Biologie moderne des Biologie moderne des leucémies aiguës leucémies aiguës

myéloblastiques (LAM)myéloblastiques (LAM)

C.PreudhommeLaboratoire d’Hématologie AU524 Inserm Lille

Introduction

40 % des LAM : Anomalies cytogénétiques

Anomalies cytogénétiques

Identification de gènes Pronostic Diagnostic et suivi Physiopathologie Modèle murin

60 % des LAM : Identification d’autres mécanismes Identification d’autres gènes (analogie de fonction ou nouvelles technologies)

Ciblage thérapeutique moléculaire

2003Impact pronostique des anomalies chromosomiques

• Consensus international– Bon risque t(15;17) t(8;21) inv(16)

– Mauvais risque -5/5q- -7 3q t(9;22) t(6;9) complexe

– Intermédiaire caryo normal

• Résultats contradictoires 11q23

trisomie 8

autres trisomies

autres a.structure

Reste à définir sur grandes séries prospectives

Distribution des anomalies chromosomiques

varie avec l ’âge (St Jude -Schoch)

<2 ans enfants Adult <60 ans Adult >60 ans

t(8;21) 0% 14% 8% 2%

inv(16) 5% 6% 5% 3%

t(15;17) 0% 8% 6% 3%

41% 9% 5,3%t(9;11) 18% 6% 2%

autres 11q23 23% 3% 3% 0,8%

Normal 10% 20% 40% 40%

Complex - < 10% 15% 30%

MRC10t(8;21)

t(15;17)

inv(16)

normal

•anomalies isolées

•associées à risque intermédiaire

•associées à mauvais risque

Caryotype complexe

Définition variableMRC >=5 anomaliesEORTC/GIMENA >=4 anomaliesAutres groupes >=3 anomalies

Basé sur résultats caryotype (cytogénétique conventionnelle)

Fréquence augmente avec âge

enfant <10%

adulte 8-10%

>60 ans 18-30%

Que contient un caryotype complexe ?

Schoch GCC 2002;35:20

-5/5q-

-7/7q-

17p-

18q-, 12p- … moins fréquents

souvent combinées (24% : les 3 délétions)

Pertes >>>> gains

15%-20% des cas : absence d’anomalie 5/ 7/ 17

Impact pronostique du caryotype complexe

MRC10

15-56 ans

MRC11

s.âgés

MRC

German AML cooperative group

retrouve le mauvais pronostic >=3 anomalies

chez <60 ans et > 60 ans

Schoch BJH 2001; 112: 118

Les 11q23/MLL

Distinction t(9;11)(p21;q23) et les autres 11q23/MLL

St Jude JCO 2002; 20: 2302

LAM enfant

Les 11q23/MLLLAM adulte

MRC

•MRC10 1998: tous 11q23/MLL dans groupe intermédiaire

•ASH2002: tous 11q23/MLL restent dans groupe intermédiaire

CALGB

•t(9;11) dans groupe intermédiaire

•autres 11q23 dans groupe mauvais pronostic

SWOG

•tous les 11q en mauvais pronostic

BGMT95

•11q23/MLL autres que t(9;11) mauvais pronostic

Les 11q23/MLL

Seul screening FISH systématique recommandé

(arbre décisionnel LAM)

FISH double couleur

•cellules interphasiques=southern (sauf ITD MLL)

•cellules métaphasiques: identification partenaire

Répertorier tous les partenaires MLL

Déterminer le pronostic de chaque translocation

AML1

SCL

AML1RUNX1/CBFA2/PEBP2aB

AML2RUNX3/CBFA3/PEBP2aC

AML3RUNX2/CBFA1/PEBP2aA

Hématopoïèse

ossification

Développementtractus gastro-intestinal

Fonction principaleGènes

Les Core binding Factor : 3 sous unités et une seule

1 domaine en commun : le domaine RUNT

« Wing »

« Tail »

