in pancreas. Acest enhancer poate recruta in vivo factorii

de transcriere Pdx1, Hn1b si Foxa2, iar aceasta recrutare este esentiala pentru expresia ngn3.



33

Lentiviral transgenesis, a highly efficient approach to dissect cis-

regulatory function

Sebastien Dussaud, PhD


The transcription factor Neurogenin 3 is responsible for endocrine determination in the

developing pancreas. The picture of transcription control that orchestrates pancreatic

development is today almost complete. Nevertheless, crucial information concerning ngn3 in

vivo expression control are still missing. Previous work demonstrated that the 5.7 kb upstream

sequence of human NEUROG3 can drive a correct spatio-temporal expression pattern in

transgenic mice, yet critical cis-elements within this sequence remain to be established. Several

studies have revealed transcription factors that interact with specific sequences in the Neurog3

5’ region, although the in vivo function of such regulatory elements has not been examined.

To address this specific question we have developed in vivo approaches based on transgenesis

using either DNA injection or lentiviral transduction for fine dissection of regulatory elements.

We have identified a 2.2 kb fragment that controls expression of a reporter gene in ngn3

expressing cells in the pancreas. This enhancer is able to recruit in vivo the transcription factors

Pdx1, Hn1b and Foxa2 and this recruitment is essential for ngn3 expression.



34

Modificarile ultrastructurii la nivel cardiac si renal datorate

hipertensiunii arteriale indusa cu L-Mame hamsterilor sirieni aurii

Mădălina Dumitrescu, Gabriela Tanko, Doina Popov

Institutul de Biologie si Patologie Celulară “Nicolae Simionescu”, Bucureşti, Romania

Oxidul nitric (NO) este sintetizat din substratul L-arginina sub acţiunea uneia din cele trei

izoforme distincte ale sintezei oxidului nitric (NOS). Recent s-a demonstrat ca NO modulează activitatea mitocondrială în condiţiile insuficienţei cardiace şi renale. În modelele experimentale pe animale, inhibarea cronică a producţiei de NO cu blocanţi ai NOS induce hipertensiune

arterială. În acest studiu am investigat alterările ultrastructurale apărute la nivel cardiac şi renal în condiţiile unui deficit de NO indus prin administrarea cronică de L-NAME (NG-nitro-L-arginin metil ester; inhibitor al NOS). În acest scop am urmărit:

a) modificările ultrastructurale ale cardiomiocitelor şi ale complexelor joncţionale intercelulare din ventriculul stâng; b) aspectele electronomicroscopice ale celulelor din constituţia glomerulului renal.

Materiale şi metode: Hamsterii sirieni aurii, masculi, au fost împărţiţi aleator în: a) grupul HT cărora li s-a administrat timp de 4 luni L-NAME (45 mg/kg corp/zi), prin gavaj; b) grupul C (control), format din hamsteri de aceeaşi varsta cu cei HT, care au primit placebo. La sfârşitul

perioadei experimentale, hamsterii au fost anesteziaţi si a fost masurată invaziv presiunea arterială. Hamsterii au fost sacrificaţi, probe de sange au fost recoltate pentru determinari biochimice, iar inima si rinichii au fost excizaţi, cântăriţi şi procesaţi pentru microscopie

electronică. Rezultatele acestui studiu au arătat că, în comparaţie cu grupul C, hamsterii din grupul HT au prezentat creşterea semnificativă a presiunii arteriale, diminuarea substanţială a nivelelor serice de NOx, creşterea conţinutului de carbonili proteici in omogenatele tisulare

cardiac şi renal şi hipertrofia ventriculului stâng şi a ţesutului renal. La nivel electrono-microscopic au fost evidenţiate: 1) în inimă: dezorganizarea sarcomerelor şi modificări ale arhitecturii joncţiunilor de comunicare si a celor aderente sugerând diminuarea comunicării

intercelulare şi alterări ale contractilităţii muşchiului cardiac; 2) în cortexul renal: colapsarea capilarelor glomerulare, pierderea fenesterelor celulelor endoteliale, fuziunea unora dintre pedicelele podocitelor şi expansiunea matricei mezangiale.

