Biochimia clinica 2010, USMF, Introducere

DiagnosticDiagnostic clinic clinic de laboratorde laboratorBiochimia clinicBiochimia clinicăă

http://kipmed.towernet.ru/med/cat/neovac.php

Diagnosticul clinic de laboratorDiagnosticul clinic de laborator – – este o disciplină medico-ştiinţifică, care :este o disciplină medico-ştiinţifică, care :•studiază interdependenţa între studiază interdependenţa între

starea fiziologică (patologică) a starea fiziologică (patologică) a organismului şi modificarea în organismului şi modificarea în compoziţia celulelor şi lichidelor compoziţia celulelor şi lichidelor biologice;biologice;

•elaborează metode de cercetare elaborează metode de cercetare obiectivă a componenţei celulare şi obiectivă a componenţei celulare şi chimice a ţesuturilor şi lichidelor chimice a ţesuturilor şi lichidelor biologice; biologice;

• determinarea devierilor de la normă, determinarea devierilor de la normă,

• determinarea diagnozei, prognozei determinarea diagnozei, prognozei maladiilor, maladiilor,

• estimarea eficacităţii tratamentului, estimarea eficacităţii tratamentului,

• efectuarea controlului asupra efectuarea controlului asupra terapiei medicamentoase,terapiei medicamentoase,

• profilaxia patologiilor.profilaxia patologiilor.

Diagnosticul clinic de laboratorDiagnosticul clinic de laborator – – utilizează datele obţinute pentru utilizează datele obţinute pentru ::

Diagnosticul clinic de Diagnosticul clinic de laboratorlaborator include mai multe direcţii include mai multe direcţii :: Biochimie clinică, hematologie clinică, Biochimie clinică, hematologie clinică,

citologie, imunologie, microbiologie, citologie, imunologie, microbiologie, micologie, parazitologie, toxicologie clinică.micologie, parazitologie, toxicologie clinică.

• 75%75% din toate investigaţiile clinice în prezent din toate investigaţiile clinice în prezent se efectuează cu aplicarea metodelor de se efectuează cu aplicarea metodelor de biochimie clinicăbiochimie clinică, deoarece a fost , deoarece a fost demonstrat, că la baza patogeniei majorităţii demonstrat, că la baza patogeniei majorităţii maladiilor stau maladiilor stau dereglări primare sau dereglări primare sau secundare ale metabolismuluisecundare ale metabolismului..

• Metodele biochimice şi fizico-chimice sunt Metodele biochimice şi fizico-chimice sunt mult mai diverse, iar deseori şi semnificativ mult mai diverse, iar deseori şi semnificativ mai informative decât cele microscopice.mai informative decât cele microscopice.

Obiectele deObiectele de cercetare cercetare clinico-clinico-biochimică biochimică sunt: sunt:

•Lichidele biologice: sângele, Lichidele biologice: sângele, lichidul cefalorahidian, lichidul cefalorahidian, transudatele, exudatele, transudatele, exudatele, urina, saliva;urina, saliva;

•Ţesuturile.Ţesuturile.

Etapele investigaţiilor de laborator

Preanalitică Analitică Postanalitică

Etapele Etapele investigaţiilor de laboratorinvestigaţiilor de laborator

Etapa preanaliticăEtapa preanalitică includeinclude::

• Selectarea şi solicitarea investigaţiei de Selectarea şi solicitarea investigaţiei de laboratorlaborator;;

• Alegerea termenilor optimali pentru Alegerea termenilor optimali pentru efectuarea investigaţieiefectuarea investigaţiei;;

• Pregătirea pacientului către recoltarea Pregătirea pacientului către recoltarea probei biologiceprobei biologice;;

• Recoltarea adecvată a probei biologiceRecoltarea adecvată a probei biologice;;

• Prelucrarea primară a probeiPrelucrarea primară a probei, , transportul şi păstrarea eitransportul şi păstrarea ei..

2. Faza preanalitică în interiorul

laboratorului 37%

1. Faza preanalitica în exteriorul

laboratorului 20%

Indicarea testelorObţinerea biomaterialului

Transportarea

Înregistrarea şi păstrarea

Centrifugarea

Repartizarea pe aparate

Pregătirea probelor

Etapa preanaliticăEtapa preanalitică : :

Etapa analiticăEtapa analitică constă înconstă în::

•Prelucrarea preliminară specială Prelucrarea preliminară specială a probei biologicea probei biologice;;

•Efectuarea testului de Efectuarea testului de laboratorlaborator;;

•Controlul calităţii investigaţiilorControlul calităţii investigaţiilor..

Etapa postanaliticăEtapa postanalitică includeinclude::

•PrimireaPrimirea rezultatelor investigaţiei rezultatelor investigaţiei de către medicul-cliniciande către medicul-clinician;;

•Interpretarea rezultatelor Interpretarea rezultatelor obţinuteobţinute;;

•Luarea deciziei referitor la Luarea deciziei referitor la necesitatea testărilor necesitatea testărilor suplimentaresuplimentare;;

•Prescrierea tratamentuluiPrescrierea tratamentului

Etapa preanaliticăEtapa preanalitică::- - pentru a selecta şi a solicitapentru a selecta şi a solicita investigaţiile de investigaţiile de laboratorlaborator este necesareste necesar::

• A efectua o analiză clinică complexă A efectua o analiză clinică complexă a a stării pacientuluistării pacientului

• A determina care investigaţii de laborator A determina care investigaţii de laborator sunt necesare de a fi efectuate în scopul sunt necesare de a fi efectuate în scopul obţinerii unei informaţii maximal utileobţinerii unei informaţii maximal utile..

