Bioteknologi Molekular

8/17/2019 Bioteknologi Molekular

1/32

Tugas Mid Bioteknologi Molekular

“BUNGA LOTUS BERPENDAR PADA MALAM HARI DENGAN

MENYISIPKAN GEN GREEN FLUOROSENS PROTEIN DARI

UBUR-UBUR”

Oleh :

NAMA : NIRWANA

NIM : F1C1 13 02

!"#A$ : !IMIA B

%&R&$AN !IMIA

FA!TA$ MAT"MATI!A 'AN I#M& ("N)"TA*&AN A#AM

&NI+"R$ITA$ *A#& O#"O

!"N'ARI

201,

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakan


2/32

$ekitar 20 tahun sila- .e.erara/a enis tana-an air se/erti /a/rus eneng

gondok teratai dan lotus le.ih dikenal se.agai tana-an liar ang tu-.uh di danau

ra4a dan te/ian sungai5 Meski/un setia/ tana-an terse.ut -e-iliki sosok ang

-enarik /ara ho.i tana-an hias kurang -elirikna5

!ini seiring /erke-.angan .isnis tana-an hias ara /andang -asarakat

-ulai .eru.ah5 $elain /ene-/atanna ang la6i- /ada kola- atau air tana-an air

da/at /ula ditana- seara soliter atau di/adukan dala- ko-.inasi ang har-onis

didala- /ot ang indah5 Makin -arakna 7/e-uliaan8 .er.agai enis tana-an air

-e-.uat tana-an air ini -udah di/eroleh5 (erti-.anganna selain ke-a-/uan

untuk tu-.uh dengan .aik didala- ruangan sosokna uga tergolong unik dan

dekorati9 sehingga ook .ila dite-/atkan di-ana saa5

(erke-.angan sains teknologi aitu /ada .idang il-u .ioteknologi -olekular

dala- hal rekaasa genetik .ukanlah hal ang .aru5 $e/erti dengan -arakna

.e.era/a tahun terakhir aitu /eran .ioteknologi dala- /e-.uatan .eras .erinsulin

untuk -engatasi -asalah gula darah /ada /enderita dia.etes5 'i-ana .eras insulin

di.uat dengan -enisi/kan gen /ada .akteri -enghasilkan insulin ke tana-an /adi5

(eristi4a ini dise.ut dengan transgenik5 Transgenik artina adalah -e-iliki -ateri

genetik 'NA; dari organis-e lain5 %adi tana-an transgenik itu -eru/akan tana-an

ang -e-iliki gen atau telah disisi/i gen dari organis-e lain dan da/at /ula dise.ut

se.agai Genetically Modified Organism organis-e ang ter-odi9ikasi seara

genetik;5


3/32

*al ini -e-.uka 4a4asan .aru lagi -engenai a/likasi rekaasa genetika

ang .eraga- se/erti -e-.uat tana-an hias ang da/at -enala saat -ala- hari5

Misalna /ada .unga lotus ang hana -ekar /ada -ala- hari5 $i9at .er/endar ang

akan di.erikan ke .unga ini di/eroleh dari gen fluorosens /ada u.ur


4/32

Teknologi 'NA reko-.inan recombinant DNA technology; adalah suatu

-etode untuk -erekaasa genetik dengan ara -enisi/kan insert ; gena ang

dikehendaki ke dala- suatu organis-e ke dala- organis-e lain dala- satu s/esies

atau .er.eda s/esies5 Teknologi 'NA reko-.inan .ertuuan untuk -engu.ah si9at

ala-i suatu indi>idu -enadi si9at ang dikehendaki oleh -anusia5 (engetahuan

-engenai struktur dan 9ungsi 'NA seara -endala- telah ditera/kan untuk

ke/entingan -anusia -elalui rekaasa genetika5 Rekaasa genetika -eru/akan salah

satu -etode /enting ang -e-.eri kontri.usi /ada /enge-.angan .ioteknologi

-odern5 $alah satu iri karakteristik .ioteknologi -odern adalah -eli.atkan rekaasa

