USULAN PENELITIANPENGARUH JUS BUAH SEMANGKA MERAH (Citrullus vulgaris) TERHADAP BERAT VESIKULA SEMINALIS DAN JUMLAH LAPISAN SEL SPERMATOGENIK TIKUS (Rattus norvegicus strain wistar) YANG DIINDUKSI ALKOHOL. Tomy Wijaya Kurniawan 201110330311060*Dosen Pembimbing 1 : dr. Thontowi Djauhari, NS, M.KesDosen Pembimbing 2 : dr. Halida Nelasari, Sp. OG Dosen Penguji : dr. Ruby Riana Asparini Sp.Bp

LATAR BELAKANG*Riskesdas 2007 : Jawa Timur, presentase peminum alkohol :Kota Malang dan Batu (6,3%) , kota Madiun (5,7%), Sumenep (0,2%) , Bangkalan dan Sampang (0,3%)AlkoholDi metabolisme menjadi asetaldehid ROS FSH dan LH produksi testosteronJus buah semangka (Citrullus Vulgaris) mengandung likopen sebagai antioksidan

RUMUSAN MASALAHAdakah pengaruh jus semangka merah (Citrullus vulgaris) terhadap berat vesikula seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik tikus putih (Rattus nurvegicus Strain Wistar) jantan yang dipapar alkohol?

*

TUJUAN PENELITIANTujuan UmumUntuk mengetahui pengaruh jus semangka merah (Citrullus vulgaris) terhadap berat vesikula seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik tikus putih (Rattus nurvegicus Strain Wistar) yang dipapar alkohol

*

Tujuan Khusus Mengetahui berat vesikulla seminalis tikus putih (Rattus nurvergicus Strain Wistar) jantan yang dipapar alkohol Mengetahui jumlah lapisan sel spermatogenik tikus putih (Rattus nurvergicus Strain Wistar) jantan yang dipapar alkoholMelihat pengaruh jus buah semangka merah (Citrullus vulgaris ) terhadap berat vesika seminalis tikus putih (Rattus nurvergicus Strain Wistar) jantan yang dipapar alkohol

*

Melihat pengaruh jus buah semangka merah (Citrullus vulgaris ) terhadap jumlah lapisan sel spermatogenik tikus putih (Rattus nurvergicus Strain Wistar) jantan yang dipapar alkoholMelihat hubungan antara dosis jus buah semangka merah (Citrullus Vulgaris) dengan berat vesikula seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik tikus putih (Rattus Norvegicus Strain Wistar) Jantan yang di papar Alkohol.

*

MANFAAT PENELITIANKlinisUntuk membuktikan pengaruh jus buah semangka merah terhadap berat vesika seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik tikus yang dipapar alkohol.Akademis Memberikan informasiMemberi dorongan dan motivasi eksplorasiMemberikan informasi yang berguna untuk penelitian lebih lanjut*

*Manfaat MasyarakatMemberikan informasi tentang dampak alkohol dalam fertilisasi dan manfaat jus semangka yang dapat menghambat atau mengurangi dampak radikal bebas akibat mengkonsumsi alkohol.

Tinjauan PustakaTestis

*

Tubulus seminiferus *

Sel spermatogenik *

Vesika seminalisTubulus berlokus dan berkelok kelok dilapisi epitel sekretoris yang menyekresikan mucus yang mengandung fruktosa, asam nitrat dan nutrisi lainnya dan sejumlah prostaglandin dan fibrinogen. *

AlkoholMetabolisme *

Terhadap sistem reproduksi*

Radikal Bebas Radikal bebas molekul yang bersifat tidak stabil (tidak punya elektron yang berpasangan) mencari elektron yang stabil di dekatnya memulai reaksi berantai yang dapat merusak tubuh karbohidrat, protein, lipid, DNA*

AntioksidanAntioksidan menetralisir dan mencegah radikal bebas menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektronnya Antioksidan enzim (endogen) dan vitamin (eksogen) endogen : SOD, katalase, glutation eksogen : vitamin E, vitamin C, betakaroten, flavonoid (flavon, flavonol, dll), phenolic, asam ferulic

*

Semangka *likopen.Suplementasi 4-8 mg likopen setiap hari pada manusia dapat menurunkan peroksidasi lipid, kerusakan DNA, dan peningkatan antioksidan (Selvan et al, 2011)