CBF

ADN

Runt

A’-B

• domaine Ig-like, semblable à p53, NF-B, STATs

Le domaine Runt

• 128 AA très conservés

• Fixation à l’ADN et association avec CBF

• Reconnaissance d’un motif PyGPyGGTPy

R80

R177R174

• Forte homologie avec le gène runt de la drosophile

• Rôle pivot dans l’hématopoïèse : souris KO aml1 -/- non viables

• Contrôle l’expression de nombreux gènes :

IL3, récepteur M-CSF, myéloperoxydase (MPO)…

chaînes ,, et du TCR (T Cell Receptor)

inhibiteur de kinase cycline-dépendante p21WAF1

Fonctions de AML1

• Fonction: Régulation de la croissance et de la différenciation des granulocytes

MPOIL3GM-CSFM-CSF RTCR

RUNX1

CBF

LEF-1

CEBP

ALY

CREB

P300 / CBP

P-CAF

RHD

Ac

Ac

Ac

Acetylation

PU.1 c-MYB

Effet activateur

Effet inhibiteur

NMLiaison à la matrice nucléaireco-localisation avec la RNA pol

EAR2453

RHD NLS VWRPY

351 381

TAD

Fixation répresseur TLE

mSin3A

P21 WAFet autres...

+

-

Core Binding Factor (CBF) fréquemment réarrangé dans les leucémies

t(8;21)(q22;q22) AML1-ETO (MTG8) LAM

inv16(p13;q22) CBFb -MYH11 LAM

t(16;21)(q24;q22) AML1-MTG16 LAM

t(8;21)(q24;q22) AML1-ETO2 (TRPS1) LAM

t(19;21)(q13;q22) AML1-AMP19 LAM

t(3;21)(q26;q22) AML1-EVI1, AML1-MDS1, AML1-EAP LMC, SMD

*

t(12;21)(p12;q22) TEL-AML1 (AML1-ETV6) LAL

Altération par translocations

Différents partenaires

*

Déacétylation, répression

AML1

Bcl2M-CSF R

GM-CSFTCRTGFCEBP

ETO

RHD

mSin3A

N-CoR

HDAC

ETO

MTGR1ETO2

MTG16

Conséquences fonctionnelles

Altération par translocations

T(8,21) et INV(16)

• Cytogénétique

• FISH ou RQPCR si

echec de caryo t(8;21) et M1/M2/M4

idem+normal si inv(16)

Mutations constitutionnelles de aml1

Familial Platelet Disorder (FPD)

prédisposition LAM

altération = délétion, mutations faux-sens ou non-sens

haploinsuffisance : Song et al. Nat.Genet. 2000

Mutations constitutionnelles

Mutations acquises et hémopathies malignes (1)

~6,5% dans les HM (> 900 patients)

20-25% dans les LAM0 (34/142)Osato et al. Blood 1999Yeoh et al. ASH 2000Preudhomme et al. Blood 2000Langabaer et al. GCC2002

35% dans les HM associées à Tri 21 acquises

30-40% dans les SMD secondaires (radiothérapie, chimiothérapie)

Mutations acquises

La protéine C/EBP

Facteur de transcription indispensable à la différenciation myéloïde.

Fixation sur les régions promotrices du G-CSF R, GM-CSF R, MPO,...

C/EBP(1)

• Protéine C/EBP

C/EBP(2)

Coopération avec d ’autres facteurs AML1, CBF, PU-1...

C/EBP (4)

• 2 domaines de transactivation• 1 domaine ZIP : Liaison au DNA

Dimérisation• 2 ATG d ’initiation

Protéines de 42 ou de 30kD. • Effet dominant négatif de la 30kD.

• Protéine C/EBP

bZIPTAD1 TAD2

30 Kd42 Kd

LAM et mutations de CEBPA (3)

• Pabst et al, Nature Genetics, vol 27, March 2001

7 % mutations (10/137) dans les LAM.16% (5/30) dans les LAM2 sans t(8/21).