.iologi tekno.iologi;5 $aat inirekaasa genetika telah -era-.ah /ada se-ua

organis-e ang -eli/uti: .akteri tu-.uhan -au/un he4an5 Organis-e ang telah

disisi/i gen dari organis-e lain dise.ut transgenik Nuraho200?;5

+. Tana"an tran#enet'k

Tana-an transgenik adalah tana-an ang telah disisi/i dengan sengaa; atau

-e-iliki gen asing dari s/esies tana-an ang .er.eda atau -akhluk hidu/

lainna atau adalah tana-an ang telah direkaasa genetikna dala- arti si9at asli

dari tana-an terse.ut sudah tidak natural lagi55Tana-an transgenik /erta-a kalina aitu .unga -atahari ang disisi/i gen

dari .unis Phaseolus vulgaris; di.uat tahun 1?@3 oleh *er.ertBoer dan $tanle

Cohen5 (ada tahun 1?@@ telah ada sekitar 23 tana-an transgenik /ada tahun 1?@?

terda/at 30 tana-an /ada tahun 1??0 le.ih dari 0 tana-an5 $eara sederhana

tana-an transgenik di.uat dengan ara -enga-.il gen


5/32

-akhluk hidu/ lain untuk disisi/kan /ada tana-an /enisi/aan gen ini -elalui suatu

>etor /erantara; ang .iasana -enggukan .akteri Agrobacterium tumefeciens

untuk tana-an dikotil atau /artikel gen untuk tana-an -onokotil lalu diinokulasikan

/ada tana-an target untuk -enghasilkan tana-an ang dikehendaki #indung 2010;

,. U!r-U!r

&.ura u.ur


6/32

$/esies : Aquorea Victoria #5

. B!na L*t!#

$eroa atau lotus Nelumbo nucifera )aertn5; adalah s/esies tu-.uhan air

tahunan dari genus Nelumbo ang .erasal dari India5 'i Indonesia tana-an ini sering

kali dise.ut teratai Nymphaea; 4alau/un se.enarna keduana tidak .erkera.at5

$eroa -e-iliki tangkai .unga tegak dan .ungana tidak -enga/ung di /er-ukaan

air se.agai-ana /ada teratai5 $eroa /ernah dikenal dengan na-a .ino-ial

Nelumbium speciosum Willd5; atau Nymphaea nelumbo.

Tangkai .er.entuk ta.ung ang kosong di tengahna untuk alan le4at udara5

'aun terda/at di /er-ukaan air keluar dari tangkai ang .erasal dari ri-/ang ang

.erada di dala- lu-/ur /ada dasar kola- sungai atau ra4a5 Tinggi tana-an sekitar

satu -eter hingga satu setengah -eter5

'aun tu-.uh ke atas tinggi di atas /er-ukaan air5 'aun .er.entuk .undaran

/enuh tan/a /otongan .ergelo-.ang di .agian te/i dengan urat daun .erku-/ul ke

tengah daun5 'ia-eter daun da/at -ena/ai ,0 -5 (er-ukaan daun -engandung

la/isan lilin sehingga air ang atuh ke /er-ukaan daun -e-.entuk .utiran air5

Ber.eda dengan teratai .unga lotus -ekar /ada -ala- hari dan akan kunu/ a/ada

siang hari5 Berikut -or9ologi .unga lotus :

!ingdo- : (lantae

https://id.wikipedia.org/wiki/Tumbuhan_airhttps://id.wikipedia.org/wiki/Tumbuhan_tahunanhttps://id.wikipedia.org/wiki/Genushttps://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Nelumbo&action=edit&redlink=1https://id.wikipedia.org/wiki/Indiahttps://id.wikipedia.org/wiki/Indonesiahttps://id.wikipedia.org/wiki/Terataihttps://id.wikipedia.org/wiki/Tabunghttps://id.wikipedia.org/wiki/Tabunghttps://id.wikipedia.org/wiki/Tabunghttps://id.wikipedia.org/wiki/Rizomahttps://id.wikipedia.org/wiki/Lumpurhttps://id.wikipedia.org/wiki/Kolamhttps://id.wikipedia.org/wiki/Sungaihttps://id.wikipedia.org/wiki/Sungaihttps://id.wikipedia.org/wiki/Rawahttps://id.wikipedia.org/wiki/Rawahttps://id.wikipedia.org/wiki/Lilinhttps://id.wikipedia.org/wiki/Tumbuhan_airhttps://id.wikipedia.org/wiki/Tumbuhan_tahunanhttps://id.wikipedia.org/wiki/Genushttps://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Nelumbo&action=edit&redlink=1https://id.wikipedia.org/wiki/Indiahttps://id.wikipedia.org/wiki/Indonesiahttps://id.wikipedia.org/wiki/Terataihttps://id.wikipedia.org/wiki/Tabunghttps://id.wikipedia.org/wiki/Rizomahttps://id.wikipedia.org/wiki/Lumpurhttps://id.wikipedia.org/wiki/Kolamhttps://id.wikipedia.org/wiki/Sungaihttps://id.wikipedia.org/wiki/Rawahttps://id.wikipedia.org/wiki/Lilin