Malviya (2014)

KERANGKA KONSEP

HIPOTESISTerdapat Pengaruh Jus Semangka (Citrullus vulgaris) Terhadap Berat Vesikula Seminalis dan Jumlah lapisan Sel Spermatogenik Tikus Putih (Rattus nurvegicus Strain Wistar) Jantan yang Dipapar Alkohol*

METODE PENELITIAN*

Rancangan Penelitian: Experimental posttest only control group designLokasi dan Waktu Penelitian Lokasi: Laboratorium farmakologi FK UMMWaktu: Februari 2015Populasitikus putih jantan (Rattus norvegicus strain wistar)Sampel

*

SampelKriteria inklusi:Tikus Putih Rattus novergicus strain wistar dengan umur 2-3 bulanBerat badan 200 gramJenis kelamin jantanSehat, ditandai dengan gerakannya aktif, bulu tebal, dan matanya jernih

Kriteria eksklusi:Terdapat kelainan anatomi pada organ testisSakit, ditandai dengan gerakannya tidak aktif dan matanya buram

*

Replikasi *Dengan rumus Federer, sebagai berikut:

Dalam penelitian ini terdapat 4 kelompok, sehingga jumlah sempel menjadi 24, tetapi jumlah ini akan ditambah antisipasi drop out sebanyak 10% dari jumlah keseluruhan.

Estimasi drop out

Jumlah sampel penelitian yang digunakan adalah 24+10% drop out= 28. Dalam penelitian ini, menggunakan 4 kelompok sehingga tiap kelompok terdiri dari 6,75 7 sampel.

*

Teknik pengambilan sampelPengambilan sampel menggunakan simple random sampling.

Variabel Penelitian Variabel Bebas : dosis jus buah semangka (1,8 cc dan 2,4 cc).Variabel Tergantung : berat vesikula seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik. *

Definisi operasionalJus buah semangka merah adalah semangka merah yang di blender, di pisahkan kulit dan bijinya (Pardede et al, 2010). Jus semangka merah mengandung likopen 6.20 mg / 100 ml (Naz, et al. 2013).Lapisan sel spermatogenik adalah lapisan tubulus seminiferus terdiri dari 4 8 lapisan diantaranya : spermatogonia, spermatosit primer, spermatosit sekunder, spermatid dan spermatozoa. ( guyton., 2006).*

Definisi operasionalPenurunan berat vesikula seminalis adalah berat vesikula seminalis yang mengalami penurunan dibandingkan dengan vesikula seminalis normal yang didapatkan dari hasil analisa pada organ vesikula seminalis tikusAlkohol yang digunakan adalah alkohol dengan kadar etanol 96% KEMENKES RI PKD 2050/9000054 no batch 10111488 yang diencerkan menjadi 25%.*

Alat dan bahan AlatTimbangan Kandang Alat bedahMikroskopObject glassAquadestEosinGelas ukur dan pengadukBlender

Bahan Tikus putih jantan (strain wistar) Alkohol 25%, dengan dosis 0,6 ccJus semangka dosis 1,8 cc &2,4 ccPakan BR-1 AquadestEter & kapas untuk membius tikusParaffinAlkohol 30%, 70%, 85%, 95%XilolHematoxilin Eosin (HE)Formalin 10%, Aquades

*

Alur Penelitian*

Etanol diberikan per oral melalui intubasi lambung pada penelitian ini berat badan tikus yang digunakan adalah 200 gr (0,2 Kg). Dosis yang digunakan 3 g / kg BB dua kali sehari 25% selama 15 hari sehingga dosis yang digunakan dalam penelitian ini adalah 3 gr/kg = 0,6 gr 0,6 cc/kali pemberianJus semangka merah mengandung likopen 6.20 mg / 100 ml, dosis pada manusia sebanyak 4-8 mg likopen. Jadi perhitungannya :*

Setelah didapatkan dosis pada manusia, kemudian di konversikan pada tikus menggunakan tabel konversi dosis antar spesies :

Dosis untuk tikus seberat 200 gr : Dosis I = 96,7 ml x 0,018 = 1,74 ml 1,8 ccDosis 2 = 129 ml x 0,018 = 2,32 ml 2.4 cc*