• Gombart et al, Blood, vol 99, February 2002

408 échantillons de tumeurs toutes confondues.11 patients mutés:

8/78 LAM1/92 SMD (1 AREB-T)1/36 cancer pulmonaire à petites cellules.1/33 cancer de la prostate

Descriptif des Mutations de CEBPA

1er groupe: Mutants N-Ter

70 97 127 200 278 358

Forme de 30kD: Patients 1 à 12

Wild type

Patients 1, 8, 11

Patients 2, 9

Patients 4, 6, 12

Patient 5

Patient 10

Patient 7

Patient 3

159

107

59

TAD1 TAD2 bZIP

• 42kD tronquée• 30kD Dominant négatif

TAD2 bZIP

Descriptif des Mutations de CEBPA

70 97 127 200 278 358Wild type

Patient 12, 13313

TAD1 TAD2 bZIP

Patient 7, 9, 10, 11, 14, 15

70 97 127 200 278 358Wild type

Patient 15

Patient 8

383

TAD1 TAD2 bZIP 2ème groupe: Mutants C-Ter

Fixation au DNA ou dimérisation altérée

3ème groupe: partie centrale

Domaine bZIP amputé

C/EBP :survie globale

C/EBP muté = amélioration de la survie globale

C

um

ula

tive p

erc

en

tag

e

0 2 4 6 8 10

0

25

50

75

100 .|||

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||

|| || || |||||| || ||| || |||| ||||

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.

||

|

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|

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years At risk:

0 178 67 40 18 4 1 1 23 17 7 2 1 0

Logrank P=.03

0 178 117 1 23 10

N O

CEBP MutéCEBP WT

P=0.03

A dominant-negative mutant of C/EBP, associated with acute myeloid leukemias, inhibits differentiation of myeloid and erythroid progenitors of man but not mouse

Maike Schwieger, Jürgen Löhler, Meike Fischer, Uwe Herwig, Daniel G. Tenen and Carol Stocking

Blood, 1 April 2004, Vol. 103, No. 7, pp. 2744-2752.

C/EBPp30, a myeloid leukemia oncoprotein, limits G-CSF receptor expression but not terminal granulopoiesis via site-selective inhibition of C/EBP DNA binding

Rebecca Cleaves, Qian-fei Wang and Alan D Friedman1

Blood. 2004 Apr 1;103(7):2744-52. Epub 2003 Dec 04.

C/EBP

AML1-ETO et leucemogénèse :nécessaire et/ou suffisant ? (1)

Miyamoto et al. PNAS 2000

HSC: cellules souches; CLP: progéniteurs lymphoides

MRD+ chez les patients en longue RC

Altération par translocations

AML1-ETO Knock/In absence d’hématopoièse fœtale hépatique mort des souris (Downing, Zhang, August, 2001, vol98,n°18)

Souris transgèniques AML1-ETO avec promoteur myeloide-spécifique

Expression dans le compartiment myéloide hématopoièse normale

Si traitement ENU (mutation dans l ’ADN)

AML1-ETO seul ne suffit pas

Altération par translocations

LA

AML1-ETO et leucemogénèse :nécessaire et/ou suffisant ? (2)

Class II Mutations

AML1/ETO, PML/RARa,AML1/ETO, PML/RARa,

C/EBPa lossof functionC/EBPa lossof function

Class I Mutations

BCR/ABL, FLT3-ITDBCR/ABL, FLT3-ITD

Therapy : eg, ATRATherapy : eg, imatinib mesylate, FTL3 inhibitors AMLAML

Blocage de differenciation + prolifération

FLT3C-KitRAS

FLT3

Domains

SP : Signal Peptide

TM : Transmembrane

TK : Tyrosine Kinase

KI : Kinase Insert

CT : C-termJM domain duplications (Y591/Y599) Duplications

Leaves TK domain in frameDominant positive mutations

- Class III receptor tyrosine kinase (KIT, FMS, PDGFR)- Expressed on hematopoietic stem cells- Ligand (FL) expressed on stroma cells

SP TM JM TK1 KI CTTK2CN

Exon 10 Exon 11 Exon 12

11F 12R

835/836

FLT3 review (Kottaridis et al, BJH 2003)(3)

n %

Thiede et al 979 20.4 - hyperleucocytose

- M3V

Schnittger et al 1003 23.5 - M5

- M2

Kattaridis et al 854 27 - caryotype normal

-11q23 <0.5%

- t(6,9)