7/32


8/32

(risnsi/ isolasi 'NA /ada .er.agai enis sel atau aringan /ada .er.agai

organis-e /ada dasarna sa-a na-un -e-iliki -odi9ikasi dala- hal teknik dan

.ahan ang digunakan5 Bahkan .e.era/a teknik -enadi le.ih -udah dengan

-enggunakan kit ang di/roduksi oleh suatu /erusahaan se.agai ontoh kit ang

digunakan untuk isolasi 'NA /ada tu-.uhan se/erti !it Nuleon (hto/ure

sedangkan untuk isolasi 'NA /ada he4an digunakan )ene%"TTM )eno-i

'NA (uri9iation !it5 Na-un taha/anensional -e-iliki kele.ihan harga le.ih -urah dan

digunakan seara luas se-entara kekuranganna -e-.utuhkan 4aktu ang relati9

la-a dan hasil ang di/eroleh tergantung enis sa-/el5

0. Bl*t S*!t$ern

Blot $outhern -eru/akan /roses /er/indahan 9rag-en 'NA ang ter/isah

seara elektro9oresis dari gel ke -e-.ran5 (rinsi/na adalah ka/ilaritas di-ana

.u9er ang -eru/akan 9ase gerak diasu-sikan akan -e-.a4a 9rag-en 'NA dari

gel ke -e-.ran5 !arena -uatan 'NA negati9 sedangkan -uatan -e-.ran /ositi9

-aka 9rag-en 'NA akan -ene-/el .lot; /ada -e-.ran5 Me-.ran ang

digunakan /ada /roses .lot southern adalah -e-.ran nitroselulosa5 Metode ini

dite-ukan oleh seorang ahli .iologi dari Inggris ang .erna-a "d4ard M5

https://id.wikipedia.org/wiki/DNAhttps://id.wikipedia.org/wiki/DNAhttps://id.wikipedia.org/wiki/Elektroforesishttps://id.wikipedia.org/wiki/Elektroforesishttps://id.wikipedia.org/wiki/Kapilaritashttps://id.wikipedia.org/wiki/Gelhttps://id.wikipedia.org/wiki/Nitroselulosahttps://id.wikipedia.org/wiki/Nitroselulosahttps://id.wikipedia.org/wiki/DNAhttps://id.wikipedia.org/wiki/Elektroforesishttps://id.wikipedia.org/wiki/Kapilaritashttps://id.wikipedia.org/wiki/Gelhttps://id.wikipedia.org/wiki/Nitroselulosa