• A completa corect buletinul de trimitereA completa corect buletinul de trimitere

Profilul Profilul “ “Biochimia sBiochimia sângeluiângelui" "

Teste biochimice standardTeste biochimice standard. . Permit de a depista la Permit de a depista la timp devierile în starea organismului, de a pune timp devierile în starea organismului, de a pune diagnoza şi de a elabora programul tratamentului. diagnoza şi de a elabora programul tratamentului. Se recomandă de efectuat o dată la jumătate de Se recomandă de efectuat o dată la jumătate de an.an.

• ААllАТ (Alanin aminotransferaАТ (Alanin aminotransferazaza) ) • ААssАТ ( Aspartat aminotransferaАТ ( Aspartat aminotransferaza)za)• ProteinProteinaa total totalăă• Fracţiile proteice Fracţiile proteice (Serum Protein Electrophoresis) (Serum Protein Electrophoresis)• BilirubinBilirubinaa total totalăă• BilirubinBilirubinaa direct directăă• Gamma-glutamGamma-glutamiil transferal transferaza za (GGT)(GGT)• Fosfataza alcalină Fosfataza alcalină К+К+(( Potassium), Na+ Potassium), Na+((Sodium), Сl-Sodium), Сl-

((Cloride) Cloride) • CreatininCreatininaa• UreaUrea• GlucoGlucozaza• Colesterol totalColesterol total

Profil Profil ““CardioriscCardiorisc" " Teste biochimice, ce permit de a aprecia afectarea Teste biochimice, ce permit de a aprecia afectarea

recentă a miocardiocitelor, precum şi riscul recentă a miocardiocitelor, precum şi riscul dezvoltării dezvoltării patologiilor cardio-vasculare în viitorpatologiilor cardio-vasculare în viitor. .

• LDHLDH (Lactat dehydrogena (Lactat dehydrogenazaza) ) • LDH-1LDH-1• ААllАТ (Alanin aminotransferaАТ (Alanin aminotransferazaza) ) • ААssАТ ( Aspartat aminotransferaАТ ( Aspartat aminotransferaza)za)• К+К+(( Potassium), Na+ Potassium), Na+((Sodium), Сl-Sodium), Сl-((Cloride) Cloride) • Creatin kinazCreatin kinazaa• Creatin KinaCreatin Kinazaza-MB-MB• ProtrombinProtrombinaa• Proteina C-reactivăProteina C-reactivă (CRP) (CRP)• TriglTrigliicerideceride• FibrinogenFibrinogen• Colesterol totalColesterol total• HDL ColesterolHDL Colesterol• LDL ColesterolLDL Colesterol

““Profil LipidicProfil Lipidic""• Teste biochimice, utilizate în diagnosticul Teste biochimice, utilizate în diagnosticul

aterosclerozei şi aprecierea riscului complicaţiilor aterosclerozei şi aprecierea riscului complicaţiilor (boala ischemică a cordului, infarct miocardic, (boala ischemică a cordului, infarct miocardic, patologii vasculare ale encefalului)patologii vasculare ale encefalului)..

• TriglTrigliicerideceride

• Colesterol totalColesterol total

• HDL ColesterolHDL Colesterol

• LDL ColesterolLDL Colesterol

Profilul Profilul “ “Investigaţii hepatice : Investigaţii hepatice : screening"screening"

• ААllАТ (Alanin aminotransferaАТ (Alanin aminotransferazaza) )

• ААssАТ ( Aspartat aminotransferaАТ ( Aspartat aminotransferaza)za)

• BilirubinBilirubinaa total totalăă

• BilirubinBilirubinaa direct directăă

• Gamma-glutamGamma-glutamiil transferal transferaza za (GGT)(GGT)

• Fosfataza alcalină Fosfataza alcalină

Profilul Profilul “ “Investigaţii hepatice : Investigaţii hepatice : completcomplet""

Teste Teste biochimice, ce permit de a depista şi de a biochimice, ce permit de a depista şi de a caracteriza gradul de afectare a celulelor hepaticecaracteriza gradul de afectare a celulelor hepatice, , de a aprecia starea funcţională a ficatuluide a aprecia starea funcţională a ficatului, , de a de a elucida cauzele posibile ale patologieielucida cauzele posibile ale patologiei..

• ААllАТ (Alanin aminotransferaАТ (Alanin aminotransferazaza) ) • ААssАТ ( Aspartat aminotransferaАТ ( Aspartat aminotransferaza)za)• ProteinProteinaa total totalăă• Fracţiile proteice Fracţiile proteice (Serum Protein (Serum Protein

Electrophoresis)Electrophoresis)• BilirubinBilirubinaa total totalăă• BilirubinBilirubinaa direct directăă• Gamma-glutamGamma-glutamiil transferal transferaza za (GGT)(GGT)• Fosfataza alcalinăFosfataza alcalină• ProtrombinProtrombinaa• ColinesteraColinesterazaza

Profilul Profilul “ “Investigaţii renaleInvestigaţii renale"" Teste biochimice pentru aprecierea stării Teste biochimice pentru aprecierea stării

funcţionale a rinichilor şi depistarea patologiilor funcţionale a rinichilor şi depistarea patologiilor renalerenale. .