- Rare CBF Pas d’influence sur la RC, des rechutes

RAS

• 3 gènes : N, K, H RAS

• Mutations codons 12, 13, 61, autres

• LAM : N>K>H RAS

• 10 à 15% de mutations (25% dans les CBF)

Valeur pronostique contreversée

Bilan : selon le caryotype

0%

20%

40%

60%

80%

100%

Population

générale

Mutations

FLT3

Mutations

Ras

Mutations

CEBPa

ND

Déf avorable

I ntermédiaire

Favorable

Groupes pronostiques (1)

Selon le caryotype (MRC)

C

um

ula

tive p

erc

en

tag

e

0 2 4 6 8 10

0

25

50

75

100 .||

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.|

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|| ||| ||| |||||| | | | ||

|| | ||| | | | | | |

.

|

|

years At risk:

1 26 10 8 2 0 0 2 136 67 35 16 5 1 3 23 3 1 0 0 0

Logrank P<.001

1 26 11 2 136 81 3 23 21

N O

favorable

intermédiaire

défavorable

P=0.30 (NS)

OS

Groupes pronostiques (3)

Conclusion : Nouvelle classification proposée :

P=0.006

C

um

ula

tive p

erc

en

tag

e

0 2 4 6 8

0

25

50

75

100 . |||

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|

| | | | || | | | | | |

.

|

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||| |

| |||

|||

|| || | ||||| | | |

|| | ||| | |

.

|

| |

|

years At risk:

1 38 22 13 4 1 2 115 54 29 13 3 3 30 4 2 1 1

Logrank P<.001

1 38 13 2 115 73 3 30 26

N O

Groupe 1

Groupe 3

Groupe 2

groupe 1 : MRC1, CEBP+, FLT3-

groupe 2 : MRC2, RAS- et gpe 1 FLT3+,

groupe 3 : MRC 3, RAS+

OS

C-Kit

• Récepteur Stem Cell Factor

• Mutation ponctuelle dans mastocystose (codon 816)

• LAM : 1,5% mutation mais

inv(16) : 10-25% délétion exon 8 ; 5% D816

t(8;21) : 5% délétion exon 8 ; 5% D816

Associé à un risque de rechute augmenté

Survie et rechute des LAM avec mutation de c-Kit exon 8

D’après Care et al. , Br J Haematol, juin 2003

All t(8;21) inv(16)N=81 N=58 N=33

Age (y) 33 [.8-60] 30.5 [4-58] 34 [.8-60] NSSex Ratio (M/F) 44/37 29/19 5/18 NSWBC (G/L) 21 [1.7-257] 13.4 [1.7-155] 58.6 [4-257] p=.0001

Mutations

KIT 15% (11/74) 11% (5/42) 19% (6/32) NS Ex8 11% (8/74) 7% (3/42) 16% (5/32) NS D816 4% (3/74) 4% (2/49) 3% (1/32) NS

FLT3-D835 6% (5/81) 4% (2/48) 9% (3/33) NSRAS 21% (15/71) 11% (4/38) 33% (11/33) p=.02N-RAS 16% (12/73) 8% (3/40) 27% (9/33) p=.03K-RAS 6% (4/71) 3% (1/38) 9% (3/33) NS

0

,2

,4

,6

,8

1

0 2 4 6 8 10

0

,2

,4

,6

,8

1

0 2 4 6 8 10E

FS

OS

Years Years

RTK-

RTK+

RTK-

RTK+

P=.004P=.0007

CBF

0

,2

,4

,6

,8

1

0 2 4 6 8 10

0

,2

,4

,6

,8

1

0 2 4 6 8 10

P=.0007 P=.06

OS

OS

RTK-

RTK+

RTK-

RTK+

t(8;21) inv(16)