9/32

$outhern ang -enge-.angkan /rosedur ini /ada tahun 1?D di &ni>ersitas

"din.urgh5

1. Polymerase Chain Reaction 2 PCR3

Reaksi .erantai /oli-erase atau le.ih u-u- dikenal se.agai (CR

ke/endekan dari istilah .ahasa Inggris polymerase chain reaction; -eru/akan

suatu teknik atau -etode /er.anakan re/likasi; 'NA seara en6i-atik tan/a

-enggunakan organis-e5 'engan teknik ini 'NA da/at dihasilkan dala- u-lah

.esar dengan 4aktu relati9 singkat sehingga -e-udahkan .er.agai teknik lain

ang -enggunakan 'NA5 Teknik ini dirintis oleh !ar Mullis /ada tahun 1?@3

dan ia -e-/eroleh hadiah No.el /ada tahun 1?? .erkat te-uanna terse.ut5

(enera/an (CR .anak dilakukan di .idang .ioki-ia dan .iologi -olekular

karena relati9 -urah dan hana -e-erlukan u-lah sa-/el ang keil5

4. En5'" Retr'k#'

"n6i- Restriksi "ndonuklease -eru/akan en6i- ang -e-otong

.agian internal 'NA ang .ekera seara s/esi9ik urutan tertentu; dise.ut

se.agai gunting .iologi5 "n6i- Restriksi "ndonuklease -e-otong 'NA te/at

/ada ikatan 9os9odiester5 "n6i-


10/32

asing5"n6i- restriksi diisolasi dari .akteri5 "n6i- restriksi .iasana terda/at

dala- ko-.inasi dengan en6i- /e-odi9ikasi lain ang -elindungi 'NA


11/32

ang .er.eda teta/i -e-iliki -ekanis-e katalitik ang sa-a5 "n6i- ligase ang

sering digunakan adalah 'NA ligase dari !. "oli dan 'NA ligase dari #age $%5

)). I#*la#' Pr*te'n

Isolasi /rotein adalah suatu ara -e-isahkan /rotein dari -akro-olekul

ang lain atau -e-isahkan /rotein dari /rotein lain ang tidak diinginkan5 $eara

sederhana /roses dari isolasi /rotein konse/na sa-a dengan isolasi 'NA hana

saa isolasi /rotein -enggunakan .u99er lsis untuk -elisiskan sel5 $uatu teknik

isolasi dan identi9ikasi /rotein harus -e-/erti-.angkan si9at


12/32

-elalui .e.era/a taha/5 Taha/ /erta-a elektro9oresis5 Taha/ kedua

elektrotrans9er5Western .lot adalah /roses /e-indahan /rotein dari gel hasil

elektro9oresis ke -e-.rane5 Me-.ran ini da/at di/erlakukan le.ih 9leksi.el

dari/ada gel sehingga /rotein ang ter.lot /ada -e-.ran da/at dideteksi dengan

ara >isual -au/un 9luoresensi5 'eteksi eks/resi /rotein /ada organis-e

dilakukan dengan /rinsi/ i-unologi -enggunakan anti.odi /ri-er dan anti.odi

sekunder Att4ood et al. 200,;5

III. METODE PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

A. De#a'n Penel't'an

(enelitian ini dilakukan dengan 2 taha/ aitu :15 Me-asukkan gen fluorosens dari u.ur


13/32

25 Mendeteksi gen ang di/eroleh .erhasil -asuk ke dala- sel tu-.uhan5

(endeteksian gen telah .erhasil -asuk ke dala- sel tu-.uhan da/at

dilakukan -elalui .e.era/a ara aitu :

a5 Mendeteksi 'NA dengan -etode southern .looting .5 Mengisolasi /rotein dari gen .aru ang dihasilkan

5 Mendeteksi /rotein dengan -etode 4estern .lotting

B. Pe"a$a#an

). Me"a#!kkan en fluorosens 7ar' !!r-!!r ke !na l*t!#

(enisi/an gen /ada suatu tana-an -e-.utuhkan /roses ang sulit dan

/anang5 (roses ini dise.ut dengan transgenik5 Transgenik artina adalah -e-iliki

-ateri genetik 'NA; dari organis-e lain5 %adi tana-an transgenik itu -eru/akan

tana-an ang -e-iliki gen atau telah disisi/i gen dari organis-e lain dan da/at /ula

dise.ut se.agai Genetically Modified Organism organis-e ang ter-odi9ikasi seara

genetik;5 &ntuk -enisi/kan se.uah gen /ada sel tu-.uhan kita -e-.utuhkan

>ektor tertentu5 +ektor adalah organis-e ang .er9ungsi se.agai kendaraan /e-.a4a

-ateri genetik ang akan disisi/kan5 $el tu-.uhan tidak -e-iliki /las-id se/erti

.akteri sehingga /ilihan >ektor ang .er/otensi untuk -e-asukkan gen ke dala- sel

(e-otongan 'NA oleh en6i- retriksi

!loning )en

Trans9or-asi

$outhern Blotting


14/32

tana-an uga ter.atas5 $eauh ini >ektor ter.aik untuk -enisi/kan gen /ada

tana-an adalah Agrobacterium tumefaciens5 *al ini karena .akteri terse.ut -e-iliki

Ti


15/32

25

(rinsi/ dasar isolasi 'NA dari aringan adalah dengan -e-eah dan

-engekstraksi aringan terse.ut sehingga akan ter.entuk ekstrak sel aitu 'NA5 (ada

taha/ /elisisan u.ur


16/32

Taha/ .erikutna aitu sentri9ugasi5 Taha/ ini dilakukan untuk -engenda/kan

/rotein ko-/onen 9enolik dan /olisakarida sehingga da/at di/isahkan dengan

larutan 'NA -enggunakan larutan CIAA !loro9or- isoa-il alkohol;5 $etelah itu

tube disentri9uga sela-a 1D -enit /ada 125000 r/- untuk -engenda/kan -olekul

kasar ang .era-/ur dengan 'NA dinding sel /rotein kar.ohidrat; serta

kloro9or-5 *asil ang di/eroleh aitu la/isan dari hasil sentri9ugasi5 !arena 'NA

.ersi9at ringan -aka 'NA .erada di la/isan /aling atas supernatant ;5 #a/isan kedua