Tahap Pembedahan Dan FiksasiMembedah tikus untuk mendapatkan testis tikusMencuci testis tikus dengan larutan NaClMemasukkan testis ke dalam botol flakon yang berisi larutan formalin 10 % dan memfiksasi selama 24 jam.Tahap pembuatan Preparat histologi - Tahap Dehidrasi- Tahap Pewarnaan HE- Tahap MountingTahap penghitungan jumlah lapisan sel spermatogenikPerhitungan jumlah lapisan sel spermatogenik dilakukan dengan cara menghitung jumlah sel tubulus seminiferus dalam 10 lapang pandang dengan perbesaran 400x (Anindita, 2012).Penguburan TikusTikus dikumpulkan pada kotak kayu berukuran 30 x 20 x 20 cm untuk kemudian dikuburkan.

*

Analisis DataUji T-testUji One way AnovaUji post hockPearson korelasi*

Hasil PenelitianTabel 5.1 hasil penimbangan vesikula seminalis tikus putih (Rattus nurvegicus strain wistar) jantan.

Sumber : Data primer (2015)

Perlakuan Berat Vesikula Seminalis Tikus / Ulanganrerata SD123456k-1.1191.0070.6590.8390.5720.7580.8256670.189652k+0.4440.5550.3010.1240.3260.4270.3628330.135311p10.7420.6010.5040.9830.7360.3410.6511670.202459p21.3370.7190.6060.7091.0210.7310.8538330.250686

Rerata berat vesikula seminalis digambarkan secara diagram dalam bentuk grafik dibawah ini:

Chart1

0.825667

0.362833

0.651167

0.853833

berat vesikula seminalis (gr)

Sheet1

berat vesikula seminalis (gr)

k-0.825667

k+0.362833

p10.651167

p20.853833

To resize chart data range, drag lower right corner of range.

*Sumber : Data primer (2015)Tabel 5.2 Hasil pengamatan jumlah lapisan sel spermatogenik tikus putih (Rattus novergicus strain wistar) jantan

PerlakuanJumlah Lapisan Sel SpermatogenikRerataSD123456k-6.46.56.96.66.76.16.5333330.249444k+1.92.21.82.12.21.92.0166670.157233p14.64.73.83.73.33.53.9333330.531246p254.84.74.84.444.6166670.328718

Rerata jumlah lapisan sel spermatogenik digambarkan secara diagram dalam bentuk grafik dibawah ini:*

Chart1

6.533333

2.016667

3.933333

4.616667

jumlah lapisan sel spermatogenik

Sheet1

jumlah lapisan sel spermatogenik

k-6.533333

k+2.016667

p13.933333

p24.616667

To resize chart data range, drag lower right corner of range.

p > 0,05 sebaran data NormalTabel 5.3 Uji Normalitas p > 0,05 varian data samaTabel 5.4 Uji homogenity of varianceSumber : Data primer (2015)Sumber : Data primer (2015)Table 5.5 Uji T-testNilai sig 0,002 > 0,05 berarti terdapat perbedaan yang bermakna pada rerata berat vesikula seminalis antara kelompok k- dan k+. Sumber : Data primer (2015)Berat vesikula seminalis

Shapiro-WilkStatistikJumlah DataSig.0,982240,923

VariabelSigBerat vesikula seminlis 0,488

nRerata sigk-60,82570,002k+60,3628

*bahwa nilai sig = 0,003 < p (0,05) yang berarti terdapat perbedaan yang bermakna pada rerata berat vesikula seminalis antar kelompok perlakuan. Tabel 5.6 Uji One Way ANOVASumber : Data primer (2015)

KelompokRata-rata Berat vesikula seminalis Tikus Putih JantanSig.Kontrol -0,82570,003Kontrol +0,3628Perlakuan 10,6512Perlakuan 20,8538

sig < 0,05 terdapat perbedaan yang bermaknaTabel 5.7 Tukey HSDSumber : Data primer (2015)

(I) kelompok(J) kelompokSig.(J) berbanding (I) Kontrol -Kontrol +0,007Ada perbedaanPerlakuan 10,521Tidak ada perbedaanPerlakuan 20,996Tidak ada perbedaan Kontrol +Kontrol -0,007Ada perbedaanPerlakuan 10,133Tidak ada perbedaanPerlakuan 20,004Ada perbedaan Perlakuan 1Kontrol -0,521Tidak ada perbedaanKontrol +0,133Tidak ada perbedaanPerlakuan 20,395Tidak ada perbedaan Perlakuan 2Kontrol -0,996Tidak ada perbedaanKontrol +0,004Ada perbedaanPerlakuan 10,395Tidak ada perbedaan