• CreatininCreatininaa• Urea Urea • К+К+(( Potassium), Na+ Potassium), Na+((Sodium), Сl-Sodium), Сl-((Cloride)Cloride)• CaCa ( (Calcium total)Calcium total)• Мg Мg ((Magnesium) Magnesium) • PP (Fosfor neorganic (Fosfor neorganic))• Analiza generală a urinei (cu microscopia Analiza generală a urinei (cu microscopia

sedimentului)sedimentului)

http://www.limbaklab.com/ru/profil_6.html#prof6_6

““Profil diabeticProfil diabetic"" Testul de bază pentru diagnosticul diabetului Testul de bază pentru diagnosticul diabetului

zaharatzaharat.. Testul este important în alegerea Testul este important în alegerea terapiei şi monitoringul tratamentuluiterapiei şi monitoringul tratamentului. . În În monitoringul diabetului se utilizează şi teste, ce monitoringul diabetului se utilizează şi teste, ce dau o informaţie retrospectivă despre starea dau o informaţie retrospectivă despre starea metabolismului glucidic.metabolismului glucidic.

• GlucoGlucozzaa• Hemoglobina glicozilată Hemoglobina glicozilată (HbA1С, (HbA1С,

Glycated Hemoglobin) Glycated Hemoglobin) • C-PeptidC-Peptidulul• FructoFructozzaminaminaa

Profilul Profilul ““Diagnostilul Diagnostilul osteoporozeiosteoporozei" "

Teste biochimice Teste biochimice destinate pentru aprecierea destinate pentru aprecierea generală a metabolismului mineralgenerală a metabolismului mineral, , reglării lui, reglării lui, precum şi pentru aprecierea conţinutului markerilor precum şi pentru aprecierea conţinutului markerilor metabolismului ososmetabolismului osos. .

• CaCa ( (Calcium total) Calcium total) • PP (Fosfor neorganic (Fosfor neorganic))• Hormonul paratiroid (Hormonul paratiroid (Parathyroid hormone, Parathyroid hormone,

PTH)PTH)• CreatininCreatininaa• N-ОsteocalcinN-Оsteocalcinaa• Dezoxipiridinolina Dezoxipiridinolina (în urină)(în urină)

Reguli importante Reguli importante îîn n alegerea alegerea termenilor optimali pentru efectuarea termenilor optimali pentru efectuarea

investigaţiei de laborator investigaţiei de laborator ::

•Recoltarea probelor biologice se Recoltarea probelor biologice se efectuează de obicei între orele efectuează de obicei între orele 7 7 şişi 9 9 dimineaţadimineaţa. .

•Recoltarea probelor Recoltarea probelor se se efectuează după efectuează după 8-12 8-12 ore de ore de inaniţieinaniţie ( (în stare bazalăîn stare bazală))..

•Recoltarea probelor se efectuează Recoltarea probelor se efectuează înainte de procedurile diagnostice şi înainte de procedurile diagnostice şi terapeutice, capabile să influenţeze terapeutice, capabile să influenţeze rezultatele testelor. rezultatele testelor.

•În cazul administrării medicamentelor În cazul administrării medicamentelor este necesar de a lua în consideraţie este necesar de a lua în consideraţie posibilele efecte ale preparatului posibilele efecte ale preparatului asupra parametrului testat şi de a asupra parametrului testat şi de a alege perioada de timp când aceste alege perioada de timp când aceste efecte sunt minimeefecte sunt minime..

•Obligatoriu se indică timpul exact de Obligatoriu se indică timpul exact de recoltare a probei în documentele recoltare a probei în documentele corespunzătoarecorespunzătoare. .

Etapa preanaliticăEtapa preanalitică::

la alegerea termenilor optimali pentru la alegerea termenilor optimali pentru efectuarea investigaţiei de laborator efectuarea investigaţiei de laborator este necesar de a lua în consideraţie este necesar de a lua în consideraţie că:că: conţinutul diferitor compuşi în sânge conţinutul diferitor compuşi în sânge

variază în dependenţă devariază în dependenţă de::

-ritmul circadian ritmul circadian ( (diurndiurn, , sezoniersezonier))

-fazele ciclului menstrual fazele ciclului menstrual ( (la la femeifemei))

Parametrii sanguiniParametrii sanguini, , nivelul cărora nivelul cărora variază esenţial în decursul zilei: variază esenţial în decursul zilei:

Hormoni:

Adrenalina Aldosterona Testosterona

ACTHSomatotropina

Cortozolul ProlactinaTiroxina

Noradrenalina

Electroliţii:

Fe

Na

K

Fosfaţii

Elemente figurate:

Eritrocite

Eozinofile

Parametrii sanguiniParametrii sanguini, , nivelul cărora nivelul cărora variază esenţial în dependenţă de variază esenţial în dependenţă de fazele ciclului menstrualfazele ciclului menstrual ::

Hormonul foliculostimulatorHormonul foliculostimulatorHormonul luteinizantHormonul luteinizant

aldosteronaaldosterona

Sporesc înainte de ovulaţie


ProgesteronaProgesteronaEstrogenii


colesterolulcolesterolul

Scade la ovulaţie

Fosfaţii Fosfaţii fierulfierul

Scad la menstruaţie

FactoriiFactorii, , ce influenţează asupra ce influenţează asupra rezultatelor investigaţiilor de rezultatelor investigaţiilor de

laboratorlaborator::Variabile intrinseci

Particularităţile Particularităţile individuale ale individuale ale

pacientuluipacientului::

vârstavârstasexulsexul

rasarasa

N PARAMETRU VÎRSTA BĂRBAŢI FEMEI

1. AlAT, U/l 0-100 0-41 0-31

2. AsAT, U/l 0-1011-100

15-600-37

15-600-31

3. γγ -Glutamiltransferaza 0-100 12-64 9-36

4. alfa-Amilaza, U/l 0-100 8-53

5. Lipaza, U/l 0-100 0-60

6 Fosfataza alcalina, U/l

0-1718-100

0-4480-258

7. LDH, U/l 0-12-100

0-5000-480


8. Creatinfosfokinaza 0-12-100

24-22924-195

24-170

9. Proteina totalăg/l

0-11-23-1415-6061-100

51-7356-7560-8064-8362-81

10. Acidul uric, μmol/l

0-1415-100

190-440214-448

190-363137-363

11. Creatinina, μmol/l

0-12-56-1718-6061-9091-100

98-15627-6244-8880-11571-11588-150

18-3527-6244-8853-9753-10653-115


12. Trigliceridele, mmol/l

0-56-1112-1516-1920-2930-3940-4950-100

0,34-0,970,35-1,220,41-1,560,45-1,840,5-2,090,55-3,210,63-3,370,7-3,25

0,36-1,120,4-1,290,46-1,560,45-1,450,45-1,450,43-1,810,5-2,10,62-2,79

13. Colesterol total, mmol/l

0-45-1515-1920-2425-2930-3435-3940-4445-70

2,9-5,13,1-5,23,1-5,43,2-5,63,4-6,33,6-6,63,8-6,93,9-7,04,1-7,2

3,1-5,23,2-5,23,2-5,63,3-5,83,4-6,03,6-6,33,8-6,53,9-6,74,2-7,4


15. Glucoza, mmol/l

0-67-1920-6061-100

4,1-7,03,9-5,93,9-6,44,6-6,4

16. Albumina, g/l 0-1415-1819-6061-90

38-5432-4538-5132-46


17. Calciu, mmol/l

0-1415-100

1,76-3,522,15-2,57

18. Fosfor, mmol/l

0 - 12 - 34 - 67 - 910 - 1213 - 1516 - 1819 - 100

1,15 - 2,151,00 - 1,951,05 - 1,8

0,95 - 1,751,05 - 1,850,95 - 1,650,85 - 1,600,84 - 1,45

19. Fier, μmol/l 0 - 12 - 1213 - 2526 - 4041 - 100

6 - 284 - 247 - 286 - 307 - 22

6 - 284 - 247 - 304 - 247 - 28


20. Magneziu, mmol/l

0 - 12 - 1718 - 100

0,48 - 1,050,60 - 0,950,73 - 1,06

21. Zn, μmol/l 0-11-56-910-1314-1920-100

10-2010-1812-16

12-15 12-18 10-18 9-15 7-23

Influenţa rasei asupra rezultatelor Influenţa rasei asupra rezultatelor investigaţiilor de laboratorinvestigaţiilor de laborator::

Europeni

Negri

Indieni

Creatinkinaza

Amilaza

http://www.shelkotrafaret.narod.ru/dnl/putin14.jpg

FactoriiFactorii, , ce influenţează asupra ce influenţează asupra rezultatelor investigaţiilor de laboratorrezultatelor investigaţiilor de laborator::

ParticularităţParticularităţile ile

alimentaţieialimentaţiei

ParticularităţParticularităţile ile

alimentaţieialimentaţiei

Efort fizic şi Efort fizic şi stres stres

emoţionalemoţional

Efort fizic şi Efort fizic şi stres stres

emoţionalemoţional

Fumatul, Fumatul, alcoolulalcoolul, , cofeinacofeina, , droguriledrogurile

Fumatul, Fumatul, alcoolulalcoolul, , cofeinacofeina, , droguriledrogurile

Proceduri Proceduri diagnostice şi diagnostice şi terapeutice terapeutice

((roentgenografiroentgenografiaa, ,

colonoscopiacolonoscopia, , proceduri proceduri

fizioterapeuticefizioterapeutice))

Proceduri Proceduri diagnostice şi diagnostice şi terapeutice terapeutice

((roentgenografiroentgenografiaa, ,

colonoscopiacolonoscopia, , proceduri proceduri

fizioterapeuticefizioterapeutice))