.er.entuk /adatan .erisi -aterial /adat hasil lisis sel debris; sehingga ang dia-.il

adalah la/isan ang .erisi 'NA5 !e-udian larutan .erisi 'NA supernatant ;

dita-.ahkan isoa-ilalkohol .er9ungsi -endenaturasi /rotein sedangkan en6i-

RNAse .er9ungsi -elisiskan RNA dari ekstrak 'NA terse.ut5

Taha/ .erikutna aitu ta.ung di sentri9ugasi ke-.ali /ada kee/atan ,5000

r/- sela-a 1D -enit5 *asil ang dida/at aitu .eru/a su/ernatan ang .ening dan

/elet enda/an 'NA -urni; ang .er4arna /utih terda/at /ada dasar ta.ung dan

/ena-.ahan sena4a etanol5 !e-udian su/ernatan terse.ut di.uang karena 'NA

.erada /ada .agian natan5 'NA -urni ang dihasilkan adalah 'NA ang ter.e.as

dari a-/uran -aterial dan ko-/onen intraeluler ang -engandung larutan

ko-/leks .eru/a RNA /rotein le-ak dan kar.ohidrat5

,. Elektr*;*re#'# DNA

$elanutna taha/ elektro9oresis5 Taha/ ini /enting dilakukan karena

-olekul 'NA dan a-/uranna di/isahkan -enadi /ita


17/32

terdiri tas -olekul 'NA ang /anang5 "lektro9oresis adalah teknik /e-isahan

ko-/onen atau -olekul .er-uatan .erdasarkan /er.edaan tingkat -igrasina

dala- se.uah -edan listrik55 $alah satu enis elektro9oresis ang digunakan untuk

elektro9oresis 'NA aitu elektro9oresis gel5 Berikut /roses kera elektro9oresis :