Studiul nostru dovedeşte faptul că deficitul cronic de NO în hipertensiunea arterială este implicat în alterarea comunicării dintre miocitele ventriculare şi în modificarea barierei de filtrare glomerulară, contribuind la insuficienţa cardiacă şi renală asociate bolii hipertensive.

Acest studiu a beneficiat de suportul financiar al Academiei Române. De asemenea, autoarea M. Dumitrescu mulţumeste pentru suportul financiar acordat prin proiectul POSDRU / 159/1.5/S/133391, finanţat de Fondul Social European prin Programul Operaţional Sectorial – Dezvoltarea Resurselor Umane 2007 – 2013.



35

Cardiac and renal alterations in L-Name induced hypertensive on

golden Syrian hamsters

Madalina Dumitrescu, GabrielaTanko, Doina Popov

Institute of Cellular Biology and Pathology “Nicolae Simionescu”, Bucharest, Romania

Nitric oxide (NO), synthesized from L-arginine by NO synthase (NOS), is a key molecule regulating cardiovascular and fluid-balance homeostasis. In experimental animal models administration of NOS inhibitors causes systemic hypertension. Recent evidence indicates that

NO can modulate mitochondrial metabolism, and dysfunctional mitochondria participates in the development and progression of hypertension. This study aimed to examine the fine structural alterations in the left ventricle and renal cortex of hamsters in which NO deficiency was induced

by the chronic administration of NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME), a NOS inhibitor. We investigated ultrastructural changes in: a) cardiomyocytes, and intercellular junctional complexes, and b) in renal glomerular cells.

Materials and Methods: Male Golden Syrian hamsters were randomly divided into two groups: hypertensive (HT) hamsters that were given 45 mg/kg/day L-NAME by gavage, for 4 months, and control (C) group, consisting of age-matched hamsters which received placebo. At

the end of the experiment, hamsters were anesthetized and blood pressure was measured invasively. Hamsters were sacrificed, blood samples were collected for biochemical assays, and heart and kidneys were excised, weighed, and processed for electron microscopy. The results

showed that, as compared with C group, HT hamsters manifested significant elevated blood pressure, left ventricular and renal tissue hypertrophy, diminished serum NOx levels, and augmented protein carbonyl content in homogenates of cardiac and renal tissues, the latter

being indicative for an increased oxidative stress. The electron micrographs from HT hamsters evidenced: i) myofibrils and mitochondria disarray, and disturbed architecture of the intercalated discs at the termini of the cardiomyocytes, including lateralized gap junction, or

widened extracellular space at the sites of adherens junctions, suggestive for alterations of cardiac contractility; ii) collapsed glomerular capillaries, loss of endothelial cells fenestrations, focal effacement of the podocytes foot processes and mesangial matrix expansion, denoting

renal dysfunction. Our findings point to a critical role of chronic NO deficiency for impaired cell-to-cell communication, and altered glomerular filtration barrier, contributing to heart failure and renal insufficiency in hypertension.

This study received the financial support from the Romanian Academy. Also, the author M.

Dumitrescu acknowledges the financial support of the POSDRU / 159/1.5/S/133391project,

financed by European Social Found within the Sectorial Operational Program Human Resources

Development 2007-2013



36

Efectul exercitat de nanosisteme metalice încarcate cu citostatic

asupra șoarecilor purtători de melanom

Laurențiu Anghelache1,3, Maria Comănescu1, Mocanu Mihaela1, Florian Dumitrache2,4, Claudiu Fleaca2,

Bogdan Marinescu 1, Gheorghița Isvoranu1, Sevinci Pop1, Valentin Nicorescu3, Maria Crivineanu3

1. INCD “Victor Babeș”, București, Romania

2. Institutul Național de Fizica Laserilor, Plasmei și Radiațiilor, Măgurele, Romania

3. Universitatea de Științe Agronomice și Medicină Veterinară, București, Romania

4. Universitatea Politehnică București, Romania

Obiective: Am inițiat un studiu preclinic în model murin singeneic (șoareci C57BL/6 purtători

de melanom) pentru investigarea unui agent teranostic nou cu activitate antitumorală.