YearsYears

RR P valueRTK Mutation 3.50[1.56-6.85] .002CBF (t(8;21) vs inv16) 3.03[1.01-8.39] .04Age* 1.005[.998-1.012] NSWBC* 1.005[.982-1.030] NS

Multivariate analysis (OS)

*continuous variables

BAALC (Brain And Acute leukemia cytoplasmic)

- Localisé en 8q22.3

- Corrélation entre +8 et hyperexpression de BAALC

- Baldus et al, Blood 2003

80 caryotypes normaux

< 60 ans

CAL GB 9621

- Résultats

• pas de différence age, sexe, flt3, NP, Hb mais BAALC faible : leuco et M5

• pas influence sur RC

• BAALC survie : 1.7 VS 5.8 years

EFS : 0.8 VS 4.9 years

DFS 1.4 VS 7.3 years

- Facteur pronostic indépendant

D’après Baldus et al, Blood 2003

EVI 1- Localisé en 3q26

- Anomalies rares mais de mauvais pronostic

- t(3;3) ou inv(3) hyperexpression EVI 1 et/ou EVI 1-MDS1

- Groupe Hollandais, Blood 2003

• 319 patients

• RQ-PCR : EVI 1 + MDS1 - 6 patients Groupe I

EVI 1 + MDS1 + 26 patients Groupe II

EVI 1 - MDS1 + 12 patients Groupe III

EVI 1 - MDS1 - 275 patients Groupe IV

- EVI 1 : lié à caryotype défavorable

- lien avec 11q23

- groupe I et II : pronostic très défavorable

Ÿ Courbes de survie

0 1000 2000 3000 4000

RFS_jrs

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

Cu

m S

urv

ival

FLT3_quali_median

,00

1,00

,00-censored

1,00-censored

Survival Functions

0 1000 2000 3000 4000

RFS_jrs

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

Cu

m S

urv

ival

HoxA9_quali_media

n

,00

1,00

,00-censored

1,00-censored

Survival Functions

p = 0,01 p = 0,008

ETUDE DU PHENOTYPE ETUDE DU PHENOTYPE MDRMDR

P.Lepelley - Laboratoire d ’Hématologie - CHU de LILLE

22 oct 2003

PHENOTYPE MDRPHENOTYPE MDR• Expression cellulaire de protéines de

transport • Efflux et/ou redistribution intracellulaire• Résistance croisée• - Glycoprotéine-P (MDR1) - MRP

(multidrug resistance associated protein)

• - LRP (lung resistance protein) - BCRP (breast cancer resistance protein)

• Modulation par agents pharmacologiques

Etudes discordantes : problèmes méthodologiques

Expression de PgP,MRP,LRP,BCRPExpression de PgP,MRP,LRP,BCRP

BCRP

Fréq Pronostic Fréq Pronostic Fréq Pronostic Fréq

LAM de novo40% (20-

75)+

40% (10-50)

+/- 30% +/- 30%

Rechutes 80% 90% 50-70%

>55 ans 70%

SMD acutisés 80% + 60%

PGP MRP LRP

Intérêt pronostic de la PgP

TEST FONCTIONNEL D ’EFFLUX DE LA TEST FONCTIONNEL D ’EFFLUX DE LA RHODAMINE 123RHODAMINE 123

Rh123 (200ng/ml) 45mn 20°C

Efflux 2H 37°C + Vérapamil (10g/ml)

Spécifique de la Pgp

MRP: efflux+/- > 4h non inhibé par

Vp

•Marqueur mitochondrial (523nm)

•2 temps:

Accumulation (A)

Efflux (E) +/- Vérapamil(V)

PhénotypePhénotype MDR / PgP dans les MDR / PgP dans les LAM et SMD (247pts)LAM et SMD (247pts)

LAMdiag(M0,DMP,C.cpl..