MedicamenteMedicamenteleleMedicamenteMedicamentelele

Variabile extrinseci

Influenţa inaniţiei asupra Influenţa inaniţiei asupra parametrilor biochimici sanguiniparametrilor biochimici sanguini::

ParametrulParametrul Tipul efectuluiTipul efectului

Inaniţie Inaniţie

48 ore48 ore

BilirubinaBilirubina Sporire Sporire

Inaniţie Inaniţie

72 ore72 ore

GlucozaGlucoza

TriglicerideTrigliceride

Acizi graşi liberiAcizi graşi liberi

Scădere Scădere

Sporire Sporire

Influenţa alimentaţiei asupra Influenţa alimentaţiei asupra parametrilor biochimici sanguiniparametrilor biochimici sanguini : :

ParametrulParametrul Tipul efectuluiTipul efectului

Produse Produse bogate în bogate în lipidelipide

КК++


Fosfataza Fosfataza alcalinăalcalină

SporireSporire

Produse Produse bogate în bogate în proteine şi proteine şi purine purine (carnea)(carnea)

Acid uricAcid uric

UreeaUreeaSporireSporire


ParametrulParametrul Tipul efectuluiTipul efectuluiProduse Produse bogate în acizi bogate în acizi graşi graşi nesăturaţinesăturaţi

ColesterolColesterol ScădereScădere

Produse Produse bogate în bogate în serotonină serotonină (banane, (banane, tomate, etc.tomate, etc.))

Acid Acid 5-5-oxioxi--indolilaceticindolilacetic

SporireSporire


ParametrulParametrul Tipul efectuluiTipul efectuluiProduse Produse bogate în bogate în pigmenţi pigmenţi (rodii, (rodii, portocaleportocale))

BilirubinaBilirubina SporireSporire

CofeinaCofeina GlucozaGlucoza

Acizi graşi liberiAcizi graşi liberiSporireSporire

Influenţa asupra parametrilor Influenţa asupra parametrilor biochimici sanguinibiochimici sanguini : :

ParametrulParametrul Tipul efectuluiTipul efectuluiAlcoolAlcool LactatLactat

Acid uricAcid uric


γγ--glutamiltransferazaglutamiltransferaza

GlutamatdehidrogenazGlutamatdehidrogenazaa

TransaminazeleTransaminazele

SporireSporire

MorfinaMorfina αα--amilazaamilaza

LipazaLipaza

SporireSporire


ParametrulParametrul Tipul Tipul efectuluiefectului

Efort fizicEfort fizic LactatLactat

GlucozaGlucoza


TransaminazeTransaminaze ((ALATALAT, , ААSSАТ)АТ)

CreatinkinazaCreatinkinaza

LactatdehidrogenazaLactatdehidrogenaza ((LDHLDH))

AldolazaAldolaza

SporireSporire

FumatulFumatul Acizi graşi liberiAcizi graşi liberi

Lipoproteine LDLLipoproteine LDLSporireSporire


ParametrulParametrul Tipul Tipul efectuluiefectului

StresulStresul LactatLactat

GlucozaGlucoza


FFiierulerul

SporireSporire

SchimbareSchimbarea bruscă a a bruscă a poziţiei poziţiei corpuluicorpului

EnzimeEnzime

Proteina totală şi fracţiile Proteina totală şi fracţiile proteiceproteice

BilirubinaBilirubina

ColesterolColesterol


SporireSporire

Medicamente ce influenţează Medicamente ce influenţează rezultatele testelor biochimice de rezultatele testelor biochimice de

laboratorlaborator

ParametrulParametrul MedicamentulMedicamentul Tipul efectuluiTipul efectului

αα--amilazaamilaza Preparate Preparate colinergicecolinergice

SporireSporire

BilirubinaBilirubina fenobarbitalfenobarbital ScădereScădere

CalciuCalciu Contraceptive Contraceptive hormonalehormonale

AndrogeniAndrogeni

CorticosteroiziCorticosteroizi

SporireSporire

ScădereScădere


laboratorlaborator


ColesterolColesterol ACTHACTH

HeparinaHeparina

TiroxinaTiroxina

SporireSporire

ScădereScădere

CreatinkinazaCreatinkinaza DexametazonaDexametazona

DigoxinaDigoxina

FenobarbitalFenobarbital

SporireSporire

CreatininaCreatinina AntibioticeAntibiotice SporireSporire


laboratorlaborator


GlucozaGlucoza FurosemidFurosemid

ACTHACTH

AdrenalinaAdrenalina

SporireSporire

Proteina Proteina totalătotală

CorticosteroiziCorticosteroizi

Steroizii anaboliciSteroizii anaboliciSporireSporire

ААLLАТАТ

ААSSАТАТ

AmpicilanaAmpicilana

GentamicinaGentamicina

OxacilinaOxacilina

Opiaţii Opiaţii

SporireSporire

Pregătirea pacientului către Pregătirea pacientului către recoltarea probei biologicerecoltarea probei biologice

Instruirea pacientului

cu privire la dietă, regim şi procedurile

de recoltare

Recoltarea Recoltarea materialului biologic materialului biologic primar pentru investigareprimar pentru investigare

În calitate de material biologic pentru investigaţiile În calitate de material biologic pentru investigaţiile clinice de laborator cel mai frecvent este utilizat clinice de laborator cel mai frecvent este utilizat sângele. Recoltarea sângelui se efectuează prinsângele. Recoltarea sângelui se efectuează prin::

• VenepuncţieVenepuncţie;;

• Recoltarea sângelui capilarRecoltarea sângelui capilar..