Nanosistemul SF83-DOPA-VB1, format din nanoparticule superparamagnetice din oxid feric

(SF83), condiționate pentru dispersare cu L-DOPA (SF83-DOPA), și îmbrăcate cu violamicină

(VB1- antibiotic antraciclinic cu activitate antitumorală), a fost construit pentru a realiza într-un

singur pas diagnosticul imagistic și terapia tumorii. Datorită superparamagnetismului, SF83

acționează ca substanță de contrast cu proprietăți superioare pentru imagistica tumorii prin

RMN, iar VB1 are proprietăți antitumorale dovedite. În plus, nanoparticulele metalice pot

intensifica acumularea citostaticului în tumoră, datorită permeabilitătii crescute a

microvascularizației locale. Concentrarea citostaticului în tumoră pentru atingerea unei

concentrații terapeutice critice permite reducerea dozei eficace de citostatic administrat

sistemic, și implicit limitarea potențialelor efecte adverse.

Metodologie. Nanoparticulele magnetice de oxid feric au fost sintetizate prin tehnica de

piroliză laser utilizând un laser cu CO2 (λ=10.59 μm) focalizat și un amestec gazos, reactiv

compus din Fe(CO)5, C2H4, O2 și Ar și acoperite apoi cu L-DOPA în suspensie sub acțiunea

ultrasunetelor. Am investigat șoareci C57 BL/6 purtători de melanom B16-F10, cărora li s-au

administrat intravenos în două doze, la interval de 48 de ore, nanosistemele SF83-DOPA și

SF83-DOPA-VB1 în doză de 0,5 mg/șoarece, reprezentând aproximativ 0,025 mg / g corp la

fiecare inocul (40μL dintr-o, suspensie de nanoparticule SF83-DOPA sau SF83-DOPA-VB1 cu

concentrația de 12,5 mg/mL). Lotul control de melanom a fost constituit din animale purtătoare

de tumoră cărora li s-au administrat în două doze 40μL de tampon fosfat salin (TFS), în același

mod în care s-au inoculat sistemele de nanoparticule. S-a constituit și un lot de animale fară

tumoră cărora li s-au administrat 40μL de TFS. După 1, 15 și 19 zile de la ultima administrare

de nanosisteme, șoarecii au fost sacrificați. Au fost recoltate probe de sânge pentru

hemoleucogramă și organe ce ar putea fi afectate de nanosisteme (rinichi, ficat, splina, creier).

Pentru studiul histopatologic fragmentele tisulare recoltate la necropsie au fost fixate în



37

formalină tamponată neutră 10%. Ulterior fragmentele au fost deshidratate cu grade

crescătoare de etanol (70, 80, 90, 95 și 100%), următorul pas fiind clarificarea în băi succesive

de xilen. Fragmentele au fost apoi incluse la parafină și s-au tăiat secțiuni (4-5µm) care au fost

colorate cu hematoxilină și eozină.

Rezultate. Șoarecii purtători de melanom prezintă comparativ cu animalele normale modificări

semnificative ale parametrilor hematologici: număr crescut de limfocite, monocite, neutrofile,

eozinofile și bazofile, și număr scăzut de trombocite. În ceea ce privește linia roșie, șoarecii

purtători de tumoră prezintă număr redus de hematii, concentrație joasă de hemoglobină și

hematocrit scăzut. Nanosistemele SF83-DOPA și SF83-DOPA-VB1 administrate intravenos nu au

modificat parametrii hematologici ai șoarecilor purtători de melanom.