LAM enrechute

LAMinduites

SMDacutisés

SMD(areb, -T,Lmmc)

nb pts 83 61 22 32 49

Pgp 78% 67% 85% 86% 85%

Rh123 63% 56% 91% 69% 80%

Corrélation avec l ’age (p<0.001) et avec CD34 (p < 0.001)

Age moyen: 56 ans, 96 pts<55 ans - 151 pts >55 ans

20 cas (9 neg) étudiés au diag et en rechute/acutisation pas de conversion

FACTEURS PRONOSTIQUES DES LAFACTEURS PRONOSTIQUES DES LA

LAM

• Age

• Leucocytose

• Cytogénétique

• “FAB” + DMP

• 2ème VS de novo

+ mutations :FLT3 RASCEBPA P53c.Kit Autres

LAL

• Age

• Leucocytose

• Cytogénétique

• Phénotype

préthérapeutique

chimiosensibilité

• Délai de RC

•Maladie résiduelle

• Délai de RC

• Chimio sensibilité

• Maladie résiduelle

LA MALADIE RESIDUELLE

Temps

Rémission complète

Clinique

Nombrede blastes

1011

1010

1012

Cytologie

Chimiothérapie

PCR

10-2

10-5

INTERETS DU SUIVI DE LA MALADIE INTERETS DU SUIVI DE LA MALADIE RESIDUELLE PAR RQ-PCR DANS RESIDUELLE PAR RQ-PCR DANS

LES LEUCEMIES AIGUES LES LEUCEMIES AIGUES MYELOIDES PRESENTANT UNE MYELOIDES PRESENTANT UNE

TRANSLOCATION t(8;21)TRANSLOCATION t(8;21)

MATERIEL ET METHODESMATERIEL ET METHODES

I. PATIENTSI. PATIENTS

29 patients suivis 29 patients suivis au CHRU de Lille au CHRU de Lille

(1994 - 2003)(1994 - 2003)

235 prélèvements 235 prélèvements sanguins et médullairessanguins et médullaires

27 échantillons 27 échantillons concomitants de concomitants de

moelle et de sangmoelle et de sang

Age médian : 46 ansAge médian : 46 ans21 patients 21 patients homogèneshomogènes

2 allogreffes2 allogreffes

5 LAM15 LAM120 LAM220 LAM2 1 LAM41 LAM4

3 inconnus3 inconnus

2 interruptions 2 interruptions thérapeutiques thérapeutiques

précocesprécoces

RESULTATSRESULTATS

I. ANALYSE GLOBALEI. ANALYSE GLOBALE

PatientsPatients

100% de rémission complète en post-induction100% de rémission complète en post-induction

10 patients rechutent (10 à 37 mois après le diagnostic)10 patients rechutent (10 à 37 mois après le diagnostic)

Survie globale moyenne : 101 moisSurvie globale moyenne : 101 mois

Survie moyenne sans rechute : 70 moisSurvie moyenne sans rechute : 70 mois

Résultats de RQ-PCRRésultats de RQ-PCR

8 échantillons exploitables par patients. 28,5 mois de médiane de suivi8 échantillons exploitables par patients. 28,5 mois de médiane de suivi

Valeur médiane du taux de transcrit au diagnostic : 9.10Valeur médiane du taux de transcrit au diagnostic : 9.10-1-1 (0,23 à 31,3) (0,23 à 31,3)

Valeur médiane du taux de transcrit à la rechute : 4,86.10Valeur médiane du taux de transcrit à la rechute : 4,86.10-1-1 (2,3.10 (2,3.10-3-3 à 24,6) à 24,6)

III. COURBES DE MR DES 21 PATIENTS HOMOGENESIII. COURBES DE MR DES 21 PATIENTS HOMOGENES

Catégorisation des patientsCatégorisation des patients

RESULTATSRESULTATS

3 groupes identifiés en fonction de l’évolution des courbes de suivi : 3 groupes identifiés en fonction de l’évolution des courbes de suivi :