)a-.ar 35 "lektro9oresis gel /ada 'NA(rinsi/na .erdasarkan /ergerakan /artikel


18/32

*unning elektro9oresis dilakukan /ada tegangan 100 +olt sela-a 30

-enit5 !ee/atan -igrasi 'NA sangat di/engaruhi oleh tegangan

elektro9oresis5 Frag-en 'NA ang .esar akan .ergerak le.ih e/at di.andingkan

dengan 9rag-en 'NA ang keil 5

Taha/ selanutna adalah -ena-/urkan 'NA hasil a-/li9ikasi le4at /roses

(CR dengan loading buffer ang -e-iliki 9ungsi -e-.antu sa-/el turun ke

dala- +ell dan -e-.antu -e-onitor .era/a la-a /roses elektro9oresis telah

.erlangsung karena -e-iliki /e4arna .ro-o9enol .iru5 (roses /e-indahan

dilakukan dengan -e-akai -ikro/i/et dan harus dilakukan seara hati


19/32

u-lah .esar dengan 4aktu relati9 singkat sehingga -e-udahkan .er.agai teknik

lain ang -enggunakan 'NA5 Teknik ini dirintis oleh !ar Mullis /ada tahun

1?@3 dan ia -e-/eroleh hadiah No.el /ada tahun 1?? .erkat te-uanna

terse.ut5 (enera/an (CR .anak dilakukan di .idang .ioki-ia dan .iologi

-olekular karena relati9 -urah dan hana -e-erlukan u-lah sa-/el ang keil5

$eara /rinsi/ (CR -eru/akan /roses ang diulang


20/32

-enadi .er.erkas tunggal5 Biasana /ada taha/ a4al (CR taha/ ini

dilakukan agak la-a sa-/ai D -enit; untuk -e-astikan se-ua .erkas 'NA

ter/isah5 (e-isahan ini -ene.a.kan 'NA tidak sta.il dan sia/ -enadi

te-/lat /atokan; .agi /ri-er 5 'urasi taha/ ini 12 -enit5

25 Taha/ /ene-/elan atau annealing 5 (ri-er -ene-/el /ada .agian 'NA

te-/lat ang ko-/le-enter urutan .asana5 Ini dilakukan /ada suhu antara

D,0 HC5 (ene-/elan ini .ersi9at s/esi9ik5 $uhu ang tidak te/at

-ene.a.kan tidak teradina /ene-/elan atau /ri-er -ene-/el di

se-.arang te-/at5 'urasi taha/ ini 12 -enit5

35 Taha/ /e-anangan atau elongasi5 $uhu untuk /roses ini tergantung dari enis

'NA /oli-erase ditunukkan oleh ( /ada ga-.ar; ang di/akai5 'engan

TaJ


21/32

seara s/esi9ik urutan tertentu; -enggunakan en6i- retriksi 5 "n6i- Restriksi

"ndonuklease -eru/akan en6i- ang -e-otong .agian internal 'NA ang

.ekera seara s/esi9ik urutan tertentu; dise.ut se.agai gunting .iologi5 "n6i-

Restriksi "ndonuklease -e-otong 'NA te/at /ada ikatan 9os9odiester5 "n6i-

restriksi ang digunakan harus sa-a antara /e-otongan /las-id dengan /e-otong

'NA asing5

Cara kera en6i- retriksi -elalui .e.era/a taha/ se.agai .erikut :

)a-.ar D5 Cara !era "n6i- Retriksi15 "n6i- restriksi -enghidrolisis ikatan 9os9odiester ang -enghasilkan gugus

38 hidroksil O*; dan gugus D8 9os9at (O


22/32

35 "n6i- retriksi .ekera dengan .antuan ko9aktor ontoh Mg2E sehingga

dala- /rosedur /ero.aanna sekuens 'NA terkadang di.eri MgCl5 !ation

.i>alen Mg2E dari MgCl terse.ut .er9ungsi dala- /roses /e-otongan /las-id

ang di.utuhkan untuk -eningkatkan akti>itas en6i- restriksi 5

Melalui /roses ini dihara/kan da/at di/eroleh 'NA dari gen gfp dari u.ur<

u.ur se.agai 'NA sisi/an /ada /roses /engkloningan5

0. Kl*n'n Gen

Taha/ selanutna aitu kloning gen5 'iketahui /roses se.elu-na

di/eroleh gen /enghasil nala hiau /ada u.ur


23/32

)a-.ar ,5 Ilustrasi /eni/an gen u.ur


24/32

D5 $elanutna .akteri akan -asuk ke dala- sel tana-an dan -entrans9er gen5

,5 !e-udian sel tana-an akan -e-.elah5 Tia/


25/32

tertentu ang sudah .erga.ung /ada Ti (las-id akan tersisi/ /ada kro-oso-

tana-an5

$elanutna eks/lan ang sudah -e-iliki gen tertentu terse.ut akan

dikulturkandi.iakkan seara in vitro di luar tu.uh tana-an -isalna /ada

a4an /etri;5 "ks/lan dari tana-an terse.ut akan tu-.uh -enadi kalus

ku-/ulan sel; ang da/at diinduksi untuk -e-.entuk .atang dan akar5

!alus ini akan tu-.uh -enadi /lantlet tana-an keil;5 (lantlet ke-udian

akan tu-.uh -enadi indi>idu tana-an transgenik ang .isa ditana- di

tanah5

,. Men7etek#' en :an 7'