Investigația histologică a organelor prelevate a evidențiat efecte toxice exercitate de

nanosisteme la nivelul rinichiului, ficatului, splinei și creierului, reprezentate prin leziuni de stază

cronică, depozite de pigment intracelular, modificări distrofice, în principal de tumefiere celulară

și degenerescență granulovacuolară și, focal, moderat infiltrat inflamator.

Concluzii. Modificările histologice particulare determinate de nanosistemele investigate au

evidențiat toxicitatea tisulară a acestora, dar la nivel hematologic nu s-au înregistrat efecte

notabile. Potențialul toxic al nanosistemelor va trebui luat în considerație pentru dezvoltarea lor

ca agenți teranostici în cancer.

Această lucrare este parțial susținută de Proiectul -Dezvoltarea resurselor umane – doctoranzi și

postdoctoranzi – pentru cercetare de excelență în domeniile sănătate și biotehnologii (DPD)

POSDRU/159/1.5/S/14153.



38

Effect of metal nano-systems loaded with cytostatic

on mice with melanoma

Laurențiu Anghelache1,3, Maria Comănescu1, Mocanu Mihaela1, Florian Dumitrache2,4, Claudiu Fleaca2,

Bogdan Marinescu 1, Gheorghița Isvoranu1, Sevinci Pop1, Valentin Nicorescu3, Maria Crivineanu3

1. NIRD ,,Victor Babes”, Bucharest, Romania

2. National Institute for Lasers, Plasma and Radiation Physics, Magurele, Romania

3. University of Agronomical Sciences and Veterinary Medicine, Bucharest, Romania

4. University Politehnica, Bucharest, Romania

Objectives: We initiated a preclinical study in syngeneic murine model (C57 BL / 6 melanoma

carriers) to investigate a new theranostic agent with antitumor activity. SF83-DOPA-VB1

nanosystems consisting of super paramagnetic iron oxide nanoparticles (SF83), subject to L-

DOPA dispersion (SF83-DOPA), coated with violamicine (VB1- anthracycline antibiotic with

antitumor activity) was constructed to achieve in one step diagnostic imaging and tumour

therapy. Thanks to super paramagnetism, SF83 acts as a contrast agent with superior

properties for tumour imaging by MRI, and VB1 has proven antitumor properties. In addition,

metal nanoparticles can enhance cytostatic accumulation in tumour due to increased

microvascular permeability local. Cytostatic concentration in the tumour to reach a critical

therapeutic concentration allows the reduction of the effective dose of chemotherapy

administered systemically, and therefore reduces the potential of adverse effects.

Methodology: Iron oxide magnetic nanoparticles have been synthesized by laser pyrolysis

technique using a CO2 laser (λ = 10.59 μm) focused and a gas mixture, reagent compose by

Fe(CO)5, C2H4, O2 and Ar and then coated with L DOPA in suspension under the action of

ultrasound. We investigated C57BL/6 mice bearing B16-F10 melanoma, which were

administered intravenously in two doses at an interval of 48 hours, nanosystems SF83-SF83-

DOPA and DOPA-VB1 at a dose of 0.5 mg / mice, representing about 0.025 mg / g body weight

every inoculum (40μL of a suspension of nanoparticles SF83-SF83-DOPA or DOPA VB1

concentration of 12.5 mg / mL). The control group consisted of melanoma tumour-bearing

animals which had received two doses of 40μL phosphate buffer saline (PBS) in the same

manner in which they were inoculated nanoparticles systems. Was formed and a lot of animals

without tumours which were administered 40μL of PBS. After 1, 15 and 19 days after the last

administration of nanosystems, the mice were sacrificed. Blood samples were collected for

blood counts and organs that could be affected by nanosystems (kidney, liver, spleen, brain). In

order to study histopathological tissue, fragments collected at necropsy were fixed in 10%

neutral buffered formalin. Subsequently, the fragments were dehydrated in increasing ethanol



39

grades (70, 80, 90, 95 and 100%), the next step was to clarify in xylene successive washing.