Jumlah lapisan sel spermatogenik *Tabel 5.9 Uji NormalitasSumber : Data primer (2015)Tabel 5.10 Uji Homogenity of varianceSumber : Data primer (2015)Sumber : Data primer (2015)Table 5.11 Uji T-testp > 0,05 sebaran data Normalp > 0,05 varian data samaNilai sig 0,000 > 0,05 berarti terdapat perbedaan yang bermakna pada rerata jumlah lapisan sel spermatogenik antara kelompok k- dan k+

Shapiro-WilkStatistikJumlah DataSig.0,923240,068

VariabelSigJumlah lapisan sel spermatogenik 0,139

nRerata sigk-66,53330,000k+62,016

*Tabel 5.12 Uji One Way ANOVAbahwa nilai sig = 0,000 < p (0,05) yang berarti terdapat perbedaan yang bermakna pada rerata jumlah lapisan sel spermatogenik antar kelompok perlakuan. Sumber : Data primer (2015)

KelompokRata-rata Jumlah lapisan Sel spermatogenik Tikus Putih JantanSig.Kontrol -6,53330,000Kontrol +2,0167Perlakuan 13,9333Perlakuan 24,6167

* sig < 0,05 terdapat perbedaan yang bermaknaSumber : Data primer (2015)Tabel 5.13 Tukey HSD

(I) kelompok(J) kelompokSig.(J) berbanding (I) Kontrol -Kontrol +0,000Ada perbedaanPerlakuan 10,000Ada perbedaanPerlakuan 20,000Ada perbedaan Kontrol +Kontrol -0,000Ada perbedaanPerlakuan 10,000Ada perbedaanPerlakuan 20,000Ada perbedaan Perlakuan 1Kontrol -0,000Ada perbedaanKontrol +0,000Ada perbedaanPerlakuan 20,025Ada perbedaan Perlakuan 2Kontrol -0,000Ada perbedaanKontrol +0,000Ada perbedaanPerlakuan 10,025Ada perbedaan

p < 0,05 terdapat korelasi yang bermakna/signifikanr = 0,947 terdapat hubungan yang sangat kuat antara dosis jus buah semangka merah terhadap peningkatan jumlah lapisan sel spermatogenik r = 0,695 terdapat hubungan yang kuat antara dosis jus buah semangka merah terhadap peningkatan berat vesikula seminalisr (+) hubungan yang searah antara dosis jus buah semangka merah dengan berat vesikula seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik, yang artinya semakin dosis jus buah semangka ditingkatkan, maka semakin meningkat berat vesikula seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik.

Nilai koefisien korelasi (r)Interpretasi0,0

Pembahasan kelompok K(-) tidak di berikan perlakuanRata-rata berat vesikula seminalis = 0,8256 Rata rata jumlah lapisan sel spermatogenik = 6,5333 kelompok K(+) diberi alkohol 25% 3 ml / kgBB/kali 2 kali sehari p.o selama 15 hariRata-rata berat vesikula seminalis = 0,3628 Rata rata jumlah lapisan sel spermatogenik = 2,0166

Penelitian oleh Nugroho, 2009tentang pengaruh pemberian etanol 40% dosis 3 ml/kgBB peroral satu kali sehari dapat menurunkan rerata berat vesikula seminalis 0,133 gr dan jumlah lapisan sel spermatogenik 5 lapisan pada tikus putih jantan

P 1 diberi alkohol 25% 3 ml / kgBB/kali 2 kali sehari dan jus buah semangka 1,8 ml p.o selama 15 hariRata-rata berat vesikula seminalis = 0.6511Rata rata jumlah lapisan sel spermatogenik = 0.8538P 2 diberi alkohol 25% 3 ml / kgBB/kali 2 kali sehari dan jus buah semangka 2,4 ml p.o selama 15 hariRata-rata berat vesikula seminalis = 3.9333 Rata rata jumlah lapisan sel spermatogenik = 4,6166

Krishnamoorthy et al, Lycopen supplementation prevents reactive oxygen species mediated apoptosis in sertoli cells of adult albino rats exposed to polychlorinated biphenyls dapat meningkatkan sel sertoli pada tikus putih jantan. likopen mencegah ROS yang dapat menyebabkan lipid peroksidasi dan apoptosis pada sel sertoli yang di sebabkan oleh induksi tersebut .