26/32

)a-.ar @5 ilustrasi /roses southern blooting

Taha/ /erta-a ialah -engisolasi 'NA dari .unga lotus ang telah disisi/kan

gen green fluorosens protein dari u.ur


27/32

-olekulna le.ih keil akan le.ih e/at .ergerak dari kutu. negati9 kekutu. /ositi9

di.andingkan dengan 9rag-en 'NA dengan .erat -olekul le.ih .esar5

$elanutna aitu /roses denaturasi 'NA dilakukan dengan -erenda- gel

dala- larutan denaturan NaO* ;5 NaO* .ersi9at .asa sehingga da/at -ene.a.kan

rusakna ikatan hidrogen antar untai 'NA5 Ikatan hidrogen antar untai 'NA ang

/utus -ene.a.kan struktur 'NA ang se-ula double helis -enadi 'NA single

strand. 'NA ang telah di/eroleh ke-udian ditrans9er ke -e-.ran nitroseluloasa

taha/ inilah ang dise.ut dengan blotting 5

Taha/an trans9er 'NA ke -e-.ran nitroselulosa ang .erdasarkan /ada

/rinsi/ ka/ilaritas5 !a/ilaritas adalah /eristi4a naikna 6at air /ada /e-.uluh

elah atau /ori


28/32

-e-anarkan sinar; /ada u.ur


29/32

$etelah isolat /rotein di/eroleh -aka /rotein inilah ang akan dideteksi

ke.eradaanna -elalui -etode 4estern .lotting5

Western Blotting

&estern blot adalah /roses /e-indahan /rotein dari gel hasil

elektro9oresis ke -e-.ran5 Me-.ran ini da/at di/erlakukan le.ih 9leksi.el

dari/ada gel sehingga /rotein ang ter.lot /ada -e-.ran da/at dideteksi dengan

ara >isual -au/un 9luoresensi5 'eteksi eks/resi /rotein /ada organis-e

dilakukan dengan /rinsi/ i-unologi -enggunakan anti.odi /ri-er dan anti.odi

sekunder5 Tuuan dilakukanna +estern blotting aitu :

a5 Mengetahui ke.eradaan L .erat Molekul /rotein sa-/el /ada a-/uran

.5 Me-.andingkan reaksi silang antar /rotein

5 Me-/elaari -odi9ikasi /rotein sela-a sintesis

Teknik ini terdiri dari 3 taha/ diantarana se.agai .erikut :

)a-.ar ?5 Ilustrasi /roses +estern blooting

15 "lektro9oresis


30/32

"lektro9oresis adalah /e-isahan /rotein .erdasarkan ukuran -olekul

dala- suatu tegangan listrik tertentu5 (roses kerana ialah :

)a-.ar 105 (roses kera elektro9oresis /rotein

'ala- elektro9oresis sa-/el ang -engandung /rotein .iasana dia-/ur

dengan $'$ sodium dodecyl sulfat,5 Muatan negati9 $'$ terse.ut -engganggu

kesta.ilan /rotein sehingga /rotein -engala-i denaturasi5 $uatu /rotein -ulti-er

uga akan terurai -enadi -ono-er /enusunna5 $a-/el dengan /rotein rantai

/oli/e/tida lurus terse.ut di-asukkan dala- suatu -e-.ran /oliakrila-id ang

dialiri arus listrik5 'ala- gel /oliakrila-id terse.ut akan ter.entuk /ita


31/32

a5 Blotting se-i kering -enggunakan kertas saring ang telah di.asahi

dengan .u99er trans9er .5 Blotting .asah tidak -enggunakan kertas saring diantara gel

/oliakrila-id dan gel trans9er teta/i kedua gel terse.ut dii-/itkan dan

direnda- dala- .u99er trans9er5

35 'eteksi

Berdasarkan /enggunaan anti.odi /ri-er dan anti.odi sekunder ada

dua -etode deteksi aitu:

a5 Metode langsung -enggunakan anti.odi /ri-er ang telah terkonugasi

dengan -olekul-arker5 Anti.odi /ri-er .er9ungsi -engikat /rotein target

.5 Metode tidak langsung -enggunakan anti.odi /ri-er dan anti.odi sekunder5

Anti.odi sekunder .er9ungsi -engikat anti.odi /ri-er dan terkonugasi

dengan -olekul /enanda5 Molekul /enanda ang u-u- digunakan

diantarana adalah en6i- alkalin 9os9atase A(; en6i- horsedish /eroksidase

*R(; i--unogold dan 12DI

I=. KESIMPULAN

Berdasarkan ru-usan -asalah dan /e-.ahasan -aka da/at disi-/ulkan

.ah4a :

15 Me-asukkan gen fluorosens dari u.urektor .eru/a


32/32

organis-e ang .er9ungsi se.agai kendaraan /e-.a4a -ateri genetik ang

akan disisi/kan aitu Agrobacterium tumefaciens

25 Metode ang digunakan aitu isolasi 'NA elektro9oresis (CR /e-otongan

'NA oleh en6i- retriksi kloning gen dan trans9or-asi gen535 Mendeteksi .ah4a gen ang di/eroleh .erhasil -asuk ke dala- sel tana-an

.unga lotus dilakukan dengan -etode southern .looting untuk -endeteksi

'NA serta isolasi /rotein dan 4estern .lotting untuk -endeteksi /rotein5

Documents

Bioteknologi Molekular