The fragments were included in paraffin and then cut off sections (4-5μm) which were stained

with haematoxylin and eosin.

Results: Melanoma-bearing mice compared with normal animals show significant changes in

haematological parameters: increased number of lymphocytes, monocytes, neutrophils,

eosinophils and basophils, and low platelet count. Regarding the red line, tumour-bearing mice

show reduced number of red blood cells, haemoglobin and haematocrit low concentration

decreased. SF83 SF83-DOPA and nanosystems-DOPA-VB1 intravenous did not alter

haematological parameters of mice bearing melanoma. Histological investigation of organs

showed toxic effects exerted by the nanosystems in the kidneys, liver, spleen and brain, lesions

represented by chronic stasis, intracellular pigment deposits, and dystrophic changes, in

principal cell swelling and granular-vacuolated degeneration and focal, moderate inflammatory

infiltrate.

Conclusions: Histological changes caused by the investigated nanosystems tissue revealed

their tissue toxicity, but at haematological level have not been noticeable effects. The toxic

potential of nanosystems will be taken into consideration for their development like theranostics

agents in cancer.

Acknowledgements: This work is partially supported by the Project Development of human

resources - PhD students and postdocs - for excellence in health research and biotechnology

(DPD) POSDRU/159/1.5/ /14153.



40

Parazitoze subclinice la cobai

Bogdan Băcescu

Facultatea de Medicină Veterinară Spiru Haret, Bucureşti, România

Particularităţile de evoluţie clinică ale infestaţiilor parazitare la cobai imprimă un caracter slab

manifestat sau asimptomatic. Datorită rezistenţei naturale şi printr-o capacitate crescută de

portaj parazitar, cobaii pot prezenta ecto şi endoparazitoze, chiar cu un grad mare de infestare,

fără expresie clinică, însă în condiţiile în care sunt utilizaţi în scopuri ştiinţifice modificările

hematologice sau biochimice pot influenţa sau denatura rezultatele.

Într-un studiu efectuat în 2008 pe 30 de cobai au fost identificate:

acarioze - Trixacarus caviae şi Chirodiscoides caviae. entomoze - Gliricola porcelli, Trimenopon hispidum, Gyropus ovalis. protozoare- Eimeria caviae, Giardia muris. nematodoze- Paraspidodera uncinata.



41

Subclinical parasitosis in guinea pigs

Bogdan Băcescu

Faculty of Veterinary Medicine Spiru Haret University, Bucharest, Romania

Particularities of clinical evolution of parasitic infestations in guinea pigs have shown weak or

asymptomatic character. Due to the natural resistance and an increased capacity of parasitic

porting, guinea pigs may present ecto and endoparazitoze, even with a high degree of

infestation, without clinical expression, but in conditions which guinea pigs are used for

scientific purposes, hematological or biochemical changes can influence or distort the results.

In a study conducted in 2008 on 30 guinea pigs were identified:

acariasis - Trixacarus caviae, Chirodiscoides caviae;

lice - Gliricola porcelli, Trimenopon hispidum, Gyropus ovalis. protozoa - Eimeria caviae, Giardia muris.

nematodes - Paraspidodera uncinata.



42

Monitorizarea unor parametrii fiziologici in timpul anesteziei cu

Izofluran si Ketamina la soarecele de laborator

N. VELICU1, E. VLASE2, N. BERCARU1

1 - Facultatea de Medicină Veterinară Spiru Haret, Bucureşti, România

2 – Institutul Cantacuzino – Staţiunea Băneasa, Bucureşti, România

Cercetările experimentale s-au realizat în incinta Laboratorului de experimentare pe

animale de laborator din cadrul Institutului Cantacuzino – Statiunea Baneasa. Studiile s-au

realizat pe 15 animale de laborator – şoareci NMRI în vârstă de 3 luni, împărţiţi în 3 loturi de

câte 5.