Groupe A : 8 patientsGroupe A : 8 patients

Patient A3

Mois

0 2 4 6 10 15 20 25 30 35 40 45 50

Ma

lad

ie R

és

idu

elle

1e-6

1e-5

1e-4

1e-3

1e-2

1e-1

1e+0

1e+1

Patient A4

Mois

0 2 4 6 9 12 15 18 21 24 27

Ma

lad

ie R

és

idu

elle

1e-6

1e-5

1e-4

1e-3

1e-2

1e-1

1e+0

1e+1

Groupe A : 1 seule rechuteGroupe A : 1 seule rechute

MR < 10MR < 10-5-5 en post-induction en post-induction

RESULTATSRESULTATS

Groupe B : 7 patientsGroupe B : 7 patients

MR < 10MR < 10-5-5 dans les 6 premiers mois dans les 6 premiers mois

Patient B5

Mois

0 2 4 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33

Ma

lad

ie R

és

idu

elle

1e-6

1e-5

1e-4

1e-3

1e-2

1e-1

1e+0

1e+1

Patient B6

Mois

0 2 4 6 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Ma

lad

ie R

ésid

ue

lle

1e-6

1e-5

1e-4

1e-3

1e-2

1e-1

1e+0

1e+1

Groupe B : 0 rechuteGroupe B : 0 rechute

RESULTATSRESULTATS

Groupe C : 6 patientsGroupe C : 6 patients

Pas de MR < 10Pas de MR < 10-5-5 dans les 6 premiers mois dans les 6 premiers mois

Patient C4

Mois

0 5 10 15 20 25 30 35

Ma

ladie

Ré

sidue

lle

1e-6

1e-5

1e-4

1e-3

1e-2

1e-1

1e+0

1e+1

Patient C5

Mois

0 2 4 6 8 10

Maladie R

ésiduelle

1e-6

1e-5

1e-4

1e-3

1e-2

1e-1

1e+0

1e+1

Groupe C : 5 rechutesGroupe C : 5 rechutes

Catégories établies en fonction de la MR à 6 moisCatégories établies en fonction de la MR à 6 mois

RESULTATSRESULTATS

Mois

100806040200

Su

rvie

Cu

mu

lée

1.2

.9

.6

.3

0.0

Temps avant rechute / Catégories

p = 0,00001

1 / 15 *

5 / 6 *

* : nbre de rechute

: patients du groupe A + B

- - - : patients du groupe C

différence très significativedifférence très significative

absence de passage de MR sous 10absence de passage de MR sous 10-5-5

dans les 6 moisdans les 6 mois

= = facteur de mauvais pronosticfacteur de mauvais pronostic

Facteurs pronostiques identifiésFacteurs pronostiques identifiés

RESULTATSRESULTATS

Catégories établies en fonction de la MR post-inductionCatégories établies en fonction de la MR post-induction

- MR > 10MR > 10-3-3 en post-induction en post-induction

- Chute < 3 log en post-inductionChute < 3 log en post-induction

différence très significativedifférence très significative

= = facteur de mauvais pronosticfacteur de mauvais pronostic

: patients dont la MR post-induction est < 10-3

---- : patients dont la MR post-induction est > 10-3

Mois

100806040200

Su

rvie

Cu

mul

ée

1.2

.9

.6

.3

0.0

PFS / valeur MR post-induction(seuil = 10-3)

p = 0,006

5 / 8 *

* : nbre de rechute

1 / 10 *

Mois

100806040200

Su

rvie

Cu

mul

ée

1.2

.9

.6

.3

0.0

p = 0,01

PFS / perte 3 log de MR après l’induction

: patients perdant + de 3log de MR après l’induction

---- : patients perdant - de 3log de MR après l’induction

4 / 6 *

* : nbre de rechute

2 / 12 *

RESULTATSRESULTATS

V. COMPARAISON MR MOELLE ET SANGV. COMPARAISON MR MOELLE ET SANG

27 prélèvements concomitants de moelle et de sang27 prélèvements concomitants de moelle et de sang

Différence MRDifférence MRmoellemoelle - MR - MRsangsang : entre -1,27 et +1,37 ; moyenne à -0,13 : entre -1,27 et +1,37 ; moyenne à -0,13