Sângele venos constituie materialul biologic Sângele venos constituie materialul biologic preferenţial pentru investigaţiilepreferenţial pentru investigaţiile biochimicebiochimice, , hormonalehormonale, , serologiceserologice, , imunologiceimunologice, , precum precum şi pentru investigaţiile hematologiceşi pentru investigaţiile hematologice..

Dezinfectăm locul puncţiei şi aplicăm garoul

Cu atenţie amestecăm sângele

Scoatem garoul şi colectăm sângeleîn eprubetele necesare

Efectuăm venepuncţia

Scoatem acul

Colapsul venei Vârful acului este lipit de peretele venei

Acul a străpuns vena

Venepuncţie VACUETTE

Optimal

Cauzele întreruperii getului de sânge în timpul venepuncţiei

Recoltarea Recoltarea materialului biologic materialului biologic primar pentru investigare primar pentru investigare

Recoltarea sângelui venos se efectuează cu Recoltarea sângelui venos se efectuează cu ajutorul unor sisteme speciale cu vacuumajutorul unor sisteme speciale cu vacuum, , care: care:

• exclud complet contactul cu materialul exclud complet contactul cu materialul biologic şi asigură securitatea atât a biologic şi asigură securitatea atât a pacientului, cât şi apacientului, cât şi a personalului medical, personalului medical,

• exclud contactul sângelui cu mediul extern,exclud contactul sângelui cu mediul extern,• preîntâmpină destrucţia celulelor sanguine, preîntâmpină destrucţia celulelor sanguine, • asigură un raport optim sângeasigură un raport optim sânge//stabilizatorstabilizator, ,

- aceasta- aceasta permite de a evita defecte ale permite de a evita defecte ale materialului biologic, contribuie la materialului biologic, contribuie la stabilitatea analiţilor şi obţinerea unui stabilitatea analiţilor şi obţinerea unui rezultat corect al testului de laboratorrezultat corect al testului de laborator..

SistemulSistemul VACUTAINER VACUTAINER constă din trei componente constă din trei componente

::

1. 1. Ac special Ac special bidirecţionat cu o supapă bidirecţionat cu o supapă protectoareprotectoare

1

2. 2. holderholder VACUTAINER VACUTAINER

2

3. 3. Eprubetă sterilăEprubetă sterilă cu conţinut dozat de vacuumcu conţinut dozat de vacuum..

3

Priorităţile faţă de Priorităţile faţă de sistemele deschise:sistemele deschise:

• durata recoltării sângelui se reduce durata recoltării sângelui se reduce cu cu 30-40%30-40%, constituind doar , constituind doar 7-10 7-10 sec.sec.

• se reduc cazurile de hemoliză se reduc cazurile de hemoliză ((de lade la 5-8 5-8 lala 2%) 2%) datorită evitării destrucţiei datorită evitării destrucţiei mecanice a eritrocitelor mecanice a eritrocitelor ..

• Se minimizează formarea micro-Se minimizează formarea micro-cheagurilorcheagurilor, , deoarece sângele deoarece sângele contactează imediat cu contactează imediat cu anticoagulantulanticoagulantul..


• Perioada de timp între recoltarea sângelui Perioada de timp între recoltarea sângelui şi contactului său cu anticoagulantul este şi contactului său cu anticoagulantul este întotdeauna constantă;întotdeauna constantă;

• Este constant şi raportul Este constant şi raportul sângesânge//anticoagulant deoarece:anticoagulant deoarece:

- - volumul anticoagulantului este dozat volumul anticoagulantului este dozat exact în procesul de producere a exact în procesul de producere a eprubeteieprubetei;;

- - volumul sângelui recoltat este determinat volumul sângelui recoltat este determinat de volumul de volumul dozat de dozat de vacuum din eprubetă vacuum din eprubetă


• Reducerea timpului de aplicare a Reducerea timpului de aplicare a garoului, deoarece la recoltarea în garoului, deoarece la recoltarea în eprubete cu vacuum garoul se eprubete cu vacuum garoul se poate scoate foarte rapid.poate scoate foarte rapid.

• SterilitateSterilitate..

Influenţa duratei de aplicare a Influenţa duratei de aplicare a garoului la venepuncţie garoului la venepuncţie asupra asupra

rezultatelor testelor de laboratorrezultatelor testelor de laborator

Parametrul Durata aplicării garoului, min.

0 2 4 6

Calciu, mmol/l 2,38 2,45 2,52 2,58

Proteina totală, g/l 72 74 77 80

Albumina, g/l 39 40 42 43

CO2

Capacele şi eticheteleCapacele şi etichetele eprubeteloreprubetelor sunt sunt colorate în diferite culori colorate în diferite culori în în

dependenţă de tipul eprubeteidependenţă de tipul eprubetei..