Animalele de experienţă au fost dispuse pe 3 loturi experimentale:

a. Lotul I la care s-a folosit anestezia inhalatorie cu Izofluran;

b. Lotul II la care s-a folosit anestezia intraperitoneala cu Ketamină;

c. Lotul III la care s-a folosit anestezia combinată, intraperitoneală cu Ketamină, completată cu anestezia inhalatorie cu Izofluran.

Cercetările efectuate au urmărit monitorizarea computerizată a unor parametri fiziologici cu importanţă în anestezia şoarecilor de laborator (frecvenţă cardiacă, frecvenţa respiratorie şi amplitudinea pulsului) cu ajutorul aparatului STARR si a softului aferent.

Izofluranul este prima alegere în anestezierea şoarecilor. El se administrează în oxigen

pentru o vaporizare precisă în procentaj exact (5% pentru inducere, 1-3% pentru menţinere).

Folosirea ketaminei produce la soarecii de laborator o bradipnee accentuata. O excelentă

combinaţie o reprezintă ketamina asociată cu izofluranul.



43

Monitoring some physiological parametersduring anesthesia with

Isoflurane and Ketamine to laboratory mice

N. VELICU1, E. VLASE2, N. BERCARU1

1 - Faculty of Veterinary Medicine Spiru Haret University, Bucharest, Romania

2 – Cantacuzino Institute, Baneasa Station, Bucharest, Romania

Experiments were performed inside the unit for laboratory animals testing in the

Cantacuzino Institute - Baneasa Station. Studies have been conducted on 15 animals - NMRI

mice, 3 months old, divided into 3 groups of 5 each.

Experimental animals were placed on three experimental groups:

a. Group I that was used inhaled isoflurane anesthesia;

b. Group II that was used intraperitoneal anesthesia with Ketamine;

c. Group III that was used intraperitoneal anesthesia with Ketamine combined with

isoflurane inhalation anesthesia.

Research has followed computerized monitoring of physiological parameters with

importance in laboratory mice anesthesia (heart rate, respiratory rate and pulse amplitude)

using STARR device and related software.

Isoflurane is the first choice in mice anesthesia. He was administered in oxygen for

precise vaporization in exact percentage (5% for induction, 1-3% for maintenance). The use of

ketamine into mice produces an accentuated bradypnea. An excellent combination is the

ketamine associated with isoflurane.



44

Datele de contact ale autorilor prezentarilor din cadrul celui de-al 4 lea

simpozion ARSAL :

Nume/Name Instituţia/Affiliation Adresa de email/email adress

ANGHELACHE Laurenţiu Institutul Național de

Cercetare-Dezvoltare în

Domeniul Patologiei și

Știintelor Biomedicale ,,Victor

Babeş”, București

[email protected]

BĂCESCU Bogdan Facultatea de Medicină

Veterinară ,,Spiru Haret”,

București

[email protected]

COMAN Cristin Institutul Cantacuzino,

Bucuresti

[email protected]

DUMITRESCU Mădălina Institutul de Biologie si

Patologie Celulară ,,Nicolae

Simionescu”, Bucureşti

[email protected]

DUSSAUD Sebastien Universitatea de Medicină

,,Pierre et Marie Curie”, Paris

[email protected]

FENYO Mădălina Institutul de Biologie si



[email protected]

GONCIAROV Magda Facultatea de Medicină

Veterinară, București

[email protected]

LEECH Kirk European Animal Research

Association (EARA), Londra

[email protected]

MILITE Gianpaolo Tecniplast, Italia [email protected]

MOROŞAN Şerban Universitatea de Medicină

,,Pierre et Marie Curie”, Paris

[email protected]



45

PREDA Bogdan Institutul de Biologie si



[email protected]

ŞERB Ştefan World Courrier, Romania [email protected]

VELICU Nicolae Facultatea de Medicină

Veterinară ,,Spiru Haret”,

București

[email protected]

Documents

Bucuresti , 23 aprilie 2015Elaborarea legislaţiei privind experimentarea pe animale şi a celorlate acte normative care sunt în acord cu legislaţia europeană, în acest domeniu