Berat vesikula seminalis oneway ANOVA sig = 0,003Terdapat perbedaan yang signifikan terhadap berat vesikula seminalis antar kelompokKorelasi pearson = 0,695- terdapat korelasi yang bermakna/signifikan, hubungan yang kuat dan searah semakin dosis jus buah semangka ditingkatkan, maka semakin meningkat berat vesikula seminalis. Anindita, 2012 Pengaruh Pemberian Vitamin C Terhadap Berat vesikula seminalis, Jumlah Sel Leydig, dan Diameter Tubulus Seminiferus Mencit (Mus musculus L) Jantan Dewasa yang Diinduksi Monosodium Glutamat pemberian dosis vitamin C yang semakin besar diikuti dengan peningkatan berat vesikula seminalis pada mencit yang di induksi monosodium glutamat.

*Jumlah lapisan sel spermatogenikoneway ANOVA sig = 0,000Terdapat perbedaan yang signifikan terhadap jumlah lapisan sel spermatogenik antar kelompokKorelasi pearson = 0,947- terdapat korelasi yang bermakna/signifikan, hubungan yang sangat kuat dan searah semakin dosis jus buah semangka ditingkatkan, maka semakin meningkat jumlah laspisan sel spermatogenik. Alfy Yulianto, 2013 Pengaruh Pemberian Vitamin E Terhadap Kualitas Sperma Tikus Putih Yang Dipapar Timbal pemberian dosis vitamin E yang semakin besar diikuti dengan meningkatnya kualitas sperma tikus putih yang dipapar timbal.

Keterbatasan penelitian Pada penelitian ini belum didapatkan dosis efektif untuk meningkatkan jumlah lapisan sel spermatogenik tikus yang di papar alkohol. Penelitian ini tidak mengamati secara mikroskopis vesikula seminalis sehingga tidak dapat mengetahui letak pasti kerusakan sel vesikula seminalis akibat paparan alkohol.

Kesimpulan Jus Buah Semangka Merah berpengaruh terhadap berat vesikula seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik tikus putih (Rattus Novergicus Strain Wistar) jantan yang di induksi alkoholBerat vesika seminalis tikus putih (Rattus Novergicus Strain Wistar) jantan yang di papar alkohol mengalami penurunan yaitu 0,3628Jumlah lapisan sel spermatogenik tikus putih (Rattus Novergicus Strain Wistar) jantan yang di papar alkohol mengalami penurunan yaitu 2,0166.

Kesimpulan

Jus buah semangka merah (Citrullu vulgaris) terbukti berpengaruh terhadap berat vesikula seminalis pada tiku putih (Rattus Novergicus Strain Wistar) jantan yang dipapar alkohol. Ditandai dengan bertambahnya berat vesikula seminalis yaitu perlakuan 1 = 0,6511 dan perlakuan 2 = 0,8538Semakin banyak dosis pemberian jus buah semangka merah (Citrullus vulgaris) yang diberikan maka semakin bertambah jumlah sel leydig.

*

Terdapat hubungan yang kuat antara dosis pemberian jus buah semangka merah (Citrullus vulgaris) terhadap berat vesikula seminalis dan jumlah lapisan sel spermatogenik pada tikus putih (Rattus Novergicus Strain Wistar) jantan yang dipapar alkohol*

SaranPenelitian lebih lanjut:Dilakukan penelitian dengan menggunakan dosis jus semangka merah yang lebih tinggi untuk mengetahui dosis yang lebih efektif dalam meningkatkan jumlah lapisan selspermatogenik tikus putih (Rattus Nurvegicus Strain Wistar) jantan yang di papar alkohol.Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap vesika seminalis secara mikroskopis untuk mengetahui kerusakan akibat paparan alkohol.Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan menggunakan ekstrak likopen untuk mengetahui efek yang paling baik.

Saran

dokumentasi

*

*TERIMAKASIH

******