Succesiunea de recoltare a Succesiunea de recoltare a sângelui în diferite tipuri de sângelui în diferite tipuri de eprubete:eprubete:№ Eprubeta

Material biologic

Investigaţiile Culoarea

1.Eprubetă fără aditivi, cu aditivi sau cu activatori ai coagulării

Serbiochimice, serologice

Roşie

2. Eprubetă cu citrat de Na Plasma coagulograma

Albastră

3.Eprubetă cu Li-heparină sau heparină

Sânge integru /plasma

imunologice, electroliţi, EAB

Verde

4. Eprubetă cu EDTASânge integru /plasma

Hematologice, PCR

Violetă

5.Eprubetă cu inhibitor al glicolizei

Plasma glucoza, lactat Sură

Aditivi polimeri Aditivi polimeri pentrupentru eprubeteeprubete cu vacuum cu vacuum

((pentru separarea seruluipentru separarea serului):):• Granule de polisterol pentru Granule de polisterol pentru

coagularea rapidă a sângelui coagularea rapidă a sângelui şi formarea unui cheag şi formarea unui cheag compactcompact

• Gel polietesteric Gel polietesteric pentru pentru separarea elementelorsepararea elementelor

figurate ale sângelui şi figurate ale sângelui şi serului la centrifugare serului la centrifugare

Aditivii polimeri (granulele de Aditivii polimeri (granulele de polisterol şi gelul poliesteric) polisterol şi gelul poliesteric) uşurează separarea seruluiuşurează separarea serului//plasmeiplasmei

Durata şi condiţiile de păstrare a Durata şi condiţiile de păstrare a sângelui recoltat:sângelui recoltat:

• Se permite doar un singur ciclu de congelare-decongelare a seruluiSe permite doar un singur ciclu de congelare-decongelare a serului

• Se interzice congelarea sângelui integruSe interzice congelarea sângelui integru

• Materialul biologic se păstrează cu atât mai bine cu cât este mai joasă temperatura de păstrareMaterialul biologic se păstrează cu atât mai bine cu cât este mai joasă temperatura de păstrare

Cele mai frecvente cauze Cele mai frecvente cauze ale alterării materialului ale alterării materialului biologic după recoltarebiologic după recoltare: :

– HemolizaHemoliza– Metabolismul celulelor sanguineMetabolismul celulelor sanguine – Reacţiile chimiceReacţiile chimice din serdin ser//plasmăplasmă– Acţiunea microorganismelorAcţiunea microorganismelor – Evaporarea apeiEvaporarea apei//sublimareasublimarea– Procese osmoticeProcese osmotice – Acţiunea luminiiAcţiunea luminii – Difuzia gazelorDifuzia gazelor

Metode Metode îîn biochimia n biochimia clinicăclinică• Metodele principale sunt Metodele principale sunt metode metode

fizico-chimicefizico-chimice de analiză: de analiză:

–Metode optice Metode optice –Metode cromatograficeMetode cromatografice–ElectroforezaElectroforeza

• Metodele optice Metodele optice se bazeaza pe se bazeaza pe masurarea proprietatilor optice masurarea proprietatilor optice ale substanteiale substantei şi sunt bazate şi sunt bazate pe înregistrarea modificărilor pe înregistrarea modificărilor razei de lumină la trecerea ei razei de lumină la trecerea ei prin soluţia examinatăprin soluţia examinată..

• Metode fotometrice sunt:Metode fotometrice sunt:– refractometria;refractometria;– polarimetria;polarimetria;– fotometria. fotometria.

Metode Metode îîn biochimia n biochimia clinicăclinică

http://ru.science.wikia.com/wiki/%D0%A4%D0%B0%D0%B9%D0%BB:Light_dispersion_conceptual.gif

FOTOMETRIAFOTOMETRIA1.1. Fotometrie de absorbţieFotometrie de absorbţie – –

a) a) spectrofotometriaspectrofotometria - -metodele bazate pe metodele bazate pe masurarea absorbtiei luminii de catre substantele masurarea absorbtiei luminii de catre substantele coloratecolorate

b) b) nefelometrianefelometria - - măsoarămăsoară absorbtia luminii de catre absorbtia luminii de catre corpurile necolorate aflate in suspensie se numesc corpurile necolorate aflate in suspensie se numesc turbidimetriceturbidimetrice

c)c) turbidimetriaturbidimetria - măsoară - măsoară dispersia luminii de dispersia luminii de catre particulele care se precipita, suspendate in catre particulele care se precipita, suspendate in solutie, lucrandu-se cu precipitat colorat sau solutie, lucrandu-se cu precipitat colorat sau necolorat.necolorat.

2.Fotometrie de emisie –2.Fotometrie de emisie – a) fluorimetriaa) fluorimetria

FOTOMETRIA FOTOMETRIA de absorbţiede absorbţie

• LegeaLegea BugherBugher — — LambertLambert — — BeerBeer — — lege fizicălege fizică, , conform conform căreia are loc micşorarea căreia are loc micşorarea intensităţii razei de lumină intensităţii razei de lumină monocromatică la trecerea ei prin mediul de absorbţiemonocromatică la trecerea ei prin mediul de absorbţie..