Valeurs de MR des paires sang / moelle

1,E-06

1,E-05

1,E-04

1,E-03

1,E-02

1,E-01

1,E+00

1,E+01

Doublons MO + SG

MR

/ K

asum

i

moelle

sang

y = 2,0894x1,0539

R2 = 0,9526

1,E-07

1,E-06

1,E-05

1,E-04

1,E-03

1,E-02

1,E-01

1,E+00

1,E+01

1,E+02

1,E-07 1,E-06 1,E-05 1,E-04 1,E-03 1,E-02 1,E-01 1,E+001,E+011,E+02

MR Moelle

MR

San

g

Coefficient de détermination à 95%Coefficient de détermination à 95% = MR= MRmoellemoelle et MR et MRsangsang comparables comparables

Scnittger et al,

BLOOD, 2003

Krauter et al ,

JCO 2004

Others transcriptsOthers transcripts

• Very few data

• * MLL AF9

* multiple splice site : difficult

* scholl et al : GCC, November 2003

• 8 patients + 2 cell lines

• Feasibility of RQ PCR : OK

• But sensitivity : LOW

* less than 20 samples analyzed

No clinical relevance demonstrated

WT1WT1

• Tumor suppressor gene located on chromosome 11p13

• Involved in pathogenesis of wilms tumor

• High expression in ovary, testis, spleen

• Expression observed in more than 80% of AML

• Expression low in PB but variable in BM

• Qualitative RT PCR : few interest for MRD

• RQ PCR : more interesting in PB than in BM

Cillioni et al, Leukemia,2002

FLT3

Domains

SP : Signal Peptide

TM : Transmembrane

TK : Tyrosine Kinase

KI : Kinase Insert

CT : C-termJM domain duplications (Y591/Y599) Duplications

Leaves TK domain in frameDominant positive mutations

- Class III receptor tyrosine kinase (KIT, FMS, PDGFR)- Expressed on hematopoietic stem cells- Ligand (FL) expressed on stroma cells

SP TM JM TK1 KI CTTK2CN

Exon 10 Exon 11 Exon 12

11F 12R

835/836

Kottaridis

Maladie résiduelle dans les leucémies aiguës myéloïdes:

approche cytométrique

L. Campos

P. Flandrin

Laboratoire d ’Hématologie

Hôpital Nord - CHU de St. Etienne

Phénotypes associés à la leucémie

• Expression croisée d’antigènes: marqueurs lymphoïdes sur cellules myéloïdes (ou inverse).

• Expression asynchrone d’antigènes: coexpression d’antigènes de maturité et d ’immaturité d’une même lignée.

• Surexpression antigénique: augmentation d ’expression d ’un antigène sur une cellule.

• Cellules exprimant des propriétés aberrantes en taille et structure.

Orfao et San Miguel (Blood 2001):

126 LAM en rémission complète,

après la chimiothérapie d ’induction,

>10-2 : élevé

10-3-10-2 : intermédiaire

10-3-10-4 : faible

< 10-4 : très faible

Survie sans rechute à 3 ans:

Venditti ( 2002):

56 patients,

après chimiothérapie d ’induction et de consolidation,

résultats:

après induction: taux cellules avec phénotype aberrant = 4.5 x 10-4. (seuil)

> 4.5 x 10-4 : 53 % de rechute

< 4.5 x 10-4 : 40 % de rechute .

après consolidation: taux = 3.5 x 10-4.

> 3.5 x10-4 : 77 % de rechute.

< 3.5 x10-4 : 17 % de rechute.

L ’étude de la maladie résiduelle après consolidation semble + prédictive du risque de rechute.

Probabilité de survie en fonction de MDR après consolidation (Venditti, 2000)

Laboratoire d’Hématologie A Calmette U524 InsermA. CossonN. GrardelJ.P. KerckaertP. LepelleyH. Leroy C. RocheC. RoumierV. SoenenTechniciens

Cliniciens MDS CHRU LilleF. Bauters S. De BottonB. Quesnel« P. Fenaux »

J. AndrieuxJ.L. Laï

Membres du Groupe ALFAMembres du GBMHM« Intergroupe LAM »

Laboratoire de Génétique Médicale CHRU Lille