Pentru cercetări sunt utilizate fotocolorimetrele în care fluxul luminos cu intensitatea I0 este trimis printr-o cuva sau printr-o eprubeta care contine solutia de analizat. Fluxul cu intensitatea I, care a reusit sa treaca prin cuva fara sa fie absorbit, cade pe o celula fotoelectrica. Celula fotoelectrica transforma energia luminoasa in energie electrica, care se masoara cu un galvanometru sensibil.

http://megasklad.ru/data/photoes/395764.jpg

METODA PCR

ÎN DIAGNOSTIC

•Reacţia polimerazică în lanţReacţia polimerazică în lanţ — — metodă a biologiei molecularemetodă a biologiei moleculare, , care permite de a obţine o care permite de a obţine o amplificare semnificativă a amplificare semnificativă a anumitor secvenţe specifice de anumitor secvenţe specifice de ADNADN..

• Metoda este bazată pe copierea Metoda este bazată pe copierea selectivă multiplă a unui anumit selectivă multiplă a unui anumit fragment specific de ADN (sau ARN) cu fragment specific de ADN (sau ARN) cu ajutorul enzimelor ajutorul enzimelor in vitroin vitro. . Are loc Are loc copierea numai a secvenţei de ADNcopierea numai a secvenţei de ADN, , care are o anumită consecutivitate care are o anumită consecutivitate dată a bazelor azotate şi numai în dată a bazelor azotate şi numai în cazul, cânt el este prezent în cazul, cânt el este prezent în materialul cercetatmaterialul cercetat..

Componentele reacţieiComponentele reacţiei

• ADN-matriceaADN-matricea

• PraimeriPraimeri

• ADN-polimeraza termostabilăADN-polimeraza termostabilă

• Substrate – Substrate – dezoxiribonucleotidtrifosfaţidezoxiribonucleotidtrifosfaţi

• IoniIoni Mg Mg2+2+

• SoluSoluţie-tamponţie-tampon

Principiul Principiul PCRPCR• Denaturarea Denaturarea – – matricea bicatenară dublu matricea bicatenară dublu

helix de ADN este încălzită la helix de ADN este încălzită la 9494--96°C 96°C pentru pentru ca catenele să se despiralizeze şi să se ca catenele să se despiralizeze şi să se separesepare..

• AnnealingAnnealing- - unirea complimentară a matricei unirea complimentară a matricei cu praimerul – la aprox. cu praimerul – la aprox. 54°C.54°C.

• ElongareaElongarea- - ADNADN--polimeraza sintetizează polimeraza sintetizează catena complimentară, polimerizând bazele catena complimentară, polimerizând bazele azotate suplimentate în mediul de reacţie;azotate suplimentate în mediul de reacţie; TaqTaq-polimeraza este maximal activă la -polimeraza este maximal activă la 72°C.72°C.

Etapele efectuării PCREtapele efectuării PCR: : 1. 1. prelucrarea materialului biologicprelucrarea materialului biologic. .

Centrifugarea materialului biologicCentrifugarea materialului biologic

2. 2. Extragerea Extragerea ADNADN//ARNARN

Termostat

Centrifuga

Vortex

2.«AMESTECARE»

1. La sediment se adaugă soluţia pentru extragerea ADN;

3. Încălzire a câte min la 55 и 95 С

4. Centrifugarepentru obţinerea supernatantului cu ADN

3. 3. Pregătirea probelor pentru Pregătirea probelor pentru amplificareamplificare: : introducerea în eprubetă a probelor introducerea în eprubetă a probelor

biologice, primerilor, polimerazei, substratelor pentru biologice, primerilor, polimerazei, substratelor pentru polimerizarea ADN.polimerizarea ADN.

Probele pregătite pentru Probele pregătite pentru amplificareamplificare

4. 4. Amplificarea Amplificarea

Amplificator

Amplificator pentru real-time Amplificator pentru real-time PCR PCR

5. 5. Electroforeza Electroforeza - - pregătirea gelului pentru camera de pregătirea gelului pentru camera de electroforezăelectroforeză

Cameră pentru electroforeză cu soluţie Cameră pentru electroforeză cu soluţie

tampontampon

Gelul după electroforezăGelul după electroforeză

7. 7. Înregistrarea rezultatelorÎnregistrarea rezultatelor la la transiluminatortransiluminator ( (in lumină in lumină

ultravioletăultravioletă))

Citirea rCitirea rezultatelezultateloror PCRPCR

• Prezenţa unei benzi luminoase strict la nivelul Prezenţa unei benzi luminoase strict la nivelul controlului pozitiv în proba de analizat semnifică controlului pozitiv în proba de analizat semnifică prezenţa agentului patogen respectiv în proba dată.prezenţa agentului patogen respectiv în proba dată.

• Lipsa bandei luminoase la nivelul controlului pozitiv Lipsa bandei luminoase la nivelul controlului pozitiv în proba de analizat semnifică lipsa agentului în proba de analizat semnifică lipsa agentului patogen respectiv în proba dată.patogen respectiv în proba dată.

K+ - control pozitivK- - control negativ

1,2,7,9,10,11 – probe clinice cu rezultate pozitive3,4,5,6,8,12 – probe clinice cu rezultate negative

Documents

Biochimia clinica 2010, USMF, Introducere